Способ стимуляции регенерации эндотелия легких при сочетании метаболического синдрома и хронической обструктивной болезни легких у женщин

Изобретение относится к области медицины. Предложено применение пегилированной формы аналога глюкагоноподобного пептида 1 ГПП 1(7-37) в качестве средства для стимуляции регенерации эндотелия легких при сочетании метаболического синдрома и хронической обструктивной болезни легких у особей женского пола. Изобретение обеспечивает расширение арсенала средств, обладающих способностью стимулировать регенерацию эндотелия легких при сочетании метаболического синдрома и хронической обструктивной болезни легких с учетом половой принадлежности. 1 ил., 7 табл., 1 пр.

 

Изобретение относится к области медицины, к клеточным технологиям и регенеративной медицине и может быть использовано для избирательной стимуляции регенерации эндотелия легких при хронической обструктивной болезни легких в сочетании с метаболическим синдромом у женщин.

Большинство доклинических и клинических биомедицинских исследований проводятся на животных моделях мужского пола. Закономерно, что такой подход может привести к ятрогении или слабой чувствительности пациентов определенного пола к специфической терапии. Между тем развитие современной медицины и медицины будущего - это персонифицированный подход к лечению. К базовым требованиям персонализированной медицины относят необходимость выявления и учета факторов, влияющих на процессы заболевания и терапии. Одним из таких факторов являются половые различия. Известны тендерные различия в эпидемиологии и этиологии, симптомах и диагностике заболеваний, а также в ответе на лечение и результатах терапии [1, 2]. Развивая проблематику избирательной чувствительности к терапевтическому воздействию, многие ряд авторов отмечает тендерные различия в фармакокинетике и фармакодинамике лекарственных препаратов [3].

Такое средство как глюкагоноподобный пептид 1 (ГПП 1) предлагается использовать для стимуляции регенерации эндотелия легких при сочетанной патологии метаболического синдрома и хронической обструктивной болезни легких [4]. Это позволяет избежать тяжелых микрососудистых осложнений и прогрессирования эмфиземы в легочной ткани у лабораторных животных в общей группе. Для достижения терапевтического эффекта ГПП 1 необходимо вводить курсом ежедневно, внутрибрюшинно в область поджелудочной железы в дозе 3 ммоль/кг.

Данный способ является наиболее близким к заявляемому по достигаемому результату и выбран в качестве прототипа.

Недостатком данного способа лекарственной терапии в условиях сочетания метаболического синдрома и хронической обструктивной болезни является использование непегилированной формы лекарственного средства, что приводит к быстрой энзиматической деградации молекулы; отсутствие учета особенностей формирования метаболических нарушений и разрушения альвеолярной ткани в мужском и женском организмах, тендерных различий процесса регенерации тканей и в эффектах препарата. Без учета половой принадлежности организма есть вероятность возникновения нежелательных побочных эффектов.

Задачей, решаемой данным изобретением, является расширение арсенала средств, обладающих способностью стимулировать регенерацию эндотелия легких при сочетании метаболического синдрома и хронической обструктивной болезни легких с учетом половой принадлежности.

Поставленная задача достигается техническим решением, представляющим собой способ стимуляции регенерации эндотелия легких при сочетании метаболического синдрома и хронической обструктивной болезни легких у женщин применением пегилированной формы аналога глюкагоноподобного пептида 1 (ГПП 1(7-37)), отличающегося от нативной формы ГПП 1 ковалентной связью молекулы полиэтиленгликоля с молекулой инкретина через аминокислоты His7, Lys26, Lys34, и тем, что препарат используют для лечения избирательно женщин с сочетанной патологии.

Новым в предлагаемом изобретении является использование курсового введения 1 раз в день в дозе 3 ммоль/кг с 149-х по 157-е, и с 173-х по 188-е сутки пегилированной формы аналога глюкагоноподобного пептида 1 особям женского пола для регенерации эндотелия легких при сочетании хронической обструктивной болезни легких и метаболического синдрома.

