Штаммм бактерий serratia plymuthica вкпм в-12668, выделенный из биоматериала палеонтологического образца (детеныша ископаемого шерстистого носорога), - деструктор нефти и нефтепродуктов

Изобретение относится к области микробиологии. Штамм бактерий Serratia plymuthica БМНс-Л, обладающий способностью деградировать нефть и нефтепродукты, депонирован в ВКПМ под регистрационным номером В-12668. Штамм бактерий Serratia plymuthica ВКПМ В-12668 может быть использован для очистки объектов окружающей среды от загрязнений нефтью и нефтепродуктами. Изобретение позволяет повысить степень очистки объектов окружающей среды от нефти и нефтепродуктов. 1 ил., 2 табл., 4 пр.

 

Изобретение относится к области микробиологии и представляет собой новый штамм бактерий Serratia plymuthica ВКПМ В-12668, выделенный из биоматериала палеонтологического образца (детеныша шерстистого носорога), обладающий способностью деструктировать нефть и нефтепродукты (дизельное топливо, масло моторное, газовый конденсат, масло гидравлическое, керосин авиационный, бензин).

Изобретение позволяет повысить эффективность очистки субстратов от нефти и нефтепродуктов (дизельное топливо, масло моторное, газовый конденсат, масло гидравлическое, керосин авиационный, бензин), в широком диапазоне температур от +2 до +37±1°С.

Уровень техники.

Известен штамм бактерий Serratia species - продуцент липазы, используемого для катализа гидролиза триацилглицеридов с образованием жирных кислот и глицерина (1. Патент RU №2308485. Штамм бактерий Serratia species - продуцент липазы. C1, C12N 9/20, C12N 1/20. Заявка: 2006107803/13. Заявлено: 13.03.2006. Опубликовано: 20.10.2007. Авторы: Логинов О.Н., Паканещикова Н.В., Силищев Н.Н., Галимзянова Н.Ф., Бойко Т.Ф. Патентообладатель: ЗАО НПП «Биомедхим» (RU)), который может быть использован в пищевой промышленности, бытовой химии, косметики.

Недостатком известного штамма является то, что он не предусмотрен для применения в качестве деструктора-нефти и нефтепродуктов.

Известен штамм бактерий Serratia species, обладающий противовирусной активностью (2. Патент RU №2650762. Штамм бактерий Serratia species, обладающий противовирусной активностью. C1, C12N 1/20, C12N 9/14, C12N 9/22, А61Р 31/16. Заявка: 2017110331. Заявлено: 28.03.2017. Опубликовано: 17.04.2018. Авторы: Пучкова Л.А., Андреева И.С., Мазуркова Н.А. Патентообладатель: ФБУН ГНЦ ВБ «Вектор» Роспотребнадзора (RU)).

Недостатком известного штамма является то, что он также не предусмотрен для применения в качестве деструктора-нефти и нефтепродуктов.

Известен штамм бактерий Serratia marcescens m-10 - продуцент внеклеточной неспецифической эндонуклеазы, обладающей выраженным противовирусным действием (3. Патент RU №2604183. Штамм бактерий Serratia marcescens m-10 - продуцент внеклеточной неспецифической эндонуклеазы, обладающей выраженным противовирусным действием. С2, C12N 1/20, C12N 9/16, C12R 1/01. Заявка: 2015107292/10. Заявлено: 03.03.2015. Опубликовано: 10.12.2016. Бюл. №27. Авторы: Келин Л.В. Патентообладатель: Общество с ограниченной ответственностью «Северный стиль» (RU)).

Недостатком известного штамма является то, что он не предназначен для очистки субстратов от нефти и нефтепродуктов.

