Кристаллическая фумаратная соль (s)-[3,4-дифтор-2-(2-фтор-4-йодфениламино)фенил][3-гидрокси-3-(пиперидин-2-ил)азетидин-1-ил]метанона

Настоящее изобретение относится к способу получения кристаллической фумаратной соли (S)-[3,4-дифтор-2-(2-фтор-4-йодфениламино)фенил][3-гидрокси-3-(пиперидин-2-ил)азетидин-1-ил]метанона соединения I, обозначенной как Форма A, характеризущейся по меньшей мере одним из следующих (iii) твердофазным ¹³C ЯМР-спектром с тремя или более пиками, выбранными из 175,3, 173,6, 117,5, 155,5 и 153,5 ± 0,2 м.д.; (v) диаграммой порошковой рентгеновской дифракции (CuKα λ=1,5418Å), содержащей три или более значения 2θ, выбранных из 4,6, 12,1, 13,2, 13,6 и 14,5 ± 0,2°2θ, при проведении измерений кристаллической формы при комнатной температуре; или диаграммой порошковой рентгеновской дифракции (CuKα λ=1,5418Å) при проведении измерений кристаллической формы при комнатной температуре, содержащей значения 2θ ± 0,2°2θ, равные 4,6, 12,1, 13,2, 13,8, 14,5, 16,3, 16,6, 17,8, 18,5, 19,7, 21,1, 22,6, 23,0, 23,3, 24,5; где способ включает добавление фумаровой кислоты, растворенной в растворителе, к смеси соединения I, растворенного в растворителе, с получением кристаллической фумаратной соли соединения I, обозначенной как Форма A; и сбор полученных кристаллов кристаллической фумаратной соли соединения I, обозначенной как Форма A, и где растворитель включает полярный протонный растворитель, апротонный растворитель или их смесь. При этом полярный протонный растворитель выбран из группы, состоящей из метанола, этанола, н-пропанола, изопропанола, воды и их смесей, и апротонный растворитель выбран из группы, состоящей из тетрагидрофурана, дихлорметана ацетонитрила и их смесей. Технический результат – получение термодинамически стабильной не гигроскопичной кристаллической фумаратной соли (S)-[3,4-дифтор-2-(2-фтор-4-йодфениламино)фенил][3-гидрокси-3-(пиперидин-2-ил)азетидин-1-ил]метанона. 2 з.п. ф-лы, 13 ил., 13 табл.

 

Перекрестная ссылка на родственную заявку

[0001] В настоящей заявке заявлен приоритет по предварительной заявке на патент США с серийным № 62/187009, поданной 30 июля 2015 года. Полное содержание вышеуказанной заявки включено в настоящий документ посредством ссылки.

Область техники

[0002] Настоящее описание относится к кристаллической фумаратной соли (S)-[3,4-дифтор-2-(2-фтор-4-йодфениламино)фенил][3-гидрокси-3-(пиперидин-2-ил)азетидин-1-ил]метанона. Настоящее описание также относится к фармацевтическим композициям, содержащим кристаллическую фумаратную соль (S)-[3,4-дифтор-2-(2-фтор-4-йодфениламино)фенил][3-гидрокси-3-(пиперидин-2-ил)азетидин-1-ил]метанона. Настоящее описание также относится к способам лечения раковых заболеваний, включающим введение пациенту, нуждающемуся в этом, кристаллической фумаратной соли (S)-[3,4-дифтор-2-(2-фтор-4-йодфениламино)фенил][3-гидрокси-3-(пиперидин-2-ил)азетидин-1-ил]метанона.

Уровень техники

[0003] Традиционно, существенные улучшения при лечении рака связаны с определением терапевтических средств, действующих по новым механизмам. Одним из механизмов, которые могут быть использованы при лечении рака, является модуляция MEK (MAPK/ERK Киназы). Ингибирование MEK представляет собой перспективную стратегию для лечения раковых заболеваний, вызванных аберрантной передачей сигналов пути ERK/MAPK (Solit et al., 2006; Wellbrock et al., 2004). Каскад сигнальной трансдукции MEK-ERK представляет собой консервативный путь, который регулирует клеточный рост, пролиферацию, дифференцировку и апоптоз в ответ на факторы роста, цитокины и гормоны. Этот путь задействуется после Ras, который зачастую является активированным или мутированным в опухолях человека. MEK является важнейшим эффектором функции Ras. Путь ERK/MAPK активирован в 30% всех опухолей, и онкогенные активирующие мутации в K-Ras и B-Raf идентифицированы в 22% и 18% всех типов рака, соответственно (Allen et al., 2003; Bamford S, 2004; Davies et al., 2002; Malumbres and Barbacid, 2003). Значительная часть раковых заболеваний человека, включая 66% (B-Raf) злокачественных меланом, 60% (K-Ras) и 4% (B-Raf) раковых заболеваний поджелудочной железы, 50% раковых заболеваний толстой и прямой кишок (толстой кишки, в частности, K-Ras: 30%, B-Raf: 15%), 20% (K-Ras) раковых заболеваний легких, 27% (B-Raf) папиллярного и анапластического рака щитовидной железы и 10-20% (B-Raf) эндометриоидных раковых заболеваний яичников, несут активирующие мутации Ras и Raf. Ингибирование пути ERK и, в частности, ингибирование активности киназы MEK приводит к антиметастатическому и антиангиогенному эффекту, что в значительной степени обусловлено снижением контакта между клетками и подвижности, а также понижающей регуляцией экспрессии фактора роста сосудистого эндотелия (VEGF). Кроме того, экспрессия доминантно-негативного MEK или ERK приводит к снижению способности к трансформации мутантного Ras, как видно в клеточной культуре и при первичном и метастатическом росте ксенотрансплантатов опухоли человека in vivo. Следовательно, путь сигнальной трансдукции MEK-ERK представляет собой подходящий путь для направленного терапевтического вмешательства, и соединения, направленные на MEK, имеют значительный терапевтический потенциал.

[0004] Одно соединение, которое специфически ингибирует MEK, представляет собой (S)-[3,4-дифтор-2-(2-фтор-4-йодфениламино)фенил][3-гидрокси-3-(пиперидин-2-ил)азетидин-1-ил]метанон (Соединение I), который имеет химическую структуру:

В WO 2007/044515 описан синтез (S)-[3,4-дифтор-2-(2-фтор-4-йодфениламино)фенил][3-гидрокси-3-(пиперидин-2-ил)азетидин-1-ил]метанона (Пример 22b, страница 231), и также описана терапевтическая активность указанной молекулы для ингибирования, регуляции и/или модуляции MEK (Биохимический анализ, страница 268). Соединение I одобрено в США, Европе и других странах для лечения меланомы в комбинации с вемурафенибом (Zelboraf^®).