Не вызывает сомнений, что терапия коморбидных патологии, как правило, связанных друг с другом несколькими звеньями патогенеза, часто приводит к полипрагмазии и осложняется развитием побочных реакций и слабой чувствительностью ряда пациентов к терапии. В настоящее время выяснено, что до 50% пациентов с хронической обструктивной болезнью легких (ХОБЛ) имеют метаболический синдром (МетС) как сопутствующую патологию [5]. При этом, сочетанная патология ХОБЛ с МетС чаще встречается у женщин с распространенностью 38,5% и только 18,5% у мужчин [6].

Тендерные различия, отмечающиеся в гомеостазе глюкозы и энергетическом балансе, являются важными факторами развития метаболического синдрома у мужчин и женщин [7]. Женщины подвергаются большему риску метаболических нарушений из-за более высокого соотношения жировой / мышечной массы и большего количества подкожной жировой клетчатки, и имеют более высокую инсулинорезистентность, чем мужчины. Это связано с гормональными различиями и диетой [8, 9]. Отмечаются тендерные различия в профиле липопротеинов [10].

Известны различия клинической картины и течения ХОБЛ у женщин и мужчин [11]. Описаны тендерные различия гистологической картины легких у пациентов с сочетанием МетС и ХОБЛ, в частности, у женщин по сравнению с мужчинами меньше альвеол, а их диаметр относительно мал по сравнению с размером легких [6]. Указывается на то обстоятельство, что функция легких у женщин имеет тенденцию к более резкому снижению по мере увеличения ожирения, чем у мужчин. Кроме этого, эстрогены могут снижать функцию легких. В 2018 году Zore Т. et al. обратил внимание на клетки-предшественники адипоцитов как потенциальный фактор, обуславливающие половые различия в накоплении жировой ткани, и на гемопоэтические стволовые клетки, как на фактор, формирующие тендерные различия воспалительного ответа [12]. Показано, у женщин меньше циркулирующих эндотелиальных клеток-предшественников по сравнению с мужчинами, что предполагает потенциальные половые различия в регенеративной способности в зависимости от пола [13].

Доказанная способность эндотелиальных прогениторных клеток восстанавливать функцию поврежденных тканей эндотелия делает перспективным практическое применения этих клеток в клинике [14]. Установлено, что снижение количества эндотелиальных прогениторных клеток в крови является независимым предиктором заболеваемости и смертности от сердечно-сосудистых заболеваний. У пациентов с ХОБЛ наблюдается дисбаланс между повышенным повреждением эндотелия и сниженной способностью к восстановлению, при чем причиной этого дисбаланса называют факторы, связанные как с самой болезнью, так и полом [15]. В связи с этим необходим поиск и разработка подходов направленных на увеличение количества (в участке травмы и повреждения) и функциональной активности эндотелиальных прогениторных клеток при различных заболеваниях, в том числе и легких.

Ранее мы продемонстрировали, что регенеративные эффекты ГПП 1, по меньшей мере, частично, опосредованы его влиянием на эндотелиальные прогениторные клетки [16]. Однако in vivo ГПП 1 быстро метаболизируется дипептидилпептидазой-4, что приводит к относительно низкой регенерациониой активности гормона. Хорошо известно, что пегилирование можно использовать для сохранения фармакологически активных молекул от энзиматического разрушения.

Современные фармакологические методы лечения больных МетС с таким осложнением как ХОБЛ относительно неэффективны, а разработка эффективных методов лечения серьезно затруднена из-за отсутствия понимания гендерно-специфических механизмов, лежащих в основе ХОБЛ и метаболического синдрома. Решение этой задачи является первостепенной при проведении работ, направленных на разработку персонализированной стратегии лечения у пациентов с метаболическим синдромом и ХОБЛ.

Отличительные признаки проявили в заявляемой совокупности новые свойства явным образом не вытекающие из уровня техники в данной области и неочевидные для специалиста. Идентичной совокупности признаков не обнаружено в проанализированной патентной и научно-медицинской литературе.

Способ может быть использован для повышения эффективности лекарственной терапии в эксперименте и клинике. Исходя из вышеизложенного, заявляемое изобретение соответствует критериям патентоспособности изобретения «Новизна», «Изобретательский уровень» и «Промышленная применимость».