Известен штамм Serratia plymuthica, обладающий противовирусной активностью в отнош9ении вирусов гриппа а (его варианты) (4. Охранный документ №0002551316. Дата охранного документа 20.05.2015. Авторы: ФГБУН ГНЦ ВБ «Вектор», Афонина B.C., Пучкова Л.А., Макаревич Е.В., Мазуркова Н.А., Соловьянова Н.А., Селиванова М.А., Андреева И.С. Патентообладатели: Соловьянова Н.А., Макаревич Е.В., Мазуркова Н.А., Селиванова М.А., Андреева И.С., Афонина B.C., Пучкова Л.А., ФГБУН ГНЦ ВБ «Вектор» (RU)).

Однако у известного штамма Serratia plymuthica не выявлена способность к утилизации нефти и нефтепродуктов, что исключает возможность его применения для очистки объектов окружающей среды (почвы и воды) от загрязнений нефтью и нефтепродуктами.

Известны штаммы: Pseudomonas putida 36 (5. Авторское свидетельство СССР N1076446, Штамм Pseudomonas putida 36, используемый для очистки воды и почвы от нефти и нефтепродуктов. A1, C02F 3/34, В09С 1/10, C12N 1/20 C02F 3/34, C02F 101:32, C12N 1/20, C12R 1:40. Заявка: 3474745, 22.07.1982. Опубликовано: 28.02.1984. Заявитель: Западно-Сибирский научно-исследовательский геологоразведочный нефтяной институт. Авторы: Дядечко В.Н., Толстокорова Л.Е., Морозова Т.Н.); Acinetronacter sp.НВ-1 (6. Патент RU N2077579. Штамм бактерий Acinetobacter species, используемый для очистки воды и почвы от нефти и нефтепродуктов. C1, C12N 1/20, C02F 3/34, В09С 1/10, C12R 1: 01, C12N 1/20, В09С 101:00. Заявка: 94043331/13, 06.12.1994. Опубликовано: 20.04.1997. Заявитель: Государственный научно-исследовательский институт прикладной микробиологии. Авторы: Жиркова Н.А., Кобел ев B.C., Холоденко В.П. Патентообладатель: Государственный научно-исследовательский институт прикладной микробиологии); Pseudomonas alcaligenes Е7 (7. Патент RU N2134723. Штамм бактерий Pseudomonas alcaligenes Е7, используемый для очистки воды и почвы от нефти и нефтепродуктов. C1, C12N 1/20, C02F 3/34, В09С 1/10, C12N 1/20, C12R 1:38. Заявка: 98105707/13, 25.03.1998. Опубликовано: 20.08.1999. Заявитель: Государственный научный центр прикладной микробилогии. Авторы: Ермоленко З.М., Холоденко В.П., Чугунов В.А. Патентообладатель: Государственный научный центр прикладной микробилогии).

Недостатком вышеперечисленных известных штаммов является то, что они утилизируют нефть при сравнительно высоких температурах и не могут применяться для очистки субстратов от нефтезагрязнений при пониженной положительной температуре (+2°С), что не перспективно для применения штамма в природно-климатических условиях Крайнего Севера.

Известен консорциум нефтеокисляющих микроорганизмов в составе Pseudomonas putida ПИ Ко-1, Pseudomonas fluorescens ПИ-896, Micrococcus sp. ПИ Ку-1, Burkholderia caryophylli Jap-3, Serratia odorifera Jap-1 при весовом соотношении 3-12 мас. % каждого микроорганизма, при этом совместно с суспензией биопрепарата в загрязненную среду вводят ризоторфин в количестве 30-120 г/м3 (8. Патент RU 2191643. Способ очистки почв от загрязнений нефтью и нефтепродуктами. C1, В09С 1/10, C12N 1/20, C12N 1/20, C12R 1:01. Заявка: 2001119562/13, 09.07.2001. Опубликовано: 27.10.2002. Заявитель: Закрытое акционерное общество "Полиинформ". Авторы: Саксон В.М., Кузнецов С.А., Бойкова И.В., Новикова И.И. Патентообладатель: Закрытое акционерное общество "Полиинформ").