[0005] Помимо терапевтической эффективности, разработчики лекарственного средства стремятся обеспечить подходящую форму терапевтического агента, имеющую свойства, подходящие для переработки, производства, обеспечения стабильности при хранении и/или применимости в качестве лекарственного средства. Соответственно, открытие такой формы, которая обладает некоторыми или всеми указанными требуемыми свойствами, является важным для разработки лекарственного средства.

[0006] Авторами настоящей заявки обнаружена кристаллическая солевая форма Соединения I, которая имеет подходящие свойства для применения в фармацевтической композиции для лечения пролиферативных заболеваний, таких как рак.

Сущность изобретения

[0007] Настоящее описание относится к кристаллической фумаратной соли Соединения I, описанной в настоящем документе. Фумаратная соль Соединения I имеет следующую структуру и идентифицирована как гемифумарат:

[0008] Настоящее описание также относится к фармацевтическим композициям, содержащим кристаллическую фумаратную соль Соединения I.

[0009] Настоящее описание также относится к применению кристаллической фумаратной соли Соединения I.

Краткое описание графических материалов

[0010] На Фиг. 1 представлен инфракрасный спектр кристаллической фумаратной соли Соединения I, обозначенной как Форма A.

[0011] На Фиг. 2 представлен ¹H ЯМР спектр в ДМСО-d₆ кристаллической фумаратной соли Соединения I, обозначенной как Форма A.

[0012] На Фиг. 3 представлен ¹³C ЯМР спектр в ДМСО-d₆ кристаллической фумаратной соли Соединения I, обозначенной как Форма A.

[0013] На Фиг. 4 представлен ¹³C ЯМР твердофазный спектр кристаллической фумаратной соли Соединения I, обозначенной как Форма A.

[0014] На Фиг. 5 представлен масс-спектр, записанный при ионизации электрораспылением в режиме положительных ионов, кристаллической фумаратной соли Соединения I, обозначенной как Форма A.

[0015] На Фиг. 6 представлен масс-спектр, записанный при ионизации электрораспылением в режиме отрицательных ионов, кристаллической фумаратной соли Соединения I, обозначенной как Форма A.

[0016] На Фиг. 7 представлен ультрафиолетовый спектр кристаллической фумаратной соли Соединения I, обозначенной как Форма A, в метаноле.

[0017] На Фиг. 8 представлена диаграмма дифференциальной сканирующей калориметрии кристаллической фумаратной соли Соединения I, обозначенной как Форма A.

[0018] На Фиг. 9 представлена диаграмма дифференциальной сканирующей калориметрии фумаратной соли Соединения I, обозначенной как аморфная форма.

[0019] На Фиг. 10 представлена дифрактограмма РПД кристаллической фумаратной соли Соединения I, обозначенной как Форма A.

[0020] На Фиг. 11 представлена дифрактограмма РПД фумаратной соли Соединения I, обозначенной как аморфная форма.

[0021] На Фиг. 12 представлена изотерма динамической сорбции/десорбции влаги кристаллической фумаратной соли Соединения I, обозначенной как Форма A, при 25 °С.

[0022] На Фиг. 13 представлена изотерма динамической сорбции/десорбции влаги фумаратной соли Соединения I, обозначенной как аморфная форма, при 25 °С.

Подробное описание

[0023] Настоящее описание относится к кристаллической фумаратной соли Соединения I. Настоящее изобретение также относится к новым композициям, содержащим описанную кристаллическую фумаратную соль Соединения I. Описанное терапевтическое применение кристаллической фумаратной соли Соединения I, а также терапевтические композиции, содержащие ее, представляют собой отдельные аспекты настоящего описания. Технологии, использованные для получения характеристик кристаллической фумаратной соли Соединения I, описаны ниже в примерах. Указанные технологии, по отдельности или в комбинации, могут быть использованы для получения характеристик кристаллической фумаратной соли Соединения I. Кристаллическая фумаратная соль Соединения I также может быть охарактеризована ссылкой на описанные графические материалы.

[0024] Было обнаружено, что кристаллическая фумаратная соль Соединения I является термодинамически стабильной, является единственной кристаллической формой, идентифицированной после проведения всесторонних экспериментов, является негигроскопичной и неизменно образуется при производстве. Напротив, аморфная форма является некристаллической, гигроскопичной и превращается в кристаллическую Форму A. Кроме того, при попытке получения солей Соединения I, только фумарат образовывал одну кристаллическую форму. Другие соли, которые могут быть получены, были аморфными или представляли собой смесь кристаллических и аморфных материалов.

Кристаллическая фумаратная соль Соединения I

[0025] Настоящее описание относится к кристаллической фумаратной соли Соединения I. Настоящее описание также относится к фармацевтическим композициям кристаллической фумаратной соли Соединения I. Фумаратная соль может быть получена смешиванием (S)-[3,4-дифтор-2-(2-фтор-4-йодфениламино)фенил][3-гидрокси-3-(пиперидин-2-ил)азетидин-1-илметанона (Соединения I) с фумаровой кислотой, которая образует соль, имеющую стехиометрию Соединение I:фумаровая кислота 2:1. Указанная кристаллическая фумаратная соль Соединения I также может быть упомянута как гемифумарат.

[0026] Фумаровая кислота имеет следующую структуру:

.

[0027] Существуют различные названия Соединения I, в том числе XL518, GDC-0973, [3,4-дифтор-2-(2-фтор-4-йоданилино)фенил]{3-гидрокси-3-[(2S)-пиперидин-2-ил]азетидин-1-ил}метанон, кобиметиниб и Cotellic^TM.

[0028] Соединение I может быть получено в соответствии с любой из нескольких различных методик, как в масштабе нескольких грамм (<1 кг) так и в масштабе нескольких килограмм (>1 кг). Способ получения в масштабе нескольких грамм представлен в публикации WO 2007/044515, где описан синтез Соединения I (Пример 22b), и полное содержание указанного документа включено в настоящий документ посредством ссылки. Альтернативно, Соединение I может быть получено в масштабе нескольких килограмм с применением способа, представленного в WO 2014/059422, полное содержание которого также включено в настоящий документ посредством ссылки, а также способами, описанными ниже в Примерах.

[0029] Форма A имеет растворимость в воде 1,6 мг/мл при 25 °С. В условиях 25 °С/0% относительной влажности (ОВ) и 25 °С/90% ОВ Форма A демонстрировала отсутствие изменений в количественном анализе, чистоте, содержании влаги и растворимости. Анализ ДСК демонстрировал стабильность Формы A до температуры плавления 239 °С. Потерю растворителя не наблюдали.

