Соединения, модулирующие активность кальцийчувствительных рецепторов, для модуляции вкуса кокуми и кормовые продукты для домашних животных, содержащие их

Изобретение относится к области производства кормов для домашних животных. Предложена ароматизирующая композиция для модуляции вкуса кокуми в кормовых продуктах для домашних животных, содержащая ряд соединений. Также предложены варианты кормовых продуктов, содержащие указанную ароматизирующую композицию. Предложенный способ усиления интенсивности вкуса кокуми в кормовом продукте включает смешивание кормового продукта с указанной ароматизирующей композицией, присутствующей в количестве, эффективном для усиления вкуса кокуми в кормовом продукте, которое определяется дегустационной комиссией. Также предложен способ модуляции активности кальцийчувствительного рецептора (CaSR), включающий контактирование CaSR с указанной ароматизирующей композицией. Изобретение обеспечивает ароматизирующее вещество, обладающее неожиданным вкусом и вызывающее сенсорное восприятие кокуми за счет повышения активности кальцийчувствительного рецептора. 5 н. и 6 з.п. ф-лы, 60 ил., 6 табл., 4 пр.

 

ПЕРЕКРЕСТНАЯ ССЫЛКА НА РОДСТВЕННЫЕ ЗАЯВКИ

Настоящая заявка испрашивает приоритет предварительной заявки на патент США № 62/322641, поданной 14 апреля 2016, которая включена здесь в ее полном объеме.

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ

Настоящий раскрываемый предмет изобретения относится к соединениям и ароматизирующим композициям, содержащим, по меньшей мере, одно соединение, которое взаимодействует с кальцийчувствительным рецептором (CaSR) для модуляции вкуса кокуми. Ароматизирующие композиции можно использовать для усиления или модификации вкусовой привлекательности, вкуса и/или аромата кормовых продуктов для домашних животных. Ароматизирующие композиции могут содержать комбинации соединений и могут быть добавлены в кормовые продукты для домашних животных в различных форматах системы доставки.

СПИСОК ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

Далее описание включает ссылку на список последовательностей, поданный здесь через EFS 14 апреля 2017. В соответствии с 37 C.F.R. 1.52(e)(5) текстовый файл списка последовательностей, идентифицированный как CaSRseqlisting.txt, составляет 13989 байт и был создан 14 апреля 2017. Список последовательностей, представленный в электронной форме, не выходит за рамки описания и, следовательно, не содержит нового предмета.

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

Вкусные профили для кормовых композиций включают основные вкусы, такие как сладкий, соленый, горький, кислый, умами и кокуми. Химические соединения, которые вызывают такие вкусы, часто называют тастанты. Не ограничиваясь теорией, предполагается, что тастанты воспринимаются вкусовыми рецепторами во рту и горле, которые передают сигналы в мозг, где тастанты и полученные вкусовые профили регистрируются. Вкусовые рецепторы включают кальцийчувствительный рецептор (CaSR), который является рецептором, сопряженным с G-белком (GPCR), детектирующим изменения уровней внеклеточного кальция, и близко родственным рецепторам T1R1, T1R2 и T1R3, то есть рецепторам сладкого вкуса и умами. Показано, что кальцийчувствительный рецептор усиливает сладкий, соленый и умами вкусы и выполняет функцию рецептора вкуса кокуми.

Производители кормов для домашних животных имеют многолетнее стремление предоставлять кормовые продукты для домашних животных, обладающие высокой питательной ценностью. Кроме того, и в частности относительно кормовых продуктов для кошек и собак, производителям кормов для домашних животных требуется высокая степень вкусовой привлекательности для того, чтобы домашние животные могло получать полноценную питательную пользу от своего корма. Домашние животные, в частности кошки, как известно, непостоянны в своих пищевых предпочтениях и часто отказываются есть кормовой продукт для домашних животных, который они принимали в течение продолжительного периода, или отказываются есть больше, чем минимальное количество кормового продукта для домашних животных. Это явление может быть частично обусловлено незначительными различиями в органолептических профилях сырья, которые могут воспринимать домашние животные их вкусовой и обонятельной системами. В результате, владельцы домашних животных часто меняют типы и марки кормов для животных с целью поддержания своих домашних животных в здоровом и удовлетворительном состоянии.

При наличии недавних достижений в технологиях придания вкусов и ароматов остается потребность в соединениях, которые могут усиливать или модифицировать вкусовую привлекательность кормовых продуктов для домашних животных усилением или модификацией вкусовых, текстурных и/или ароматических профилей кормового продукта для домашних животных. Усиление или модификация может заключаться в увеличении интенсивности требуемого свойства с целью восстановления требуемого свойства, которое отсутствует или каким-то образом утрачено в кормовом продукте для домашних животных, или в снижении интенсивности нежелательного свойства. В частности, требуется увеличить интенсивность требуемого тастанта в кормовом продукте для домашних животных. Таким образом, в данной области сохраняется потребность в композициях для усиления вкусовой привлекательности и/или модуляции вкуса кокуми в кормовых продуктах для домашних животных.

СУЩНОСТЬ РАСКРЫВАЕМОГО ПРЕДМЕТА ИЗОБРЕТЕНИЯ

Настоящий раскрываемый предмет изобретения относится к ароматизирующим композициям и способам получения и модификации таких композиций во множестве кормовых продуктов для домашних животных. В частности, настоящее раскрытие относится к композициям, содержащим одно или более соединений, которые усиливают, повышают, снижают и/или модулируют активность кальцийчувствительного рецептора (CaSR) и таким образом модулируют вкус кокуми.

В некоторых вариантах осуществления ароматизирующая композиция содержит соль двухвалентного или трехвалентного элемента II группы из периодической системы. В некоторых вариантах осуществления элемент II группы выбирают из группы, состоящей из бериллия (Be), магния (Mg), кальция (Ca), стронция (Sr), бария (Ba) и их комбинаций. В некоторых вариантах осуществления элемент II группы представляет собой магний (Mg) или стронций (Sr). В некоторых вариантах осуществления, по меньшей мере, одно соединение, модулирующее кальцийчувствительный рецептор, представляет собой соль двухвалентного или трехвалентного лантаноида. В некоторых вариантах осуществления лантаноид выбирают из группы, состоящей из лантана (La), церия (Ce), празеодима (Pr), неодима (Nd), прометия (Pm), самария (Sm), европия (Eu), гадолиния (Gd), тербия (Tb), диспрозия (Dy), гольмия (Ho), эрбия (Er), тулия (Tm), иттербия (Yb), лютеция (Lu) и их комбинаций. В некоторых вариантах осуществления лантаноид представляет собой гадолиний (Gd), празеодим (Pr) или тербий (Tb).

В некоторых вариантах осуществления ароматизирующая композиция содержит соединение формулы Vft-1a или Vft-1b, имеющее одну из следующих структур:

Vft-1a

Vft-1b

где n, n₆, n₇, X₁, X₂, R₁, R₂, R₃, R₄, R₅, R₆ и Y описаны здесь ниже.

В некоторых вариантах осуществления ароматизирующая композиция содержит соединение формулы Vft-2, имеющее следующую структуру:

где n, X₁, X₂, W, R₁, R₂, R₃, R₄ и R₅ описаны здесь ниже.

В некоторых вариантах осуществления ароматизирующая композиция содержит соединение формулы Vft-3, имеющее следующую структуру:

где AA₁ и AA₂ описаны ниже и необязательно обозначаются формулой VFT-3b:

где n, n₁, n₂, n₄, R₁, R₂, R₃, R₄ и R₅ описаны здесь ниже.

В некоторых вариантах осуществления ароматизирующая композиция содержит соединение формулы Vft-4, имеющее следующую структуру:

где n₁, n₂ и R описаны здесь ниже.

В некоторых вариантах осуществления ароматизирующая композиция содержит соединение формулы Vft-5, имеющее следующую структуру:

R₁-AA_n-R₂,

где n, AA, R₁ и R₂ описаны здесь ниже.

В некоторых вариантах осуществления ароматизирующая композиция содержит соединение формулы Vft-6, имеющее следующую структуру:

где n₁-n₆, R₁- R₁₂, R_a, R_b, R_c, R_d, R_e and R_f описаны здесь ниже.

В некоторых вариантах осуществления ароматизирующая композиция содержит соединение, имеющее в своем составе фосфор, описанное одной из формул Vft-6.5a, Vft-6.5b и Vft-6.5c:

где n, X₁, X₂, R₁, R₂, R₃, R₄, R₅, R₆ описаны здесь ниже.

В некоторых вариантах осуществления ароматизирующая композиция содержит аминогликозид, описанный здесь ниже.

В некоторых вариантах осуществления ароматизирующая композиция содержит аминогликозидный антибиотик.

В некоторых вариантах осуществления ароматизирующая композиция содержит соединение, которое взаимодействует с активным центром Venus Flytrap домена рецептора CaSR, например, в одной или более из следующих групп аминокислот: Asn64, Phe65, Asn102, Thr145, Ser147, Ala168, Ser169, Ser170, Asp190, Gln193, Asp216, Tyr218, Ser272, Glu297, Ala298, Trp299, Ala300, Ser302, Leu304, Tyr411, Thr412 и/или His413.

В некоторых вариантах осуществления ароматизирующая композиция содержит кальцимиметик. В некоторых вариантах осуществления ароматизирующая композиция содержит кальцимиметик, раскрытый ниже в таблице 1. Например, кальцимиметик может иметь структуру нижеуказанной формулы Tm-1:

где n₁, n₂, R₁-R₉, X₁-X₁₁, кольцо A и кольцо B описаны здесь ниже. В некоторых вариантах осуществления настоящего раскрытия ароматизирующая композиция содержит один или более кальцимиметиков формул Tm-2-Tm-12, описанных здесь.

В некоторых вариантах осуществления ароматизирующая композиция содержит соединение, которое взаимодействует с активным центром 7 трансмембранного домена рецептора CaSR, например, в одной или более из следующих групп аминокислот: Phe684, Gly685 и/или Phe688 в спирали 3, Gln735 в спирали 4, Met771, Ala772, Phe775, Leu776 и/или Thr780 в спирали 5, Phe814, Val817, Trp818 и/или Phe821 в спирали 6 и/или Glu837, Ala840 и/или Ile841 в спирали 7.

Настоящее раскрытие также относится к солям и стереоизомерам соединений, описанных здесь.

В некоторых вариантах осуществления настоящего раскрытия ароматизирующая композиция дополнительно содержит, по меньшей мере, одну аминокислоту, описанную здесь.

В некоторых вариантах осуществления настоящего раскрытия ароматизирующая композиция дополнительно содержит, по меньшей мере, одно трансмембранное соединение, активирующее рецептор умами, описанное здесь.

В некоторых вариантах осуществления настоящего раскрытия ароматизирующая композиция дополнительно содержит, по меньшей мере, одно соединение, активирующее рецептор жирных кислот (GPR120), описанное здесь.

В некоторых вариантах осуществления настоящего раскрытия ароматизирующая композиция дополнительно содержит, по меньшей мере, один нуклеотид и/или производное нуклеотида, описанные здесь.

В некоторых вариантах осуществления ароматизирующая композиция содержит, по меньшей мере, одну, две, три, четыре, пять или более первичных аминокислот и/или, по меньшей мере, одну, две, три, четыре, пять или более вторичных аминокислот и/или, по меньшей мере, одну, две, три, четыре, пять или более третичных аминокислот. В некоторых вариантах осуществления первичная аминокислота представляет собой аминокислоту, модифицирующую рецептор умами. В некоторых вариантах осуществления вторичная аминокислота представляет собой аминокислоту, модифицирующую рецептор CaSR. В некоторых вариантах осуществления третичная аминокислота может взаимодействовать с одним или более другими рецепторами вкуса и не связываться с тем же рецептором, что и первичная аминокислота или вторичная аминокислота, или конкурировать с первичной аминокислотой или вторичной аминокислотой за связывание с кальцийчувствительным рецептором или рецептором умами.

В некоторых вариантах осуществления настоящее раскрытие демонстрирует способы идентификации соединений, модулирующих кальцийчувствительный рецептор, например, in silico и in vitro методы.

В некоторых вариантах осуществления настоящее раскрытие относится к кормовым продуктам для домашних животных, включающим ароматизирующую композицию, содержащую соединение, где ароматизирующая композиция присутствует в количестве, эффективном для усиления вкуса кокуми в кормовых продуктах, которое определяется дегустационной комиссией. Ароматизирующие композиции могут быть включены в систему доставки для применения в кормовых продуктах для домашних животных.

В некоторых вариантах осуществления настоящее раскрытие относится к кормовым продуктам для домашних животных, включающим ароматизирующую композицию, содержащую соединение, где ароматизирующая композиция присутствует в концентрации от около 0,0001 вес.% до около 10 вес.% (% вес./вес.) или от около 0,001% до около 1% вес./вес. кормового продукта для домашних животных. В некоторых вариантах осуществления кормовой продукт для домашних животных представляет собой корм для домашних кошек.

В некоторых вариантах осуществления настоящее раскрытие относится к кормовым продуктам для домашних животных, включающим ароматизирующую композицию, содержащую соединение. В некоторых вариантах осуществления ароматизирующая композиция присутствует в концентрации от около 0,001 ppm до около 1000 ppm кормового продукта для домашних животных. Альтернативно или дополнительно, соединение может присутствовать в концентрации от около 1 пM до около 1 М в кормовом продукте для домашних животных.

Кроме того, настоящее раскрытие относится к способам усиления вкусовой привлекательности кормового продукта для домашних животных. В некоторых вариантах осуществления способ включает смешивание кормового продукта для домашних животных с ароматизирующей композицией. В некоторых вариантах осуществления ароматизирующая композиция присутствует в концентрации от около 0,001 вес.% до около 10 вес.% или от около 0,01% до около 1% вес./вес. смеси.

В некоторых вариантах осуществления настоящего раскрытия способ усиления вкусовой привлекательности кормового продукта для домашних животных включает смешивание кормового продукта для домашних животных с ароматизирующей композицией. В некоторых вариантах осуществления ароматизирующая композиция присутствует в концентрации от около 0,001 ppm до около 1000 ppm смеси. Альтернативно или дополнительно, по меньшей мере, одно соединение присутствует в концентрации от около 1 пM до около 1 М в смеси.

В некоторых вариантах осуществления настоящего раскрытия ароматизирующую композицию смешивают с кормовым продуктом для домашних животных в количестве, эффективном для усиления вкусовой привлекательности кормового продукта для домашних животных.

Настоящий раскрываемый предмет изобретения также относится к способам модуляции активности кальцийчувствительного рецептора, включающим контактирование композиции с кальцийчувствительным рецептором, например, кальцийчувствительным рецептором кошки, содержащим аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1, где композиция взаимодействует с одной или более аминокислотами в центре взаимодействия кальцийчувствительного рецептора, выбранными из группы, состоящей из Asn64, Phe65, Asn102, Thr145, Ser147, Ala168, Ser169, Ser170, Asp190, Gln193, Asp216, Tyr218, Ser272, Glu297, Ala298, Trp299, Ala300, Ser302, Leu304, Tyr411, Thr412 и His413 и их комбинаций в VFT домене и/или Phe684, Gly685 и/или Phe688 в спирали 3, Gln735 в спирали 4, Met771, Ala772, Phe775, Leu776 и/или Thr780 в спирали 5, Phe814, Val817, Trp818 и/или Phe821 в спирали 6 и/или Glu837, Ala840 и/или Ile841 в спирали 7 трансмембранного домена 7TM; и их комбинаций. В настоящем раскрытии спирали 7TM домена нумеруются последовательно в соответствии с обычной терминологией GPCR.

Настоящий раскрываемый предмет изобретения также относится к способам идентификации композиции, которая модулирует активность кальцийчувствительного рецептора, включающим контактирование испытуемого вещества с кальцийчувствительным рецептором и определение взаимодействия между испытуемым веществом и одной или более аминокислотами в центре взаимодействия кальцийчувствительного рецептора, как описано здесь.

Вышеизложенное довольно широко обозначило признаки и технические преимущества настоящей заявки для того, чтобы последующее подробное описание можно было лучше понять. В дальнейшем будут описаны дополнительные признаки и преимущества заявки, которые составляют предмет пунктов формулы изобретения заявки. Специалистам в данной области должно быть понятно, что концепция и конкретный раскрытый вариант осуществления могут быть легко использованы в качестве основы для модификации или проектирования других структур для выполнения того же назначения настоящей заявки. Также специалистам в данной области должно быть понятно, что такие эквивалентные конструкции не выходят за рамки сущности и объема заявки, как изложено в прилагаемой формуле изобретения. Новые признаки, которые считаются характерными для заявки, как для ее структуры, так и способа осуществления, вместе с дополнительными целями и преимуществами будут лучше понятны из последующего описания.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ФИГУР

На фиг.1 показан димер CaSR.

На фиг.2 показан димер CaSR и представлены различные связывающие домены CaSR.

На фиг.3А-3С показано in silico моделирование связывания соединения L-аспарагиновая кислота с Venus Flytrap доменом CaSR кошки. (A) показывает структуру связывающего соединения, (B) показывает модель связывания соединения с CaSR кошки, а (C) показывает предполагаемые аминокислотные остатки CaSR, которые взаимодействуют со связывающим соединением.

На фиг.4A-4C показано in silico моделирование связывания соединения L-лизин с Venus Flytrap доменом CaSR кошки. (A) показывает структуру связывающего соединения, (B) показывает модель связывания соединения с CaSR, а (C) показывает предполагаемые аминокислотные остатки CaSR, которые взаимодействуют со связывающим соединением.

На фиг.5А-5С показано in silico моделирование связывания соединения L-(+)-2-амино-3-фосфонопропионовая кислота с Venus Flytrap доменом CaSR кошки. (A) показывает структуру связывающего соединения, (B) показывает модель связывания соединения с CaSR, а (C) показывает предполагаемые аминокислотные остатки CaSR, которые взаимодействуют со связывающим соединением.

На фиг.6А-6С показано in silico моделирование связывания соединения глутатион с Venus Flytrap доменом CaSR кошки. (A) показывает структуру связывающего соединения, (B) показывает модель связывания соединения с CaSR, а (C) показывает предполагаемые аминокислотные остатки CaSR, которые взаимодействуют со связывающим соединением.

На фиг.7А-7С показано in silico моделирование связывания соединения H-γ-Glu-Val-Gly-OH с Venus Flytrap доменом CaSR кошки. (A) показывает структуру связывающего соединения, (B) показывает модель связывания соединения с CaSR, а (C) показывает предполагаемые аминокислотные остатки CaSR, которые взаимодействуют со связывающим соединением.

На фиг.8А-8С показано in silico моделирование связывания соединения H-γ-Glu-Tyr-OH с Venus Flytrap доменом CaSR кошки. (A) показывает структуру связывающего соединения, (B) показывает модель связывания соединения с CaSR, а (C) показывает предполагаемые аминокислотные остатки CaSR, которые взаимодействуют со связывающим соединением.

На фиг.9A-9C показано in silico моделирование связывания соединения H-β-Asp-Leu-OH с Venus Flytrap доменом CaSR кошки. (A) показывает структуру связывающего соединения, (B) показывает модель связывания соединения с CaSR, а (C) показывает предполагаемые аминокислотные остатки CaSR, которые взаимодействуют со связывающим соединением.

На фиг.10А-10C показано in silico моделирование связывания соединения N-(1-(4-хлорфенил)этил)-3-(4-изопропоксифенил)-3-фенилпропан-1-амин с 7 трансмембранным доменом CaSR кошки. (A) показывает структуру связывающего соединения, (B) показывает модель связывания соединения с CaSR, а (C) показывает предполагаемые аминокислотные остатки CaSR, которые взаимодействуют со связывающим соединением.

На фиг.11А-11С показано in silico моделирование связывания соединения N-(1-(4-хлорфенил)этил)-3-(4-метоксифенил)-4-метилпентан-1-амин с 7 трансмембранным доменом CaSR кошки, (A) показывает структуру связывающего соединения, (B) показывает модель связывания соединения с CaSR, а (C) показывает предполагаемые аминокислотные остатки CaSR, которые взаимодействуют со связывающим соединением.

На фиг.12A-12C показано in silico моделирование связывания соединения 3-(фуран-2-ил)-4-фенил-N-(1-фенилэтил)бутан-1-амин с 7 трансмембранным доменом CaSR кошки. (A) показывает структуру связывающего соединения, (B) показывает модель связывания соединения с CaSR, а (C) показывает предполагаемые аминокислотные остатки CaSR, которые взаимодействуют со связывающим соединением.

На фиг.13А-13С показано in silico моделирование связывания соединения 3-(2,2-диметилтетрагидро-2Н-пиран-4-ил)-3-фенил-N-(1-фенилэтил)пропан-1-амин с 7 трансмембранным доменом CaSR кошки. (A) показывает структуру связывающего соединения, (B) показывает модель связывания соединения с CaSR, а (C) показывает предполагаемые аминокислотные остатки CaSR, которые взаимодействуют со связывающим соединением.

На фиг.14А-14С показано in silico моделирование связывания соединения N-((2,3-дигидробензофуран-2-ил)метил)-1-(хинолин-2-ил)этанамин с 7 трансмембранным доменом CaSR кошки. (A) показывает структуру связывающего соединения, (B) показывает модель связывания соединения с CaSR, а (C) показывает предполагаемые аминокислотные остатки CaSR, которые взаимодействуют со связывающим соединением.

На фиг.15А-15С показано in silico моделирование связывания соединения 2,6-дихлор-4-(1-(((1-метил-2-(тиофен-2-ил)пиперидин-3-ил)метил)амино)этил)анилин с 7 трансмембранным доменом CaSR кошки. (A) показывает структуру связывающего соединения, (B) показывает модель связывания соединения с CaSR, а (C) показывает предполагаемые аминокислотные остатки CaSR, которые взаимодействуют со связывающим соединением.

На фиг.16А-16С показано in silico моделирование связывания соединения 1-(4-хлорфенил)-N-(2-(2,2-диметил-4-(п-толил)тетрагидро-2Н-пиран-4-ил)этил)этанамин с 7 трансмембранным доменом CaSR кошки. (A) показывает структуру связывающего соединения, (B) показывает модель связывания соединения с CaSR, а (C) показывает предполагаемые аминокислотные остатки CaSR, которые взаимодействуют со связывающим соединением.

На фиг.17А-17С показано in silico моделирование связывания соединения метил-2-(3-цианофенил)-2-((4-фтор-2,3-дигидро-1Н-инден-1-ил)амино)ацетат с 7 трансмембранным доменом CaSR кошки. (A) показывает структуру связывающего соединения, (B) показывает модель связывания соединения с CaSR, а (C) показывает предполагаемые аминокислотные остатки CaSR, которые взаимодействуют со связывающим соединением.

На фиг.18A-18C показано in silico моделирование связывания соединения 2-(2-ацетил-1,2-дигидроизохинолин-1-ил)-N-(1-(3-бромфенил)этил)ацетамид с 7 трансмембранным доменом CaSR кошки. (A) показывает структуру связывающего соединения, (B) показывает модель связывания соединения с CaSR, а (C) показывает предполагаемые аминокислотные остатки CaSR, которые взаимодействуют со связывающим соединением.

На фиг.19A-19C показано in silico моделирование связывания соединения 1-(бензо[d]тиазол-2-ил)-1-(2,4-диметилфенил)этанол с 7 трансмембранным доменом CaSR кошки. (A) показывает структуру связывающего соединения, (B) показывает модель связывания соединения с CaSR, а (C) показывает предполагаемые аминокислотные остатки CaSR, которые взаимодействуют со связывающим соединением.

На фиг.20A-20C показано in silico моделирование связывания соединения 3-(4-((4-фтор-4'-метилбифенил-2-ил)метокси)фенил)пропановая кислота (также известная как TUG891) с 7 трансмембранным доменом CaSR кошки. (A) показывает структуру связывающего соединения, (B) показывает модель связывания соединения с CaSR, а (C) показывает предполагаемые аминокислотные остатки CaSR, которые взаимодействуют со связывающим соединением.

На фиг.21 показаны кривые зависимости «доза-эффект» активации in vitro CaSR кошки для различных соединений, описанных в примере 2.

На фиг.22A-22B показаны кривые зависимости «доза-эффект» активации in vitro CaSR для четырех аминокислот, описанных в таблице 4.