Недостатком известного консорциума является то, что при приготовлении рабочей суспензии микроорганизмов температура поддерживается на уровне +18+22°С, т.е. микроорганизмы, входящие в состав консорциума, не способны к деградации нефтепродуктов при пониженной положительной температуре (+2°С), что также исключает их использование для очистки мерзлотных почв от нефтезагрязнений в природно-климатических условиях Крайнего Севера.

Известен штамм бактерий «Bacillus subtilis Колыма 7/2» (9. Патент RU 2446900. Способ очистки мерзлотных почв от нефти спорообразующими бактериями Bacillus subtilis. С2. В09С 1/10 (2006.01). Заявка: 2010129158/13, 13.07.2010. Опубликовано: 10.04.2012. Авторы: Неустроев М.П., Тарабукина Н.П., Неустроев М.М., Сазонов Н.Н., Парникова С.И., Степанова A.M. Патентообладатель: Государственное научное учреждение Якутский научно-исследовательский институт сельского хозяйства Россельхозакадемии), обладающий способностью снижать концентрацию нефти до 0,48%, то есть уровень нефти от 135143 мг/кг снижается до 645 мг/кг в течение 3 месяцев летнего периода.

Однако штамм осуществляет деградацию только нефти и не способен утилизировать нефтепродукты (дизельное топливо, масло моторное, газовый конденсат, масло гидравлическое, керосин авиационный, бензин), в том числе в условиях пониженной положительной температуры (+2°С), что являлось бы перспективным способом для применения в природно-климатических условиях Крайнего Севера.

Известен штамм бактерий Serratia marcescens Н₃К, используемый для очистки сточных вод от нефти и нефтепродуктов (10. Патент KZ №1732. Штамм бактерий Serratia marcescens Н₃К, используемый для очистки сточных вод от нефти и нефтепродуктов. U, C12N 1/20, C02F 3/34, В09С 1/10. Заявка: 2015/0326.2. Заявлено: 05.10.2015. Опубликовано: 30.09.2016. Бюл. №12. Авторы: Раманкулов Е.М., Молдагулова Н.Б., Хасенова Э.Ж., Махатова А.С., Шевцов А.Б. Патентообладатель: Республиканское государственное предприятие на праве хозяйственного ведения «Национальный центр биотехнологии» Комитета науки Министерства образования и науки Республики Казахстан (KZ)).

Недостатком известного штамма Serratia marcescens Н₃К является то, что он не способен к деградации нефти и нефтепродуктов при температуре +2°С, что исключает его возможность применения в условиях Крайнего Севера.

К настоящему времени не известно ни одного штамма микроорганизмов, выделенных из палентологических находок доисторических животных, которые используются в качестве деструкторов нефти и нефтепродуктов, в том числе, ни один из известных выше перечисленных штаммов не выделен из палеонтологических находок доисторических животных.

В качестве ближайшего аналога служит штамм бактерий Serratia plymuthica VKM B-2819D - деструктор нефти и нефтепродуктов (11. Патент RU 2560272. Штамм бактерий Serratia plymuthica - деструктор нефти и нефтепродуктов. МПК C1, C12N 1/20, C02F 3/34, В09С 1/10, C12R 1/01. Заявка: 2014138294/10. Заявлено: 22.04.2014. Опубликовано: 20.08.2015. Автор: Ерофеевская Л.А. Патентообладатель: Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт проблем нефти и газа Сибирского отделения Российской академии наук (RU)).

Недостатком известного решения является то, что опыты по испытанию штамма бактерий Serratia plymuthica VKM B-2819D выполнены только при температуре +4, +20, +30°С и не известна способность штамма к деструкции нефти и нефтепродуктов при пониженной положительной температуре +2°С и при более высокой температуре (+37°С), что сделало бы известный штамм более перспективным для применения в различных природно-климатических условиях, в том числе в условиях Крайнего Севера, кроме того, не известна способность штамма бактерий Serratia plymuthica VKM B-2819D к деградации таких нефтепродуктов, как керосин авиационный и бензин.