[0030] Форма A, описанная в настоящем документе, может быть охарактеризована по меньшей мере одним из следующих:

(i) ¹H ЯМР спектр в d₆ ДМСО, по существу такой, как показано на Фиг. 2;

(ii) 13C ЯМР спектр в d₆ ДМСО, по существу такой, как показано на Фиг. 3;

(iii) твердофазный ¹³C ЯМР спектр с тремя или более пиками, выбранными из 175,3, 173,6, 117,5, 155,5 и 153,5, ± 0,2 м.д.;

(iv) твердофазный ¹³C ЯМР спектр, по существу такой, как показано на Фиг. 4;

(v) диаграмма порошковой рентгеновской дифракции (CuKα λ=1,5418Å), содержащая три или более значений 2θ, выбранных из 4,6, 12,1, 13,2, 13,6 и 14,5 ±0,2 °2θ при проведении измерений кристаллической формы при комнатной температуре;

(vi) диаграмма порошковой рентгеновской дифракции (ПРД), по существу соответствующая диаграмме, представленной на Фиг. 10; и

(vii) термограмма дифференциальной сканирующей калориметрии, по существу соответствующая представленной на Фиг. 8.

[0031] В одном варианте реализации Форма A характеризуется по меньшей мере двумя из (i), (ii), (iii), (iv), (v), (vi) или (vii).

[0032] В другом варианте реализации Форма A характеризуется по меньшей мере тремя из (i), (ii), (iii), (iv), (v), (vi) или (vii).

[0033] В другом варианте реализации Форма A характеризуется по меньшей мере четырьмя из (i), (ii), (iii), (iv), (v), (vi) или (vii).

[0034] В другом варианте реализации Форма A характеризуется по меньшей мере пятью из (i), (ii), (iii), (iv), (v), (vi) или (vii).

[0035] В другом варианте реализации Форма A характеризуется по меньшей мере шестью из (i), (ii), (iii), (iv), (v), (vi) или (vii).

[0036] В другом варианте реализации Форма A характеризуется всеми из (i), (ii), (iii), (iv), (v), (vi) или (vii).

[0037] В одном варианте реализации кристаллическая фумаратная соль (S)-[3,4-дифтор-2-(2-фтор-4-йодфениламино)фенил][3-гидрокси-3-(пиперидин-2-ил)азетидин-1-илметанона, обозначенная как Форма A, характеризуется одним, двумя, тремя, четырьмя или пятью пиками, выбранными из 175,3, 173,6, 117,5, 155,5 и 153,5 ± 0,2 м.д. в твердофазном ¹³C ЯМР спектре.

[0038] В другом варианте реализации кристаллическая фумаратная соль (S)-[3,4-дифтор-2-(2-фтор-4-йодфениламино)фенил][3-гидрокси-3-(пиперидин-2-ил)азетидин-1-илметанона, обозначенная как Форма A, характеризуется одним или более пиками, выбранными из 173,6, 117,5, 155,5 и 153,5 ± 0,2 м.д. в твердофазном ¹³C ЯМР спектре.

[0039] В другом варианте реализации кристаллическая фумаратная соль (S)-[3,4-дифтор-2-(2-фтор-4-йодфениламино)фенил][3-гидрокси-3-(пиперидин-2-ил)азетидин-1-илметанона, обозначенная как Форма A, характеризуется одним, двумя, тремя или четырьмя пиками, выбранными из 175,3, 117,5, 155,5 и 153,5 ± 0,2 м.д. в твердофазном ¹³C ЯМР спектре.

[0040] В другом варианте реализации кристаллическая фумаратная соль (S)-[3,4-дифтор-2-(2-фтор-4-йодфениламино)фенил][3-гидрокси-3-(пиперидин-2-ил)азетидин-1-илметанона, обозначенная как Форма A, характеризуется одним, двумя, тремя или четырьмя пиками, выбранными из 175,3, 173,6, 155,5 и 153,5 ± 0,2 м.д. в твердофазном ¹³C ЯМР спектре.

[0041] В другом варианте реализации кристаллическая фумаратная соль (S)-[3,4-дифтор-2-(2-фтор-4-йодфениламино)фенил][3-гидрокси-3-(пиперидин-2-ил)азетидин-1-илметанона, обозначенная как Форма A, характеризуется одним, двумя, тремя или четырьмя пиками, выбранными из 175,3, 173,6, 117,5 и 153,5 ± 0,2 м.д. в твердофазном ¹³C ЯМР спектре.

[0042] В одном варианте реализации кристаллическая фумаратная соль (S)-[3,4-дифтор-2-(2-фтор-4-йодфениламино)фенил][3-гидрокси-3-(пиперидин-2-ил)азетидин-1-илметанона, обозначенная как Форма A, характеризуется одним, двумя, тремя или четырьмя пиками, выбранными из 175,3, 173,6, 117,5 и 155,5 ± 0,2 м.д. в твердофазном ¹³C ЯМР спектре.

[0043] В одном варианте реализации кристаллическая фумаратная соль (S)-[3,4-дифтор-2-(2-фтор-4-йодфениламино)фенил][3-гидрокси-3-(пиперидин-2-ил)азетидин-1-илметанона, обозначенная как Форма A, характеризуется одним, двумя, тремя, четырьмя или пятью пиками, выбранными из 4,6, 12,1, 13,2, 13,6 и 14,5 ±0,2 °2θ на диаграмме рентгеновской дифракции (CuKα λ=1,5418Å).

[0044] В другом варианте реализации кристаллическая фумаратная соль (S)-[3,4-дифтор-2-(2-фтор-4-йодфениламино)фенил][3-гидрокси-3-(пиперидин-2-ил)азетидин-1-илметанона, обозначенная как Форма A, характеризуется одним, двумя, тремя или четырьмя пиками, выбранными из 12,1, 13,2, 13,6 и 14,5 ±0,2 °2θ на диаграмме рентгеновской дифракции (CuKα λ=1,5418Å).

[0045] В другом варианте реализации кристаллическая фумаратная соль (S)-[3,4-дифтор-2-(2-фтор-4-йодфениламино)фенил][3-гидрокси-3-(пиперидин-2-ил)азетидин-1-илметанона, обозначенная как Форма A, характеризуется одним, двумя, тремя или четырьмя пиками, выбранными из 4,6, 12,1, 13,6 и 14,5 ±0,2 °2θ на диаграмме рентгеновской дифракции (CuKα λ=1,5418Å).

[0046] В другом варианте реализации кристаллическая фумаратная соль (S)-[3,4-дифтор-2-(2-фтор-4-йодфениламино)фенил][3-гидрокси-3-(пиперидин-2-ил)азетидин-1-илметанона, обозначенная как Форма A, характеризуется одним, двумя, тремя или четырьмя пиками, выбранными из 4,6, 13,6 и 14,5 ±0,2 °2θ на диаграмме рентгеновской дифракции (CuKα λ=1,5418Å).

[0047] В одном варианте реализации кристаллическая фумаратная соль (S)-[3,4-дифтор-2-(2-фтор-4-йодфениламино)фенил][3-гидрокси-3-(пиперидин-2-ил)азетидин-1-илметанона, обозначенная как Форма A, характеризуется одним, двумя, тремя или четырьмя пиками, выбранными из 4,6, 12,1, 13,2 и 13,6 ±0,2 °2θ на диаграмме рентгеновской дифракции (CuKα λ=1,5418Å).