На фиг.23 показана аминокислотная последовательность и нуклеотидная последовательность CaSR кошки, идентифицированные соответственно как SEQ ID NO: 1 и 2.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

До настоящего времени сохраняется потребность в модификаторе вкуса и аромата, который может усиливать и/или улучшать вкусовую привлекательность различных кормовых продуктов для домашних кошек. Настоящая заявка относится к ароматизирующим композициям, которые содержат, по меньшей мере, одно соединение, модулирующее активность кальцийчувствительного рецептора (CaSR). Ароматизирующие композиции можно использовать для усиления вкусовой привлекательности и/или улучшения или модификации вкуса различных кормовых продуктов для домашних животных, таких как питательно полноценный корм для домашних животных, и можно добавлять в кормовые продукты для домашних животных в различных форматах системы доставки. Ароматизирующие композиции могут дополнительно содержать комбинации соединений, включающих аминокислоты, нуклеотиды и фураноны (которые описаны в международной заявке № PCT/EP2013/072788, поданной 31 октября 2013, PCT/EP2013/072789, поданной 31 октября 2013, PCT/EP2013/072790, поданной 31 октября 2013, и PCT/EP2013/072794, поданной 31 октября 2013, каждая из которых включена посредством ссылки в полном объеме) и/или трансмембранные соединения, активирующие рецептор умами (которые описаны в международной заявке № PCT/US15/65036, поданной 10 декабря 2015, которая включена посредством ссылки в полном объеме), и/или производные нуклеотидов (которые описаны в международной заявке № PCT/US15/65046, поданной 10 декабря 2015, которая включена посредством ссылки в полном объеме), и/или соединения, активирующие рецептор жирных кислот (GPR120) (которые описаны в международной заявке № PCT/US15/65106, поданной 10 декабря 2015, которая включена посредством ссылки в полном объеме).

1. Определения

Термины, используемые в данном описании, в целом имеют свои обычные значения в данной области, в контексте данного изобретения и в определенном контексте, где используется каждый термин. Некоторые термины рассмотрены ниже или в других местах в описании для обеспечения дополнительных указаний практикам в описании композиций и способов по изобретению и как получить и использовать их.

В том смысле, в каком здесь применяются грамматические формы единственного числа при использовании в сочетании с термином «содержащий» в формуле изобретения и/или описании, они могут означать «один», но также соответствовать значениям «один или более», «по меньшей мере, один» и «один или более чем один». Более того, термины «имеющий», «включающий», «состоящий» и «содержащий» являются взаимозаменяемыми, и специалист в данной области понимает, что данные термины являются неограничивающими терминами.

Термин «около» или «приблизительно» означает в пределах допустимой погрешности для конкретного значения, как определяет специалист с общей подготовкой в данной области, которая будет зависеть частично от того, как значение измеряют или определяют, то есть от ограничений системы измерения. Например, «около» может означать в пределах 3 или более чем 3 стандартного отклонения на практике в данной области. Альтернативно, «около» может означать диапазон до 20%, предпочтительно до 10%, более предпочтительно до 5% и еще более предпочтительно до 1% указанного значения. Альтернативно, в частности, относительно биологических систем или процессов, термин может означать в пределах порядка величины, предпочтительно в пределах 5-кратного и более предпочтительно - в пределах от 2-кратного значения величины.

В том смысле, в котором здесь используется термин «вкус», он относится к ощущению, вызванному активацией или ингибированием рецепторных клеток вкусовых луковиц субъекта. В некоторых вариантах осуществления вкус можно выбрать из группы, состоящей из сладкого, кислого, соленого, горького, кокуми и умами вкуса. В некоторых вариантах осуществления вкус вызван у субъекта тастантом. В некоторых вариантах осуществления тастант представляет собой синтетический тастант. В некоторых вариантах осуществления тастант получают из природного источника.

В некоторых вариантах осуществления «вкус» может включать вкус кокуми. Смотри, например, Ohsu et al., J. Biol. Chem., 285(2): 1016-1022 (2010), содержание которой включено здесь посредством ссылки. В некоторых вариантах осуществления вкус кокуми представляет собой ощущение, вызванное активацией или ингибированием рецепторных клеток вкусовых луковиц субъекта, например, рецептора CaSR, и отличается от других вкусов, например, сладкого, соленого и умами вкусов, хотя он может выполнять функцию усилителя вкуса для этих вкусов.

Используемый здесь термин «вкусовый профиль» относится к комбинации вкусов, таких как, например, один или более из сладкого, кислого, соленого, горького, умами, кокуми и вкуса свободной жирной кислоты. В некоторых вариантах осуществления вкусовой профиль образуется одним или более тастантами, которые присутствуют в композиции в одинаковых или разных концентрациях. В некоторых вариантах осуществления вкусовой профиль относится к интенсивности вкуса или комбинации вкусов, например, сладкого, кислого, солевого, горького, умами, кокуми и вкуса свободной жирной кислоты, определяемых субъектом или любым анализом, известным в данной области. В некоторых вариантах осуществления модификация, изменение или варьирование комбинации тастантов во вкусовом профиле может изменить сенсорное восприятие субъекта.

В том смысле, в котором здесь используется термин «вкусоаромат», он относится к одному или более сенсорным стимулам, таким как, например, один или более стимулов: вкус (вкусовой), запах (обонятельный), осязание (тактильный) и температура (тепловой). В некоторых неограничивающих вариантах осуществления сенсорное восприятие субъекта при воздействии вкусоаромата можно классифицировать как характерное восприятие конкретного аромата. Например, вкусоаромат может быть идентифицирован субъектом в качестве, но не ограничиваясь этим, цветочного, цитрусового, ягодного, орехового, карамельного, шоколадного, острого, дымного, сырного, мясного и тому подобного вкусоаромата. В том смысле, в каком здесь используется ароматизирующая композиция, ее можно выбрать из жидкости, сухого порошка, спрея, пасты, суспензии и любой их комбинации. Ароматизатор может быть натуральной композицией, искусственной композицией, идентичной натуральной или любой их комбинацией.

В том смысле, в котором здесь используется взаимозаменяемо термин «аромат» и «запах», он относится к обонятельной реакции на стимул. Для примера, а не в качестве ограничения, аромат может быть образован ароматическими веществами, которые воспринимаются рецепторами запаха обонятельной системы.

В том смысле, в каком здесь используется термин «вкусоароматический профиль», он относится к комбинации сенсорных стимулов, например, вкусов, таких как сладкий, кислый, горький, соленый, умами, кокуми и вкус свободной жирной кислоты, и/или обонятельных, тактильных и/или тепловых стимулов. В некоторых вариантах осуществления вкусоароматический профиль содержит один или более вкусоароматов, которые вносят свой вклад в сенсорное восприятие субъекта. В некоторых вариантах осуществления модификация, изменение или варьирование комбинации стимулов во вкусоароматическом профиле может изменить сенсорное восприятие субъекта.

Используемый здесь термин «примешивание», например, «примешивание ароматизирующей композиции или их комбинаций по настоящей заявке к кормовому продукту», относится к способу, в котором ароматизирующая композиция или отдельные компоненты ароматизирующей композиции смешиваются или добавляются в готовый продукт или смешиваются или добавляется в некоторые или все компоненты продукта во время получения продукта или некоторых комбинаций этих стадий. При использовании в контексте примешивания термин «продукт» относится к продукту или любым его компонентам. Данная стадия примешивания может включать способ, выбранный из стадии добавления ароматизирующей композиции в продукт, распыления ароматизирующей композиции на продукт, покрытия ароматизирующей композицией продукта, суспендирования продукта в ароматизирующей композиции, окрашивания ароматизирующей композицией продукта, обмазывания охлаждающей композицией продукта, инкапсулирования продукта в ароматизирующую композицию, смешивания ароматизирующей композиции с продуктом и любой их комбинации. Ароматизирующая композиция может представлять собой жидкость, эмульсию, сухой порошок, спрей, пасту, суспензию и любую их комбинацию.

В некоторых вариантах осуществления соединения ароматизирующей композиции можно получить во время обработки кормового продукта для домашних животных, например, стерилизации, автоклавирования и/или экструдирования, из соединений-предшественников, присутствующих в кормовом продукте для домашних животных. В некоторых вариантах осуществления соединение ароматизирующей композиции можно получить во время обработки кормового продукта для домашних животных, а дополнительные компоненты ароматизирующей композиции можно добавить в кормовой продукт для домашних животных примешиванием.

В том смысле, в каком здесь используется термин «ppm», он означает частей на миллион и является относительным параметром веса. Часть на миллион представляет собой микрограмм на грамм, таким образом, что компонент, который присутствует в количестве 10 ppm, присутствует в количестве 10 микрограмм конкретного компонента на 1 г совокупной смеси.

В том смысле, в каком здесь используется термин «вкусовая привлекательность», он может относиться в целом к желанию животного съесть определенный кормовой продукт. Усиление «вкусовой привлекательности» кормового продукта для домашних животных может привести к повышению удовольствия и принятия корма для домашних животных животным-компаньоном в целях обеспечения скармливания животному «здорового количества» корма для домашних животных. В том смысле, в каком здесь используется термин «здоровое количество» корма для домашних животных, он относится к количеству, которое позволяет животному-компаньону обеспечивать или получать рацион, способствующий в целом его общему состоянию здоровья в отношении микроэлементов, макроэлементов и энергетической ценности, таких как установленные в «Mars Petcare Essential Nutrient Standards». В некоторых вариантах осуществления «вкусовая привлекательность» может означать относительное предпочтение животным одного кормового продукта над другим. Например, если животное демонстрирует предпочтение одному из двух или более кормовых продуктов, предпочтительный кормовой продукт является более «вкусным» и обладает «повышенной вкусовой привлекательностью». В некоторых вариантах осуществления относительную вкусовую привлекательность одного кормового продукта по сравнению с одним или более другими кормовыми продуктами можно определить, например, при проведении параллельных сравнений свободного выбора, например, на основе относительного потребления кормовых продуктов, или других подходящих измерений предпочтений, указывающих на вкусовую привлекательность. Вкусовую привлекательность можно определить в соответствии со стандартным протоколом испытаний, в котором животное имеет равный доступ к обоим кормовым продуктам, таким как тест, называемый «тест двух мисок» или «тест сравнения». Такое предпочтение может возникать вследствие любого ощущения животного, но может быть связано, в частности, со вкусом, послевкусием, запахом, ощущением во рту и/или текстурой.

Термин «корм для домашних животных» или «кормовой продукт для домашних животных» означает продукт или композицию, предназначенную для потребления животным-компаньоном, таким как кошки, собаки, морские свинки, кролики, птицы и лошади. Для примера, а не в качестве ограничения, животное-компаньон может быть «домашней» кошкой, такой как Felis domesticus. В некоторых вариантах осуществления животное-компаньон может быть «домашней» собакой, например Canis lupus familiaris. «Корм для домашних животных» или «кормовой продукт для домашних животных» включает любой кормовой продукт, корм, закуску, кормовую добавку, жидкость, напиток, лакомство, игрушку (жевательные и/или потребляемые игрушки), суррогатный корм или заменитель корма.

В том смысле, в каком здесь используется термин «питательно полноценный», он относится к кормовому продукту для домашних животных, который содержит все известные необходимые питательные вещества для предполагаемого получателя кормового продукта для домашних животных в соответствующих количествах и пропорциях, основанных, например, на рекомендациях признанных или компетентных органов в области кормления животных-компаньонов. Следовательно, такие продукты способны выполнять функцию единственного источника кормового рациона для поддержания жизни без добавления дополнительных источников питательных веществ.

В том смысле, в каком здесь используется термин «ароматизирующая композиция», он относится, по меньшей мере, к одному соединению или его биологически приемлемой соли, модулирующим, включая повышение, увеличение, усиление действия, ослабление, подавление или стимулирование вкусов, запахов, ароматов и/или текстур натурального или синтетического тастанта, ароматизирующего вещества, вкусового профиля, ароматического профиля и/или текстурного профиля у животного или человека. В некоторых вариантах осуществления ароматизирующая композиция содержит комбинацию соединений или их биологически приемлемых солей. В некоторых вариантах осуществления ароматизирующая композиция содержит одно или более вспомогательных веществ.

В том смысле, в каком здесь используется термин «модулирует» или «модифицирует», он означает увеличение или уменьшение количества, качества или влияния конкретной активности рецептора и/или увеличение или уменьшение экспрессии, активности или функции рецептора. В том смысле, в каком здесь используется термин «модуляторы», он относятся к любым ингибирующим или активирующим соединениям, идентифицированным с использованием методов in silico, in vitro и/или in vivo, например, агонистов, антагонистов и их гомологов, включая фрагменты, варианты и миметики.

В том смысле, в каком здесь используется термин «ингибиторы» или «антагонисты», он относятся к модулирующим соединениям, которые снижают, уменьшают, блокируют, предотвращают, замедляют активацию, инактивируют, десенсибилизируют или понижают регуляцию биологической активности и/или экспрессию представляющих интерес рецепторов или метаболического пути.

В том смысле, в каком здесь используется термин «индукторы», «активаторы» или «агонисты», он относятся к модулирующим соединениям, которые повышают, индуцируют, стимулируют, увеличивают, активируют, облегчают, усиливают активацию, сенсибилизируют или повышают регуляцию представляющего интерес рецептора или метаболического пути.

В некоторых вариантах осуществления «активное соединение» представляет собой модулирующее соединение, то есть является активным в отношении кальцийчувствительного рецептора. Например, активное соединение может быть активным в отношении кальцийчувствительного рецептора в качестве агониста, антагониста, позитивного аллостерического модулятора (ПАМ), негативного аллостерического модулятора или демонстрируя сочетание активностей, например, как активности агониста, так и активности позитивного аллостерического модулятора или как активности агонистов, так и активности негативного аллостерического модулятора.

В том смысле, в каком здесь используются термины «вектор» и «вектор экспрессии», они относятся к молекулам ДНК, являющимся или линейными, или кольцевыми, в которые может быть интегрирован фрагмент последовательности другой ДНК соответствующего размера. Такой фрагмент(ы) ДНК может включать дополнительные сегменты, которые обеспечивают транскрипцию гена, кодированного фрагментом последовательности ДНК. Дополнительные сегменты могут включать, но не ограничиваться ими: промоторы, терминаторы транскрипции, энхансеры, участки внутренней посадки рибосом, нетранслируемые области, сигналы полиаденилирования, селективные маркеры, ориджины репликации и тому подобное. Экспрессирующие векторы часто получают из плазмид, космид, вирусных векторов и искусственных хромосом дрожжей. Векторы часто представляют собой рекомбинантные молекулы, содержащие последовательности ДНК из нескольких источников.

Термин «функционально связанный» в применении к последовательностям ДНК, например, в векторе экспрессии, указывает, что последовательности расположены таким образом, что для достижения намеченных целей они действуют совместно, то есть последовательность промотора позволяет инициировать транскрипцию, которая происходит с помощью связанной кодирующей последовательности до сигнала терминации транскрипции.

В том смысле, в каком здесь используется термин «молекула нуклеиновой кислоты» и «нуклеотидная последовательность», он относится к одно- или двухцепочечной ковалентно связанной последовательности нуклеотидов, в которых 3' и 5' концы каждого нуклеотида соединены фосфодиэфирными связями. Молекула нуклеиновой кислоты может состоять из дезоксирибонуклеотидных оснований или рибонуклеотидных оснований и может быть синтезирована in vitro или выделена от природных источников.

Термины «полипептид», «пептид», «аминокислотная последовательность» и «белок», используемые здесь взаимозаменяемо, относятся к молекуле, образованной связыванием, по меньшей мере, двух аминокислот. Связь между одним аминокислотным остатком и следующим является амидной связью и иногда называется пептидная связь. Полипептид может быть получен подходящим способом, известным в данной области, включающим выделение из природных источников, экспрессию в системе рекомбинантной экспрессии, химический синтез или ферментативный синтез. Термины могут применяться к аминокислотным полимерам, в которых один или более аминокислотных остатков представляют собой искусственный химический миметик соответствующей природной аминокислоты, а также к природным аминокислотным полимерам и неприродным аминокислотным полимерам.

В том смысле, в каком здесь используется термин «аминокислота», он относится к природным и синтетическим аминокислотам, а также к аналогам аминокислот и миметикам аминокислот, которые действуют аналогично природным аминокислотам. Природные аминокислоты представляют собой аминокислоты, кодированные генетическим кодом, а также те аминокислоты, которые затем модифицируются, например гидроксипролин, гамма-карбоксиглутамат и O-фосфосерин. Аналоги и производные аминокислот могут относиться к соединениям, которые имеют такую же основную химическую структуру, как природная аминокислота, то есть углерод, который связан с водородом, карбоксильной группой, аминогруппой и R группой, например гомосерин, норлейцин, метионинсульфоксид и метионинметилсульфоний. Такие аналоги могут иметь модифицированные R-группы (например, норлейцин) или модифицированные боковые пептидные связи, но сохранять такую же основную химическую структуру, как природная аминокислота. Миметики аминокислот означают химические соединения, которые имеют структуру, отличающуюся от общей химической структуры аминокислоты, но но действуют аналогично природной аминокислоте.

Термины «выделенный» или «очищенный», используемые здесь взаимозаменяемо, относятся к нуклеиновой кислоте, полипептиду или другому биологическому фрагменту, отделенному от компонентов, с которыми он связан в природных условиях. Термин «выделенный» может относиться к полипептиду, который является отдельным и обособленным от целого организма, в котором молекула встречается в природе или присутствует по существу в отсутствие других биологических макромолекул того же типа. Термин «выделенный» относительно полинуклеотида может относиться к молекуле нуклеиновой кислоты, полностью или частично лишенной последовательностей, обычно связанных с ней в природе; или к последовательности, существующей в природе, но имеющей гетерологичные последовательности, связанные с ней; или к молекуле, диссоциировавшей от хромосомы.

Используемый здесь термин «рекомбинантный» можно использовать для описания молекулы нуклеиновой кислоты и относится к полинуклеотиду геномного, РНК, ДНК, кДНК, вирусного, полусинтетического или синтетического происхождения, который в силу своего происхождения или манипуляции не связан со всем или частью полинуклеотида, с которым он связан в природе.

В том смысле, в каком здесь используется термин «слияние», он относится к соединению различных пептидных или белковых сегментов генетическими или химическими методами, в которых соединенные концы пептидных или белковых сегментов могут быть непосредственно связаны друг с другом или могут быть разделены линкерными или спейсерными фрагментами, такими как аминокислотные остатки или другие линкерные группы.

Термин «алкил» относится к линейной или разветвленной С₁-С₂₀ углеводородной группе, состоящей исключительно из атомов углерода и водорода, не содержащей ненасыщенности, и которая присоединена к остальной части молекулы посредством одинарной связи, например, метил, этил, н-пропил, 1-метилэтил (изопропил), н-бутил, н-пентил, 1,1-диметилэтил (трет-бутил).

Термин «циклоалкил» означает ненасыщенную неароматическую моно- или полициклическую углеводородную кольцевую систему (содержащую, например, C₃-C₆), такую как циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил. Примеры полициклических циклоалкильных групп (содержащих, например, С₆-С₁₅) включают пергидронафтильную, адамантильную и норборнильную группы, мостиковые циклические группы или спиробициклические группы, например, спиро-(4,4)-нон-2-ил.

2. Кальцийчувствительный рецептор (CaSR)

Настоящий раскрываемый предмет изобретения относится к кальцийчувствительным рецепторам для применения в раскрытых способах. Кальцийчувствительные рецепторы по настоящему раскрытию могут включать кальцийчувствительные рецепторы млекопитающих, такие как, но не ограничиваясь ими, кальцийчувствительные рецепторы кошки, собаки и человека, для идентификации активных соединений со вкусом кокуми.

В некоторых неограничивающих вариантах осуществления кальцийчувствительный рецептор по настоящему раскрытию кодируется нуклеиновой кислотой, описанной в международной заявке № PCT/US15/55149, поданной 12 октября 2015, которая включена здесь посредством ссылки в полном объеме. В некоторых неограничивающих вариантах осуществления кальцийчувствительный рецептор по настоящему раскрытию содержит аминокислотную последовательность, описанную в международной заявке № PCT/US15/55149, поданной 12 октября 2015.

В некоторых неограничивающих вариантах осуществления кальцийчувствительный рецептор содержит нуклеотидную последовательность кальцийчувствительного рецептора кошки, собаки и человека, описанную в международной заявке № PCT/US15/55149, поданной 12 октября 2015.

В некоторых неограничивающих вариантах осуществления кальцийчувствительный рецептор содержит аминокислотную последовательность кальцийчувствительного рецептора кошки, собаки и человека, описанную в международной заявке № PCT/US15/55149, поданной 12 октября 2015.

В некоторых вариантах осуществления кальцийчувствительный рецептор для применения в настоящем раскрываемом предмете изобретения может включать рецептор, содержащий нуклеотидную последовательность, имеющую, по меньшей мере, 85%, по меньшей мере, 90%, по меньшей мере, 91%, по меньшей мере, 92%, по меньшей мере, 93%, по меньшей мере, 94%, по меньшей мере, 95%, по меньшей мере, 96%, по меньшей мере, 97%, по меньшей мере, 98% или, по меньшей мере, 99% идентичности с нуклеотидной последовательностью кальцийчувствительного рецептора кошки, собаки и человека.

В некоторых вариантах осуществления кальцийчувствительный рецептор для применения в настоящем раскрываемом предмете изобретения может включать рецептор, содержащий аминокислотную последовательность, имеющую, по меньшей мере, 85%, по меньшей мере, 90%, по меньшей мере, 91%, по меньшей мере, 92%, по меньшей мере, 93%, по меньшей мере, 94%, по меньшей мере, 95%, по меньшей мере, 96%, по меньшей мере, 97%, по меньшей мере, 98% или, по меньшей мере, 99% идентичности с аминокислотной последовательностью кальцийчувствительного рецептора кошки, собаки и человека.

В некоторых вариантах осуществления раскрытый предмет изобретения относится к применению выделенного или очищенного кальцийчувствительного рецептора и/или его вариантов и фрагментов. Раскрытый предмет изобретения также охватывает применение вариантов последовательности. В некоторых вариантах осуществления вариация может происходить в каждой или обеих кодирующей и некодирующей областях нуклеотидной последовательности кальцийчувствительного рецептора. Варианты могут включать по существу гомологичный белок, кодируемый одним и тем же генетическим локусом в организме, то есть аллельный вариант. Варианты также включают белки, полученные из других генетических локусов в организме, например, кошки, но имеющие существенную гомологию с кальцийчувствительным рецептором, то есть гомолог. Варианты также могут включать белки по существу гомологичные кальцийчувствительному рецептору, но полученные из другого организма, то есть ортолог. Варианты также включают белки, которые по существу гомологичны кальцийчувствительному рецептору, который получают химическим синтезом. Варианты также включают белки, которые по существу гомологичны кальцийчувствительному рецептору, который получают рекомбинантными методами.

Раскрытый предмет изобретения также относится к слитым белкам, которые содержат кальцийчувствительный рецептор или его фрагмент. В некоторых вариантах осуществления слитый белок по настоящему раскрытию может включать детектируемый маркер, функциональную группу, такую как носитель, метку, стабилизирующую последовательность или механизм, посредством которого можно обнаружить связывание агониста с кальцийчувствительным рецептором. Неограничивающие варианты осуществления метки включают метку FLAG, метку His, метку MYC, связывающий мальтозу белок и другие, известные в данной области. Настоящий раскрываемый предмет изобретения также относится к нуклеиновым кислотам, кодирующим такие слитые белки, векторам, содержащим нуклеиновые кислоты, кодирующие слитые белки, и клеткам-хозяевам, содержащим такие нуклеиновые кислоты или векторы. В некоторых вариантах осуществления слияния можно проводить на аминоконце (N-конце) кальцийчувствительного рецептора или на карбоксильном конце (С-конце) кальцийчувствительного рецептора.

В некоторых вариантах осуществления описанные здесь кальцийчувствительные рецепторы могут содержать дополнительные аминокислоты на N-терминальном и/или С-терминальном конце последовательностей, например, при использовании в способах по раскрываемому предмету изобретения. В некоторых вариантах осуществления дополнительные аминокислоты могут способствовать иммобилизации полипептида для целей скрининга или позволить полипептиду стать частью слитого белка, как описано выше, для облегчения определения биологической активности.

3. Соединения, модулирующие кальцийчувствительный рецептор

Настоящее раскрытие относится к ароматизирующим композициям, содержащим, по меньшей мере, одно соединение, которое может модулировать активность кальцийчувствительного рецептора (CaSR). Описанные здесь соединения идентифицировали с помощью метода in vitro, в котором определяли способность соединений активировать CaSR кошки, экспрессированный клетками в культуре, и/или метода in silico, в котором способность соединений связываться с CaSR определяли in silico. Ароматизирующие композиции можно использовать для усиления или модификации вкусовой привлекательности, вкуса или аромата кормовых продуктов для домашних животных. В некоторых вариантах осуществления описанные здесь ароматизирующие композиции можно добавить в композиции кормовых продуктов для домашних животных в различных форматах системы доставки. Ароматизирующие композиции могут содержать комбинации соединений, например, комбинации одного или более соединений и/или одной или более аминокислот, и/или одного или более нуклеотидов, и/или одного или более фуранонов, описанных здесь и в международных заявках PCT/EP2013/072788, поданной 31 октября 2013, PCT/EP2013/072789, поданной 31 октября 2013, PCT/EP2013/072790, поданной 31 октября 2013, PCT/EP2013/072794, поданной 31 октября 2013; и/или одного или более трансмембранных соединений, активирующих рецептор умами, описанных здесь и в международной заявке № PCT/US15/65036, поданной 10 декабря 2015; и/или одного или более производных нуклеотидов, описанных здесь и в международной заявке № PCT/US15/65046, поданной 10 декабря 2015; и/или одного или более соединений, активирующих рецептор жирных кислот (GPR120), описанных здесь и в международной заявке № PCT/US15/65106, поданной 10 декабря 2015; каждая из которых включена здесь посредством ссылки в полном объеме.