Предлагаемый способ изучен в экспериментах на мышах самцах и мышах самках линии C57BL/6. Животные поступили из отдела экспериментальных биологических моделей НИИФиРМ им. Е.Д. Гольдберга (ветеринарное удостоверение имеется). Содержание животных и экспериментальный дизайн одобрены Этическим комитетом НИИФиРМ им. Е.Д. Гольдберга и соответствуют международным правилам, принятым Европейской Конвенцией по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и иных научных целей. С целью исключения сезонных колебаний изучаемых показателей все эксперименты проведены в осенне-зимний период. Забор материала осуществляют в утренние часы. Мышей умерщвляют передозировкой CO₂. Количество животных в каждой группе не менее 10 особей.

Суть изобретения будет понятна из фигуры 1.

На фигуре 1 изображено легкое (нижнее легочное поле) мыши при окрашивании ткани легкого гематоксилином и эозином: а, б, в - мышей самцов, г, д, е - мышей самок, а, г - интактных, б, д - с метаболическим синдромом и хронической обструктивной болезнью легких, в, е - получавших пегилированный ГПП 1, с метаболическим синдромом и хронической обструктивной болезнью легких. 189 день эксперимента, ув. 100.

Изобретение осуществляют следующим образом.

Способ осуществляют следующим образом: у лабораторных животных (мыши самцы и самки линии C57BL/6) метаболический синдром вызывают введением глутамата натрия (ГН; «Sigma», США) подкожно в дозе 2,2 мг/г с 1 по 10 день жизни, ежедневно [Cameron D.P., 1976]. Контрольные животные получают физиологический раствор в эквивалентном объеме. На 124-е сутки эксперимента проводят измерения индекса Ли [Cameron D.P., 1976]. Индекс, рассчитанный как кубический корень из массы тела (г) * 10 / носоанальная длина (мм), равный или ниже 0,300 классифицируют как нормальный. Мышей со значениями индекса Ли более 0,300 классифицируют как тучные и включают в эксперимент. Метаболические нарушения контролируют по липидному профилю. Дополнительно оценивают отношение триглицериды/уровень липопротеидов высокой плотности (ЛПВП) [17]. На 126 сутки эксперимента индуцируют ХОБЛ.

Хроническая обструктивная болезнь легких моделируется нулем эндотрахеального введения липополисахарида (ЛПС) в дозе 3 мкг/мышь в 50 мкл фосфатного буфера на 126 и 129 сутки и экстрактом сигаретного дыма (ЭСД) в объеме 50 мкл/мышь на 127, 130. 133, 136, 139, 142, 149, 156, 163, 170 сутки эксперимента [18]. Экстракт сигаретного дыма получен из сигарет марки L&MREDLABEL 2 сигареты на/мл (состав 1 сигареты: смола 10 мг/сигарета, никотин 0.8 мг/ сигарета, СО 10 мг/ сигарета). Сигаретный фильтр перед получением экстракта удаляется (длина сигареты с фильтром 80 мм, после удаления фильтра 55 мм). Экстракция осуществляется путем протягивания дыма зажженной сигареты через натрий-фосфатный буфер с постоянной скоростью, при помощи вакуумного насоса, сигарета сжигается до длины 5 мм. Время сжигания одной сигареты составляет 140 секунд. Для удаления частиц полученный экстракт фильтруется через бактериальный фильтр с величиной пор 45 им. Для стандартизации полученного экстракта проводится измерение рН и оптической плотности на длине волны 405 и 540 нм.

Липополисахарид (компонент клеточной стенки грамотрицательных бактерий Е. coli O111:В4 («Lipopolysaccharides from Escherichia coli О111:B4», «Sigma». США)) используют для инициации острой фазы воспаления. Липополисахарид (ЛПС) стимулирует клетки врожденной иммунной системы Toll-подобным рецептором 4. являющимся членом семейства Toll-подобных рецепторных белков, который распознает общие связанные с патогенами молекулярные структуры (PAMPs), вызывая тем самым усиление воспалительной реакции [19].

Глюкагоноподобный пептид 1 представляет собой инкретин (Sigma. США). Пегилированная форма глюкагоноподобного пептида 1 была получена согласно [4]. Препарат представляет собой глюкагоноподобный пептид 1 (ГПП-1(7-37)). ковалентно связанный с молекулой полиэтиленгликоля (ПЭГ). Пегилированный ГПП 1 (пег ГПП-1) вводят ежедневно внутрибрюшинно в область поджелудочной железы в дозе 3 ммоль/кг на с 149-х по 157-е, и с 173-х по 188-е сутки эксперимента.