[0048] Другие твердофазные свойства, которые могут быть использованы для характеристики кристаллической фумаратной соли (S)-[3,4-дифтор-2-(2-фтор-4-йодфениламино)фенил][3-гидрокси-3-(пиперидин-2-ил)азетидин-1-илметанона, обозначенной как Форма A, представлены на фигурах и описаны ниже в примерах. В одном варианте реализации кристаллическая фумаратная соль (S)-[3,4-дифтор-2-(2-фтор-4-йодфениламино)фенил][3-гидрокси-3-(пиперидин-2-ил)азетидин-1-илметанона, обозначенная как Форма A, характеризуется параметрами элементарной ячейки, примерно равными следующим:

Кристаллическая система: Тетрагональная

Пространственная группа: P43212

Форма кристаллизации: Пластинки

Размеры элементарной ячейки

a=7,8825 Å

b=7,8825 Å

c=76,846 Å

α=90°

β=90°

γ=90°

Температура: 293 K

Объем ячейки: 4774,7 ų

Молекул в элементарной ячейке: 8

Плотность: 1,637 г/см³

Параметры элементарной ячейки Формы A измеряли при температуре около 25 °С, например, при температуре окружающей среды или при комнатной температуре.

[0049] В другом варианте реализации настоящее описание относится к Форме A, описанной в настоящем документе в любых аспектах и/или вариантах реализации, в по существу чистой форме.

[0050] Настоящее описание также относится к способу получения кристаллической фумаратной соли Соединения I, обозначенной как Форма A. Получение, твердофазные свойства и характеристики кристаллической фумаратной соли Соединения I, обозначенной как Форма A, описаны ниже в примерах.

Фармацевтические композиции

[0051] Другой аспект настоящего описания относится к фармацевтической композиции, содержащей кристаллическую фумаратную соль Соединения I и одно или более фармацевтически приемлемых вспомогательных веществ. Количество кристаллической фумаратной соли Соединения I может быть терапевтически эффективным количеством. Другой аспект настоящего описания относится к фармацевтической композиции в форме твердого вещества или дисперсии, содержащей кристаллическую фумаратную соль Соединения I или их комбинации и фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество.

[0052] В одном варианте реализации лекарственная форма представляет собой таблеточную лекарственную форму. Таблетки обычно получают из активного лекарственного соединения, наполнителя, разрыхлителя и смазывающего вещества посредством смешивания, грануляции и таблетирования.

[0053] Наполнители известные в данной области техники и включают, в качестве примера и без ограничения, сахара и сахарные спирты, целлюлозные материалы и другие наполнители. Неограничивающие примеры подходящих спиртов и сахарных спиртов включают декстраты, декстрин, декстрозу, лактозу, мальтодекстрин, маннит, изомальт, сорбит, сахарозу, сахарную крупку, ксилит, фруктозу, лактит, эритрит, мальтит, ксилозу, глюкозу, маннозу, галактозу, мальтозу, целлобиозу, трегалозу и раффинозу. Неограничивающие примеры целлюлозных материалов включают микрокристаллическую целлюлозу («MCC») и силикатизированную MCC. Неограничивающие примеры других наполнителей включают карбонат кальция, сульфат кальция, силикат кальция, хитин, хитозан, дигидрат двухосновного фосфата кальция, глицерилпальмитостеарат, гидрированное растительное масло, каолин, алюмосиликат магния, карбонат магния, оксид магния, полиметакрилаты, хлорид калия, порошкообразную целлюлозу,прежелатинизированный крахмал, хлорид натрия, крахмал, тальк и двух- и трехосновный фосфат кальция. В некоторых аспектах настоящего описания наполнитель представляет собой лактозу, MCC, силикатизированную MCC, двухосновный фосфат кальция, маннит, изомальт, прежелатинизированный крахмал и их комбинации.

[0054] Разрыхлители известны в данной области техники. Неограничивающие примеры включают: модифицированные крахмалы, такие как карбоксиметилкрахмал натрия (крахмалгликолят натрия), поперечно-сшитые поливинилпирролидоны, такие как кросповидон; модифицированные целлюлозные материалы, такие как кроскармеллоза натрия; поперечно-сшитую альгиновую кислоту; камеди, такие как геллановая камедь и ксантановая камедь; силикат кальция. В некоторых аспектах настоящего описания разрыхлитель представляет собой кроскармеллозу натрия, кросповидон, крахмалгликолят натрия и их комбинации. В некоторых аспектах настоящего описания разрыхлитель представляет собой кроскармеллозу натрия, крахмалгликолят натрия и их комбинации.

[0055] Смазывающие агенты известны в данной области техники. Неограничивающие примеры включают стеарат магния, стеарат кальция, стеариновую кислоту, стеарилфумарат натрия, гидрированные растительные масла, полиэтиленгликоль (4000-6000) и лаурилсульфат натрия. В некоторых аспектах настоящего описания смазывающий агент представляет собой стеарат магния, стеарилфумарат натрия и их комбинации.

[0056] В одном аспекте настоящего описания, относящемся к производству таблеток, наполнитель, разрыхлитель и смазывающий агент протирают, пропуская через сито, с получением не содержащего комков предварительно смешанного материала. Не содержащий комков предварительно смешанный материал смешивают с активным лекарственным соединением в смесительном устройстве и перемешивают с получением предварительной смеси. Предварительную смесь гранулируют в устройстве сухой грануляции (например, посредством грануляции, измельчения и просева) с получением гранул. Наполнитель, разрыхлитель и смазывающий агент присутствуют в гранулах в качестве внутригранулярных компонентов. Протирают дополнительное количество разрыхлителя и смазывающего агента, пропуская их через сито, с получением не содержащего комков материала, который смешивают с гранулами в смесительном устройстве и перемешивают с получением готовой смеси. Готовую смесь таблетируют в таблетировочном устройстве с получением сердцевины таблеток. На сердцевину таблеток наносят покрытие из покрывающей смеси в устройстве для нанесения пленки с получением таблеток с покрытием.

[0057] В данном контексте «внутригранулярный» относится к компоненту, который добавляют до грануляции, так что указанный компонент находится внутри гранул. Кроме того, в данном контексте «внегранулярный» относится к компоненту, который смешивают с гранулами перед прессованием, например, в таблеточном прессе.