В некоторых вариантах осуществления соединения, модулирующие кальцийчувствительный рецептор, которые можно назвать модуляторами кальцийчувствительного рецептора, по настоящей заявке идентифицируют с помощью in silico моделирования кальцийчувствительного рецептора, например, кальцийчувствительного рецептора кошки, где модуляторы кальцийчувствительного рецептора по настоящей заявке имеют структуру, соответствующую центру связывания кальцийчувствительного рецептора. В некоторых вариантах осуществления метод in silico включает методы in silico, описанные здесь и в разделе «Примеры» настоящей заявки.

В некоторых вариантах осуществления модуляторы кальцийчувствительного рецептора по настоящей заявке идентифицируют посредством метода in vitro, например, где соединения-агонисты кальцийчувствительного рецептора активируют и/или модулируют раскрытый здесь кальцийчувствительный рецептор, экспрессированный клетками in vitro. В некоторых вариантах осуществления метод in vitro включает методы in vitro, описанные здесь и в разделе «Примеры» настоящей заявки.

В некоторых вариантах осуществления соединения включаются в ароматизирующую композицию без других веществ, усиливающих вкусовую привлекательность. В некоторых вариантах осуществления соединения включаются в одну или более ароматизирующих композициях с одним или более дополнительными веществами, усиливающими вкусовую привлекательности, например, нуклеотидами, производными нуклеотидов, аминокислотами, фуранонами, соединениями, активирующими рецептор жирных кислот, и трансмембранными соединениями, активирующими рецептор вкуса умами, описанными здесь, которые активируют различные активные центры различных рецепторов (например, рецептора вкуса умами).

На фиг.1 представлен пример димера кальцийчувствительного рецептора. На фиг.2 представлен пример мономера кальцийчувствительного рецептору, и выделены два связывающих домена: Venus Flytrap (VFT) домен и 7 трансмембранный (7TM) домен. Кроме того, на фиг.2 дополнительно показаны активные центры в каждом домене. Соединения, модулирующие кальцийчувствительный рецептор, которые могут называться модуляторами кальцийчувствительного рецептора, будут описаны со ссылкой на домен, с которым они взаимодействуют.

3.1 Соединения, связующие Venus Flytrap домен CaSR

Настоящее раскрытие относится к ароматизирующим композициям, которые содержат, по меньшей мере, одно соединение, модулирующее кальцийчувствительный рецептор, которое может взаимодействовать (например, связываться) с Venus Flytrap (VFT) доменом рецептора. В некоторых вариантах осуществления такие взаимодействия с VFT доменом кальцийчувствительного рецептора агонизируют кальцийчувствительный рецептор. В других вариантах осуществления соединение действует синергически с другими агонистами или модуляторами кальцийчувствительного рецептора в целях модуляции активности кальцийчувствительного рецептора. И в других вариантах осуществления взаимодействия с доменом кальцийчувствительного рецептора VFT антагонизируют кальцийчувствительный рецептор. В некоторых вариантах осуществления соединение повышает способность агониста кальцийчувствительного рецептора активировать рецептор (то есть соединение выполняет функции позитивного аллостерического модулятора).

В некоторых вариантах осуществления соединение взаимодействует с одной или более аминокислотами в VFT домене, например, одной или более из Asn64, Phe65, Asn102, Thr145, Ser147, Ala168, Ser169, Ser170, Asp190, Gln193, Asp216, Tyr218, Ser272, Glu297, Ala298, Trp299, Ala300, Ser302, Leu304, Tyr411, Thr412 и His413. Следовательно, в некоторых вариантах осуществления соединение, модулирующее кальцийчувствительный рецептор, можно идентифицировать и/или определить на основе его взаимодействия с одним или более из этих остатков.

3.1.1. Соли двухвалентных и трехвалентных металлов

В некоторых вариантах осуществления ароматизирующая композиция содержит соль двухвалентного или трехвалентного элемента II группы. Например, элемент II группы может представлять собой бериллий (Be), магний (Mg), кальций (Ca), стронций (Sr) или барий (Ba). В некоторых вариантах осуществления элемент II группы представляет собой магний (Mg). В некоторых вариантах осуществления элемент II группы представляет собой стронций (Sr). В других некоторых вариантах осуществления элемент II группы не является Mg или Sr. В некоторых вариантах осуществления элемент II группы не является кальцием (Ca).

В некоторых вариантах осуществления, по меньшей мере, одно соединение, модулирующее кальцийчувствительный рецептор, представляет собой соль двухвалентного или трехвалентного лантаноида. Например, лантаноид может представлять собой лантан (La), церий (Ce), празеодим (Pr), неодим (Nd), прометий (Pm), самарий (Sm), европий (Eu), гадолиний (Gd), тербий (Tb), диспрозия (Dy), гольмия (Ho), эрбия (Er), тулия (Tm), иттербия (Yb) или лютеция (Lu). В некоторых вариантах осуществления лантаноид представляет собой гадолиний (Gd). В некоторых вариантах осуществления лантаноид представляет собой празеодим (Pr). В некоторых вариантах осуществления лантаноид представляет собой тербий (Tb). В некоторых вариантах осуществления лантаноид не является гадолинием (Gd), празеодимом (Pr) или тербием (Tb).

3.1.2 Фосфорсодержащие соединения

В некоторых вариантах осуществления ароматизирующая композиция содержит фосфорсодержащее соединение формулы Vft-6.5a, Vft-6.5b или Vft-6.5c:

где Vft-6.5a имеет следующую структуру:

;

Vft-6.5b имеет следующую структуру:

;

Vft-6.5c имеет следующую структуру:

,

где в Vft-6.5a, Vft-6.5b и Vft-6.5c:

n равно 1, 2 или 3,

n₁ равно 0, 1, 2, 3 или 4,

R₃, R₄, R₅, R₆ представляют собой каждый независимо H, низший (C₁-C₆)алкил (разветвленный или неразветвленный), арилалкил (то есть CH₂Ph), арил, Ph, гетероарил или P(=X₃)OR₇R₈;

R₇ и R₈ представляют собой каждый независимо H, низший (C₁-C₆)алкил (разветвленный или неразветвленный), арилалкил (то есть CH₂Ph), арил, Ph или гетероарил;

R₁ и R₂ представляют собой каждый независимо H, CH₃, низший (C₁-C₆)алкил, гетероарил, (CH₂)_n1арил или (CH₂)_n1гетероарил;

R представляет собой независимо H, OH, CH₃, низший (C₁-C₆)алкил, гетероарил, (CH₂)_n1арил, (CH₂)_n1гетероарил, CH₂CH=CH, низшие алкены или низшие ацетилены; и

X₁, X₂, X₃ представляют собой каждый независимо О или S.

3.1.3 α-Аминокислоты I

В некоторых вариантах осуществления ароматизирующая композиция содержит соединение формулы Vft-1a или Vft-1b:

Vft-1a

Vft-1b

где n находится в диапазоне от 1 до 6;

где n₆ и n₇ представляет собой каждый независимо 1 или 2;

где X₁ и X₂ представляют собой независимо кислород или серу;

где R₁ и R₂ выбирают независимо из группы, состоящей из H, CH₃, разветвленного или неразветвленного низшего (C₁-C₈)алкила, (CH₂)_n2арила, (CH₂)_n2гетероарила, арила, гетероарила, c-C₃H₅, c-C₄H₇, c-C₅H₉, c-C₆H₁₁ и (CH₂)_n3-(C₃-C₆)циклоалкила;

где Y, R₃ и R₄, R₇ и R₈ выбирают независимо из группы, состоящей из H, CH₃ и разветвленного или неразветвленного низшего (C₁-C₁₀)алкила;

где R₅ и R₆ выбирают независимо из группы, состоящей из H, OH, разветвленного или неразветвленного низшего (C₁-C₆)алкила, O(CH₂)_n4арила, O(CH₂)_n4гетероарила, NR₇R₈, N(R₉)OH, арила и гетероарила;

где R₉, R₁₁, R₁₂ и R₁₃ независимо означают H, CH₃, разветвленный или неразветвленный низший (C₁-C₁₀)алкил;

где n₂, n₃ и n₄ находится независимо в диапазоне от 0 до 4;

где n₅ равно 0, 1 или 2.

В формулах Vft-1a и Vft-1b разветвленные и неразветвленные арильные и алкильные группы могут быть необязательно замещены одним или более из следующего: CH₃, OH, SH, OCH₃, SCH₃, COOH, COOR₁₃, S(O)n₄R₁, C(O)R₁₁, C(O)NR₁₁R₁₂, CN, NR₁₁R₁₂, NR₁₁C(O)R₁₂, арил, метилендиокси, (C₁-C₅)-алкил, CH₂SSCH₂CH(COOH)(NH₂), галоген (включая F, Cl, Br или I), NO₂, NHC(=NH)NH₂, CHO, CF₃, P(=X₁)(OR₁)₂ и OP(=X₁)(OR₁)₂.

Формула Vft-1a и Vft-1b включает как (R), так и (S) стереоизомеры. В некоторых вариантах осуществления соединение представляет собой (R) стереоизомер. В некоторых вариантах осуществления соединение представляет собой (S) стереоизомер.

В некоторых вариантах осуществления ароматизирующая композиция содержит, по меньшей мере, одно из следующего: L-аспарагиновая кислота, L-глутаминовая кислота, L-аргинин и L-лизин.

В некоторых вариантах осуществления ароматизирующая композиция не содержит, по меньшей мере, одно из следующего: L-аспарагиновая кислота, L-глутаминовая кислота, L-аргинин и L-лизин.

3.1.4. α-Аминокислоты II

В некоторых вариантах осуществления ароматизирующая композиция содержит соединение формулы Vft-2, имеющей следующую структуру:

где n находится в диапазоне от 0 до 6;

где W выбирают из группы, состоящей из CR₆R₇, O, S, S(O)n₂, Se, Se(O)n₂, P(X₂)(OR₁)₂, OP(X₂)(OR₁)₂, NH₂, NHC(=NH)NH₂, Ph, индола и гетероарила;

где Х₁ выбирают из группы, состоящей из Н, СН₃, низшего (C₁-C₆)алкила, (СН₂)_n3арила, (СН₂)_n3гетероарила, арила, гетероарила, ОН, NR₁R₂, NH(=C)NR₁R₂, фенила, пара-гидроксифенила, индола, SR₁, OR₁, COOR₁, S(O)n₂, тетразола, имидазола, P(=X₂)(OR₁)₂ и OP(=X₂)(OR₁)₂;

где X₂ представляет собой кислород или серу;

где R₁ и R₂ выбирают независимо из группы, состоящей из Н, разветвленного или неразветвленного низшего (C₁-C₈)алкила, (CH₂)_n2арила, (CH₂)_n2гетероарила, арила, гетероарила, c-C₃H₅, c-C₄H₇, c-C₅H₉, c-C₆H₁₁ и (CH₂)_n3(C₃-C₆)циклоалкила;

где R₃, R₄, R₆, R₇, R₁₁, R₁₂ и R₁₃ выбирают независимо из группы, состоящей из H, CH₃, разветвленного и неразветвленного низшего (C₁-C₁₀)алкила;

где R₅ выбирают из группы, состоящей из Н, ОН, разветвленного или неразветвленного низшего (C₁-C₆)алкоксида, OCH₃, OEt, OCH₂Ph, О(С₁-С₆)алкила, O(CH₂)_n4арила, O(CH₂)_n4гетероарила, NR₆R₇, N(R₈)OH, O-арила и O-гетероарила;

где R₈ представляет собой H или CH₃;

где n₂ находится в диапазоне от 0 до 2; и

где n₃ и n₄ находятся независимо в диапазоне от 0 до 4.

Арильные и алкильные (разветвленные и неразветвленные) группы могут быть необязательно замещены CH₃, OH, SH, OCH₃, SCH₃, COOH, COOR₁₃, S(O)n₄R₁, C(O)R₁₁, C(O)NR₁₁R₁₂, CN, NR₁₁R₁₂, NR₁₁C(O)R₁₂, арилом, метилендиокси, (C₁-C₅)алкилом, CH₂SSCH₂CH(COOH)(NH₂), галогеном (F, Cl, Br, I), NO₂, NHC(=NH)NH₂, CHO, CF₃, P(=X₂)(OR₁)₂ и OP(=X₂)(OR₁)₂; R₁₁, R₁₂ и R₁₃ представляют собой независимо H, CH₃, низший (C₁-C₁₀)алкил разветвленный или неразветвленный.

Формула Vft-2 включает как (R), так и (S) стереоизомеры. В некоторых вариантах осуществления соединение представляет собой (R) стереоизомер. В некоторых вариантах осуществления соединение представляет собой (S) стереоизомер.

В некоторых вариантах осуществления ароматизирующая композиция содержит, по меньшей мере, одно из следующего: L-аспарагиновая кислота, L-глутаминовая кислота, L-аргинин, L-лизин, L-фенилаланин, L-триптофан и Se-(метил)селеноцистеин.

В некоторых вариантах осуществления ароматизирующая композиция не содержит, по меньшей мере, одно из следующего: L-аспарагиновая кислота, L-глутаминовая кислота, L-аргинин, L-лизин, L-фенилаланин, L-триптофан и Se-(метил)селеноцистеин.

3.1.5. Гамма-глутамил и бета-аспартил ди- и трипептиды

В некоторых вариантах осуществления ароматизирующая композиция содержит соединение формулы Vft-3, имеющей следующую структуру:

где n равно 0 или 1, при условии, что, если n₁ равно 0, то AA₂ не существует;

где AA₁-(AA₂)n₁ представляют собой независимо любую аминокислоту, перечисленную ниже в разделе 3.1.6;

где n находится в диапазоне от 0 до 6;

где n₁ и n₂ находятся независимо в диапазоне от 0 до 3;

где n₃ находится в диапазоне от 0 до 2;

где n₄ находится в диапазоне от 1 до 6;

где n₅ находится в диапазоне от 0 до 3.

Кроме того, AA₁-(AA2)n представляют собой аминокислоту формулы Vft-3b, имеющей следующую структуру:

где W выбирают из группы, состоящей из O, S, S(O)n₃, Se, Se(O)n₃, OP(O)(OH)₂, NR₁R₂, CR₁R₂, CH₂;

где R₁, R₂, R₃, R₄ выбирают из группы, состоящей из H, CH₃, низшего (C₁-C₆)алкила, (CH₂)_n2индола, (CH₂)_n2арила, (CH₂)_n2гетероарила и OH, COOH;

где R₅ выбирают из группы, состоящей из H, CH₃, низшего (C₁-C₆)алкила, C(O)C₁-C₆, C(O)арила, C(O)гетероарила, C(O)OC₁-C₆, C(O)CH(OH)CH₃, C(O)OCH₂арила, (CH₂)_n2индола, (CH₂)_n2арила, (CH₂)_n2гетероарила, нитрозо и OH, арила, индола,

где n₂ находится в диапазоне от 0 до 2;

где, если AA₁ или AA₂ содержит серу или селен, то аминокислоту можно окислить с получением S(O)n₂ или Se(O)n₂, а также нитрозо таких видов, как S(N=O) или Se(N=О); и

где, если AA₁ или AA₂ содержит серу или селен, то аминокислоту можно алкилировать по атому серы или селена.

В формуле Vft-3 разветвленные и неразветвленные арильные и алкильные группы могут быть необязательно замещены одним или более из следующего: метил, OH, SH, OCH₃, SCH₃, COOH, COOR₁₃, S(O)_n3R₁, C(O)R₁₁, C(O)NR₁₁R₁₂, CN, NR₁₁R₁₂, NR₁₁C(O)R₁₂, арил, метилендиокси, (C₁-C₅)алкил, CH₂SSCH₂CH(COOH)(NH₂), галоген (включая F, Cl, Br или I), NO₂, NHC(=NH)NH₂, CHO, CF₃, P(=X₁)(OR₁)₂ и OP(=X₁)(OR₁)₂;

где R₁₁, R₁₂ и R₁₃ независимо соответствуют H, CH₃, низшим (C₁-C₁₀)алкилам разветвленным или неразветвленным. Формула Vft-3 включает как (R), так и (S) стереоизомеры. В некоторых вариантах осуществления соединение представляет собой (R) стереоизомер. В некоторых вариантах осуществления соединение представляет собой (S) стереоизомер.

В случае бифункциональных аминокислот, таких как аспарагиновая кислота и глутаминовая кислота, в пределах объема настоящего изобретения находится образование амидной связи, происходящее в альфа-карбоксилате или боковой цепи карбоксилата.

В некоторых вариантах осуществления ароматизирующая композиция содержит гамма-глутамилдипептид, выбранный из группы, состоящей из γ-Glu-Val, γ-Glu-Tyr, γ-Glu-Ala, γ-Glu-Phe и γ-D- Glu-Trp. В некоторых вариантах осуществления ароматизирующая композиция содержит гамма-глутамилтрипептид, выбранный из группы, состоящей из офтальмологической кислоты (γ-Glu-Abu-Gly), γ-Glu-Val-Gly, S-метилглутатиона, S-(2-гидроксиэтил)глутатиона, 3-глутатионил-S-метилиндола, глутатиона (γ-Glu-Cys-Gly) и S-лактоилглутатиона. В некоторых вариантах осуществления ароматизирующая композиция содержит гамма-глутамилпептид, выбранный из группы, состоящей из γ-Glu-Met, γ-Glu-Cys, γ-Glu-Gly, γ-Glu-Gln, γ-Glu-Glu, γ-Glu-Trp, γ-Glu-Leu, γ-Glu-Abu, γ-Glu-γ-Glu-Glu, γ-Glu-γ-Glu-Gln. В некоторых вариантах осуществления ароматизирующая композиция содержит бета-аспартилпептид, выбранный из группы, состоящей из β-Asp-Ala, β-Asp-Gly, β-Asp-Leu и β-Asp-Phe.

В некоторых вариантах осуществления ароматизирующая композиция не содержит одного или более вышеуказанных гамма-глутамилпептидов. В некоторых вариантах осуществления ароматизирующая композиция не содержит одного или более вышеуказанных гамма-глутамилтрипептидов.

В некоторых вариантах осуществления формула Vft-3 определяется, как указано выше, за исключением того, что она не включает глутатион (γ-Glu-Cys-Gly) (например, L-глутатион), γ-Glu-Ala, γ-Glu-Met, γ-Glu-Val, γ-Glu-Cys, γ-Glu-Val-Gly, γ-Glu-Cys-Gly, γ-Glu-Val-Cys, γ-Glu-Val-Pro, γ-Glu-Val-Ser, γ-Glu-Val-Phe, γ-Glu-Val-Asn, γ-Glu-Ser-Gly, γ-Glu-Abu-Gly, γ-Glu-Gly, γ-Glu-Thr, γ-Glu-Orn, Asp-Gly, Cys-Gly, Cys-Met, Glu-Cys, Gly-Cys, Leu-Asp, D-Cys, γ-Glu-Met(O), γ-Glu-γ-Glu-Val, γ-Glu-Val-NH₂, γ-Glu-Val-ol, γ-Glu-Ser, γ-Glu-Tau, γ-Glu-Cys(S-Me)(O), γ-Glu-Leu, γ-Glu-Ile, γ-Glu-t-Leu и/или γ-Glu-Cys(S-Me).

3.1.6. Различные аминокислоты

В некоторых вариантах осуществления ароматизирующая композиция содержит одну или более из следующих аминокислот: глицин, саркозин, аланин, валин, лейцин, изолейцин, пролин, фенилаланин, гомофенилаланин, тирозин, триптофан, серин, треонин, цистеин, S-метилцистеин, метионин, аспарагин, глутамин, лизин, аргинин, гистидин, аспарагиновая кислота, глутаминовая кислота, ABU, селеноцистеин, Se-(метил)селеноцистеин, орнитин, тиопролин, пеницилламин, 5,5-диметилтиазолидин-4-карбоновая кислота, диаминопропионовая кислота и бета-аланин. В некоторых вариантах осуществления амидные связи глутаминовой кислоты и аспарагиновой кислоты могут быть образованы при помощи альфа-карбоксилата или боковой цепи карбоксилата и/или того и другого. В некоторых вариантах осуществления свободные карбоксилаты глутаминовой кислоты и аспарагиновой кислоты могут быть этерифицированы с получением сложных эфиров низших алкилов (метил или этил). В некоторых вариантах осуществления аминокислоты, которые содержат серу или селен, могут быть окислены с получением S(O)_n3 и Se(O)_n3, а также нитрозосоединений таких, как S(N=O), Se(N=О). В некоторых вариантах осуществления аминокислоты, которые содержат серу или селен, также могут быть окислены с получением соответствующих гомодимеров и гетеродимеров дисульфидов и диселенидов. В некоторых вариантах осуществления те аминокислоты, которые содержат серу или селен, также могут быть алкилированы по атому серы или селена.

3.1.7. Многоосновные пептиды

В некоторых вариантах осуществления ароматизирующая композиция содержит соединение формулы Vft-4, имеющей следующую структуру:

где n₁ находится в диапазоне от 1 до 550;

где n₂ находится в диапазоне от 0 до 5;

где R представляет собой NR₁R₂, C(=N)NH₂, NR₁C(=NR₂)NR₃R₄ или имидазол;

где R₁, R₂, R₃, R₄ представляют собой независимо H, CH₃ или низший (C₁-C₆)алкил.

Многоосновные пептиды по настоящему раскрытию, обозначенные формулой Vft-4, могут содержит одно или более индивидуальных соединений (например, в смеси), где каждое индивидуальное соединение определено формулой Vft-4.

В некоторых вариантах осуществления соединение содержит, по меньшей мере, одно из следующего: полиаргинин, полилизин и полиорнитин.

В некоторых вариантах осуществления соединение не содержит, по меньшей мере, одно из следующего: полиаргинин, полилизин и полиорнитин.

В некоторых вариантах осуществления ароматизирующая композиция содержит соединение формулы Vft-5, имеющей следующую структуру:

R₁-AA_N-R₂,

где n равно 1-550;

где каждую АА выбирают независимо из группы аминокислот, указанных в разделе 3.1.6;

где R₁ выбирают из группы, состоящей из H, C(=O)-низшего (C₁-C₆)алкила, Cbz, C(=O)О-низшего-(C₁-C₆)алкила, C(O)арила и других защитных групп для азота, известных специалисту в данной области; и

где R₂ выбирают из ОН, NR_2aR_3a, OCH₃, O(C₁-C₆), OCH₂арила и C(CH₃)₃;

где R_2a и R_3a выбирают независимо из группы, состоящей из H, разветвленного или неразветвленного низшего (C₁-C₈)алкила и CH₂фенила.

В некоторых вариантах осуществления соединение содержит полиаргинин (например, поли-L-аргинин), полилизин (например, поли-L-лизин) или полиорнитин (например, поли-L-орнитин).

В некоторых вариантах осуществления формула Vft-4 определяется, как указано выше, за исключением того, что она исключает полиаргинин (например, поли-L-аргинин), полилизин (например, поли-L-лизин) и полиорнитин (например, поли-L-орнитин).

3.1.8 Полиамины

В некоторых вариантах осуществления ароматизирующая композиция содержит соединение формулы Vft-6, имеющей следующую структуру:

где n₁-n₆ находятся независимо в диапазоне от 0 до 6, при условии что, если один или более из n₁-n₆ равны 0, то это указывает на завершение цепи;

где R₁- R₁₂ выбирают независимо из группы, состоящей из H, CH₃, разветвленного или неразветвленного низшего (C₁-C₆)алкила, CH₂CH=CH2, арила, фенила, CH₂арила и CH₂Ph;

где R_a-R_f выбирают независимо из H, CH₃, разветвленного или неразветвленного низшего (C₁-C₆)алкила, CH₂CH=CH₂, арила, фенила, CH₂арила, CH₂Ph и (CR₁₃R₁₄)n₇NR₁₅R₁₆;

где n₇ находится в диапазоне от 2 до 6;

где R₁₃ и R₁₄ выбирают независимо из группы, состоящей из H, CH₃, разветвленного или неразветвленного низшего (C₁-C₆)алкила, CH₂CH=CH₂, арила, фенила, CH₂арила и CH₂Ph;

где R₁₅ и R₁₆ выбирают независимо из группы, состоящей из H, CH₃, разветвленного или неразветвленного низшего (C₁-C₆)алкила, CH₂CH=CH₂, арила, фенила, CH₂арила и CH₂Ph; и

где необязательно соединение формулы Vft-6 включает циклическую структуру, где пунктирная линия обозначает ковалентную связь между двумя концевыми атомами.