Задачей изобретения является расширение номенклатуры штаммов, обладающих способностью деструктировать как нефть, так и нефтепродукты (дизельное топливо, масло моторное, газовый конденсат, масло гидравлическое, керосин авиационный, бензин), в широком диапазоне температур (+2…+37°С), в относительно короткие сроки (10-60 суток), что будет перспективным для применения штамма в различных природно-климатических условиях, в том числе в условиях Крайнего Севера при восстановлении техногенно-нарушенных экосистем криолитозоны.

Поставленная задача решена тем, что получен штамм бактерий Serratia plymuthica ВКПМ В-12668 - деструктор нефти и нефтепродуктов, обладающий утилизирующей способностью по отношению к нефти и нефтепродуктам (дизельное топливо, масло моторное, газовый конденсат, масло гидравлическое, керосин авиационный, бензин), перспективный для очистки объектов окружающей среды от загрязнений нефтью и нефтепродуктами (дизельное топливо, масло моторное, газовый конденсат, масло гидравлическое, керосин авиационный, бензин), в широком диапазоне температур (от +2 до +37°С).

Происхождение штамма.

Штамм бактерий Serratia plymuthica ВКПМ В-12668 (авторский номер БМНс-Л) выделен методом целенаправленных исследований из биоматериала замороженного доисторического детеныша шерстистого носорога (Coelodonta antiquitatis Blumenbach, 1799) (образец голова верхняя челюсть до 7 см), найденного осенью 2014 г. охотниками на берегу реки Семюэлях в Абыйском районе Республики Саха (Якутия).

Отбор проб проведен 03.04.2015 г. в Академии наук Республики Саха (Якутия).

Замороженная мумия детеныша ископаемого шерстистого носорога была обнаружена в оттаявшем береговом обнажении безымянного притока р. Семюэлях в окрестностях пос.Белая Гора, где вскрывались льдистые отложения верхнего плейстоцена. Судя по размерам тела (172 см от ноздрей до основания хвоста) и состоянию зубной системы, детенышу-сосунку было от одного до полутора лет.

Радиоуглеродная датировка костей животного показала его возраст в 42 тыс. лет назад, а датировка образца кожи - 34,7 тыс. лет назад (12. Protopopov A., Potapova О., Plotnikov V., Maschenko Е., Boeskorov G., Klimovskii A., Banderov A., Ivanov S., Kolesov S., Pavlov I. Abstrs 75th Annual SVP Meeting. October 14-17th, 2015, Dallas (TX), 2015. P. 199).

Полученный штамм идентифицирован с помощью анализа генов, кодирующих 16S РНК и депонирован в Национальном Биоресурсном Центре Всероссийской Коллекции Промышленных Микроорганизмов (ВКПМ) Федерального государственного бюджетного учреждения «ГосНИИгенетика» Минобрнауки России под регистрационным номером ВКПМ: В-12668.

Результат исследований тушки шерстистого носорога по экспертизе №373 от 09.04.2015 г. на антитела сибирской язвы отрицательный. Место проведения испытаний ГБУ PC (Я) «Якутская республиканская ветеринарно-испытательная лаборатория».

Полученный штамм характеризуется следующими признаками.

Морфология: мелкие палочки, расположенные одиночно и беспорядочными скоплениями.

Культуральные характеристики: на мясопептонном агаре (МПА), масс. %: ферментативный пептон - 1,0; натрий хлористый - 0,5; агар - 1,0; вода мясная - остальное, рН 7,0-7,2) и ГРМ агаре (на основе гидролизата рыбной муки), масс. %: гидролизат рыбной муки - 1,2; пептон ферментативный - 1,2; натрий хлористый - 0,6; агар - 1,0; вода дистиллированная остальное; рН 7,1-7,5, формирует малиновые или красно-оранжевые пастообразные округлой формы колонии, диаметром 1-3 мм. Консистенция мягкая, легко снимаются с поверхности агара, легко размазываются.