[0058] В другом способе производства таблеток согласно настоящему описанию, внутригранулярный наполнитель и внутригранулярный разрыхлитель протирают через сито и смешивают с активным лекарственным соединением в смесительном устройстве. Затем компоненты перемешивают с получением первичной предварительной смеси. Внутригранулярный смазывающий агент протирают через сито и смешивают с первичной предварительной смесью в смесительном устройстве. Затем компоненты перемешивают с получением предварительной смеси. Предварительную смесь гранулируют в устройстве сухой грануляции посредством грануляции, измельчения и просева с получением гранул. Внегранулярный разрыхлитель протирают через сито и смешивают с гранулами в смесительном устройстве. Затем компоненты перемешивают с получением первичной готовой смеси. Внегранулярный смазывающий агент протирают через сито и смешивают с первичной готовой смесью в смесительном устройстве. Затем компоненты перемешивают с получением готовой смеси. Готовую смесь таблетируют в таблетировочном устройстве с получением сердцевины таблеток. Твердую смесь пленочного покрытия смешивают с водой и суспендируют в суспендирующем устройстве с получением смеси пленочного покрытия. На сердцевину таблеток наносят покрытие из покрывающей смеси в устройстве для нанесения пленки с получением таблеток с покрытием.

[0059] Один конкретный аспект производства согласно настоящему описанию включает следующие стадии предварительного смешивания, грануляции/измельчения и просева, окончательного смешивания, таблетирования и нанесения покрытия. Предварительную смесь получают в две стадии. На первой стадии внутригранулярный моногидрат лактозы, внутригранулярную кроскармеллозу натрия и внутригранулярную микрокристаллическую целлюлозу просеивают для устранения комков и загружают в смеситель. Протирание может быть выполнено способами, известными специалистам в данной области техники, такими как пропускание материала через сито с размером отверстий 1,0 мм, например, с применением вибрационного просеивателя или встроенного просеивателя. Затем в смеситель загружают гемифумаратную Форму A кобиметиниба и перемешивают содержимое смесителя при скорости перемешивания 6 об./мин. в течение 30 минут. На второй стадии внутригранулярный стеарат магния просеивают для устранения комков через сито с размером отверстий 0,5 мм и загружают в смеситель, и перемешивают содержимое при скорости перемешивания 6 об./мин. в течение 8 минут с получением предварительной смеси. В некоторых таких аспектах получают замес предварительной смеси, подходящий для получения 420000 таблеток, при этом предварительная смесь содержит 22,982 кг микрокристаллической целлюлозы, 15,322 кг моногидрата лактозы, 1,008 кг кроскармеллозы натрия и 0,126 кг стеарата магния. Предварительную смесь гранулируют в сухом виде посредством вальцевания, измельчают и просеивают через сито с размером отверстий 1 мм. В некоторых таких аспектах, для активного лекарственного соединения с размером частиц D [v, 0,5] менее 38 мкм, силу вальцевания устанавливают на 2 кН/см с размером щели 5 мм. В некоторых других таких аспектах, для активного лекарственного соединения с размером частиц D [v, 0,5] по меньшей мере 38 мкм, силу вальцевания устанавливают на значение от 2 кН/см до 4 кН/см с размером щели от 4 мм до 5 мм. Готовую смесь получают в две стадии. На первой стадии внегранулярную кроскармеллозу натрия просеивают через сито с размером отверстий 1,0 мм для устранения комков, как описано выше, и смешивают с гранулятом в смесителе. Содержимое смесителя перемешивают при скорости перемешивания 6 об./мин. в течение 10 минут. На второй стадии внегранулярный стеарат магния просеивают через сито с размером отверстий 0,5 мм для устранения комков и загружают в смеситель, и перемешивают содержимое при скорости 6 об./мин. в течение 8 минут с получением готовой смеси. В тех аспектах, в которых получают замес готовой смеси, подходящий для получения 420000 таблеток, количество внегранулярной кроскармеллозы натрия составляет 1,008 кг, и количество внегранулярного стеарата магния составляет 0,63 кг. Готовую смесь прессуют в прессе, таком как ротационный таблеточный пресс, с основной силой прессования от 14 кН до 19 кН, с получением сердцевин таблеток. Сердцевины таблеток покрывают распылением покрывающей суспензии, используя устройство для дражирования, известное в данной области техники. В некоторых таких аспектах, в которых получают замес готовой смеси, подходящий для получения 420000 таблеток, покрывающая суспензия содержит 0,806 кг поливинилового спирта, 0,504 кг диоксида титана, 0,407 кг Macrogol/ПЭГ 3350, 0,298 кг талька и подходящее количество очищенной воды для получения покрывающей суспензии. В некоторых других таких аспектах покрывающая композиция представляет собой Opadry II белый 85F18422. Замес другого размера, отличный от замеса, подходящего для получения 420000 таблеток, может быть получен с применением таких же соотношений ингредиентов.

[0060] Подходящие смесители известны в данной области техники и включают любое устройство, обычно используемое в фармацевтической промышленности для равномерного смешивания двух или более компонентов, включая V-образные смесители, смесители двухконусной конфигурации, бункерные (контейнерные) смесители и смесители с вращающимся барабаном. Комбинация объема смесителя, степени наполнения смесителя, скорости вращения и времени вращения может быть легко определена специалистами в данной области техники с помощью стандартных экспериментов для получения по существу однородной смеси компонентов. Объем смесителя обычно составляет 50 л, 100 л, 200 л, 250 л или более. Выбор степени наполнения смесителя обеспечивает возможность конвекции и трехмерного движения материала, и обычно составляет около 25%, около 30%, около 35%, около 40%, около 50%, около 60% или около 70%, а также их диапазоны, такие как от около 30% до около 60%, от около 45% до около 65%, от 32% до 53% или от 32% до 40%. Время перемешивания обычно составляет 5 минут, 10 минут, 15 минут, 20 минут, 30 минут, 40 минут, 50 минут, 60 минут или более. Скорость вращения обычно составляет, например, 2 об./мин., 3 об./мин., 4 об./мин., 5 об./мин., 6 об./мин., 7 об./мин., 8 об./мин., 9 об./мин. или 10 об./мин.,

[0061] Оборудование для сухой грануляции, измельчения и просева известно в данной области техники и имеется в продаже у многих производителей, включая Gertis, Fitzpatrick® и Fruend-Vector. Такое оборудование обычно обеспечивает возможность регулирования силы вальцевания, ширины зазора, скорости вальцов и скорости подачи. Поверхности вальцов могут быть гладкими, с насечкой, или одна поверхность валка может быть гладкой, а другая поверхность валка может быть с насечкой. В любом из указанных различных аспектов, предварительную смесь загружают в загрузочный бункер роликового пресса. Вальцевание осуществляют при определенной силе и размере зазора, и процесс предпочтительно проводят при регулировании зазора. Полученные ленты измельчают, пропуская через сито, с получением гранул. В некоторых аспектах настоящего описания сито является единым целым с мельницей. Размер зазора обычно составляет около 2 мм, около 3 мм, около 4 мм или около 5 мм, и диапазоны между ними, например, от около 2 мм до около 5 мм, от около 2 мм до около 4 мм, от около 3 мм до около 5 мм или от около 4 мм до около 5 мм. Сила вальцевания обычно составляет около 1 кН/см, около 2 кН/см, около 3 кН/см, около 4 кН/см, около 5 кН/см, около 6 кН/см, около 7 кН или около 8 кН/см, и диапазоны между ними, например, от около 1 кН/см до около 8 кН/см, от около 2 кН/см до около 5 кН/см или от около 2 кН/см до около 4 кН/см. Размер отверстий измельчающего сита обычно составляет 0,5 мм, 0,75 мм, 1,0 мм, 1,25 мм, 1,5 мм, 1,75 мм, 2,0 мм, 2,25 мм или 2,5 мм, и диапазоны между ними, например, от около 0,5 мм до около 2,5 мм, от около 0,5 мм до около 2,0 мм, от около 0,5 мм до около 1,5 мм, от около 0,5 мм до около 1,25 мм, от около 0,75 мм до около 2,5 мм, от около 0,75 мм до около 2,0 мм, от около 0,75 мм до около 1,5 мм, от около 0,75 мм до около 1,25 мм. В некоторых конкретных аспектах настоящего описания используют измельчающее сито с размером отверстий 1,0 мм.