В некоторых вариантах осуществления ароматизирующая композиция включает линейную форму соединения формулы Vft-6. В некоторых вариантах осуществления ароматизирующая композиция включает циклическую форму соединения формулы Vft-6.

В некоторых вариантах осуществления формула Vft-5 определяется, как указано выше, за исключением того, что она не включает один или более из следующего: спермидин, спермин и путресцин.

3.1.9. Аминогликозидные антибиотики

В некоторых вариантах осуществления ароматизирующая композиция содержит аминогликозидный антибиотик. Например, аминогликозидный антибиотик можно выбрать из группы, состоящей из неомицина, тобрамицина, гентамицина, рибостамицина, паромомицина и антибиотика ГЕНЕТИЦИН. В качестве дополнительного примера аминогликозидный антибиотик можно выбрать из группы, состоящей из амикацина, стрептомицина, неамина, паромамина, апрамицина, бутирозина В, ливидомицина А, канамицина А, канамицина В, канамицина С, тобрамицина, амикацина, гентамицина С1, генатмицина С2, генетицина, сисомицина, арбекацина, астромицина, беканамицина, дибекацина, дигидрострептомицина, элсамитруцина, гигромицина В, исепамицина, касугамицина, легомицина, ливидомицина, микрономицина, неамина, неомицина, нетилмицина, ноурсетрицина, плазомицина, тобрамицина, тотомицина и вердамицина.

В некоторых вариантах осуществления аминогликозидным антибиотиком являются гентамицин, тобрамицин, рибостамицин, паромомицин или антибиотик ГЕНЕТИЦИН. В некоторых вариантах осуществления аминогликозидный антибиотик не является неомицином.

3.1.10. Взаимодействие с VFT доменом CaSR

В некоторых вариантах осуществления ароматизирующая композиция содержит соединение, которое взаимодействует с активным центром VFT домена CaSR. Например, координация лиганда в шарнирной области VFT домена (см. фиг.2) может вызывать взаимодействия в одной или более из следующих групп аминокислот: Tyr218, Thr145, Ser147, Ala168, Ser170, Asp190, Glu297, Ala298 и Ser272. Например, Asp190 и Glu297 могут играть роль в связывании цвиттерионных и других атомов азота с лигандами; например, атомов азота в активных аминокислотах, гамма-глутамил ди- и трипептидах и других соединениях, содержащих основные атомы азота.

Кроме того, более длинные лиганды могут распространяться дальше от шарнирной области, вызывая другие специфические взаимодействия, например, с His413, Thr412 и Trp299. Также может образовываться связь с Asn64, Phe65, Asn102, Ser169, Gln193, Asp216, Ala300, Ser302, Leu304 и/или Tyr411.

В некоторых вариантах осуществления активные соединения, например, агонисты или позитивные аллостерические модуляторы, которые связываются с шарнирной областью VFT домена, могут способствовать координации связывания Ca²⁺ с шарнирной областью в первичном центре связывания для Ca⁺². В некоторых вариантах осуществления такой первичный центр связывания не является единственным центром связывания для Ca⁺² в шарнирной области VFT домена.

Таким образом, в некоторых вариантах осуществления ароматизирующая композиция включает соединение, содержащее цвиттерионный или основной азот. Такое соединение может создавать взаимодействия с Asp190 и/или Glu297.

В некоторых вариантах осуществления ароматизирующая композиция содержит соединение, создающее более двух взаимодействий в шарнирной области VFT домена. По меньшей мере, одно из взаимодействий может быть с Tyr218, Thr145, Ser147, Ala168, Ser170, Asp190, Glu297, Ala298 и/или Ser272. В некоторых вариантах осуществления два или более взаимодействий присутствуют в Tyr218, Thr145, Ser147, Ala168, Ser170, Asp190, Glu297, Ala298 и/или Ser272. В некоторых вариантах осуществления все взаимодействия присутствуют в Tyr218, Thr145, Ser147, Ala168, Ser170, Asp190, Glu297, Ala298 и/или Ser272.

В некоторых вариантах осуществления ароматизирующая композиция включает соединение, содержащее цвиттерионный или основной азот, который создает одно или более взаимодействий с Asp190 и/или Glu297 и дополнительно создает более двух взаимодействий с Tyr218, Thr145, Ser147, Ala168, Ser170, Asp190, Glu297, Ala298 и/или Ser272.

В некоторых вариантах осуществления ароматизирующая композиция содержит соединение, которое создает взаимодействия в шарнирной области VFT домена, где два или более взаимодействий присутствуют в Asp190, Glu297, Tyr218, Thr145, Ser147, Ala168, Ser170, Asp190, Glu297, Ala298 и/или Ser272, а дополнительные два или более взаимодействий присутствуют в Tyr218, Thr145, Ser147, Ala168, Ser170, Asp190, Glu297, Ala298 и/или Ser272.

В некоторых вариантах осуществления ароматизирующая композиция содержит соединение, которое создает два или более взаимодействий с шарнирной областью VFT области, где два или более взаимодействий присутствуют в Asp190, Glu297, Tyr218, Thr145, Ser147, Ala168, Ser170, Asp190, Glu297, Ala298 и Ser272, и данное соединение также способствует координации связывания иона Ca⁺² с шарнирной областью VFT домена.

3.2 Соединения, связывающие 7 трансмембранный домен CaSR

Настоящее раскрытие дополнительно относится к ароматизирующим композициям, содержащим, по меньшей мере, одно соединение, модулирующее кальцийчувствительный рецептор, которое может взаимодействовать с (например, связываться с) 7 трансмембранным (7ТМ) доменом рецептора. В некоторых вариантах осуществления такие взаимодействия с 7ТМ доменом кальцийчувствительного рецептора агонизируют кальцийчувствительный рецептор. В других вариантах осуществления соединение действует синергически с другими агонистами или модуляторами кальцийчувствительного рецептора в целях модуляции активности кальцийчувствительного рецептора. В других вариантах осуществления взаимодействия с 7ТМ доменом кальцийчувствительного рецептора антагонизируют кальцийчувствительный рецептор. В некоторых вариантах осуществления соединение повышает способность агониста кальцийчувствительного рецептора активировать рецептор (то есть соединение выполняет функцию позитивного аллостерического модулятора).

В некоторых вариантах осуществления соединение взаимодействует с одной или более аминокислотами в 7ТМ домене, например, одной или более аминокислотами в спиралях 3, 4, 5, 6 и/или 7 рецептора. В спирали 3 остатки на активном центре включают Phe684, Gly685 и Phe688. В спирали 4 остатки на активном центре включают Gln735. В спирали 5 остатки на активном центре включают Met771, Ala772, Phe775, Leu776 и Thr780. В спирали 6 остатки на активном центре включают Phe814, Val817, Trp818 и Phe821. В спирали 7 остатки на активном центре включают Glu837, Ala840 и Ile841. Следовательно, в некоторых вариантах осуществления соединение, модулирующее кальцийчувствительный рецептор, можно идентифицировать и/или определить на основе его взаимодействия с одним или более из этих остатков.

3.2.1 Кальцимиметики

В некоторых вариантах осуществления ароматизирующая композиция содержит один или более кальцимиметиков. В некоторых вариантах осуществления кальцимиметик включает 4-хлор-N-[(1S,2S)-2-[[(1R)-1-(1-нафталинил)этил]амино]циклогексил]бензамида гидрохлорид. В некоторых вариантах осуществления кальцимиметик включает 2-хлор-6-[(2R)-3-([1,1-диметил-2-(2-нафталинил)этил]амино)-2-гидроксипропокси]бензонитрил.

В некоторых вариантах осуществления кальцимиметик может иметь структуру любой из формул Tm-1-Tm-12 в таблице 1.

Таблица 1

Структуры кальцимиметических соединений

В Tm-1-Tm-12 G1-G4 представляют собой независимо C(R₄aR₄b), N(R₄), S или O;

W представляют собой OR₄ или SR₄;

X представляет собой NR₁R₂, CR₁R₂, O или S;

X₁-X₁₀ представляют собой независимо C или N;

X₁₁ представляет собой C, O, N или S;

X₁₂ представляет собой O, NH или S;

X₁₃ представляет собой CR₄aR₄b, O, N(R₁₂) или S;

Z представляет собой H, O, N, S или C;

n₁, n₂ и n₃ находятся независимо в диапазоне от 0 до 4, при условии что, если n₁ или n₂ равно 0, то это указывает на химическую связь;

n₄ находятся в диапазоне от 0 до 2;

n₅ находятся в диапазоне от 1 до 3;

R₁, R_1a, R_1b и R_1c выбирают независимо из группы, состоящей из H, CH₃, CF₃, CBr₃, разветвленного или неразветвленного низшего (C₁-C₆)алкил, (C₃-C₆)циклоалкила, COOR₁₃, C(O)NR₁₆R₁₇ и SO₂NR_4aR_4b; и

R₂ выбирают из группы, состоящей из CH₃, CF₃, CBR₃, NO₂, низшего (C₁-C₆)алкила, (C₃-C₆)циклоалкила, арила и гетероарила.

В Tm-1-Tm-12 кольца A и B представляют собой любые арильные или гетероарильные кольца, которые могут быть независимо замещены функциональными группами R₃ и/или R₇. R₃ и R₇ можно независимо выбрать из группы, состоящей из H, OH, разветвленного или неразветвленного низшего (C₁-C₆)алкила, O(CH₂)_n3арила, O(CH₂)_n3гетероарила, NR₁₀R₁₁, N(R₁₂)OH, арила, гетероарила, метил, OH, SH, OCH₃, SCH₃, COOH, COOR₁₃, S(O)n₄R₁₄, C(O)R₁₅, C(O)NR₁₆R₁₇, CN, NR₁₈R₁₉, NR₂₀C(O)R₂₁, арила, метилендиокси, (C₁-C₅)алкила, CH₂SSCH₂CH(COOH)(NH₂), галогена (включая F, Cl, Br или I), NO₂, NHC(=NH)NH₂, CHO, CF₃, P(=X₁)(OR₁)₂, OP(=X₁)(OR₁)₂, тетразола, C(O)N(R₁₂)OH, CF₃, OR₄, SR₄, N=C=S, N=C=O, C(R₄)=C(R_4a)R_4b, (CH₂)_n1CH=CH₂, NHC(=X₁₂)NH₂, NHC(=X₁₂)NHR₄, SO₂NR_4aR_4b и C-CR₄.

R₄, R_4a и R_4b выбирают независимо из группы, состоящей из H, CH₃, низшего (C₁-C₆)алкила, (C₁-C₆)циклоалкила, фенила, арила и гетероарила.

R₅, R₆, R₈ и R₉ выбирают независимо из группы, состоящей из H, CH₃, разветвленного или неразветвленного низшего (C₁-C₁₀)алкила, арила, гетероарила, фенила, пиридила, фурана, пирана, тиофена, (CH₂)_nарила, (CH₂)_nтетраарила, тетрагидропирана, где n равно 0-4. Если n равно 0, то это указывает на химическую связь.

R₁₀ и R₁₁ выбирают независимо из группы, состоящей из H, CH₃, низшего (C₁-C₆)алкила, фенила.

R₁₂ представляет собой H или CH₃.

R₁₃ выбирают из группы, состоящей из Н, СН₃, низшего (С₁-С₆)алкила и СН₂арила.

R₁₄ выбирают из группы, состоящей из H, CH₃, низшего (C₁-C₆)алкила и OH.

R₁₅ выбирают из группы, состоящей из H, CH₃, CF₃, низшего (C₁-C₆)алкила и фенила.

R₁₆, R₁₇, R₁₈, R₁₉, R₂₀ и R₂₁ каждый независимо выбирают из группы, состоящей из H, CH₃, низшего алкила, фенила, CH₂фенила и (C₁-C₆)циклоалкила.

R₂₂ выбирают из группы, состоящей из H, C(X)R₄. Если R₂₂ отсутствует, то кольцо A является ароматическим.

Независимо друг от друга кольцо А и кольцо В могут быть насыщенными или ненасыщенными. Кроме того, кольцо А и кольцо В могут независимо включать конденсированные пятичленные или шестичленные насыщенные или ненасыщенные кольца. Например, кольцо B может включать ненасыщенное шестичленное кольцо между X₁ и X₂, между X₂ и X₃, между X₃ и X₄ или между X₄ и X₅, образуя, например, кольцевую систему нафталина или другие конденсированные кольцевые системы, такие как бензотиофен, бензофуран, 2,3-дигидробензофуран, индол, циклогексил, хинолин, изохинолин, хиназолин, хиноксалин и цинолин. Аналогичным образом кольцо A может включать насыщенное или ненасыщенное шестичленное кольцо между X₆ и X₇, между X₇ и X₈, между X₈ и X₉ или между X₉ и X₁₀ с получением одной или более конденсированных кольцевых систем.

J можно выбрать из группы, состоящей из арила, фенила, пиридила, фурана, тиофена, пирола, бензотиофена, бензотиазола, бензимидозола, бензо[d]оксазола, бензофурана, индола, хинолина, изохинолина, хиназолина, хиноксалина, циннолина, тиазоло[4,5-с]пиридина, тиазоло[5,4-d]пиримидина, оксазоло[5,4-d]пиримидина и оксазоло[5,4-b]пиридина.

Арил₁ можно выбрать из группы, состоящей из фенила, фурана, тиофена, пирола, нафталина, бензофурана, бензотиофена, индола, хинолина, изохинолина, гетероарила и арила.

Q можно выбрать из группы, состоящей из арила, гетероарила, (C₁-C₇)циклоалкила и инданила.

Алкильная и циклоалкильная группы могут необязательно иметь следующие присоединенные функциональные группы: H, OH, NR₁₀R₁₁, N(R₁₂)OH, арил, гетероарил, метил, OH, SH, OCH₃, SCH₃, COOH, COOR₁₃, S(O)_n4R₁₄, C(O)R₁₅, C(O)NR₁₆R₁₇, CN, NR₁₈R₁₉, NR₂₀C(O)R₂₁, арил, галоген (включая F, Cl, Br, I), NO₂, NHC(=NH)NH₂, CHO, CF₃, P(=X₁)(OR₁)₂, OP(=X₁)(OR₁)₂, CF₃, OR₄, SR₄, C(R₄)=C(R_4a)R_4b, (CH₂)_n1CH=CH₂, NHC(=X₁₂)NH₂, NHC(=X₁₂)NHR₄ и SO₂NR_4aR_4b.

В некоторых вариантах осуществления кальцимиметик, имеющий структуру формулы Tm-1 или формулы Tm-2, выбирают из N-(1-(4-хлорфенил)этил)-3-(4-метоксифенил)-6-метилгептан-1-амина, N-(1-(4-хлорфенил)этил)-3-(фуран-2-ил)-3-(п-толил)пропан-1-амина, N-(1-(4-хлорфенил)этил)-3-(4-изопропоксифенил)-3-фенилпропан-1-амина, N-(1-(4-хлорфенил)этил)-3-(4-метоксифенил)-4-метилпентан-1-амина, N-(1-(4-хлорфенил)этил)-3-(4-изопропоксифенил)-3-(2-метоксифенил)пропан-1-амина, 3-(фуран-2-ил)-3-фенил-N-(1-фенилэтил)пропан-1-амина, N-(1-(4-хлорфенил)этил)-3-(фуран-2-ил)-3-(2-метоксифенил)пропан-1-амина, N-(1-(4-хлорфенил)этил)-3-(4-изопропоксифенил)-6-метилгептан-1-амина, N-(1-(4-хлорфенил)этил)-3-(4-изопропоксифенил)-4-метилпентан-1-амина, 3-(фуран-2-ил)-N-(1-фенилэтил)-3-(п-толил)пропан-1-амина, 3-(2,2-диметилтетрагидро-2Н-пиран-4-ил)-3-фенил-N-(1-фенилэтил)пропан-1-амина, 3-(фуран-2-ил)-N-(1-(тиофен-2-ил)этил)-3-(п-толил)пропан-1-амина и N-(1-(4-хлорфенил)этил)-3-(фуран-2-ил)-4-фенилбутан-1-амина.

В некоторых вариантах осуществления кальцимиметик, имеющий структуру формулы Tm-2, представляет собой 3-(фуран-2-ил)-4-фенил-N-(1-фенилэтил)бутан-1-амин или N-(1-(1Н-индол-2-ил)этил)-1-(3,4-диметилфенил)этанамин.

В некоторых вариантах осуществления кальцимиметик, имеющий структуру формул Tm-1, Tm-2, Tm-3 или Tm-4, представляет собой цинакальцет.

В некоторых вариантах осуществления кальцимиметик, имеющий структуру формул Tm-1, Tm-2, Tm-3 или Tm-4, не является цинакальцетом.

В некоторых вариантах осуществления кальцимиметик, имеющий структуру формул Tm-2 или Tm-5, представляет собой Калиндол.

В некоторых вариантах осуществления кальцимиметик, имеющий структуру формул Tm-2 или Tm-5, не является Калиндол.

В некоторых вариантах осуществления кальцимиметик, имеющий структуру формулы Tm-3, представляет собой 6-бром-4-фтор-N-(1-(пиридин-4-ил)этил)-2,3-дигидро-1Н-инден-1-амин или метил-2-(3-цианофенил)-2-((4-фтор-2,3-дигидро-1Н-инден-1-ил)амино)ацетат.

В некоторых вариантах осуществления кальцимиметик, имеющий структуру формулы Tm-4, представляет собой 3-((8-хлор-2,3,4,5-тетрагидробензо[b]оксепин-5-ил)амино)-2-(пиридин-2-ил-метил)пропан-1-ол.

В некоторых вариантах осуществления кальцимиметик, имеющий структуру формулы Tm-5, представляет собой N-((2,3-дигидробензофуран-2-ил)метил)-1-(хинолин-2-ил)этанамин.

В некоторых вариантах осуществления кальцимиметик, имеющий структуру формулы Tm-6, представляет собой 6-бром-4-фтор-N-(1-(пиридин-4-ил)этил)-2,3-дигидро-1Н-инден-1-амин или метил-2-(3-цианофенил)-2-((4-фтор-2,3-дигидро-1Н-инден-1-ил)амино)ацетат.

В некоторых вариантах осуществления кальцимиметик, имеющий структуру формулы Tm-8, представляет собой 3-фенил-1-(1,2,3,4-тетрагидронафталин-1-ил)пирролидин.

В некоторых вариантах осуществления кальцимиметик, имеющий структуру формулы Tm-9, представляет собой 2-(2-ацетил-1,2-дигидроизохинолин-1-ил)-N-(1-(3-бромфенил)этил)ацетамид.

В некоторых вариантах осуществления кальцимиметик, имеющий структуру формулы Tm-10, представляет собой 1-(бензо[d]тиазол-2-ил)-1-(2,4-диметилфенил)этанол или 1-(4-амино-2,5-диметоксифенил)-1-(бензо[d]тиазол-2-ил)-2,2,2-трифторэтанол.

В некоторых вариантах осуществления кальцимиметик, имеющий структуру формулы Tm-11, представляет собой 2,6-дихлор-4-(1-(((1-метил-2-(тиофен-2-ил)пиперидин-3-ил)метил)амино)этил)анилин.

В некоторых вариантах осуществления кальцимиметик, имеющий структуру формулы Tm-12, представляет собой 1-(4-хлорфенил)-N-(2-(2,2-диметил-4-(п-толил)тетрагидро-2H-пиран-4-ил)этил)этанамин.

В некоторых вариантах осуществления кальцимиметик, имеющий структуру любой из формул Tm-1-Tm-12, не включает одно или более из вышеперечисленных видов кальцимиметических соединений.

3.2.2. Взаимодействие с 7TM доменом CaSR

В некоторых вариантах осуществления ароматизирующая композиция содержит соединение, которое взаимодействует с активным центром 7TM домена CaSR. Например, активные соединения, в частности агонисты или позитивные аллостерические модуляторы, которые связываются с 7ТМ доменом, могут образовывать солевой мостик или водородную связь между соединениям и Glu837.

Альтернативно или дополнительно активные соединения могут подвергаться стэкинг-взаимодействию кольца. Для примера, а не в качестве ограничения, стэкинг-взаимодействие кольца может происходить с одним или более Phe821, Phe775, Trp818, Phe684 и Phe688.

В некоторых вариантах осуществления одно или более активных соединений могут взаимодействовать для заполнения активного центра, например, образованием гидрофобных взаимодействий с одним или более остатками в активном центре. Например, активные соединения могут заполнять активный центр, взаимодействуя с остатками в спиралях 3, 4, 5, 6 и/или 7, описанных выше. В некоторых вариантах осуществления один или более остатков включают Phe684, Gly685 и/или Phe688 в спирали 3, Gln735 в спирали 4, Met771, Ala772, Phe775, Leu776 и/или Thr780 в спирали 5, Phe814, Val817, Trp818 и/или Phe821 в спирали 6 и/или Glu837, Ala840 и/или Ile841 в спирали 7. Соединение может создавать взаимодействия с любым количеством остатков в любой комбинации спиралей. Например, в некоторых вариантах осуществления соединение создает гидрофобные взаимодействия с одним, двумя, тремя, четырьмя, пятью или более остатками в спиралях 3, 4, 5, 6 или 7. В некоторых вариантах осуществления соединение образует гидрофобные взаимодействия с одним, двумя, тремя, четырьмя, пятью или более остатками в спиралях 5, 6 и 7 и с одним, двумя, тремя, четырьмя, пятью или более остатками в спиралях 3, 4 и 5.

4. Способы идентификации соединений, модулирующих кальцийчувствительный рецептор

Настоящее раскрытие также относится к способу идентификации соединений, модулирующих активность и/или экспрессию кальцийчувствительного рецептора. Для примера, а не в качестве ограничения, модулятор может быть агонистом или антагонистом. Настоящий раскрываемый предмет изобретения относится к in silico и in vitro методам для идентификации таких соединений, которые модулируют активность и/или экспрессию кальцийчувствительного рецептора, описанного выше.

4.1 In silico методы

Настоящий раскрываемый предмет изобретения также относится к in silico методам для идентификации соединений, которые могут потенциально взаимодействовать с кальцийчувствительным рецептором и/или модулировать активность и/или экспрессию кальцийчувствительного рецептора, например, кальцийчувствительного рецептора кошки, собаки или человека.

В некоторых вариантах осуществления способ может включать прогнозирование трехмерной структуры (3D) кальцийчувствительного рецептора и скрининг предсказанной 3D структуры с предполагаемыми соединениями, модулирующими кальцийчувствительный рецептор (то есть испытуемыми соединениями). Способ может дополнительно включать прогнозирование того, будет ли взаимодействовать предполагаемое соединение с центром связывания рецептора путем анализа потенциальных взаимодействий с предполагаемым соединением и аминокислотами рецептора. Способ может дополнительно включать идентификацию испытуемого соединения, которое может связываться с или модулировать биологическую активность кальцийчувствительного рецептора, путем определения соответствует ли трехмерная структура соединения центру связывания трехмерной структуры рецептора.

В некоторых вариантах осуществления кальцийчувствительный рецептор для применения в раскрытом способе может иметь аминокислотную или нуклеотидную последовательность, описанную в международной заявке № PCT/US15/55149, поданной 12 октября 2015, или ее фрагмент или вариант.

Неограничивающие примеры соединений (например, потенциальных модуляторов кальцийчувствительного рецептора), которые можно протестировать с использованием раскрытых способов, включают любое низкомолекулярное химическое соединение или любой биологический объект, в частности пептиды, соли и аминокислоты, известные в данной области. В некоторых вариантах осуществления испытуемое соединение может представлять собой низкомолекулярное химическое вещество.

В некоторых вариантах осуществления структурные модели кальцийчувствительного рецептора можно построить с использованием кристаллических структур близкородственных рецептору GPCR в качестве шаблонов для гомологичного моделирования. Для Flytrap домена CaSR недавно были определены рентгеновские кристаллографические структуры Venus Flytrap (VFT) домена кальциевого рецептора человека. Структурами, доступными в банке данных Protein Data Bank (PDB, www.rcsb.org), являются:

PDB ID: 5FBH - кристаллическая структура внеклеточного домена кальцийчувствительного рецептора человека, со связанным Gd⁺³;

PDB ID: 5FBK - кристаллическая структура внеклеточного домена кальцийчувствительного рецептора человека;

PDB ID: 5K5T - кристаллическая структура неактивной формы внеклеточного домена кальцийчувствительного рецептора человека;

PDB ID: 5K5S - кристаллическая структура активной формы внеклеточного домена кальцийчувствительного рецептора человека (смотри Geng, et al., Structural mechanism of ligand activation in human calcium-sensing receptor, Elife. 2016 Jul 19;5. pii: e13662; Zhang, et al., Structural basis for regulation of human calcium-sensing receptor by magnesium ions and an unexpected tryptophan derivative co-agonist, Sci Adv. 2016 May; 2(5): e1600241, раскрытие которых включено здесь посредством ссылки в их полном объеме).