На среде Сабуро (состав, г/л: пептон - 10,0 мальтоза - 40,0; агар - 12,0±2,0; вода очищенная до 1 л), формирует малиновые или красно-оранжевые пастообразные округлой формы колонии, диаметром 1-3 мм. Консистенция мягкая, легко снимаются с поверхности агара, легко размазываются.

На агаризованной среде Мюнца (13. Керстен Д.К. Морфологические и культуральные свойства индикаторных микроорганизмов нефтегазовой съемки - Микробиология, №5. - 1963. - С. 1024-1030) с нефтью и нефтепродуктами (дизельное топливо, масло моторное, газовый конденсат, бензин, керосин авиационный) следующего состава: (масс. %) KNO₃ - 0,4; MgSO₄⋅7H₂O - 0,08; NaCl - 0,1; K₂ НРО₄ - 0,14; KH₂ РО₄ - 0,06; агар - 2,0; нефть или нефтепродукты - 1,0; вода дистиллированная - остальное, рН - 7,2, формирует малиновые или красно-оранжевые пастообразные округлой формы колонии, диаметром 1-2 мм. Консистенция мягкая, легко снимаются с поверхности агара, легко размазываются.

В мясопептонном бульоне образует муть без пленки.

Изученные признаки штамма: растет на среде с 2% NaCl при рН 5,5-9,0 (оптимум при рН 6,5-7,4) усл. ед., при температуре +2…+37°С, (+4…+20°С).

Отношение к кислороду: аэроб, но может развиваться и при отсутствии кислорода, но более медленно.

Используемые источники углерода: сорбит, лактоза, глюкоза.

Другие тесты: Индол-положительный. Реакция Фогес-Проскауэра отрицательная. Фенилаланиндезоксаминаза отрицательная. Не ферментирует бета галактозидазу. Не продуцирует сероводород. Не активен по отношению к орнитину и лизину. Не использует цитрат натрия и малонат натрия. Утилизирует инозит.Утилизирует нефтяные углеводороды. Не продуцирует гемолизины.

Способ, условия и состав твердых сред для выращивания культуры: стерильный питательный агар на основе гидролизата рыбной муки или мясо^ пептонный агар промышленного производства, разливают в чашки Петри, после застывания, подсушивают в термостате, засевают и культивируют при температуре 20-30°С, в течение 72 часов.

Штамм не вирулентный, не токсичный, не токсигенный (проверка проведена на белых мышах).

Штамм не патогенен для растений (проверка на фитотоксичность проведена на семенах овса посевного (Avéna sativa) сорт «Скакун», пшеницы (Triticum) сорт «Приленская-19» и клевера лугового (Trifolium pretense).

Штамм может поддерживаться регулярными пересевами (1 раз в 10-14 дней) на скошенном МПА или храниться в лиофилизированном состоянии в ампулах при температуре +4°С.

Штамм можно получить в лаборатории геохимии каустобиолитов, 677007, Республика Саха (Якутия), г. Якутск, ул. Автодорожная, дом 20, ИПНГ СО РАН, каб. 401.

Изобретение поясняется следующими примерами.

Пример 1. Выделение и культивирование штамма бактерий Serratia plymuthica ВКПМ В-12668.

Штамм бактерий Serratia plymuthica ВКПМ В-12668 выделен методом целенаправленных исследований из биоматериала замороженного доисторического детеныша шерстистого носорога (образец голова верхняя челюсть до 7 см), найденного осенью 2014 г. охотниками на берегу реки Семюэлях в Абыйском районе Республики Саха (Якутия).

Для этого 1,0 г биологического материала, отобранного из замороженной тушки вышеуказанного объекта растирали в ступке в асептических условиях, вносили в колбу, объемом 250 мл, содержащей, предварительно подготовленной 100 мл минеральной среды следующего состава: (масс. %) KNO₃ - 0,4; MgSO₄7H₂O - 0,08; NaCl - 0,1; K₂HPO₄ - 0,14; KH₂PO₄ - 0,06; вода дистиллированная - остальное, рН 7,2.