При морфологическом исследовании оценивают в легких: нарушения гистоархитектоники ткани легких, наличие отека и воспалительной инфильтрации, венозного застоя, утолщения стенок сосудов и бронхов, количество капилляров [20, 21]. Морфологическое исследование легких выполняют на 189 сутки. Левую долю легкого фиксируют в 10% растворе нейтрального формалина, проводят через спирты возрастающих концентраций к ксилолу и заливают в парафин в соответствии со стандартной процедурой. Обезвоженные срезы толщиной 5 мкм окрашивают гематоксилином и эозином. Микропрепараты от каждого экспериментального животного исследуют на световом микроскопе Axio Lab.Al (Carl Zeiss, Germany) при увеличении ×100 и ×400. Для иммуногистохимического исследования эндотелиальных клеток легких используют поликлональные антитела к мембранному белку CD31 (Abcam, США). Анализ полученных изображений и подсчет клеток экспрессирующих детектируемый антиген производят при помощи программы ImageJ.

В целях определения содержания эндотелиальных прогениторных клеток (CD45^-CD31⁺CD34⁺ и CD31⁺CD34⁺CD146⁺), перицитов (CD34^-CD31^-CD146⁺) в крови, костном мозге и легких изучают экспрессию поверхностных маркеров CD45, CD31, CD34. CD146 с использованием проточного цитофлюориметра FACS Canto II с программным обеспечением FACS Diva («BD Biosciences»), США).

Статистическую обработку полученных результатов проводят методами вариационной статистики с использованием пакета статистической обработки данных SPSS 12.0. Вычисляют среднее арифметическое (М), ошибку среднего арифметического (т), значение вероятности (Р). Различие двух сравниваемых величин считают достоверным в том случае, если вероятность их тождества была меньше 5% (Р<0.05). Используя выборочные коэффициенты асимметрии и эксцесса, оценивают степень приближения закона распределения исследуемого признака к нормальному. В случаях нормального распределения признаков для статистической оценки применяют параметрический t-критерий Стьюдента. При больших отклонениях распределений признака от нормального вида для независимых выборок используют непараметрический критерий U-критерий Уилкоксона. Для выявления достоверности различий качественных показателей используют критерий углового преобразования Фишера.

Пример.

Введение глутамата натрия и ЭСД вызывает развитие сочетанной патологии МетС и ХОБЛ. В частности, у животных наблюдается нарушение липидного обмена, более выраженное у самцов (таблица 1). В условиях в условиях моделирования метаболического синдрома и ХОБЛ лечение пегГПП-1 улучшает показатели у самок и слабо влияет на исследованные показатели у самцов. В тоже время в легких мышей на 189 сутки эксперимента наблюдается очаговая эмфизема средней степени выраженности (фигура 1). При этом площадь эмфиземы у самок превосходит таковую у самцов. В легких мышей с сочетанной патологией обнаруживаются группы увеличенных в размерах альвеол и альвеолярных ходов, и разрывы альвеолярных стенок. В альвеолах отмечаются единичные нейтрофилы и более значительное количество макрофагов. Лечение пегГПП-1 уменьшает воспалительную инфильтрацию макрофагами легких самок и самцов в условиях сочетанной патологии МетС и ХОБЛ. Кроме этого, в нижней области легких леченых мышей (самцов и самок) достоверно уменьшается площадь эмфизематозно-расширенной ткани по сравнению с нелеченными мышами (таблица 2, фигура 1 в, е). Следует отметить более выраженный позитивный эффект пегГПП-1 на развитие ХОБЛ на фоне МетС у мышей самок.

В условиях в условиях моделирования метаболического синдрома и ХОБЛ наблюдается снижение числа CD31⁺ клеток в легких мышей, более выраженное у самок (таблица 3). Лечение пегГПП-1 вызывает значительное повышение числа CD31⁺ клеток в легких мышей самок по сравнению с нелеченными мышами с метаболическим синдромом и ХОБЛ, более выраженно у мышей-самок (таблица 3).