В некоторых вариантах осуществления модели структуры VFT можно формировать для других представляющих интерес видов, таких как кошка и собака, на основе гомологии последовательностей VFT человека. В некоторых вариантах осуществления модели структуры трансмембранных доменов можно формировать на основе гомологии последовательностей 7 трансмембранных доменов (7ТМs) GPCRs, структуры которых были кристаллографически определены.

Для примера, а не в качестве ограничения, модели структуры трансмембранных доменов можно формировать с использованием кристаллических структур группы C GPCR. В некоторых вариантах осуществления модель структуры или Flytrap домена, или трансмембранного домена кальцийчувствительного рецептора может основываться на комбинации известных кристаллических структур GPCR. (Смотри Binet et al., J. Biol. Chem, 282 (16):12154-63 (2007), Wu et al., Science, 344 (6179):58-64 (2014); и Dore et al., Nature 511:557-562 (2014), каждое из которых включено здесь посредством ссылки в их полном объеме). Для примера, а не в качестве ограничения, модель структуры 7 трансмембранного домена кошки или собаки можно формировать на основе кристаллических структур, имеющих в банке данных Protein Data Bank (PDB) идентификационный номер 4OR2 и/или 4OO9. На фиг.3-20 показаны модели структуры кальцийчувствительных рецепторов, которые можно использовать в раскрытых in silico методах. Можно использовать любое подходящее программное обеспечение моделирования, известное в данной области. В некоторых вариантах осуществления может использовать программный пакет Modeller (Accelrys, BIOVIA, Dassault Systèmes) для формирования трехмерной структуры белка.

В некоторых вариантах осуществления in silico методы идентификации соединения, которое связывается с кальцийчувствительным рецептором, включают определение, взаимодействует ли испытуемое соединение с одной или более аминокислотами взаимодействующего домена кальцийчувствительного рецептора, описанного здесь.

Соединения, идентифицированные раскрытыми in silico методами можно дополнительно тестировать с использованием in vitro методов, описанных здесь.

4.2 Центр связывания кальцийчувствительного рецептора

Настоящая заявка относится к способам скрининга соединений, модулирующих активность кальцийчувствительного рецептора, например, кальцийчувствительного рецептора кошки, собаки или человека, где соединения взаимодействуют с одной или более аминокислотами кальцийчувствительного рецептора. В некоторых вариантах осуществления центр связывания кальцийчувствительного рецептора содержит аминокислоты в составе трансмембранного домена, например, 7 трансмембранного (7TM) домена или Venus Flytrap (VFT) домена рецептора, и может быть идентифицирован формированием карты взаимодействия рецептора с использованием in silico моделирования, описанного здесь. В одном неограничивающем примере присутствие аминокислоты в карте взаимодействия означает, что остаток попадает под условия связывания лиганда и взаимодействует с лигандом.

В некоторых вариантах осуществления взаимодействие между соединением и одной или более аминокислотами кальцийчувствительных рецепторов, описанных здесь, может включать одно или более из следующего: водородную связь, ковалентную связь, нековалентную связь, солевой мостик, физическое взаимодействие и их комбинации. Взаимодействия могут также представлять собой любую характеристику взаимодействия известного в данной области взаимодействия лиганда рецептора. Такие взаимодействия можно определять, например, сайт-направленным мутагенезом, рентгеновской кристаллографией, рентгеновским или другими спектроскопическими методами, ядерным магнитным резонансом (ЯМР), оценкой степени поперечного сшивания, масс-спектроскопией или электрофорезом, криомикроскопией, методами замещения на основе известных агонистов, анализом структуры и их комбинациями. В некоторых вариантах осуществления взаимодействия определяют in silico, например, теоретическими средствами, такими как докинг соединения в кармане связывания кальцийчувствительного рецептора кошки или собаки, как описано здесь, например, с использованием молекулярного докинга, молекулярного моделирования, молекулярной имитации или других средств, известных специалистам в данной области.

В некоторых вариантах осуществления взаимодействие представляет собой взаимодействие типа солевой мостик.

В некоторых вариантах осуществления взаимодействие представляет собой взаимодействие типа водородная связь.

В некоторых вариантах осуществления взаимодействие представляет собой гидрофобное взаимодействие.

В некоторых вариантах воплощения взаимодействие представляет собой стэкинг-взаимодействие кольца.

В некоторых вариантах осуществления соединения, идентифицированные в соответствии с описанными здесь способами, модулирующие активность кальцийчувствительного рецептора, взаимодействуют с одной или более аминокислотами Venus Flytrap (VFT) домена кальцийчувствительного рецептора. В некоторых вариантах осуществления аминокислоты, с которыми взаимодействуют соединения, содержат 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21 22 или более Asn64, Phe65, Asn102, Thr145, Ser147, Ala168, Ser169, Ser170, Asp190, Gln193, Asp216, Tyr218, Ser272, Glu297, Ala298, Trp299, Ala300, Ser302, Leu304, Tyr411, Thr412 и His413 в кальцийчувствительном рецепторе, например, кальцийчувствительном рецепторе, включающем кальцийчувствительный рецептор кошки, или функционально эквивалентные аминокислоты кальцийчувствительного рецептора собаки или кальцийчувствительного рецептора человека.

В некоторых вариантах осуществления соединения, идентифицированные в соответствии с способами, описанными здесь, модулирующие активность кальцийчувствительного рецептора, взаимодействуют с одной или более аминокислотами трансмембранного домена кальцийчувствительного рецептора, например, 7 трансмембранного (7TM) домена. В некоторых вариантах осуществления аминокислоты, с которыми взаимодействуют соединения, содержат 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16 или более Phe684, Gly685 и/или Phe688 в спирали 3, Gln735 в спирали 4, Met771, Ala772, Phe775, Leu776 и/или Thr780 в спирали 5, Phe814, Val817, Trp818 и/или Phe821 в спирали 6 и/или Glu837, Ala840 и/или Ile841 в спирали 7 кальцийчувствительного рецептора, например, кальцийчувствительного рецептора, включающего кальцийчувствительный рецептор кошки, или функционально эквивалентные аминокислоты кальцийчувствительного рецептора собаки или кальцийчувствительного рецептора человека.

В некоторых вариантах осуществления способы идентификации композиции, модулирующей активность кальцийчувствительного рецептора кошки, включают (а) контактирование испытуемого вещества с кальцийчувствительным рецептором, например, кальцийчувствительным рецептор кошки, содержащим аминокислотную последовательность SEQ ID NO:1, (b) определение взаимодействия между испытуемым веществом и одной или более аминокислотами в центре взаимодействия кальцийчувствительного рецептора, выбранными из группы, состоящей из Asn64, Phe65, Asn102, Thr145, Ser147, Ala168, Ser169, Ser170, Asp190, Gln193, Asp216, Tyr218, Ser272, Glu297, Ala298, Trp299, Ala300, Ser302, Leu304, Tyr411, Thr412 и His413 и их комбинации в VFT домене и/или Phe684, Gly685 и/или Phe688 в спирали 3, Gln735 в спирали 4, Met771, Ala772, Phe775, Leu776 и/или Thr780 в спирали 5, Phe814, Val817, Trp818 и/или Phe821 в спирали 6 и/или Glu837, Ala840 и/или Ile841 в спирали 7, и (c) выбор в качестве композиции испытуемого вещества, которое взаимодействует с одной или более аминокислотой.

В некоторых вариантах осуществления способ дополнительно включает определение активности кальцийчувствительного рецептора после стадии (а) и выбор в качестве композиции испытуемого вещества, повышающего активность кальцийчувствительного рецептора.

В некоторых вариантах осуществления способ дополнительно включает контактирование кальцийчувствительного рецептора с лигандом, например, агонистом, и выбор в качестве композиции испытуемого вещества, повышающего или усиливающего способность агониста активировать кальцийчувствительный рецептор.

4.3 In vitro методы

Настоящий раскрываемый предмет изобретения также относится к in vitro методам для идентификации соединений, которые могут модулировать активность и/или экспрессию кальцийчувствительного рецептора.

Кальцийчувствительные рецепторы для применения в способах по настоящему раскрытию могут включать выделенные или рекомбинантные кальцийчувствительные рецепторы или клетки, экспрессирующие кальцийчувствительный рецептор, раскрытый здесь. В некоторых вариантах осуществления кальцийчувствительный рецептор для применения в раскрытых способах может иметь аминокислотную или нуклеотидную последовательность, описанную в международной заявке № PCT/US15/55149, поданной 12 октября 2015, или ее фрагмент или вариант.

В некоторых вариантах осуществления способ для идентификации соединений, модулирующих активность и/или экспрессию кальцийчувствительного рецептора, включает определение биологической активности кальцийчувствительного рецептора в отсутствие и/или присутствие испытуемого соединения. В некоторых вариантах осуществления способ может включать определение биологической активности кальцийчувствительного рецептора в присутствии различных концентраций испытуемого соединения. Способ может дополнительно включать идентификацию испытуемых соединений, вызывающих модуляцию активности и/или экспрессии кальцийчувствительного рецептора, по сравнению с активностью и/или экспрессией кальцийчувствительного рецептора в отсутствие испытуемого соединения.

В некоторых вариантах осуществления соединения, идентифицированные в соответствии с описанными здесь способами, повышают биологическую активность кальцийчувствительного рецептора, по меньшей мере, на около 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 100% и более по сравнению с биологической активностью кальцийчувствительного рецептора, при отсутствии соединения. В некоторых вариантах осуществления соединения, идентифицированные в соответствии с описанными здесь способами, повышают биологическую активность кальцийчувствительного рецептора, по меньшей мере, на 30% по сравнению с биологической активностью кальцийчувствительного рецептора при отсутствии соединения.

В некоторых вариантах осуществления способ может дополнительно включать анализ двух или более, трех или более или четырех или более испытуемых соединений в комбинации. В некоторых вариантах осуществления два или более, три или более или четыре или более испытуемых соединений могут быть из разных классов соединений, например аминокислоты и низкомолекулярные химические соединения. Для примера, а не в качестве ограничения, способ может включать анализ влияния одного или более низкомолекулярных химических испытуемых соединений на биологическую активность и/или экспрессию кальцийчувствительного рецептора в присутствии одного или более испытуемых соединений типа аминокислот. В некоторых вариантах осуществления способ для определения влияния соединения на активность и/или экспрессию кальцийчувствительного рецептора включает анализ влияния испытуемого соединения на биологическую активность и/или экспрессию кальцийчувствительного рецептора в присутствии одного или более испытуемых соединений типа нуклеотиды или производные нуклеотидов.

В некоторых вариантах осуществления способ идентификации соединений, модулирующих активность и/или экспрессию кальцийчувствительного рецептора, включает определение того, что модулирует ли соединение рецептор непосредственно, например, в качестве агониста или антагониста. В некоторых вариантах осуществления способ включает определение, модифицирует ли соединение косвенно активность рецептора (например, в качестве аллостерического модулятора), например, усилением или снижением влияния других соединений на активацию или ингибирование активности рецептора.

В некоторых вариантах осуществления способ идентификации соединений, модулирующих активность и/или экспрессию кальцийчувствительного рецептора, включает экспрессию кальцийчувствительного рецептора в клеточную линию и определение биологической активности рецептора в присутствии и/или отсутствии испытуемого соединения. Способ может дополнительно включать идентификацию испытуемых соединений, модулирующих активность рецептора определением, существует ли разница в активации рецептора в присутствии испытуемого соединения по сравнению с активностью рецептора в отсутствие испытуемого соединения. В некоторых вариантах осуществления селективность предполагаемого модулятора кальцийчувствительного рецептора можно оценить сравнением его влияния на другие GPCRs или рецепторы вкуса, например, умами, GPR120, T1R и тому подобные.

Активация рецептора в описанных способах может быть определена с помощью меченого соединения и/или вещества. В некоторых вариантах осуществления активность кальцийчувствительного рецептора можно определить путем обнаружения вторичных мессенджеров, таких как, но не ограничиваясь ими, cAMP, cGMP, IP3, DAG или кальций. В некоторых вариантах осуществления активность кальцийчувствительного рецептора можно определить путем обнаружения уровней внутриклеточного кальция. Мониторинг можно осуществлять путем детектирования люминесценцией или флуоресценцией, например, с помощью кальцийчувствительного флуоресцентного красителя. В некоторых вариантах осуществления уровни внутриклеточного кальция можно определить с использованием красителя клеток, например, флуоресцентного индикатора кальция, такого как Calcium 4. В некоторых вариантах осуществления уровни внутриклеточного кальция можно определить измерением степени связывания кальция с кальцийсвязывающим белок, например, кальмодулин. Альтернативно и/или дополнительно активность кальцийчувствительного рецептора можно определить детектированием уровней фосфорилирования, транскрипции и/или уровней белка в одном или более белках-мишенях ниже по ходу транскрипции кальцийчувствительного рецептора.

Клеточная линия, используемая в раскрытых способах, может включать любой клеточный тип, способный экспрессировать кальцийчувствительный рецептор. Неограничивающие примеры клеток, которые можно использовать в раскрытых способах, включают клетки HeLa, клетки яичника китайского хомячка (клетки CHO), клетки почек африканской зеленой мартышки (клетки COS), ооциты Xenopus, клетки HEK-293 и фибробласты мыши 3T3. В некоторых вариантах осуществления способ может включать экспрессию кальцийчувствительного рецептора в клетках CHO-K1. В некоторых вариантах осуществления способ может включать экспрессию кальцийчувствительного рецептора в клетках HEK-293. В некоторых вариантах осуществления способ может включать экспрессию кальцийчувствительного рецептора в клетках COS. В некоторых вариантах осуществления клетки конститутивно экспрессируют кальцийчувствительный рецептор. В другом варианте осуществления экспрессия кальцийчувствительного рецептора клетками является индуцируемой.

В некоторых вариантах осуществления клетка экспрессирует кальцийсвязывающий фотобелок, где фотобелок люминесцирует при связывании кальция. В некоторых вариантах осуществления кальцийсвязывающий фотобелок включает белок клитин. В некоторых вариантах осуществления клитин представляет собой рекомбинантный клитин. В некоторых вариантах осуществления клитин включает выделенный клитин, например, клитин, выделенный из Clytia gregarium. В некоторых вариантах осуществления кальцийсвязывающий фотобелок включает белок экворин, например рекомбинантный экворин или выделенный экворин, такой как экворин, выделенный из Aequorea victoria. В некоторых вариантах осуществления кальцийсвязывающий фотобелок включает белок обелин, например рекомбинантный обелин или выделенный обелин, такой как обелин, выделенный из Obelia longissima.

В некоторых вариантах осуществления экспрессию кальцийчувствительного рецептора в клетке можно осуществлять введением нуклеиновой кислоты, кодирующей кальцийчувствительный рецептор, в клетку. Для примера, а не в качестве ограничения, нуклеиновая кислота, имеющая нуклеотидную последовательность, указанную в международной заявке № PCT/US15/55149, поданной 12 октября 2015, или ее фрагмент, может быть введена в клетку. В некоторых вариантах осуществления введение нуклеиновой кислоты в клетку можно осуществлять любым способом, известным в данной области, включая, но не ограничиваясь этим, трансфекцию, электропорацию, микроинъекцию, инфицирование вирусным или бактериофаговым вектором, содержащим нуклеотидную последовательность, слияние клеток, перенос генов, опосредованный хромосомой, перенос генов, опосредованный микроклетками, слияние сферопластов и тому подобное. В данной области известны многочисленные способы введения чужеродных генов в клетки (смотри, например, Loeffler and Behr, Meth. Enzymol., 217:599-618 (1993), Cohen et al., Meth. Enzymol. 217:618-644 (1993); Cline, Pharmac., 29:69-92 (1985), раскрытие которых включено здесь посредством ссылки в их полном объеме) и могут использоваться в соответствии с раскрываемым предметом изобретения. В некоторых вариантах осуществления способ может обеспечить стабильный перенос нуклеиновой кислоты в клетку таким образом, что нуклеиновая кислота экспрессируется клеткой и наследуется, и экспрессируется ее потомством. В некоторых вариантах осуществления способ может обеспечить переходный перенос нуклеиновой кислоты в клетку, таким образом, что нуклеиновая кислота экспрессируется клеткой, при этом наследуемость и экспрессия снижаются в последующих поколениях потомства клетки.

В некоторых вариантах осуществления способ может включать идентификацию соединений, которые связываются с кальцийчувствительным рецептором. Способ может включать контактирование кальцийчувствительного рецептора с испытуемым соединением и оценку связывания между соединением и кальцийчувствительным рецептором. Для примера, а не в качестве ограничения, способы могут включать предоставление выделенного или очищенного кальцийчувствительного рецептора в бесклеточной системе и контактирование рецептора с испытуемым соединением в бесклеточной системе для определения, связывается ли испытуемое соединение с кальцийчувствительным рецептором. В некоторых вариантах осуществления способ может включать контактирование кальцийчувствительного рецептора, экспрессированного на поверхности клетки с испытуемым соединением, и определение связывания испытуемого соединения с кальцийчувствительным рецептором. Связывание можно определить непосредственно, например, с использованием меченого испытуемого соединения или можно определить косвенно. В некоторых вариантах осуществления определение включает обнаружение физиологического события в клетке, вызванного связыванием соединения с кальцийчувствительным рецептором, например, повышение уровней внутриклеточного кальция. Для примера, а не в качестве ограничения, определение можно осуществлять посредством детектирования флуоресценцией, например, кальцийчувствительный флуоресцентный краситель, детектированием люминесценцией или любого другого способа определения, известного в данной области.

В некоторых неограничивающих вариантах осуществления исследование in vitro охватывает клетки, экспрессирующие кальцийчувствительный рецептор, который является нативным для клеток. Примеры таких клеток, экспрессирующих нативный кальцийчувствительный рецептор, охватывают, например, но не ограничиваются ими, вкусовые клетки собаки (собачьи) и/или кошки (кошачьи) (например, клетки первичного рецептора вкуса). В некоторых вариантах осуществления вкусовые клетки собаки и/или кошки, экспрессирующие кальцийчувствительный рецептор, выделяются из организма собаки и/или кошки и культивируются in vitro. В некоторых вариантах осуществления клетки рецептора вкуса могут быть иммортализированы, например, таким образом, что клетки, выделенные из организма собаки и/или кошки, могут размножаться в культуре.

В некоторых вариантах осуществления экспрессию кальцийчувствительного рецептора в клетке можно индуцировать редактированием генома, например, с использованием системы редактирования генома CRISPR, для включения гена кальцийчувствительного рецептора в геном клетки или редактирования или модифицирования гена кальцийчувствительного рецептора, нативного клетке.

В некоторых вариантах осуществления in vitro методы для идентификации соединения, которое связывается с кальцийчувствительным рецептором, включают определение, взаимодействует ли испытуемое соединение с одной или более аминокислотами взаимодействующего домена кальцийчувствительного рецептора, описанного здесь.

В некоторых вариантах осуществления соединения, идентифицированные как модуляторы кальцийчувствительного рецептора, можно дополнительно протестировать в других аналитических методах, включающих, но не ограничивающихся ими, исследования in vivo, для подтверждения или количественного определения их модулирующей активности.

В некоторых вариантах осуществления способы, описанные здесь, могут включать определение, является ли модулятор кальцийчувствительного рецептора соединением, усиливающим кальцийчувствительный рецептор вкуса, например, агонистом кальцийчувствительного рецептора.

В некоторых вариантах осуществления способы идентификации модулятора кальцийчувствительного рецептора могут включать сравнение влияния испытуемого соединения на агонист кальцийчувствительного рецептора. Например, испытуемое соединение, которое повышает активность рецептора по сравнению с активностью рецептора при контактировании с агонистом кальцийчувствительного рецептора, можно выбирать в качестве соединения, модулирующего кальцийчувствительный рецептор (например, в качестве агониста).

В некоторых вариантах осуществления способы идентификации модулятора кальцийчувствительного рецептора могут включать определение, модулирует ли испытуемое соединение активность рецептора при контактировании рецептора с агонистом, или может ли испытуемое соединение модулировать активность позитивного аллостерического модулятора (ПАМ). Испытуемые соединения, которые усиливают или снижают влияние указанного агониста или ПАМ на рецептор, можно выбирать в качестве соединения, модулирующего кальцийчувствительный рецептор (например, в качестве аллостерического модулятора).

5. Ароматизирующие композиции

В некоторых вариантах осуществления ароматизирующие композиции по настоящему изобретению можно использовать для повышения вкусовой привлекательности кормовых продуктов для домашних животных, таких как кормовые продукты для кошек. Ароматизирующие композиции могут содержать комбинации соединений и могут быть добавлены в кормовой продукт для домашних животных в различных системах доставки.

В некоторых вариантах осуществления настоящее раскрытие относится к способам модуляции вкуса кокуми (например, активности кальцийчувствительного рецептора) и/или вкусовой привлекательности кормового продукта для домашних животных, включающим: а) предоставление, по меньшей мере, одного кормового продукта для домашних животных или его предшественника и b) смешивание кормового продукта для домашних животных или его предшественника с, по меньшей мере, модулирующим вкус кокуми количеством, по меньшей мере, одной ароматизирующей композиции, например, содержащей одно или более соединений или их приемлемых в пищевом отношении солей, с целью получения улучшенного кормового продука для домашних животных.

В некоторых вариантах осуществления ароматизирующие композиции по настоящему изобретению могут усиливать активность кальцийчувствительного рецептора и/или вкусовую привлекательность кормового продукта для домашних животных, такого как, например, кормовой продукт для домашних животных, включий влажные кормовые продукты для домашних животных, сухие кормовые продукты для домашних животных, сырые кормовые продукты для домашних животных, питьевые продукты для домашних животных и/или кормовые продукты типа закуски для домашних животных.

В некоторых вариантах осуществления одну или более ароматизирующих композиций по настоящему раскрытию можно добавить в кормовой продукт для домашних животных в количестве, эффективном для модификации, улучшения или иного изменения вкуса или вкусового профиля кормового продукта для домашних животных. Модификация может включать, например, усиление или повышение вкусовой привлекательности кормового продукта для домашних животных, это определяется животными, например, кошками и/или собаками, или, в случае испытания рецептуры, это определяется группой дегустаторов, оценивающих вкусовые ощущения животных, например, кошек и/или собак, с использованием методик, известных в данной области.

В некоторых вариантах осуществления настоящего раскрытия можно получить кормовой продукт для домашних животных, содержащий достаточное количество, по меньшей мере, одной ароматизирующей композиции, описанной здесь, например, включающей соединение, с получением кормового продукта для домашних животных, имеющего требуемый вкус, например, вкус кокуми.

В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения можно получить кормовой продукт для домашних животных, содержащий достаточное количество ароматизирующей композиции, включающей, по меньшей мере, одно, два, три, четыре, пять, шесть или более соединений.

В некоторых вариантах осуществления в кормовой продукт для домашних животных можно добавить модифицирующее кальцийчувствительный рецептор количество одной или более ароматизирующих композиций по настоящему раскрытию, таким образом, что кормовой продукт для домашних животных обладает повышенной вкусовой привлекательностью по сравнению с кормовым продуктом для домашних животных, полученным без ароматизирующей композиции, это определяется животными, например, кошками и/или собаками, или в случае испытания рецептуры, это определяется группой дегустаторов, оценивающих вкусовые ощущения животных, с использованием методик, известных в данной области.

В некоторых вариантах осуществления настоящего раскрытия ароматизирующую композицию добавляют в кормовой продукт для домашних животных в количестве, эффективном для повышения, усиления и/или модификации вкусовой привлекательности кормового продукта для домашних животных.

Концентрация ароматизирующей композиции, смешанной с кормовым продуктом для домашних животных для модуляции и/или улучшения вкусовой привлекательности кормового продукта для домашних животных, может изменяться в зависимости от переменных факторов, таких как, например, конкретный вид кормового продукта для домашних животных, какие модулирующие вкус соединения уже присутствуют в кормовом продукте для домашних животных и их концентрации, и усиливающий эффект конкретной ароматизирующей композиции на такие модулирующие вкус соединения.