[0062] Подходящие таблеточные прессы известны в данной области техники и имеются в продаже, например, у компаний Riva-Piccola, Fette, Bosch Packaging Technology, GEA и Natoli Engineering Company. В целом, каждую таблетку получают прессованием гранул в форме из закаленной стали. Форма имеет форму диска с отверстием, вырезанным в ее центре. Порошок прессуют в центре формы с помощью двух пуансонов из закаленной стали, которые входят в верхнюю и нижнюю часть формы, формируя таблетку. Прессование таблетки может быть выполнено в две стадии, причем первая стадия предварительного прессования включает набивание порошка и небольшое уплотнение смеси перед применением основной силы прессования для формирования таблетки. После прессования таблетку выталкивают из формы. В некоторых аспектах настоящего описания сила прессования составляет около 5 кН, около 6 кН, около 7 кН, около 8 кН, около 9 кН, около 10 кН, около 11 кН, около 12 кН, около 13 кН, около 14 кН, около 15 кН, около 16 кН, около 17 кН, около 18 кН, около 19 кН или около 20 кН, и диапазоны между ними, например, от около 5 кН до около 20 кН, от около 14 кН до около 19 кН, от около 14 кН до около 18 кН или от около 8 кН до около 13 кН. В некоторых аспектах настоящего описания таблетка, содержащая около 60 мг активного лекарственного соединения, может быть получена при силе прессования от около 14 кН до около 18 кН. В других аспектах настоящего описания таблетка, содержащая около 20 мг активного лекарственного соединения, может быть получена при силе прессования от около 8 кН до около 13 кН.

[0063] В некоторых аспектах сердцевина таблетки содержит компоненты и имеет диапазоны концентраций в % масс., представленные в таблице A.

Таблица А

Компонент	1ый диапазон	2ой диапазон	3ий диапазон
Активное лекарственное соединение	5-35%	10-30%	15-25%
Наполнитель	60-78%	65-78%	70-78%
Разрыхлитель	1-7%	2-6%	3-5%
Смазывающее вещество	0,5-5%	1-4%	1-3%
Связующее вещество (необязательное)	0-10%	0-8%	0-6%

[0064] В некоторых аспектах настоящего описания сердцевина таблетки содержит компоненты и имеет диапазоны концентраций в % масс., представленные в таблице B, для таблетки, содержащей 20 мг активного лекарственного соединения. Для таблеток, содержащих отличное от 20 мг количество активного лекарственного соединения, например, 40 мг или 60 мг, соотношения различных компонентов, описанных ниже для таблеток по 20 мг, сохраняют.

Таблица В

Компонент	1ый диапазон	2ой диапазон	3ий диапазон
Активное лекарственное соединение	17,5-18,5%	17,5-18,5%	17,5-18,5%
Наполнитель	60-78%	65-78%	70-78%
Разрыхлитель	1-7%	2-6%	3-5%
Смазывающее вещество	0,5-5%	1-4%	1-3%
Связующее вещество (необязательное)	0-10%	0-8%	0-6%

[0065] В некоторых аспектах настоящего описания сердцевина таблетки содержит компоненты и имеет диапазоны концентраций в % масс., представленные в таблице C, для таблетки, содержащей 20 мг активного лекарственного соединения.

Таблица C

Компонент	1ый диапазон	2 ой диапазон	3 ий диапазон
Полиморфная Форма A гемифумарата кобиметиниба	17,5-18,5%	17,5-18,5%	17,5-18,5%
MCC	36-47%	39-47%	42-47%
Моногидрат лактозы	24-31%	26-31%	38-47%
Кроскармеллоза натрия	1-7%	2-6%	3-5%
Стеарат магния	0,5-5%	1-4%	1-3%
Связующее вещество (необязательное)	0-10%	0-8%	0-6%

[0066] В некоторых других аспектах настоящего описания сердцевины таблеток содержат компоненты и имеют концентрации в %,масс. представленные в таблице D, для таблетки, содержащей 20 мг активного лекарственного соединения.

Таблица D

Компонент	1ая Таблетка	2 ая Таблетка
Полиморфная Форма A гемифумарата кобиметиниба	18,5%	18,5%
MCC	24,67%	45,6%
Моногидрат лактозы	48,33%	30,4%
Кроскармеллоза натрия Внутригранулярная Внегранулярная	1% 1%	2% 2%
Стеарат магния Внутригранулярный Внегранулярный	0,375% 1,125%	0,25% 1,25%
Коповидон	5%	0%

[0067] В некоторых других аспектах настоящего описания сердцевины таблеток с покрытием содержат компоненты и имеют концентрации в % масс., представленные в таблице E, для таблетки, содержащей 20 мг активного лекарственного соединения. Компоненты и концентрации в % масс. композиции пленочного покрытия указаны в таблице F.

Таблица Е

Компонент	1ая таблетка	2ая таблетка
Полиморфная Форма A гемифумарата кобиметиниба	17,96%	17,79%
MCC	23,95%	43,85%
Моногидрат лактозы	46,92%	29,23%
Кроскармеллоза натрия Внутригранулярная Внегранулярная	0,97% 0,97%	1,92% 1,92%
Стеарат магния Внутригранулярный Внегранулярный	0,36% 1,09%	0,24% 1,21%
Коповидон	4,85%	0%
Пленочное покрытие	2,91%	3,85%

Таблица F

Компонент	Концентрация
Поливиниловый спирт	40%
Диоксид титана	25%
Macrogol/ПЭГ 3350	20,2%
Тальк	14,8%

Способы лечения

[0068] Другой аспект настоящего описания относится к способам лечения раковых заболеваний, включающим введение субъекту, нуждающемуся в этом, кристаллической фумаратной соли Соединения I. В конкретном варианте реализации кристаллическая фумаратная соль Соединения I представляет собой Форму A. Вводимое количество кристаллической фумаратной соли Соединения I может быть терапевтически эффективным количеством.