При исследовании относительного количества капилляров в среднем легочном поле самцов и самок мышей C57BL/6 на 189 сутки эксперимента под влиянием пстГПП-1 наблюдается достоверное увеличение количества капилляров в легких мышей самок по сравнению с патологией (Таблица 4), препарат не влияет на данный показатель у мышей самцов.

В легких самцов интактного контроля наблюдается значительно большее количество эндотелиальных прогениторных клеток (CD45^-CD31⁺CD34⁺ и CD31⁺CD34⁺CD146⁺), чем у самок интактного контроля (таблица 5). Моделирование МетС и ХОБЛ у самок вызывает в легких значительное увеличение количества эндотелиальных прогениторных клеток (CD45^-CD31⁺CD34⁺) и перицитов по сравнению с группой самок интактного контроля (таблица 5). В противоположность этому в группе мышей-самцов на фоне развития сочетанной патологии в легких значительно сокращается число эндотелиальных прогениторных клеток (CD45^-CD31⁺CD34⁺), перицитов по сравнению со здоровыми самцами. Лечение пегГПП-1 мышей-самцов уменьшает количество перицитов и эндотелиальных прогениторных клеток (CD45^-CD31⁺CD34⁺) по сравнению с группой мышей с сочетанной патологией (Таблица 5). На фоне лечения пегГПП 1 мышей самок наблюдается нормализация практически всех исследованных клеток в легких: восстанавливается до уровня интактного контроля количество перицитов и увеличивается выше интактного контроля количество эндотелиальных прогениторных клеток (CD45^-CD31⁺CD34⁺) (Таблица 5). Накопление эндотелиальных прогениторных клеток и перицитов в легких самок под влиянием препарата указывает на регенерацию поврежденного эндотелия легких у самок, получавших пегГПП-1, у самцов этого не наблюдается.

Тендерные различия наблюдаются в популяциях незрелых эндотелиальных клеток костного мозга здоровых мышей. У самцов количество эндотелиальных клеток (CD31⁺CD34⁺CD146⁺) (в 5,5 раза) превосходит таковое у самок, при этом количество перицитов (в 7,6 раза) меньше, чем у самок интактного контроля (таблица 6).

Моделирование метаболического синдрома и ХОБЛ у самок вызывает увеличение содержание костномозговых эндотелиальных клеток (CD31⁺CD34⁺CD146^-) по сравнению со здоровыми самками (таблица 6). Следует отметить, что у самок при сочетанной патологии изменяются остальные исследованные клетки костного мозга и в большей степени, чем у мышей самцов. У самцов сочетание метаболического синдрома и ХОБЛ приводит к накоплению эндотелиальных клеток (CD45^-CD31⁺CD34⁺). Лечение пегТПП-1 увеличивает количество костномозговых CD45^-CD31⁺CD34⁺ -эндотелиальных клеток у мышей самцов (в 2,2 раза) и самок (в 8,9 раза) по сравнению с нелеченными мышами в условиях МетС и ХОБЛ (таблица 5). С другой стороны, в этих группах наблюдается уменьшение количества CD31⁺CD34⁺CD146⁺ -эндотелиальных клеток, у самцов даже ниже уровня интактного контроля. Введение пегГПП-1 мышам-самкам с сочетанной патологией вызывает увеличение количества перицитов (в 2,9 раза) по сравнению с нелеченными животными. Следует отметить, на фоне введения пегГПП-1 мышам самцам позитивного влияния на исследованные клетки не наблюдается.

Тендерные различия в содержании исследованных эндотелиальных прогениторных клеток наблюдаются в крови здоровых животных. Так, у самцов количество циркулирующих в крови CD45^-CD31⁺CD34⁺ -эндотелиальных клеток (на 63%), CD31⁺CD34⁺CD146⁺ -эндотелиальных клеток (на 94%) уступает таковому у самок (таблица 7). В противоположность этому, количество перицитов (в 21,5 раза) у здоровых самцов выше, чем у здоровых самок. В крови самок при моделировании метаболического синдрома и ХОБЛ наблюдается снижение числа эндотелиальных клеток (CD45^-CD31⁺CD34⁺ и CD31⁺CD34⁺CD146⁺), исключение составили перициты, количество которых резко возрастает по отношению к группе здоровых самок (таблица 7). У самцов с сочетанной патологией выявляется увеличение количества перицитов. При этом, количество эндотелиальных клеток (CD45^-CD31⁺CD34⁺ и CD31⁺CD34⁺CD146") в крови самцов, напротив, снижается, и меньше, чем в группе самок. Лечение пегГПП-1 вызывает увеличение количества эндотелиальных клеток в крови у самок и самцов но сравнению с нелеченными животными в условиях МетС и ХОБЛ (таблица 7). Тендерные различия выражаются в противоположной реакции перицитов: число этих клеток у самок снижается и увеличивается у самцов.