Для обеспечения такой модификации вкусовой привлекательности можно использовать широкий диапазон концентраций ароматизирующих композиций. В некоторых вариантах осуществления настоящей заявки ароматизирующую композицию смешивают с кормовым продуктом для домашних животных, где ароматизирующая композиция присутствует в количестве от около 0,001 ppm до около 1000 ppm. Для примера, но не в качестве ограничения, ароматизирующая композиция может присутствовать в количестве от около 0,001 ppm до около 750 ppm, от около 0,001 ppm до около 500 ppm, от около 0,001 ppm до около 250 ppm, от около 0,001 ppm до около 150 ppm, от около 0,001 ppm до около 100 ppm, от около 0,001 ppm до около 75 ppm, от около 0,001 ppm до около 50 ppm, от около 0,001 ppm до около 25 ppm, от около 0,001 ppm до около 15 ppm, от около 0,001 ppm до около 10 ppm, от около 0,001 ppm до около 5 ppm, от около 0,001 ppm до около 4 ppm, от около 0,001 ppm до около 3 ppm, от около 0,001 ppm до около 2 ppm, от около 0,001 ppm до около 1 ppm, от около 0,01 ppm до около 1000 ppm, от около 0,1 ppm около до 1000 ppm, от около 1 ppm до 1000 ppm, от около 2 ppm до около 1000 ppm, от около 3 ppm до около 1000 ppm, от около 4 ppm до около 1000 ppm, от около 5 ppm до около 1000 ppm, от около 10 ppm до около 1000 ppm, от около 15 ppm до около 1000 ppm, от около 25 ppm до 1000 ppm, от около 50 ppm до около 1000 ppm, от около 75 ppm до около 1000 ppm, от около 100 ppm до около 1000 ppm, от около 150 ppm до около 1000 ppm, от около 200 ppm до около 1000 ppm, от около 250 ppm до около 1000 ppm, от около 500 ppm до около 1000 ppm или от около 750 ppm до около 1000 ppm и значения в этих пределах.

В некоторых вариантах осуществления настоящей заявки ароматизирующую композицию смешивают с кормовым продуктом для домашних животных, где ароматизирующая композиция присутствует в количестве от около 0,001 ppm до около 500 ppm или от около 0,01 ppm до около 500 ppm, от около 0,1 ppm до около 500 ppm или от около 1 ppm до около 500 ppm и значения в этих пределах.

В некоторых вариантах осуществления настоящей заявки ароматизирующую композицию смешивают с кормовым продуктом для домашних животных, где ароматизирующая композиция присутствует в количестве от около 0,01 ppm до около 100 ppm или от около 0,1 ppm до около 100 ppm, или от около 1 ppm до около 100 ppm и значения в этих пределах.

В некоторых вариантах осуществления ароматизирующая композиция присутствует в кормовом продукте для животных в количестве более чем около 0,001 ppm, более чем около 0,01 ppm, более чем около 0,1 ppm, более чем около 1 ppm, более чем около 2 ppm, более чем около 3 ppm, более чем около 4 ppm, более чем около 5 ppm, более чем около 10 ppm, более чем около 25 ppm, более чем около 50 ppm, более чем около 75 ppm, более чем около 100 ppm, более чем около 250 ppm, более чем около 500 ppm, более чем около 750 ppm или более чем около 1000 ppm и значения в этих пределах.

В некоторых вариантах осуществления соединение по настоящему раскрытию присутствует в кормовом продукте в количестве, достаточном для модуляции, активации и/или усиления кальцийчувствительного рецептора. Для примера, но не в качестве ограничения, соединение может присутствовать в кормовом продукте в количестве от около 1 пМ до около 1 М, от около 1 нМ до около 1 М, от около 1 мкМ до около 1 М, от около 1 мМ до около 1 М, от около 10 мМ до около 1 М, от около 100 мМ до около 1 М, от около 250 мМ до около 1 М, от около 500 мМ до около 1 М, от около 750 мМ до около 1 М, от около 0,001 мкМ до около 1 М, от около 0,001 мкМ до около 750 мМ, от около 0,001 мкМ до около 500 мМ, от около 0,001 мкМ до около 250 мМ, от около 0,001 мкМ до около 100 мМ, от около 0,001 мкМ до около 50 мМ, от около 0,001 мкМ до около 25 мМ, от около 0,001 мкМ до около 10 мМ, от около 0,001 мкМ до около 1 мМ, от около 0,001 мкМ до около 100 мкМ или от около 0,001 мкМ до около 10 мкM и значения в этих пределах.

В некоторых вариантах осуществления соединение по настоящему раскрытию присутствует в кормовом продукте в количестве, достаточном для модуляции, активации и/или усиления кальцийчувствительного рецептора. Для примера, но не в качестве ограничения, соединение может присутствовать в кормовом продукте в количестве от около 1 пМ до около 10 М, от около 1 пМ до около 1 М, от около 1 мМ до около 1 М, от около 10 мМ до около 1 М, от около 100 мМ до около 1 М, от около 250 мМ до около 1 М, от около 500 мМ до около 1 М, от около 750 мМ до около 1 М, от около 1 мкМ до около 1 М, от около 1 мкМ до около 750 мМ, от около 1 мкМ до около 500 мМ, от около 1 мкМ до около 250 мМ, от около 1 мкМ до около 100 мМ, от около 1 мкМ до около 50 мМ, от около 1 мкМ до около 25 мМ, от около 1 мкМ до около 10 мМ, от около 1 мкМ до около 1 мМ, от около 1 мкМ до около 100 мкМ или от около 1 мкМ до около 10 мкМ и значения в этих пределах.

В некоторых вариантах осуществления настоящей заявки ароматизирующую композицию смешивают с кормовым продуктом для домашних животных, где ароматизирующая композиция присутствует в количестве от около 10 пМ до около 0,5 М или от около 1 пМ до около 0,5 М, или от около 0,1 пМ до около 0,5 М и значения в этих пределах.

В некоторых вариантах осуществления настоящей заявки ароматизирующую композицию смешивают с кормовым продуктом для домашних животных, где ароматизирующая композиция присутствует в количестве от около 10 пМ до около 0,1 М или от около 1 пМ до около 0,1 М, или от около 0,1 пМ до 0,1 М и значения в этих пределах.

В некоторых вариантах осуществления настоящей заявки ароматизирующую композицию смешивают с кормовым продуктом, где ароматизирующая композиция присутствует в количестве от около 0,0001% до около 10% вес/вес (вес./вес.) кормового продукта. Для примера, но не в качестве ограничения, ароматизирующая композиция может присутствовать в количестве от около 0,0001% до около 10%, от около 0,0001% до около 1%, от около 0,0001% до около 0,1%, от около 0,0001% до около 0,01%, от около 0,0001% до около 0,001%, от около 0,001% до около 10%, от около 0,001% до около 1%, от около 0,01% до около 1% или от около 0,1% до около 1% и значения в этих пределах.

В некоторых вариантах осуществления настоящей заявки ароматизирующую композицию смешивают с кормовым продуктом, где ароматизирующая композиция присутствует в количестве от около 0,0001% до около 5% или от около 0,001% до около 5%, от около 0,01% до около 5% вес./вес. или от около 0,1% до около 5% вес./вес. и значения в этих пределах.

В некоторых вариантах осуществления настоящей заявки ароматизирующую композицию смешивают с кормовым продуктом, где ароматизирующая композиция присутствует в количестве от около 0,0001% до около 1% или от около 0,001% до около 1%, от около 0,01% до около 1% вес./вес., или от около 0,1% до около 1% вес./вес. и значения в этих пределах.

В некоторых вариантах осуществления настоящей заявки ароматизирующую композицию смешивают с кормовым продуктом, где ароматизирующая композиция присутствует в количестве от около 0,001% до около 10% вес./вес.

В некоторых вариантах осуществления соединения по настоящей заявке смешивают вместе в различных соотношениях или смешивают вместе с другими соединениями, например, нуклеотидами и/или фуранонами, и/или аминокислотами, и/или трансмембранными соединениями, активирующими рецептор умами, и/или производными нуклеотидов и/или соединениями, активирующими рецептор жирных кислот (GPR120), с получением различных ароматизирующих композиций. Неограничивающие примеры нуклеотидов, производных нуклеотидов, фуранонов, аминокислот, соединений, активирующих рецептор жирных кислот (GPR120), и трансмембранных соединений, активирующих рецептор умами, раскрыты в международных заявках № PCT/EP2013/072788, поданной 31 октября 2013, PCT/EP2013/072789, поданной 31 октября 2013, PCT/EP2013/072790, поданной 31 октября 2013, PCT/EP2013/072794, поданной 31 октября 2013, PCT/US15/65046, поданной 10 декабря 2015, PCT/US15/65036, поданной 10 декабря 2015, и PCT/US15/65106, поданной 10 декабря 2015, которые включены здесь посредством ссылки в их полном объеме.

5.1. Аминокислоты

В некоторых вариантах осуществления настоящего раскрытия ароматизирующая композиция содержит, по меньшей мере, одно соединение и, по меньшей мере, одну аминокислоту, описанную здесь и в международных заявках № PCT/EP2013/072788, поданной 31 октября 2013, PCT/EP2013/072789, поданной 31 октября 2013, PCT/EP2013/072790, поданной 31 октября 2013, и PCT/EP2013/072794, поданной 31 октября 2013, каждая из которых включена здесь посредством ссылки в ее полном объеме.

В некоторых вариантах осуществления настоящего раскрытия ароматизирующая композиция содержит, по меньшей мере, одну аминокислоту, выбранную из группы, состоящей из L-глутаминовой кислоты (или моноглутамата натрия (MSG)), L-аспарагиновой кислоты, L-аргинина, L-лизина, L-фенилаланина, L-триптофана и Se-(метил)селеноцистеин. В некоторых вариантах осуществления, по меньшей мере, одна аминокислота активирует CaSR в качестве ПАМ. В некоторых вариантах осуществления, по меньшей мере, одна аминокислота активирует CaSR в качестве агониста.

В некоторых вариантах осуществления настоящего раскрытия ароматизирующая композиция содержит, по меньшей мере, первичную аминокислоту, вторичную аминокислоту и третичную аминокислоту. В некоторых вариантах осуществления первичная аминокислота может повышать активность рецептора T1R1/T1R3 (то есть рецептора умами) и может быть аминокислотой, выбранной из аминокислот первой группы, приведенных в таблице 2. В некоторых вариантах осуществления вторичная аминокислота может модулировать активность кальцийчувствительного рецептора, описанного здесь, и может быть аминокислотой, выбранной из аминокислот второй группы, приведенных в таблице 2. В некоторых вариантах осуществления третичная аминокислота может взаимодействовать с одним или более другими рецепторами вкуса и не связываться с тем же рецептором, что и первичная аминокислота или вторичная аминокислота, или конкурировать с первичной аминокислотой или вторичной аминокислотой за связывание с рецептором. В некоторых вариантах осуществления третичная аминокислота может быть аминокислотой, выбранной из аминокислот третьей группы, приведенных в таблице 2. В некоторых вариантах осуществления ароматизирующая композиция содержит, по меньшей мере, одну аминокислоту первой группы, по меньшей мере, одну аминокислоту второй группы и, по меньшей мере, одну аминокислоту третьей группы.

Таблица 2

Аминокислоты, активирующие рецептор вкуса

Первая группа аминокислот	Вторая группа аминокислот	Третья группа аминокислот
L-триптофан	L-глутаминовая кислота (или моноглутамат натрия [MSG])	L-треонин
L-фенилаланин	L-аспарагиновая кислота	L-изолейцин
L-гистидин	L-аргинин	L-пролин
Глицин	L-лизин	Гидрокси-L-пролин
L-цистеин	L-фенилаланин	L-цистин
L-аланин	L-триптофан	L-глутамин
L-тирозин	Se-(метил)селеноцистеин	L-валин
L-серин		L-орнитин
L-метионин		Таурин
L-лейцин
L-аспарагин

В некоторых вариантах осуществления, по меньшей мере, одна первичная, вторичная и/или третичная аминокислота может присутствовать в количестве от около 1 мМ до около 1 М, или от около 250 мМ до около 1 М, или от около 5 мМ до около 500 мМ, или от около 10 мМ до около 100 мМ, или от около 15 мМ до около 50 мМ, или от около 20 мМ до около 40 мМ кормового продукта для домашних животных. В некоторых вариантах осуществления аминокислота(ы) может присутствовать в количестве менее чем около 1 М, менее чем около 200 мМ, менее чем около 100 мМ, менее чем около 50 мМ, менее чем около 20 мМ или менее чем около 10 мМ кормового продукта для домашних животных. В некоторых вариантах осуществления первичная аминокислота и/или вторичная аминокислота и/или третичная аминокислота, отдельно или в комбинации, могут присутствовать в количестве около 25 мМ кормового продукта для домашних животных.

В некоторых вариантах осуществления настоящего раскрытия ароматизирующая композиция дополнительно содержит, по меньшей мере, один нуклеотид и/или производное нуклеотида, описанные здесь.

В некоторых вариантах осуществления настоящего раскрытия ароматизирующая композиция дополнительно содержит, по меньшей мере, одно соединение, активирующее рецептор жирных кислот (GPR120), описанное здесь.

В некоторых вариантах осуществления настоящего раскрытия ароматизирующая композиция дополнительно содержит, по меньшей мере, одно трансмембранное соединение, активирующее рецептор умами, описанное здесь.

5.2. Трансмембранные соединения, активирующие рецептор умами

В некоторых вариантах осуществления настоящего раскрытия ароматизирующая композиция содержит, по меньшей мере, одно соединение, описанное в настоящей заявке, и, по меньшей мере, одно трансмембранное соединение, активирующее рецептор умами, описанное в международной заявке № PCT/US15/65036, поданной 10 декабря 2015, которая включена здесь посредством ссылки в полном объеме.

В некоторых вариантах осуществления настоящего раскрытия ароматизирующая композиция содержит, по меньшей мере, одно соединение и, по меньшей мере, два, три, четыре, пять или более трансмембранных соединений, активирующих рецептор умами.

В некоторых вариантах осуществления трансмембранное соединение, активирующее рецептор умами, по настоящему раскрытию может присутствовать в кормовом продукте в количестве от около 1 пМ до около 1 М, от около 1 нМ до около 1 М, от около 1 мкМ до около 1 М, от около 1 мМ до около 1 М, от около 10 мМ до около 1 М, от около 100 мМ до около 1 М, от около 250 мМ до около 1 М, от около 500 мМ до около 1 М, от около 750 мМ до около 1 М, от около 1 мкМ до около 1 М, от около 1 мкМ до около 750 мМ, от около 1 мкМ до около 500 мМ, от около 1 мкМ до около 250 мМ, от около 1 мкМ до около 100 мМ, от около 1 мкМ до около 50 мМ, от около 1 мкМ до около 25 мМ, от около 1 мкМ до около 10 мМ, от около 1 мкМ до около 1 мМ, от около 1 мкМ до около 100 мкМ или от около 1 мкМ до около 10 мкМ и значения в этих пределах.

В некоторых вариантах осуществления трансмембранное соединение, активирующее рецептор умами, может представлять собой соль, стереоизомер или съедобную форму трансмембранного соединения, описанного здесь.

В некоторых вариантах осуществления настоящего раскрытия ароматизирующая композиция дополнительно содержит, по меньшей мере, одну аминокислоту, описанную здесь.

В некоторых вариантах осуществления настоящего раскрытия ароматизирующая композиция дополнительно содержит, по меньшей мере, один нуклеотид и/или производное нуклеотида, описанные здесь.

В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения ароматизирующая композиция дополнительно содержит, по меньшей мере, одно соединение, активирующее рецептор жирной кислоты (GPR120), описанное здесь.

5.3. Нуклеотиды и производные нуклеотидов

В некоторых вариантах осуществления настоящего раскрытия кормовая композиция содержит, по меньшей мере, одно соединение и, по меньшей мере, один нуклеотид и/или производное нуклеотида, описанные здесь и в международных заявках № PCT/US15/65046, поданной 10 декабря 2015, PCT/EP2013/072788, поданной 31 октября 2013, PCT/EP2013/072789, поданной 31 октября 2013, PCT/EP2013 072790, поданной 31 октября 2013, и PCT/EP2013/072794, поданной 31 октября 2013, которые включены здесь посредством ссылки в их полном объеме.

В некоторых вариантах осуществления настоящего раскрытия ароматизирующая композиция содержит, по меньшей мере, одно соединение и, по меньшей мере, два, три, четыре, пять или более нуклеотидов и/или производных нуклеотидов, описанных здесь. Неограничивающие примеры нуклеотидов включают гуанозинмонофосфат (ГМФ), инозинмонофосфат (ИМФ), аденозинмонофосфат (АМФ), цитидинмонофосфат (ЦМФ), тиминмонофосфат (ТМФ), ксантозинмонофосфат (КМФ), уридинмонофосфат (УМФ) и их комбинации.

В некоторых вариантах осуществления ароматизирующая композиция может содержать нуклеотид и/или производное нуклеотида, присутствующие в кормовом продукте, которые могут присутствовать в количестве от около 1 пМ до около 1 М, от около 1 нМ до около 1 М, от около 1 мкМ до около 1 М, от около 1 мМ до около 1 М, от около 10 мМ до около 1 М, от около 100 мМ до около 1 М, от около 250 мМ до около 1 М, от около 500 мМ до около 1 М, от около 750 мМ до около 1 М, от около 1 мкМ до около 1 М, от около 1 мкМ до около 750 мМ, от около 1 мкМ до около 500 мМ, от около 1 мкМ до около 250 мМ, от около 1 мкМ до около 100 мМ, от около 1 мкМ до около 50 мМ, от около 1 мкМ до около 25 мМ, от около 1 мкМ до около 10 мМ, от около 1 мкМ до околоо 1 мМ, от около 1 мкМ до около 100 мкМ или от около 1 мкМ до около 10 мкМ и значения в этих пределах.

В некоторых вариантах осуществления нуклеотид и/или производное нуклеотида может присутствовать в количестве более чем около 1 мМ или более чем около 2,5 мМ в кормовом продукте для домашних животных. В некоторых неограничивающих вариантах осуществления нуклеотид и/или производное нуклеотида может присутствовать в количестве менее чем около 100 мМ, менее чем около 50 мМ, менее чем около 20 мМ или менее чем около 10 мМ в кормовом продукте для домашних животных. В некоторых неограничивающих вариантах осуществления нуклеотид и/или производное нуклеотида присутствует в количестве около 5 мМ в кормовом продукте для домашних животных.

В некоторых вариантах осуществления настоящего раскрытия ароматизирующая композиция дополнительно содержит, по меньшей мере, одну аминокислоту, описанную здесь.

В некоторых вариантах осуществления настоящего раскрытия ароматизирующая композиция дополнительно содержит, по меньшей мере, одно трансмембранное соединение, активирующее рецептора умами, описанное здесь.

В некоторых вариантах осуществления настоящего раскрытия ароматизирующая композиция дополнительно содержит, по меньшей мере, одно соединение, активирующее рецептор жирной кислоты (GPR120), описанное здесь.

5.4. Соединения, активирующие рецептор жирных кислот (GPR120)

В некоторых вариантах осуществления настоящего раскрытия ароматизирующая композиция содержит, по меньшей мере, одно соединение, описанное в настоящей заявке, и, по меньшей мере, одно соединение, активирующее рецептор жирных кислот (GPR120), описанное в международной заявке № PCT/US15/65106, поданной 10 декабря 2015, которая включена здесь посредством ссылки в полном объеме.

В некоторых вариантах осуществления настоящего раскрытия ароматизирующая композиция содержит, по меньшей мере, одно соединение и, по меньшей мере, два, три, четыре, пять или более соединений, активирующих рецептор жирных кислот (GPR120).

В некоторых вариантах осуществления соединение, активирующее рецептор жирных кислот (GPR120), по настоящему раскрытию может присутствовать в кормовом продукте в количестве от около 1 пМ до около 1 М, от около 1 нМ до около 1 М, от около 1 мкМ до около 1 М, от около 1 мМ до около 1 М, от около 10 мМ до около 1 М, от около 100 мМ до около 1 М, от около 250 мМ до около 1 М, от около 500 мМ до около 1 М, от около 750 мМ до около 1 М, от около 1 мкМ до около 1 М, от около 1 мкМ до около 750 мМ, от около 1 мкМ до около 500 мМ, от около 1 мкМ до около 250 мМ, от около 1 мкМ до около 100 мМ, от около 1 мкМ до около 50 мМ, от около 1 мкМ до около 25 мМ, от около 1 мкМ до около 10 мМ, от около 1 мкМ до около 1 мМ, от около 1 мкМ до около 100 мкМ или от около 1 мкМ до около 10 мкМ и значения в этих пределах.

В некоторых вариантах осуществления соединение, активирующее рецептор жирных кислот (GPR120), может представлять собой соль, стереоизомер или приемлемую форму соединения, активирующего рецептор жирных кислот (GPR120), описанного здесь.

В некоторых вариантах осуществления настоящего раскрытия ароматизирующая композиция дополнительно содержит, по меньшей мере, одну аминокислоту, описанную здесь.

В некоторых вариантах осуществления настоящего раскрытия ароматизирующая композиция дополнительно содержит, по меньшей мере, один нуклеотид и/или производное нуклеотида, описанные здесь.

В некоторых вариантах осуществления настоящего раскрытия ароматизирующая композиция дополнительно содержит, по меньшей мере, одно соединение, активирующее рецептор умами, описанное здесь.

6. Системы доставки

В некоторых вариантах осуществления ароматизирующие композиции по настоящей заявке можно включать в систему доставки для использования в кормовых продуктах для домашних животных. Системы доставки могут представлять собой безводную жидкость, твердое вещество или эмульсию. Системы доставки обычно адаптируют для соответствия требованиям ароматизирующей композиции и/или кормового продукта для домашних животных, в который вводится ароматизирующая композиция.

Ароматизирующие композиции можно использовать в безводной жидкой форме, сухой форме, твердой форме и/или в виде эмульсии. При использовании в сухой форме можно применять подходящие способы высушивания, такие как распылительная сушка. Альтернативно, ароматизирующая композиция может быть инкапсулирована или абсорбирована на нерастворимых в воде материалах. Современные способы получения таких сухих форм хорошо известны в данной области и могут быть применены к настоящему раскрываемому предмету изобретения.

Ароматизирующие композиции по настоящему раскрываемому предмету изобретения можно использовать во многих различных физических формах, хорошо известных в данной области, для обеспечения исходного импульса вкуса, аромата и/или текстуры, и/или пролонгированного ощущения вкуса, аромата и/или текстуры. Но не ограничиваясь этим, такие физические формы включают свободные формы, такие как высушенные распылительной сушкой, порошкообразные, гранулированные формы и инкапсулированные формы и их смеси.

В некоторых вариантах осуществления соединения ароматизирующей композиции можно получить в процессе обработки кормового продукта для домашних животных, например, стерилизации, автоклавирования и/или экструзии соединений-предшественников, присутствующих в кормовом продукте для домашних животных.

В некоторых вариантах осуществления, как отмечено выше, способы инкапсуляции можно использовать для модификации ароматизирующих систем. В некоторых вариантах осуществления ароматизирующие соединения, ароматизирующие компоненты или вся ароматизирующая система могут быть полностью или частично инкапсулированы. Инкапсулирующие материалы и/или способы могут быть выбраны для определения типа модификации ароматизирующей системы.

В некоторых вариантах осуществления инкапсулирующие материалы и/или способы выбирают для повышения стабильности ароматизирующих соединений, ароматизирующих компонентов или ароматизирующих композиций; в то время как в других вариантах осуществления инкапсулирующие материалы и/или способы выбирают для модификации профиля высвобождения ароматизирующей композиций.

Подходящие инкапсулирующие материалы могут включать, но не ограничиваются ими, гидроколлоиды, такие как альгинаты, пектины, агары, гуаровые камеди, целлюлозы и тому подобное, белки, поливинилацетат, полиэтилен, сшитый поливинилпирролидон, полиметилметакрилат, полилактидная кислота, полигидроксиалканоаты, этилцеллюлоза, поливиниловый ацетатфталат, сложные эфиры полиэтиленгликоля, сополимер метакриловой кислоты и метилметакрилата, сополимер этилена и винилацетата (EVA) и тому подобное и их комбинации. Подходящие способы инкапсуляции могут включать, но не ограничиваются ими, нанесение покрытия распылением, распылительную сушку, охлаждение распылением, абсорбцию, адсорбцию, образование комплексов включения (например, создание комплекса включения аромат/циклодекстрин), коацервацию, нанесение покрытия в кипящем слое, или может быть использован другой способ для инкапсуляции компонента с инкапсулирующим материалом.

Инкапсулированные системы доставки ароматизирующих веществ или подсластителей содержат гидрофобную матрицу жира или воска, окружающую подслащивающее вещество или ароматизирующее вещество ядра. Жиры могут быть выбраны из любого числа обычных материалов, таких как жирные кислоты, глицериды или полиглицериновые сложные эфиры, сложные эфиры сорбита и их смеси. Примеры жирных кислот включают, но не ограничиваются ими, гидрогенизированные и частично гидрогенизированные растительные масла, такие как пальмовое масло, пальмоядровое масло, арахисовое масло, рапсовое масло, рисовое масло, соевое масло, хлопковое масло, подсолнечное масло, сафлоровое масло и их комбинации. Примеры глицеридов включают, но не ограничиваются ими, моноглицериды, диглицериды и триглицериды.