В качестве источника углерода и энергии использовали нефть, которую вносили в минеральную среду в количестве 1000 мг на 1,0 дм среды.

Инкубация проводилась в термостатируемых качалочных условиях на установке «УВМТ-12-250» при 200 об/мин и температуре +20±1°С.

Рост бактерий наблюдали уже через 24 часа инкубации по образованию мутной эмульсии и дезинтеграции слоя нефти.

Чистая культура бактерий была получена путем культивирования при вышеперечисленных условиях и многократных пересевов (более 10) накопительной культуры на чашки Петри с МПА.

Далее посевы инкубировали в стационарных условиях при различных температурах (+2, +4,+20, +30, +37, +40°С).

Через 72 часа, при культивировании штамма при температурах от +20 и +30°С и через 10 суток, при культивировании при температуре +2, +4 и +37°С, на поверхности МПА наблюдали появление выпуклых, колоний малинового или красно-оранжевого цвета, которые по культурально-морфологическим и биохимическим описаниям, приведенным в Определителе Берги (14. Bergey's Manual of Systematic Bacteriology Book Review Int. J. of Syst. Bact; July 1985, p. 408.). идентифицированы, как род бактерий Serratia.

При температуре +40°С рост колоний не наблюдалось.

Первичный скрининг по базе данных GenBank показал, что исследуемый штамм принадлежит к следующей систематической группе: Bacteria; Proteobacteria; Gammaproteobacteria; Enterobacteriales; Enterobacteriaceae; Serratia.

Критерием отнесения микроорганизма к тому или иному виду считается гомология не менее 97% (16. Биохимия. - №12. - Том 72. - 2007. - С. 1659-1667).

Анализ филогенетического родства, построенный с использованием штаммов близкородственных микроорганизмов показал, что наиболее близким к исследуемому штамму является вид Serratia plymuthica (99%).

Пример 2. Приготовление бактериального препарата на основе клеток штамма бактерий Serratia plymuthica ВКПМ В-12668

Изолированные колонии штамма бактерий Serratia plymuthica ВКПМ В-12668 (фиг. 1), полученные по примеру 1, пересевают на скошенный МПА и инкубируют 48 часов при температуре +20±1°С.

После инкубации клетки штамма бактерий Serratia plymuthica ВКПМ В-12668 смывают 0,9% раствором NaCl и готовят исходную микробную суспензию бактериального изолята с титром 1×10⁹ микробных клеток/см³ по оптическому стандарту ГИСК им. A.M. Тарасевича.

Для получения бактериального изолята готовят жидкую минеральную среду Мюнца выше описанного состава с нефтью (нефтепродуктами) и культивируют в колбах в качалочных условиях в течение 48 часов, при температуре плюс 20±1°С, при 200 об/мин.

Получают жидкую мутноватую смесь клеток штамма бактерий Serratia plymuthica ВКПМ В-12668 с титром 1-5×10⁹ клеток/см³, которую можно использовать в качестве биопрепарата для обработки объектов, загрязненных нефтью или нефтепродуктами.

Пример 3. Исследование нефтеокисляющей активности штамма бактерий Serratia plymuthica ВКПМ В-12668

Клетки штамма бактерий Serratia plymuthica ВКПМ В-12668 смывают 0,9% раствором NaCl со скошенного МПА (по примеру 2), готовят исходную микробную суспензию бактериального изолята, объемом 25 см, с концентрацией 1×10 микробных клеток/см³ по оптическому стандарту ГИСК им. A.M. Тарасевича.