[0069] В другом аспекте настоящего описания способ лечения может быть осуществлен на практике посредством введения пациенту, нуждающемуся в этом, фармацевтической композиции, содержащей кристаллическую фумаратную соль Соединения I, как описано выше, и фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество. Другой аспект настоящего описания относится к способам лечения рака, как описано выше, где рак, подлежащий лечению, представляет собой меланому (включая BRAF V600 мутантную меланому), рак молочной железы (включая трижды негативный рак молочной железы), рак толстой и прямой кишок (включая KRAS мутантный рак толстой и прямой кишок), немелкоклеточный рак легких, острый миелоидный лейкоз и рак поджелудочной железы.

[0070] Ингибиторы BRAF используют для лечения меланомы, и вемурафениб является ингибитором BRAF, который в настоящее время используют для лечения меланомы. Следовательно, другой аспект настоящего описания относится к способу лечения меланомы у субъекта, включающему введение субъекту, нуждающемуся в лечении, терапевтически эффективного количества кристаллической фумаратной соли Соединения I, отдельно или в комбинации с вемурафенибом. В одном варианте реализации кристаллическую фумаратную соль Соединения I вводят до или после, или одновременно с вемурафенибом. В другом варианте реализации меланома представляет собой BRAF V600 мутантную меланому. В конкретном варианте реализации кристаллическую фумаратную соль Соединения I вводят пациенту с нерезектабельной или метастатической меланомой с мутацией BRAF V600. Другой аспект настоящего описания относится к способу лечения BRAF V600 мутантной меланомы у субъекта, включающему введение субъекту, нуждающемуся в лечении, терапевтически эффективного количества кристаллической фумаратной соли Соединения I, отдельно или в комбинации с вемурафенибом. В одном варианте реализации кристаллическую фумаратную соль Соединения I вводят до или после, или одновременно с вемурафенибом. В конкретном варианте реализации кристаллическую фумаратную соль Соединения I вводят в комбинации с Zelboraf^® (вемурафенибом) для лечения пациентов с нерезектабельной или метастатической меланомой с мутацией BRAF V600.

[0071] Ингибиторы тирозинкиназы используют для лечения немелкоклеточного рака легких (NSCLC). Гефитиниб и эрлотиниб являются ингибиторами ангиогенеза, которые направлены на тирозинкиназу рецепторов эпидермального фактора роста, и которые в настоящее время используют для лечения NSCLC. Другие соединения находятся на стадии клинической разработки для лечения немелкоклеточного рака легких, такие как MEHD7945A. Следовательно, другой аспект настоящего описания относится к способу лечения немелкоклеточного рака легких (NSCLC) у субъекта, включающему введение субъекту, нуждающемуся в лечении, терапевтически эффективного количества кристаллической фумаратной соли Соединения I, необязательно в комбинации с эрлотинибом или гефитинибом. В другом варианте реализации используют комбинацию с эрлотинибом. В другом варианте реализации используют комбинацию с MEHD7945A.

[0072] Другой аспект настоящего описания относится к способу лечения заболеваний или расстройств, связанных с неконтролируемой, патологической и/или нежелательной клеточной активностью, включающему введение субъекту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества кристаллической фумаратной соли Соединения I, обозначенной как Форма A. Указанный способ лечения может быть осуществлен на практике посредством введения фармацевтической композиции кристаллической фумаратной соли Соединения I, обозначенной как Форма A.

[0073] Другой аспект настоящего описания относится к применению кристаллической фумаратной соли Соединения I, обозначенной как Форма A, в соответствии с любым из вышеуказанных вариантов реализации для производства лекарственного средства для лечения заболевания или расстройства, описанного выше. Фармацевтическая композиция может представлять собой любую фармацевтическую форму, которая содержит кристаллическую фумаратную соль Соединения I. Фармацевтическая композиция может представлять собой, например, таблетку, капсулу, средство для местного или трансдермального введения. Фармацевтические композиции обычно содержат от около 1% до около 99% по отношению к массе активного соединения(-ий) или кристаллической формы активного соединения(-ий) и от 99% до 1% по отношению к массе одного или более подходящих фармацевтических вспомогательных веществ. В одном примере композиция содержит от около 5% до около 75% по отношению к массе активного соединения, а остальное представляют собой подходящие фармацевтические вспомогательные вещества, как описано ниже.

[0074] «Терапевтически эффективное» количество кристаллической фумаратной соли Соединения I относится к количеству, достаточному для лечения пациента, страдающего от рака. Терапевтически эффективное количество согласно настоящему описанию представляет собой количество, терапевтически пригодное для лечения или предупреждения болезненных состояний и расстройств, описанных в настоящем документе. Кристаллическая фумаратная соль Соединения I, описанная в настоящем документе, обладает терапевтической активностью для ингибирования, регуляции и/или модуляции сигнальной трансдукции киназ, в частности, MEK 1/2, как описано в WO 2007/044515.

[0075] Фактическое количество, необходимое для лечения любого конкретного пациента, зависит от множества факторов, включая болезненное состояние, подлежащее лечению, и его тяжесть; конкретную используемую фармацевтическую композицию; возраст, массу тела, общее состояние здоровья, пол и рацион пациента; способ введения; время введения; путь введения; и скорость экскреции активного соединения(-ий) или кристаллической формы активного соединения(-ий) согласно настоящему описанию; продолжительность лечения; любые лекарства, используемые в комбинации или параллельно с конкретным используемым соединением; и другие подобные факторы, хорошо известные в области медицины. Такие факторы описаны в публикации Goodman and Gilman ʺThe Pharmacological Basis of Therapeuticsʺ, десятое издание, A. Gilman, J. Hardman and L. Limbird, ред., McGraw-Hill Press, 155-173, 2001, включенной в настоящий документ посредством ссылки. Активное соединение(-ия) или кристаллическая форма активного соединения(-ий) согласно настоящему описанию и фармацевтические композиции, содержащие их, могут быть использованы в комбинации с противораковыми или другими агентами, которые обычно вводят пациенту, которого лечат от рака. Они также могут быть составлены в одну композицию с одним или более такими агентами в виде одной фармацевтической композиции.

[0076] В зависимости от типа фармацевтической композиции, фармацевтически приемлемые вспомогательные вещества могут быть выбраны из любого одного или из комбинации вспомогательных веществ, известных в данной области техники. Выбор фармацевтически приемлемых вспомогательных веществ отчасти зависит от предполагаемого способа введения. Для фармацевтической композиции согласно настоящему описанию, то есть для фармацевтической композиции активного соединения(-ий) или кристаллической формы активного соединения(-ий) согласно настоящему изобретению, вспомогательное вещество следует выбирать так, чтобы по существу сохранить конкретную форму активного соединения(-ий), будь то кристаллическая или некристаллическая форма. Другими словами, любые вспомогательные вещества не должна существенно изменять форму активного соединения(-ий). Кроме того, носитель не должен быть несовместим с указанной формой активного соединения(-ий), например, вызывая нежелательный биологический эффект или иное неблагоприятное взаимодействие с любым другим компонентом(-ами) фармацевтической композиции.