Подходящие воски могут быть выбраны из группы, состоящей из природных и синтетических восков и их смесей. Неограничивающие примеры включают парафин, вазелин, карбовакс, микрокристаллический воск, пчелиный воск, карнаубский воск, канделильский воск, ланолин, воск восковницы, воск сахарного тростника, спермацетовый воск, воск рисовых отрубей и их смеси.

Жиры и воски можно использовать по отдельности или в комбинации в количествах около от 10% до около 70%, и в альтернативном варианте в количестве около от 30% до около 60% по весу инкапсулированной системы. При использовании в комбинации жир и воск могут присутствовать в соотношении около от 70:10 до 85:15 соответственно.

Обычные инкапсулированные системы доставки ароматизирующих композиций, ароматизирующего вещества или подслащивающего вещества раскрыты в патентах США № 4597970 и 4722845, раскрытие которых включено здесь посредством ссылки в их полном объеме.

Жидкие системы доставки могут включать, но не ограничиваться ими, системы с дисперсией ароматизирующих композиций по настоящей заявке, такие как в углеводных сиропах и/или эмульсиях. Жидкие системы доставки также могут включать экстракты, где соединение и/или ароматизирующие композиции растворяются в растворителе. Твердые системы доставки могут быть созданы с использованием распылительной сушки, нанесения покрытия распылением, охлаждения распылением, сушки в кипящем слое, абсорбции, адсорбции, коацервации, комплексообразования или любой другой стандартной технологии. В некоторых вариантах осуществления система доставки может быть выбрана для соответствия или назначения съедобной композиции. В некоторых вариантах осуществления система доставки включает масляный материал, такой как жир или масло. В некоторых вариантах осуществления система доставки включает кондитерский жир, такой как какао-масло, заменитель какао-масла, суррогат масла-какао или эквивалент какао-масла.

При использовании в сухой форме можно использовать подходящие способы высушивания, такие как распылительная сушка. Альтернативно, ароматизирующая композиция может быть адсорбирована или абсорбирована на носителях, таких как нерастворимые в воде материалы, и может быть инкапсулирована. Современные способы получения таких сухих форм хорошо известны в данной области.

7. Кормовые продукты для домашних животных

Ароматизирующие композиции по настоящему раскрываемому предмету изобретения можно использовать в широком диапазоне кормовых продуктов для домашних животных. Неограничивающие примеры подходящих кормовых продуктов для домашних животных включают влажные кормовые продукты, сухие кормовые продукты, сырые кормовые продукты, кормовые добавки для домашних животных (например, витамины), питьевые продукты для домашних животных, закуски и лакомства, описанные здесь.

Комбинация ароматизирующей композиции(й) по настоящему раскрываемому предмету изобретения вместе с кормовым продуктом для домашних животных и необязательными компонентами, при необходимости, обеспечивает ароматизирующее вещество, которое обладающее неожиданным вкусом и вызывающее, например, сенсорное восприятие кокуми, например, за счет повышения активности кальцийчувствительного рецептора. Раскрытые здесь ароматизирующие композиции можно добавлять до, во время или после обработки смеси или упаковки кормового продукта для домашних животных, а компоненты ароматизирующей композиции можно добавлять последовательно или одновременно. В некоторых вариантах осуществления соединения ароматизирующей композиции можно получить во время обработки кормового продукта для домашних животных, например, стерилизации, автоклавирования и/или экструзии соединений-предшественников, присутствующих в кормовом продукте для домашних животных.

В некоторых вариантах осуществления кормовой продукт для домашних животных представляет собой питательно полноценный сухой кормовой продукт. Сухой или с низким содержанием влаги питательно полноценный кормовой продукт для домашних животных может содержать менее чем около 15% влаги, и содержать от около 10% до около 60% жира, от около 10% до около 70% белка и от около 30% до около 80% углеводов, например, пищевых волокон и золы.

В некоторых вариантах осуществления кормовой продукт для домашних животных представляет собой питательно полноценный влажный кормовой продукт. Влажный или с высоким содержанием влаги питательно полноценный кормовой продукт для домашних животных может содержать более чем около 50% влаги. В некоторых вариантах осуществления влажный кормовой продукт для домашних животных содержит от около 40% жира, от около 50% белка и от около 10% углеводов, например, пищевых волокон и золы.

В некоторых вариантах осуществления кормовой продукт для домашних животных представляет собой питательно полноценный сырой кормовой продукт. Сырой, например, полувлажный или полусухой или слегка сухой или слегка влажный или с промежуточным или средним содержанием влаги, питательно полноценный кормовой продукт для домашних животных содержит от около 15% до около 50% влаги.

В некоторых вариантах осуществления кормовой продукт для домашних животных представляет собой кормовой продукт типа закуска для домашних животных. Неограничивающие примеры кормовых продуктов типа закуска для домашних животных включают закусочные баточники, жевательные продукты для домашних животных, хрустящие лакомства, зерновые батончики, закуски, печенье и сладкие продукты.

В некоторых вариантах осуществления источник белка может происходить из растительного источника, такого как люпиновый белок, пшеничный белок, соевый белок и их комбинации. Альтернативно или дополнительно источник белка может происходить из различных животных источников. Неограничивающие примеры белка животного происхождения включают говядину, свинину, птицу, баранину или рыбу, включая, например, мышечное мясо, мясные субпродукты, мясную муку или рыбную муку.

8. Методы определения показателей вкуса

В некоторых вариантах осуществления настоящего раскрытия показатели вкуса, аромата и/или вкусовой привлекательности кормового продукта для домашних животных можно модифицировать смешиванием ароматизирующей композиции с кормовым продуктом или формировать в условиях получения продукта, как описано здесь. В некоторых вариантах осуществления показатель(и) можно усилить или снизить повышением или уменьшением концентрации ароматизирующей композиции, смешанной или полученной с кормовым продуктом. В некоторых вариантах осуществления показатели вкуса модифицированного кормового продукта можно оценить, как описано здесь, и концентрации ароматизирующей композиции, смешанной или полученной с кормовым продуктом, можно повысить или уменьшить в зависимости от результатов оценки.

В некоторых вариантах осуществления настоящего раскрытия показатели вкуса и/или вкусовой привлекательности можно определить с использованием испытаний in vitro, в которых определяется способность соединения активировать кальцийчувствительный рецептор кошки, экспрессированный клетками in vitro при различных концентрациях. В некоторых вариантах осуществления повышение активации рецептора коррелирует с усилением вкуса и/или вкусовой привлекательности соединения. В некоторых вариантах осуществления композицию оценивают отдельно или в комбинации с другими соединениями. В некоторых вариантах осуществления испытание in vitro включает испытания in vitro, описанные в разделе «Примеры» настоящей заявки.

В некоторых вариантах осуществления настоящего раскрытия показатели вкуса и/или вкусовой привлекательности можно определить с использованием модели in silico, где способность соединения взаимодействовать с аминокислотными остатками в центре связывания кальцийчувствительного рецептора определяют in silico. В некоторых вариантах осуществления способность соединения модулировать кальцийчувствительный рецептор кошки коррелирует со степенью связывания соединения с моделью рецептора in silico. В некоторых вариантах осуществления композицию оценивают отдельно или в комбинации с другими соединениями. В некоторых вариантах осуществления модель in silico включает модели in silico, описанные в разделе «Примеры» настоящей заявки.

В некоторых вариантах осуществления настоящего раскрытия показатели вкуса и/или вкусовой привлекательности можно определить с помощью дегустаторов, оценивающих вкус. Для примера, но не в качестве ограничения, дегустационная комиссия может состоять из дегустаторов, оценивающих вкусовые ощущения кошки. В некоторых вариантах осуществления дегустационная комиссия может состоять из дегустаторов, оценивающих вкусовые ощущения собак. В некоторых вариантах осуществления вкусовую привлекательность кормового продукта для домашних животных можно определять по потреблению кормового продукта для домашних животных, содержащего только ароматизирующую композицию (например, тест одной мисок, монадическое ранжирование). В некоторых вариантах осуществления вкусовую привлекательность кормового продукта для домашних животных можно определить предпочтительным потреблением кормового продукта для домашних животных, содержащего ароматизирующую композицию, описанную здесь, в сравнении с кормовым продуктом для домашних животных, несодержащим ароматизирующую композицию или другую ароматизирующую композицию (например, тест двух мисок для тестирования предпочтений, различия и/или выбора).

В некоторых вариантах осуществления вкусовая привлекательность и/или вкус кокуми ароматизирующей композиции можно определить предпочтительным потреблением водного раствора, содержащего ароматизирующую композицию, описанную здесь, по сравнению с водным раствором, не содержащим ароматизирующей композиции или содержащим другую ароматизирующую композицию (например, тест двух бутылок). Например, дегустационную оценку растворов может использовать для сравнения вкусовой привлекательности ряда концентраций соединений при монадической экспозиции. В некоторых вариантах осуществления раствор может содержать усилитель вкусовой привлекательности, например L-гистидин, в качестве пищевого/вполне определенного тастанта для увеличения базового потребления раствора, что позволяет идентифицировать потенциальное отрицательное влияние испытуемого соединения.

Коэффициент потребления для каждого кормового продукта для домашних животных или эмульсии можно определить, измеряя количество одного потребляемого рациона, деленное на общее потребление. Затем можно рассчитать коэффициент потребления (CR) для сравнения потребления одного рациона в пересчете на другой рацион для определения предпочтительного потребления одного кормового продукта или эмульсии над другим. Альтернативно или дополнительно разницу потребления (g) можно использовать для оценки средней разницы потребления двух эмульсий в тесте двух бутылок или двух кормовых продуктов для домашних животных в тесте двух мисок при выбранном уровне значимости, например, при уровне значимости 5%, для определения средней разницы потребления с 95% доверительным интервалом. Однако, можно использовать любой уровень значимости, например, уровень значимости 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 10%, 15%, 20%, 25% или 50%. В некоторых вариантах осуществления можно также рассчитать процентные показатели предпочтений, например, процентное предпочтение одной эмульсии или кормового продукта животным представляет собой процент от общего количества потребления эмульсии или кормового продукта во время теста, который приходиться на эту эмульсию или кормовой продукт.

9. Способы получения

В некоторых вариантах осуществления соединения по настоящему раскрытию можно получить с использованием стандартных процессов хемосинтеза. В некоторых вариантах осуществления процесс хемосинтеза предоставляет соединение, имеющее чистоту, по меньшей мере, 99,999% или, по меньшей мере, 99% или, по меньшей мере, 95% или, по меньшей мере, 90% или, по меньшей мере, 85 или, по меньшей мере, 80%. В некоторых вариантах осуществления соединения можно получить с использованием стандартных процессов гидролиза, таких как те, которые используют кислоты, ферменты или комбинацию кислот и ферментов.

В некоторых вариантах осуществления соединения по настоящему раскрытию можно получить в условиях приготовления продукта, например, во время производства кормового продукта для домашних животных. Для примера, но не в качестве ограничения, соединения по настоящему раскрытию можно получить во время тепловой обработки продукта, например, стерилизации, автоклавирования и/или экструзии соединений-предшественников, присутствующих в корме для домашних животных. В некоторых вариантах осуществления жидкий и/или порошкообразный палатант также можно добавлять для улучшения вкуса корма для домашних животных, например, для сухого кормового продукта для домашних животных, и для усиления вкусовой привлекательности корма для домашних животных. Палатант может представлять собой гидролизат мяса (например, печень) и/или гидролизат растений и может необязательно включать другие палатанты, известные в данной области. В некоторых вариантах осуществления соединение можно смешивать или получать в жидком и/или порошкообразном палатанте до его добавления в кормовой продукт для домашних животных. Альтернативно или дополнительно, соединение можно смешивать или получать в жидком и/или порошкообразном палатанте после его добавления в кормовой продукт для домашних животных.

10. Неограничивающие примеры способов по настоящему раскрытию

В некоторых неограничивающих вариантах осуществления настоящее раскрытие относится к способу усиления вкусовой привлекательности кормового продукта для домашних животных, включающему смешивание кормового продукта для домашних животных с ароматизирующей композицией, содержащей соединение, описанное здесь, где соединение присутствует в концентрации от около 1 пМ до около 10 М или от около 1 пМ до около 1 М в смеси.

В некоторых неограничивающих вариантах осуществления настоящее раскрытие относится к способу усиления вкусовой привлекательности кормового продукта для домашних животных, включающему получение кормового продукта для домашних животных с ароматизирующей композиции, содержащей соединение, описанное здесь, где соединение присутствует в концентрации от около 1 пМ до около 10 М или от около 1 пМ до около 1 М в продукте.

В некоторых неограничивающих вариантах осуществления настоящее раскрытие относится к способу усиления вкуса кокуми кормового продукта для домашних животных, например, повышением активности кальцийчувствительного рецептора, включающему смешивание кормового продукта для домашних животных с ароматизирующей композицией, содержащей соединение, описанное здесь, где соединение присутствует в концентрации от 0,001 ppm до 1000 ppm в смеси.

В некоторых неограничивающих вариантах осуществления настоящее раскрытие относится к способу усиления вкусовой привлекательности кормового продукта для домашних животных, включающему смешивание кормового продукта для домашних животных с ароматизирующей композицией, содержащей соединение, описанное здесь, где ароматизирующая композиция присутствует в концентрации от около 0,001 ppm до 1000 ppm в смеси.

В некоторых неограничивающих вариантах осуществления настоящее раскрытие относится к способу усиления вкуса кокуми кормового продукта для домашних животных, например, повышением активности кальцийчувствительного рецептора, включающему смешивание кормового продукта для домашних животных с ароматизирующей композицией, содержащей соединение, описанное здесь, где ароматизирующая композиция присутствует в концентрации от около 0,0001% до около 10% вес./вес. или от около 0,001% до около 5% вес./вес. или от около 0,01% до около 1% вес./вес. в смеси.

В некоторых неограничивающих вариантах осуществления настоящее раскрытие относится к способу усиления вкусовой привлекательности кормового продукта для домашних животных, включающему смешивание кормового продукта для домашних животных с ароматизирующей композицией, содержащей соединение, описанное здесь, где ароматизирующая композиция присутствует в концентрации от около 0,0001% до около 10% вес./вес. или от около 0,001% до около 5% вес./вес. или от около 0,01% до около 1% вес./вес. в смеси.

ПРИМЕРЫ

Настоящий раскрываемый предмет изобретения будет лучше понятен со ссылкой на следующие примеры, которые приведены в качестве иллюстрации настоящего изобретения, а не в качестве ограничения.

ПРИМЕР 1. ИДЕНТИФИКАЦИЯ МОДУЛЯТОРОВ CASR С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ СКРИНИНГА IN SILICO

В настоящем примере описывается компьютерное моделирование кальцийчувствительного рецептора (CaSR) кошки и собаки для идентификации предполагаемых соединений модуляторов.

Вычислительные методы применяли для анализа трехмерной структуры CaSR с целью идентификации участков полипептидов, которые можно использовать для селективной модуляции рецептора. Структурную гомологическую модель Venus flytrap и богатого цистеином доменов CaSR формировали на основе кристаллических структур CaSR человека (Geng, et al., 2016, Zhang, et al., 2016). Модели трансмембранного домена CaSR формировали на основе структур класса C GPCR (смотри Binet et al., J. Biol. Chem, 282(16):12154-63 (2007), Wu et al., Science, 344(6179):58-64 (2014) и Dore et al., Nature 511:557-562 (2014), каждый из которых включен здесь посредством ссылки в полном объеме). Гомологические модели построили с использованием пакета программ Discovery Studio (DS) от Accelrys. В частности, использовали программу Modeller от DS (смотри Eswar et al., Current Protocols in Bioinformatics, Приложение 15:5.6.1-5.6.30 (2006), которое включено здесь посредством ссылки в его полном объеме). Скрининг «in silico» использовали для идентификации соединений, которые взаимодействуют со структурными доменами CaSR.

Группа С белков семейства GPCR включает белки T1R1, T1R2, T1R3, CaSR, GabaB и mGlu. Белки группы C имеют (1) большой внешний домен, называемый Flyprap Venus (VFT) домен, (2) 7 трансмембранный (7TM) домен и (3) богатый цистеином домен, который соединяет VFT и 7TM домены. Гомологическую модель VFT и богатого цистеином домена рецептора CaSR кошки формировали на основе последних кристаллических структур hCaSR (Geng, et al., 2016; Zhang, et al., 2016), которые в настоящее время доступны в банке данных Protein Data Bank (PDB, www.rcsb.org). Программу докинга BioDock от BioPredict использовали для стыковки соединений L-аспарагиновая кислота (фиг.3), L-лизин (фиг.4) и глутатион (фиг.5) в активном центре VFT домена CaSR in silico.

На фиг.3 показано связывание L-аспарагиновой кислоты с шарнирной областью VFT домена CaSR кошки в случае, если L-аспарагиновая кислота действует в качестве агониста. Цвиттерионный азот L-аспарагиновой кислоты может образовывать солевой мостик с Glu297, а также возможную водородную связь с Ala168. Цвиттерионный карбоксилат L-аспарагиновой кислоты образует водородные связи с Ser 170, Ser147 и карбонилом основной цепи Ala168. Карбоксилат боковой цепи L-аспарагиновой кислоты может образовывать солевой мостик взаимодействия с Arg66. На фиг.3C показаны также центры связывания для Sr⁺² и PO^-3, смоделированные после установленного связывания ионов в кристаллических структурах hCSAR, упомянутого здесь.

На фиг.4A-4C показано связывание L-лизина с шарнирной областью VTF домена CaSR кошки в случае, если L-лизин действует в качестве позитивного аллостерического модулятора (ПАМ). Цвиттерионная основная цепь может создавать пролонгированные взаимодействия с остатками петли, в частности Ser147 и Glu297, в то время как азот боковой цепи образует солевой мостик взаимодействия с Glu297.

На фиг.5А-5С показано связывание L-(+)-2-амино-3-фосфонопропионовой кислоты с шарнирной областью VTF домена CaSR кошки. Цвиттерионная карбоксильная группа может образовывать водородные связи с Ser147, в то время как цвиттерионный азот образует солевой мостик с Glu297 и водородную связь с карбонилом основной цепи Ala168. Фосфонопроприоновая кислотная группа боковой цепи может образовывать солевой мостик взаимодействия с Arg66 и дополнительную водородную связь с Ser272.

На фиг.6А-6С показано связывание глутатиона (γ-Glu-Cys-Gly) в качестве агониста с шарнирной областью VTF домена CaSR кошки. В шарнирной области цвиттерионный азот гамма-глутаминового остатка глутатиона образует солевой мостик с Glu297, в то время как цвиттерионный карбоксилат гамма-глутаминового остатка создает дополнительные водородные связи взаимодействия с Ser170. SH цистеинового остатка глутатиона может создавать дополнительные взаимодействия с Glu297. NH глицинового остатка может образовывать водородные связи с карбонилом основной цепи Glu297 или Trp299 или с тем и другим. Карбоксильная группа глицинового остатка глутатиона может образовывать солевой мостик взаимодействия с His413, а также дополнительные водородной связи, взаимодействуя с Thr412. Учитывая, что эти взаимодействия относятся как к верхнему сегменту, так и к сегменту, они могут стабилизировать закрытую форму VTF домена.

На фиг.7A-7C показано связывание «пептида для придания кокуми» (γ-Glu-Val-Gly) в качестве агониста VTF домена CaSR кошки. В шарнирной области цвиттерионный карбоксилат глутамата может образовывать водородные связи с остатками петли, в частности Ser147, Ser170 и Thr145. Цвиттерионный азот может образовывать водородные связи взаимодействия с Ser170 и карбонилом основной цепи Ala168, на основе солевого моста, возможного взаимодействия с Glu197. Пептидный азот пептидов из валина и глицина может каждый создавать взаимодействия с Glu297, в то время как цвиттерионная карбоксильная группа пептидного глицина может образовывать солевой мостик взаимодействия с Arg66 и Ser301.

На фиг.8A-8C показано связывание γ-глутамилдипептида H-γ-Glu-Tyr-OH в качестве агониста VTF домена CaSR кошки. В шарнирной области цвиттерионный карбоксилат пептидной группы глутамата может образовывать водородные связи с остатками петли, в частности Ser147 и Ser170. Цвиттерионный азот пептидной группы глутамата может образовывать водородные связи с Ser170 и с карбонилом основной цепи Ser169, а также внутренние водородные связи внутри пептида.

Пептидная группа тирозина может образовывать водородные связи взаимодействия за счет остатка Flytrap, в частности с Glu297, Thr145, и основной цепи Ser301 и Phe320.

На фиг.9А-9С показано связывание β-аспартилдипептида H-β-Asp-Leu-OH в качестве агониста VTF домена CaSR кошки. В шарнирной области цвиттерионный карбоксилат пептидной группы глутамата может образовывать водородные связи с остатками петли, в частности Ser147 и Ser170. Цвиттерионный азот пептидной группы глутамата может образовывать водородные связи с Ser170 и с карбонилом основной цепи Ser169, а также солевой мостик взаимодействия с Glu297. Карбоксилат пептидной группы лейцина может образовывать солевой мостик с Arg66.

Аналогично гомологическую модель 7TM домена CaSR кошки формировали на основе кристаллических структур 4OR2 и 4OO9 из PDB. 4OR2 представляет собой кристаллическую структуру трансмембранного домена mGluR1 из группы G GPCR, связанного с негативным аллостерическим модулятором (НАМ) (смотри Wu et al., Science, 344 (6179):58-64 (2014), которая включена здесь посредством ссылки в полном объеме). 4OO9 представляет собой кристаллическую структуру трансмембранного домена mGluR5 из группы G GPCR, связанного с НАМ (смотри Dore et al., Nature 511:557-562 (2014), которая включена здесь посредством ссылки в полном объеме). Программу докинга BioDock от BioPredict использовали для стыковки соединений N-(1-(4-хлорфенил)этил)-3-(4-изопропоксифенил)-3-фенилпропан-1-амин (фиг.10), N-(1-(4-хлорфенил)этил)-3-(4-метоксифенил)-4-метилпентан-1-амин (фиг. 11), 3-(фуран-2-ил)-4-фенил-N-(1-фенилэтил)бутан-1-амин (фиг. 12), 3-(2,2-диметилтетрагидро-2Н-пиран-4-ил)-3-фенил-N-(1-фенилэтил)пропан-1-амин (фиг.13) N-((2,3-дигидробензофуран-2-ил)метил)-1-(хинолин-2-ил)этанамин (фиг.14), 2,6-дихлор-4-(1-(((1-метил-2-(тиофен-2-ил)пиперидин-3-ил)метил)амино)этил)анилин (фиг.15), 1-(4-хлорфенил)-N-(2-(2,2-диметил-4-(п-толил)тетрагидро-2Н-пиран-4-ил)этил)этанамин (фиг. 16), метил-2-(3-цианофенил)-2-((4-фтор-2,3-дигидро-1Н-инден-1-ил)амино)ацетат (фиг.17), 2-(2-ацетил-1,2-дигидроизохинолин-1-ил)-N-(1-(3-бромфенил)этил)ацетамид (фиг.18), 1-(бензо[d]тиазол-2-ил)-1-(2,4-диметилфенил)этанол (фиг. 19) и 4-хлор-N-[(1S,2S)-2-[[(1R)-1-(1-нафталинил)этил]амино] (фиг.20) в активном центре 7TM домена CaSR in silico.

На фиг.10 показано связывание N-(1-(4-хлорфенил)этил)-3-(4-изопропоксифенил)-3-фенилпропан-1-амина в 7ТМ домене CaSR кошки. На фиг.10В показана позиция связывания в 7ТМ домене CaSR кошки. На фиг.10C представлено крупным планом взаимодействие между лигандом и 7ТМ доменом. Аналогично, на фиг.11 показано связывание N-(1-(4-хлорфенил)этил)-3-(4-метоксифенил)-4-метилпентан-1-амина, а на фиг.12 показано связывание 3-(фуран-2-ил)-4-фенил-N-(1-фенилэтил)бутан-1-амина в 7ТМ домене CaSR кошки. Эти соединения и другие γ-разветвленные ПАМы хорошо подходят 7ТМ домену CaSR кошки, охватывая обширные гидрофобные взаимодействия в активном центре. Для этих соединений присутствует солевой мостик с Glu837, а для других высокоактивных трансмембранных ПАМов наблюдается солевой мостик или водородная связь с Glu837. Стэкинг-взаимодействие кольца показано с Phe821 (справа), взаимодействие, общедоступное большинству других активных трансмембранных ПАМ. Дополнительный стэкинг кольца возможен для этих соединений с Phe775 (слева).