Итак, пегилированная форма глюкагоноподобного пептида 1 позитивно влияет на динамику показателей легких, на содержание эндотелиальных прогениторных клеток легких, костного мозга и периферической крови, нарушенных при сочетаиной патологии метаболическом синдроме и ХОБЛ, преимущественно у мышей самок, за счет чего способна стимулировать регенерацию эндотелия легких мышей-самок. Для регенерации эндотелия легких мужского организма желательно применять другой препарат.

ЛИТЕРАТУРА

1. Середенин С.Б., Вальдман Е.А. Гепетико-биохимическое развитие проблемы индивидуальной чувствительности к лекарственным средствам // Экснерим. и клиническая фармакология. 2003. Т. 66, №2. С. 57-59.

2. McGregor A.J., Hasnain М., Sandberg K., Morrison M.F., Berlin М., Trott J. How to study the impact of sex and gender in medical research: a review of resources. Biol Sex Differ. 2016; 7(Suppl 1): 46. doi:10.1186/s13293-016-0099-1

3. Soldin O.P., Chung S.H., Mattison D.R. Sex differences in drug disposition // J Biomed Biotechnol. 2011; 2011:187103. doi:10.1155/2011/187103.

4. Патент №2712761 Российская Федерация МПК A61K 38/22 (2006.01) А61Р 11/00 (2006.01) А61Р 3/10 (2006.01) Средство для стимуляции регенерации эндотелия легких при сочетании метаболического синдрома и хронической обструктивной болезни легких [Текст] / Скурихин Е.Г., Першина О.В., Пахомова А.В.. Ермакова Н.Н., Крупин В.А.. Пан Э.С.. Дыгай A.M.; Патентообладатель: Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Томский национальный исследовательский медицинский центр Российской академии наук" (RU) - №2019120915, заявл.: 02.07.2019; опубл.: 31.01.2020.

5. Chan S.M.H., Selemidis S., Bozinovski S., Vlahos R. Pathobiological mechanisms underlying metabolic syndrome (MetS) in chronic obstructive pulmonary disease (COPD): clinical significance and therapeutic strategies // Pharmacol Ther. 2019; 198: 160-188. doi: 10.1016/j.pharmthera.2019.02.013

6. Kim J.H., Yoo J.Y., Kim H.S. Metabolic Syndrome in South Korean Patients with Chronic Obstructive Pulmonary Disease: A Focus on Gender Differences // Asian Nurs. Res. 2019; 13: 137-146. doi: 10.1016/j.anr.2019.03.002.

7. Mauvais-Jarvis F. Epidemiology of Gender Differences in Diabetes and Obesity // Adv. Exp.Med. Biol. 2017; 1043: 3-8. doi: 10.1007/978-3-319-70178-31.

8. Karpe F., Pinnick K.E. Biology of upper-body and lower-body adipose tissue link to whole-body phenotypes // Nat. Rev. Endocrinol. 2015; 11: 90-100. doi: 10.1038/nrendo.2014.185.

9. Karastergiou K., Fried S.K. Cellular mechanisms driving sex differences in adipose tissue biology and body shape in humans and mouse models // Adv. Exp. Med. Biol. 2017; 1043: 29-51. doi: 10.1007/978-3-319-70178-3_3.

10. Link J.C., Reue K. Genetic Basis for Sex Differences in Obesity and Lipid Metabolism // Annu. Rev. Nutr. 2017;37:225-245. doi: 10.1146/annurev-nutr-071816-064827.