Полученный бактериальный изолят бактерий Serratia plymuthica ВКПМ В-12668 культивируют в водной среде с минеральными компонентами (масс. %): KNO₃ - 0,4; MgSO₄⋅7H₂0 - 0,08; NaCl - 0,1; K₂HPO₄ - 0,14; KH₂PO₄ - 0,06; вода дистиллированная - остальное; рН среды - 7,2 усл. ед.

В колбочки объемом 200,0 см³ вносят по 100,0 см³ готовой минеральной среды и 1000 мг нефти.

Колбы засевают клетками штамма бактерий Serratia plymuthica ВКПМ В-12668 до концентрации 1×10⁹ клеток/см³.

В качестве контроля ставят такую же колбу со средой, нефтью и без бактерий для определения общих (естественных) потерь.

Естественное испарение нефти и нефтепродуктов высчитывают через 48 часов и после окончания опыта.

Колбы культивируют при температурах +2, +10, +20 и +37°С в течение 10 суток.

Результаты эксперимента представлены в таблице 1.

Биодеградацию нефти и нефтепродуктов определяют спектрометрическим методом, с использованием концентратомера «ИКН-025» (16. ФР. 1.31.2007.03234 МВИ 01.02.117. Методика выполнения измерений массовой концентрации нефтепродуктов в питьевых, природных и сточных водах ИК-спектрометрическим методом с использованием концентратомера «ИКН-0,25»).

Данные эксперимента показывают, что естественная потеря нефти и нефтепродуктов в среде без добавления бактериального изолята через 48 часов составила в среднем при температурах: +2°С - 0,2%; +10°С - 0,3%; +20°С - 0,6%; +37°С - 1,0%.

На 10-е сутки деградация нефти и нефтепродуктов в контрольных вариантах была незначительной, в то время, как под влиянием предлагаемого штамма бактерий Serratia plymuthica ВКПМ В-12668 деградация нефти и нефтепродуктов составила при температуре +2°С - 2,98-3,64%; при температуре +10°С - 5,84-17,21%; при температуре +20°С - 63,04-67,16%; при температуре +37°С - 46,88-64,47%) (таблица 1).

Пример 4. Очистка пресной воды от нефти и нефтепродуктов с помощью клеток штамма бактерий Serratia plymuthica ВКПМ В-12668.

В эксикатор объемом 5,0 дм³ вносят 3,0 дм³ водопроводной воды, отстоявшейся в течение суток при комнатной температуре.

В воду добавляют 30000 мг сырой неочищенной нефти (нефтепродуктов) и 0,03 дм³ бактериального изолята штамма. штамма бактерий Serratia plymuthica ВКПМ В-12668, приготовленного по примеру 2, содержащего 1,0-10⁹ клеток/см³ суспензии.

В качестве контроля используют воду в количестве 3,0 дм³ с добавлением 30000 мг нефти (нефтепродуктов) и без внесения микробной суспензии бактериального изолята.

Эксперимент проводят в течение 60 суток при температуре +20°С.

Показано, что под влиянием штамма бактерий Serratia plymuthica ВКПМ В-12668 за 60 суток деструкция в пресной воде для нефти составила 57,67% и для дизельного топлива и масла моторного - 57,07%; для масла гидравлического - 56,87%; для газового конденсата - 56,69%; для керосина авиационного - 59,99%; для бензина - 59,29% (таблица 2).

Таким образом, преимуществом предлагаемого штамма бактерий Serratia plymuthica ВКПМ В-12668 является то, что он обладает высокой деструкционной способностью по отношению как к нефти, так и к нефтепродуктам в относительно короткие сроки (от 10 до 60 суток), в широком диапазоне температур от +2 до +37°С, который может быть использован для очистки объектов окружающей среды от загрязнений нефтью и нефтепродуктами (дизельное топливо, масло моторное, газовый конденсат, масло гидравлическое, керосин авиационный, бензин).

Штамм бактерий Serratia plymuthica ВКПМ В-12668, выделенный из биоматериала палеонтологического образца (детеныша ископаемого шерстистого носорога), - деструктор нефти и нефтепродуктов.