На фиг.13 показано связывание 3-(2,2-диметилтетрагидро-2Н-пиран-4-ил)-3-фенил-N-(1-фенилэтил)пропан-1-амина. На фиг.13В показана позиция связывания в 7ТМ домене, а на фиг.13С представлено крупным планом взаимодействие между лигандом и 7ТМ доменом. Солевой мостик с Glu837 рассматриваться как на фиг.10-12 в виде основного стэкинг-взаимодействия кольца с Phe821, так и возможного дополнительного стэкинг-взаимодействия кольца с Phe775.

На фиг.14 показано связывание N-((2,3-дигидробензофуран-2-ил)метил)-1-(хинолин-2-ил)этанамина. На фиг.14В показана позиция связывания в 7ТМ домене, а на фиг.14С представлено крупным планом взаимодействие между лигандом и 7ТМ доменом. Хотя класс соединений отличается от тех, которые указаны на фиг.10-13, аналогичные наблюдения относятся к типу связывания. Соединение хорошо заполняет активный центр, проявляя обширные гидрофобные взаимодействия по всему активному центру. Показан солевого мостика взаимодействия с Glu837, как стэкинг-взаимодействие кольца с Phe821 и возможное дополнительное стэкинг-взаимодействие кольца с Phe775.

На фиг.15 показано связывание 2,6-дихлор-4-(1-(((1-метил-2-(тиофен-2-ил)пиперидин-3-ил)метил)амино)этил)анилина. На фиг.15В показана позиция связывания в 7ТМ домене, а на фиг.15С представлено крупным планом взаимодействие между лигандом и 7ТМ доменом. Солевой мостик с Glu837 показан на фиг.10-14 совместно с азотистыми основаниями. Стэкинг кольца замещенного фенила может происходить с PHE821 или Phe688 в зависимости от небольших перемещений в активном центре.

На фиг.16 показано связывание 1-(4-хлорфенил)-N-(2-(2,2-диметил-4-(п-толил)тетрагидро-2Н-пиран-4-ил)этил)этанамина. На фиг.16В показана позиция связывания в 7ТМ домене, а на фиг.16С представлено крупным планом взаимодействие между лигандом и 7ТМ доменом. Солевой мостик с Glu837 показан на фиг.10-15 совместно с азотистыми основаниями. Возможен стэкинг кольца замещенного фенила с Phe688 и/или Phe821. Стэкинг кольца с Phe775 возможен при небольших перемещениях в активном центре. Тетрагидропиран добавляет дополнительные гидрофобные связи.

На фиг.17 показано связывание метил-2-(3-цианофенил)-2-((4-фтор-2,3-дигидро-1Н-инден-1-ил)амино)ацетата. На фиг.17В показана позиция связывания в 7ТМ домене, а на фиг.17С представлено крупным планом взаимодействие между лигандом и 7ТМ доменом. Солевой мостик с Glu837 показан на фиг.10-16 совместно с азотистыми основаниями. Представлен стэкинг кольца замещенного фенила с Phe821. Стэкинг кольца с Phe775 возможен при небольших перемещениях в активном центре. Сложный эфир указывает на гидрофобный карман выше Phe688.

На фиг.18 показано связывание 2-(2-ацетил-1,2-дигидроизохинолин-1-ил)-N-(1-(3-бромфенил)этил)ацетамида. На фиг.18В показана позиция связывания в 7ТМ домене, а на фиг.18С представлено крупным планом взаимодействие между лигандом и 7ТМ доменом. Водородная связь с Glu837 показана на фиг.17 с лигандом амидный азот. Представлен стэкинг кольца замещенного фенила с Phe821.

На фиг.19 показано связывание 1-(бензо[d]тиазол-2-ил)-1-(2,4-диметилфенил)этанола. На фиг.19B показана позиция связывания в 7TM домене, а на фиг.15C представлено крупным планом взаимодействие между лигандом и 7TM доменом. Водородная связь с Glu837 показана на фиг.19C с лигандом гидроксильная группа. Возможен стэкинг кольца замещенного фенила с Phe821 и/или Phe688. Возможен дополнительный стэкинг кольца бензо[d]тиазола с Phe688.

На фиг.20 показано связывание 4-хлор-N-[(1S,2S)-2-[[(1R)-1-(1-нафталинил)этил]амино] (Calhex 231) в качестве антагониста. На фиг.20В показана позиция связывания в 7ТМ домене, а на фиг.20C представлено крупным планом взаимодействие между лигандом и 7ТМ доменом. Солевой мостик с Glu837 показан на фиг.10-19 совместно с азотистыми основаниями. Нафталин распложен так, чтобы обеспечить возможное стэкинг-взаимодействие кольца с ароматическими остатками, как показано на фиг.20С. Остальная часть соединения создает обширные гидрофобные взаимодействия по всему активному центру с возможными стэкинг-взаимодействиями кольца с Phe775.

Ссылки:

1. Binet et al., «Common Structural Requirements for Heptahelical Domain Function in Class A and Class C G Protein-coupled Receptors.» (2007) J. Biol. Chem, 282(16):12154-63.

2. Wu et. al., «Structure of a Class C GPCR Metabotropic Glutamate Receptor 1 Bound to an Allosteric Modulator.» (2014) Science, 344(6179):58-64.

3. Dore et al., «Structure of class C GPCR metabotropic glutamate receptor 5 transmembrane domain.» (2014) Nature 511:557-562.

4. Eswar et al., Current Protocols in Bioinformatics, Supplement 15:5.6.1-5.6.30 (2006).

ПРИМЕР 2. СОЕДИНЕНИЯ, АКТИВИРУЮЩИЕ КАЛЬЦИЙЧУВСТВИТЕЛЬНЫЙ РЕЦЕПТОР IN VITRO

В настоящем примере описывается активация CaSR кошки соединениями in vitro.

Соединения, которые могут выполнять функции агонистов (АГО), позитивных аллостерических модуляторов (ПАМов) и/или антагонистов CaSR, идентифицировали по функциональной характеристике in vitro с использованием протокола двойного введения.

Методы: клетки HEK293TRex/nat-Clytin, которые индуцибельно экспрессируют трансгенную конструкцию CaSR кошки (f:CaSR), использовали для скрининга 119 испытуемых соединений для идентификации соединений, модулирующих активность f:CaSR. В качестве контроля использовали клетки, которые не экспрессируют CaSR (то есть неиндуцированные трансгенные клетки или макетные контрольные клетки, трансфицированные пустым плазмидным вектором). Клетки HEK293 высевали с плотностью 10000 клеток/лунку в 384 МТР. Через 24 часа после высева клеток клетки нагружали 10 мкл коэлентеразина в аналитическом буфере (20 мкл/лунку) в течение 4 ч при комнатной температуре. Каждое соединение испытывали в предварительном профилировании на его способность активировать CaSR в диапазоне концентраций 100 мМ (1 М×10^-1) до 0,01 мкМ (1 М×10^-8). Способность каждого соединения активировать f:CaSR, экспрессируемый клетками HEK293, определяли измерением люминесценции с использованием системы скрининга FLIPR® Tetra после контактирования клеток с соединением по типу агониста и типу ПАМ в соответствии со следующим протоколом:

тип АГО/ПАМ (двойное введение): 10 мкл/лунку испытуемого соединения (3× концентрация) и контрольных образцов вводили и измеряли люминесценцию (то есть активность АГО). Через 5 минут вводили CaCl₂ в концентрации, соответствующей EC20 агониста (3× концентрированный) (15 мкл/лунка), где измеряли люминесценцию (то есть активность ПАМ).

Контрольные образцы для испытания агонистов представляли собой 15 мМ CaCl₂ (EC100, положительный контроль) и 0 мМ CaCl₂ (отрицательный контроль).

Контрольные образцы для испытания ПАМ представляли собой 0,9 мМ CaCl₂ (EC20)+усилитель Калиндол (положительный контроль), 0,9 мМ CaCl₂ (EC20, отрицательный контроль) и усилитель Калиндол (отрицательный контроль).

Контрольные клеточные линии, используемые для предварительного профилирования, представляли собой неиндуцированные трансгенные клетки НЕК.

Соединения, которые модулировали активность CaSR в качестве агониста, антагониста или PAM в испытании предварительным профилированием, дополнительно испытывали для определения EC50 или IC50. В этих исследованиях использованные контрольные клеточные линии представляли собой макетные клеточные линии HEK, которые не были трансфицированы трансгеном CaSR. Карбахол, агонист эндогенно экспрессированного мускаринового рецептора, использовали для определения уровня эталонной активности клеток HEK.

Анализ данных проводили с использованием программного обеспечения Analyzer Module of Genedata Screener.

Кинетическое значение отклика (KRV): [Макс. (2s:90s)] - [Исходный уровень]]. Макс. RLU кинетического следа после введения минус медиана точек до введения.

KRV, нормализованный контролем стимулятора (то есть положительные контроли) минус нейтральный контроль (то есть активность неиндуцированных или макетных контрольных клеток), с применением следующей формулы означает активность [%] испытуемых соединений:

где:

x представляет собой расчетное значение сигнала лунки (KRV).

<> обозначают медиану расчетных значений сигналов (KRV) для эталонных лунок на планшете.

Нормализация располагает значения активности соединений на эквивалентной шкале и делает их сопоставимыми между планшетами. Следовательно, значения активности соединений приводятся в соответствие (на основе двух эталонов) к единому диапазону (двухточечная нормализация).

Результаты: результаты предварительного профилирования получали как по типу агониста, так и по типу ПАМ (данные не представлены). На основе предварительного профилирования 54 соединения отобрали для дальнейшего изучения с целью определения EC50 или IC50. Кривые доза-ответ для активации/ингибирования CaSR лигандами по типу агониста и по типу ПАМ для анализа EC50/IC50 показаны на фиг.21.

Как представлено на фиг. 21, 23 испытуемых лиганда активировали CaSR в качестве агонистов, 27 активировали CaSR в качестве ПАМов и 2 активировали CaSR в качестве антагонистов. Для каждого лиганда определяли значение EC50 или IC50. Термин полумаксимальная эффективная концентрация (EC50) (или полумаксимальная ингибирующая концентрация, IC50) относится к концентрации соединения, которая вызывает ответ, равный среднему между базовой линией и максимумом после определенного времени воздействия. В таблице 3 приведены химическая структура и результаты для каждого из 52 соединений, отобранных для дальнейшего изучения (анализ ПАМ L-аргинина и L-лизина, оставшихся 2 соединения из 54 активных соединений в результате предварительного профилирования, показан в примере 3).

Таблица 3

Соединения активные в отношении CaSR

ПРИМЕР 3. АМИНОКИСЛОТЫ, АКТИВИРУЮЩИЕ КАЛЬЦИЙЧУВСТВИТЕЛЬНЫЙ РЕЦЕПТОР IN VITRO

В настоящем примере описывается активация CaSR кошки аминокислотами in vitro.

Аминокислоты, которые могут выполнять функции ПАМов CaSR, идентифицировали по функциональной характеристике in vitro с использованием протокола однократного введения. Оценивали эффективность соединения в активации CaSR.

Методы: клетки HEK293TRex/nat-Clytin, которые индуцибельно экспрессируют трансгенную конструкцию CaSR кошки (f:CaSR), использовали для скрининга 30 аминокислот для идентификации соединений, модулирующих активность f:CaSR. В качестве контроля использовали клетки, которые не экспрессируют CaSR (то есть, контрольные клетки, трансфецированные пустым плазмидным вектором). Клетки HEK293 высевали с плотностью 10000 клеток/лунку в 384 МТР. Через 24 часа после высева клеток клетки нагружали 10 мкл коэлентеразина в аналитическом буфере (20 мкл/лунку) в течение 4 ч при комнатной температуре. Кривые доза-ответ устанавливали для кальция в присутствии каждой из 30 аминокислот при концентрации 5 мМ или 10 мМ по типу ПАМ с целью определения изменения EC50 для кальция. В качестве контроля использовали только CaCl₂.

Тип ПАМ (однократное введение): Испытуемое соединение (6× концентрация) и CaCl₂ (6× концентрированный) непосредственно смешивали 1:1 в планшете с соединением для получения 3× концентрированного рабочего раствора каждого испытуемого соединения и контроля. Вводили 10 мкл/лунку рабочей смеси испытуемого соединения или контроля и измеряли люминесценцию (то есть активность ПАМ).

Результаты: Получали результаты испытания ПАМ для 30 аминокислот (данные не представлены). 4 аминокислоты идентифицировали в качестве ПАМ: L-аргинин, L-фенилаланин, L-триптофан и L-лизин вследствие значительного снижения значения EC50, полученного для кальция. На фиг.19A-19B показаны кривые доза-ответ для активации CaSR in vitro для четырех аминокислот. В таблице 4 приведены химические структуры и результаты для 4 аминокислот, которые обладали активностью ПАМ, при использовании протокола однократного введения.

Таблица 4

ПАМ-активные аминокислоты в отношении CaSR

ПРИМЕР 4. ПРИМЕРЫ АРОМАТИЗИРУЮЩИХ КОМПОЗИЦИЙ С ПО МЕНЬШЕЙ МЕРЕ ТРЕМЯ АМИНОКИСЛОТАМИ

Настоящий пример описывает ароматизирующие композиции, содержащие первичную аминокислоту, которая активирует рецептор умами (T1R1/T1R3) кошки, вторичную аминокислоту, которая активирует кальцийчувствительный рецептор кошки, и третичную аминокислоту, которая активирует рецептор вкуса кошки, отличный от умами и кальцийчувствительного рецепторов.

Ароматизирующая композиция содержит первичную аминокислоту, которая активирует рецептор умами кошки и которую выбирают из первой группы аминокислот в таблице 4. Ароматизирующая композиция содержит вторичную аминокислоту, которая активирует кальцийчувствительный рецептор кошки и которую выбирают из второй группы аминокислот в таблице 4. Ароматизирующая композиция дополнительно содержит третичную аминокислоту, которую выбирают из третьей группы аминокислот в таблице 5. Аминокислоты третьей группы являются активирующими вкус для кошек, но не активируют рецептор умами или кальцийчувствительный рецептор кошки.

Таблица 5

Аминокислоты

Первая группа аминокислот	Вторая группа аминокислот	Третья группа аминокислот
L-триптофан	L-глутаминовая кислота (или моноглутамат натрия [MSG])	L-треонин
L-фенилаланин	L-аспарагиновая кислота	L-изолейцин
L-гистидин	L-аргинин	L-пролин
Глицин	L-лизин	Гидрокси-L-пролин
L-цистеин	L-фенилаланин	L-цистин
L-аланин	L-триптофан	L-глутамин
L-тирозин	Se-(метил)селеноцистеин	L-валин
L-серин		L-орнитин
L-метионин		Таурин
L-лейцин
L-аспарагин

Считается, что комбинация аминокислот от каждой из этих групп может иметь аддитивное или синергическое взаимодействие. Такие комбинации можно использовать для разработки вкусового профиля для кошек.

Кроме того, подобные методы можно применять для разработки вкусовых профилей для собак и/или людей. Было обнаружено, что соединения, которые активируют кальцийчувствительный рецептор человека, не обязательно активируют кальцийчувствительный рецептор кошки. В таблице 6 приведен перечень таких соединений.

Таблица 6

Примеры различий в соединениях, активирующих рецепторы вкуса у кошек и людей

Соединение	Агонист CaSR человека	Агонист CaSR кошки	Примечания
L-гистидин	Да	Нет	Активирующий вкус умами у кошек
L-аланин	Да	Нет	Активирующий вкус умами у кошек
Путресцин	Да	Нет

Как отмечено в таблице 6, некоторые соединения, которые не активируют кальцийчувствительный рецептор кошки, являются активирующими для другого рецептора вкуса. Например, L-триптофан, L-фенилаланин, L-гистидин и L-аланин не активируют кальцийчувствительный рецептор кошки, но являются активирующими вкус умами у кошек. Используя такую информацию, можно разработать различные вкусовые профили в зависимости от того, какие рецепторы вкуса необходимо активировать, например, кальцийчувствительные рецепторы человека по сравнению с кальцийчувствительными рецепторами кошки.

Стоит отметить, что сравнение кристаллических структур CaSR человека и CaSR кошки показало очень небольшое различие в активном центре (ни один из остатков не отличается идентичностью у человека и кошки в пределах 4 А аминокислот, которые мы моделировали). Поэтому примечательно, что CaSR кошки имеет определенные отличия в его предпочтении аминокислот в качестве агонистов и/или ПАМов, подчеркивая тот факт, что представленные здесь результаты не являются тривиальными расширениями предшествующего уровня в отношении CaSR человека.

Несмотря на то, настоящий раскрываемый предмет изобретения и его преимущества были описаны подробно, следует понимать, что различные изменения, замены и варианты могут быть сделаны здесь без отступления от сущности и объема изобретения, определяемого прилагаемой формулой изобретения. Кроме того, объем настоящей заявки не предназначен для ограничения конкретными вариантами осуществления способа, устройств, производства, композиции веществ, средств, методов и стадий, приведенных в описании. Как специалисту в данной области легко понятно из раскрытия настоящего раскрываемого предмета изобретения, способы, устройства, производство, композиции веществ, средства, методы или стадии, существующие в настоящее время или которые будут разработаны позднее, выполняющие по существу ту же самую функцию или позволяющие получать по существу такой же результат, как и соответствующие варианты осуществления, описанные здесь, можно использовать в соответствии с настоящим раскрываемым предметом изобретения. Соответственно, прилагаемая формула изобретения предполагает включение в ее объем таких способов, устройств, производства, композиций веществ, средств, методов или стадий.

В данной заявке приведены патенты, заявки на патенты, публикации описаний продуктов и протоколы, раскрытие которых включено в настоящее описание посредством ссылки во всей их полноте для всех целей.

1. Ароматизирующая композиция для модуляции вкуса кокуми в кормовых продуктах для домашних животных, содержащая соединение, выбранное из группы, состоящей из следующих формул:

Tm-1
Tm-2
Tm-3
Tm-4
Tm-5
Tm-6
Tm-7
Tm-8
Tm-9
Tm-10
Tm-11
Tm-12

где G₁-G₄ представляют собой независимо C(R_4aR_4b) или N(R₄);

W представляют собой OR₄ или SR₄;

X представляет собой O или S;

X₁-X₁₀ представляют собой независимо C или N;

X₁₁ представляет собой C, O, N или S;

X₁₂ представляет собой O, NH или S;

X₁₃ представляет собой CR_4aR_4b, O, N(R₁₂) или S;

Z представляет собой H, O, N, S или C;

n₁, n₂ и n₃ находятся независимо в диапазоне от 0 до 4, при условии, что если n₁ или n₂ равно 0, то это указывает на химическую связь;

n₄ находятся в диапазоне от 0 до 2;

n₅ находятся в диапазоне от 1 до 3;

R₁, R_1a, R_1b и R_1c выбирают независимо из группы, состоящей из H, CH₃, CF₃, CBr₃, разветвленного или неразветвленного низшего (C₁-C₆)алкила, (C₃-C₆)циклоалкила, COOR₁₃, C(O)NR₁₆R₁₇ и SO₂NR_4aR_4b; и

R₂ выбирают из группы, состоящей из CH₃, CF₃, CBR₃, NO₂, низшего (C₁-C₆)алкила, (C₃-C₆)циклоалкила, арила и гетероарила;

где кольца A и B и любые арильные кольца необязательно могут быть независимо замещены функциональными группами R₃ и/или R₇, где R₃ и R₇ выбирают независимо из группы, состоящей из H, OH, разветвленного или неразветвленного низшего (C₁-C₆)алкила, O(CH₂)_n3арила, O(CH₂)_n3гетероарила, NR₁₀R₁₁, N(R₁₂)OH, арила, гетероарила, метила, OH, SH, OCH₃, SCH₃, COOH, COOR₁₃, S(O)n₄R₁₄, C(O)R₁₅, C(O)NR₁₆R₁₇, CN, NR₁₈R₁₉, NR₂₀C(O)R₂₁, арила, метилендиокси, (C₁-C₅)алкила, CH₂SSCH₂CH(COOH)(NH₂), галогена (включая F, Cl, Br или I), NO₂, NHC(=NH)NH₂, CHO, CF₃, P(=X₁)(OR₁)₂, OP(=X₁)(OR₁)₂, тетразола, C(O)N(R₁₂)OH, CF₃, OR₄, SR₄, N=C=S, N=C=O, C(R₄)=C(R_4a)R_4b, (CH₂)_n1CH=CH₂, NHC(=X₁₂)NH₂, NHC(=X₁₂)NHR₄, SO₂NR_4aR_4b и C-CR₄;

R₄, R_4a и R_4b выбирают независимо из группы, состоящей из H, CH₃, низшего (C₁-C₆)алкила, (C₁-C₆)циклоалкила, фенила, арила и гетероарила;

R₅, R₆, R₈ и R₉ выбирают независимо из группы, состоящей из H, CH₃, разветвленного или неразветвленного низшего (C₁-C₁₀)алкила, арила, гетероарила, фенила, пиридила, фурана, пирана, тиофена, (CH₂)_nарила, (CH₂)_nтетраарила, тетрагидропирана, где n равно 0-4, и если n равно 0, то это указывает на химическую связь;

R₁₀ и R₁₁ выбирают независимо из группы, состоящей из H, CH₃, низшего (C₁-C₆)алкила, фенила;

R₁₂ представляет собой H или CH₃;

R₁₃ выбирают из группы, состоящей из Н, СН₃, низшего (С₁-С₆)алкила и СН₂арила;

R₁₄ выбирают из группы, состоящей из H, CH₃, низшего (C₁-C₆)алкила и OH;

R₁₅ выбирают из группы, состоящей из H, CH₃, CF₃, низшего (C₁-C₆)алкила и фенила;

R₁₆, R₁₇, R₁₈, R₁₉, R₂₀ и R₂₁ каждый независимо выбирают из группы, состоящей из H, CH₃, низшего алкила, фенила, CH₂фенила и (C₁-C₆)циклоалкила;

R₂₂ выбирают из группы, состоящей из H, C(X)R₄, и если R₂₂ отсутствует, то кольцо A является ароматическим;

J выбирают из группы, состоящей из арила, фенила, пиридила, фурана, тиофена, пирола, бензотиофена, бензотиазола, бензимидозола, бензо[d]оксазола, бензофурана, индола, хинолина, изохинолина, хиназолина, хиноксалина, циннолина, тиазоло[4,5-с]пиридина, тиазоло[5,4-d]пиримидина, оксазоло[5,4-d]пиримидина и оксазоло[5,4-b]пиридина;

Aryl₁ (Арил₁) выбирают из группы, состоящей из фенила, фурана, тиофена, пирола, бензофурана, бензотиофена, индола, хинолина, изохинолина, гетероарила и арила;

Q выбирают из группы, состоящей из арила, гетероарила, (C₁-C₇)циклоалкила и инданила.

2. Кормовой продукт, содержащий ароматизирующую композицию по п.1, где ароматизирующая композиция присутствует в количестве, эффективном для усиления вкуса кокуми в кормовом продукте, которое определяется дегустационной комиссией.

3. Кормовой продукт, содержащий ароматизирующую композицию по п.1, где ароматизирующая композиция присутствует в количестве, эффективном для усиления вкусовой привлекательности кормового продукта, которое определяется дегустационной комиссией.

4. Кормовой продукт по п.2 или 3, где ароматизирующая композиция присутствует в концентрации от 1 пМ до 10 М, от 1 пМ до 1 М, от 0,0001 до 10% вес./вес., от 0,001 до 5% вес./вес. или от 0,01 до 1% вес./вес. в кормовом продукте.

5. Кормовой продукт по одному из пп.2-4, где кормовой продукт представляет собой кормовой продукт для домашних животных.

6. Кормовой продукт по п.5, где кормовой продукт для домашних животных представляет собой кормовой продукт для домашних кошек или кормовой продукт для домашних собак.

7. Кормовой продукт по п.4, где кормовой продукт для домашних животных представляет собой влажный кормовой продукт для домашних животных.

8. Кормовой продукт по п.4, где кормовой продукт для домашних животных представляет собой сухой кормовой продукт для домашних животных.

9. Способ усиления интенсивности вкуса кокуми в кормовом продукте, включающий смешивание кормового продукта с ароматизирующей композицией по п.1, где ароматизирующая композиция присутствует в количестве, эффективном для усиления вкуса кокуми в кормовом продукте, которое определяется дегустационной комиссией.

10. Способ по п.9, где ароматизирующая композиция присутствует в концентрации от 1 пМ до 10 М, от 1 пМ до 1 М, от 0,0001 до 10% вес./вес., от 0,001 до 5% вес./вес. или от 0,01 до 1% вес./вес. в смеси.

11. Способ модуляции активности кальцийчувствительного рецептора (CaSR), включающий контактирование CaSR с ароматизирующей композицией по п.1.