11. Åberg J., Hasselgren M., Montgomery S.. Lisspers K., Stallberg В., Janson C. Sundh J. Sex-related differences in management of Swedish patients with a clinical diagnosis of chronic obstructive pulmonary disease // Int. J. Chron. Obstr. Pulm. Dis. 2019; 14: 961-969. doi: 10.2147/COPD.S 19331 1.

12. Zore Т., Palafox M., Reue K. Sex differences in obesity, lipid metabolism, and inflammation-A role for the sex chromosomes? // Mol. Metab. 2018; 15: 35-44. doi: 10.1016/j. molmet.2018.04.003.

13. Topel M.L., Hayek S.S., Ко Y.A., Sandesara P.В., Samman Tahhan A., Hesaroieh I., Mahar E., Martin G.S., Waller E.K., Quyyumi A.A. Sex Differences in Circulating Progenitor Cells//J Am Heart Assoc. 2017 Oct 3: 6(10). pii: e006245. doi: 10.1161/JAHA.117.006245.

14. Семенова A.E., Сергиенко И.В., Домбровский А.Л., Рвачева А.В. Роль эндотелиальных прогениторных клеток при атеросклерозе // Атеросклероз и дислипидемии. 2012. №. 3. С. 14-24.

15. Gareía-Lucio J., Peinado V.I., de Jover L., Del Pozo R., Blanco 1., Bonjoch C, Coll-Bonfill N., Paul Т., Tura-Ceide O., Barberá J.A. Imbalance between endothelial damage and repair capacity in chronic obstructive pulmonary disease // PLoS One. 2018 Apr 19: 13(4):e0195724. doi: 10.1371/journal.pone.0195724.

16. Skurikhin, E.G.; Pershina, O.V.; Pakhomova, A.V.; Pan, E.S.; Krupin. V.A.; Ermakova, N.N.; Vaizova, O.E.; Pozdeeva, A.S.; Zhukova, M.A.; Skurikhina, V.E.; Grimm, W.-D.; Dygai, A.M. Endothelial Progenitor Cells as Pathogenetic and Diagnostic Factors, and Potential Targets for GLP-1 in Combination with Metabolic Syndrome and Chronic Obstructive Pulmonary Disease // Int. J. Mol. Sci. 2019. 20. 1105.

17. Salazar M.R.; Carbajal H.A.; Espeche W.G.; Aizpun'ia M.; Leiva Sisnieguez C.E.; Leiva Sisnieguez B.C. Use of the plasma triglyceride/high-density lipoprotein cholesterol ratio to identify cardiovascular disease in hypertensive subjects // J. Am. Soc. Hypertens. 2014, 8. 724-731.

18. He Z.H., Chen P., Chen Y. et al. Comparison between cigarette smoke-induced emphysema and cigarette smoke extract-induced emphysema // Tobacco induced diseases. 2015. Vol. 13, №1. P. 6.

19. Wu K.-C. Huang S.S., Kuo Y.H., Ho Y.L., Yang C.S., Chang Y.S., Huang G.J. Ugonin M, a Helminthostachys zeylanica constituent, prevents LPS-induced acute lung injury through TLR4-mediated MAPK and NF-kB signaling pathways // Molecules. 2017. Vol. 22 (573). P. 1-15.

20. Плотников М.Б., Алиев О.И., Анищенко A.M., Сидехменова А.В., Шаманаев А.Ю., Фомина Т.П. Параметры капиллярной сети коры головного мозга крыс линии SFIR в периоды развития артериальной гипертензии и стабильно высокого артериального давления // Российский физиологический журнал им. И.М. Сеченова. 2016. Т. 102. №5. С. 558-566.

21. Черняев А.Л., Самсонова М.В. Патологическая анатомия легких: атлас. М.: Издательство «Атмосфера». 2004. 112 с.

Применение пегилированной формы аналога глюкагоноподобного пептида 1 ГПП 1(7-37), отличающегося от нативной формы ГПП 1 ковалентной связью молекулы полиэтиленгликоля с молекулой глюкагоноподобного пептида 1 через аминокислоты His7, Lys26, Lys34, в качестве средства для стимуляции регенерации эндотелия легких при сочетании метаболического синдрома и хронической обструктивной болезни легких у особей женского пола.