[0077] Фармацевтические композиции согласно настоящему описанию могут быть получены способами, известными в области составления фармацевтических композиций, например, см., Remington, Pharmaceutical Sciences, 18ое изд., (Mack Publishing Company, Истон, штат Пенсильвания, 1990). В твердых лекарственных формах Соединение I смешивают с по меньшей мере одним фармацевтически приемлемым вспомогательным веществом, таким как цитрат натрия или фосфат дикальция или (а) с другими вспомогательными веществами, такими как наполнители или сухие разбавители, например, крахмалы, лактоза, сахароза, глюкоза, маннит и кремниевая кислота; (b) со связующими агентами, такими как, например, производные целлюлозы, крахмал, альгинаты, желатин, поливинилпирролидон, сахароза и гуммиарабик; (с) с увлажнителями, такими как, например, глицерин; (d) с разрыхлителями, такими как, например, агар-агар, карбонат кальция, картофельный или тапиоковый крахмал, альгиновая кислота, кроскармеллоза натрия, сложные силикаты и карбонат натрия; (e) с замедлителями растворения, такими как, например, парафин; (f) с ускорителями абсорбции, такими как, например, четвертичные аммониевые соединения; (g) со смачивающими агентами, такими как, например, цетиловый спирт, моностеарат глицерина, стеарат магния и т.п.; (h) с адсорбентами, такими как, например, каолин и бентонит; и (i) со смазывающими агентами, такими как, например, тальк, стеарат кальция, стеарат магния, твердые полиэтиленгликоли, лаурилсульфат натрия, или их смесями. В случае капсул, таблеток и пилюль лекарственные формы могут также содержать буферные агенты.

[0078] Фармацевтически приемлемые вспомогательные вещества, обычно называемые адъювантами, известные в области составления фармацевтических композиций, также могут быть использованы в фармацевтических композициях согласно настоящему описанию. Они включают, но не ограничиваются ими, консерванты, увлажнители, суспендирующие агенты, подсластители, ароматизаторы, отдушки, эмульгаторы и средства дозирования. Заражение микроорганизмами можно предотвратить посредством добавления различных антибактериальных и противогрибковых агентов, например, парабенов, хлорбутанола, фенола, сорбиновой кислоты и т.п. Также может быть необходимо включить изотонические агенты, например, сахара, хлорид натрия и т.п. При необходимости, фармацевтическая композиция согласно настоящему описанию может также содержать небольшие количества вспомогательных веществ, таких как увлажняющие или эмульгирующие агенты, рН буферные агенты и антиоксиданты, такие как, например, лимонная кислота, сорбитмонолаурат, триэтаноламина олеат и бутилгидрокситолуол.

[0079] Твердые лекарственные формы, описанные выше, могут быть получены с покрытиями и оболочками, такими как энтеросолюбильные покрытия и другие известные в данной области. Они могут содержать контрастные агенты, и также могут иметь такой состав, что активное соединение или соединения высвобождаются в определенной части кишечника замедленным образом. Примеры залитых композиций, которые могут быть использованы, представляют собой полимерные вещества и воски. Активные соединения могут также быть в микроинкапсулированной форме, если это уместно, с одним или несколькими из вышеупомянутых вспомогательных веществ.

[0080] Суспензии, помимо активных соединений, могут содержать суспендирующие агенты, как, например, этоксилированные изостеариловые спирты, полиоксиэтиленсорбит и сложные эфиры сорбита, микрокристаллическая целлюлоза, метагидроксид алюминия, бентонит, агар-агар и трагакант или смеси этих соединений, и т.п.

[0081] Композиции для ректального введения представляют собой, например, суппозитории, которые могут быть получены смешиванием активного соединения(-ий) или кристаллической формы активного соединения(-ий), например, с подходящими не раздражающими вспомогательными веществами или носителями, такими как масло какао, полиэтиленгликоль или воск для суппозиториев, которые являются твердыми при обычных температурах, но жидкими при температуре тела, и поэтому плавятся в соответствующей полости тела и высвобождают активный компонент.

[0082] Поскольку активное соединение(-ия) или кристаллическая форма активного соединения(-ий) сохраняется в процессе их получения, то твердые лекарственные формы являются предпочтительными для фармацевтической композиции согласно настоящему описанию. Особенно предпочтительны твердые лекарственные формы для перорального введения, которые включают капсулы, таблетки, пилюли, порошки и гранулы. В таких твердых лекарственных формах активное соединение(-ия) смешано с по меньшей мере одним инертным, фармацевтически приемлемым вспомогательным веществом. Введение активного соединения(-ий) или кристаллической формы активного соединения(-ий) в чистой форме или в соответствующей фармацевтической композиции может быть осуществлено любым из приемлемых способов введения, или с помощью агентов, служащих для тех же целей. Так, введение может быть, например, пероральным, назальным, парентеральным (внутривенным, внутримышечным или подкожным), местным, трансдермальным, внутривагинальным, интравезикальным, интрацистернальным или ректальным, в форме твердого вещества, полутвердого вещества, лиофилизированного порошка или в жидких лекарственных формах, таких как, например, таблетки, суппозитории, пилюли, мягкие эластичные или твердые желатиновые капсулы, порошки, растворы, суспензии или аэрозоли, или т.п., предпочтительно в единичных лекарственных формах, подходящих для простого введения точных доз. Одним из предпочтительных способов введения является пероральное введение с использованием удобной схемы введения, которую можно регулировать в соответствии с тяжестью состояния болезни, подлежащего лечению.

Получение (S)-[3,4-дифтор-2-(2-фтор-4-йодфениламино)фенил][3-гидрокси-3-(пиперидин-2-ил)азетидин-1-ил]метанона (Соединение I)

[0083] Соединение I может быть получено так, как описано в публикации WO 2014/059422, полное содержание которой включено в настоящий документ посредством ссылки, и как показано, в общих чертах, на Схеме 1. Взаимодействие имеющегося в продаже (3S,5R,8aS)-3-фенилгексагидрооксазоло[3,2- a]пиридинкарбонитрила VII с имеющимся в продаже трет-бутил-3-оксо-1-азетидинкарбоксилатом VIIa в присутствии основания приводит к получению соединения VI. Соединение VI обрабатывают гидридным восстановительным агентом, таким как цианоборгидрид натрия, в присутствии кислоты, затем обрабатывают водным раствором гидроксида натрия с получением соединения V. Снятие защиты с соединения V с помощью кислоты приводит к получению соединения IV, которое связывают с хлорангидридом кислоты IVa в присутствии каталитического количества пиридина с получением соединения III. Гидрирование соединения III обеспечивает получение пиперидинового производного II. Наконец, связывание соединения II с 2-фтор-4-йоданилином IIa обеспечивает получение требуемого соединения.

Схема 1

Общие способы получения кристаллических форм

[0084] Кристаллические формы могут быть получены различными способами, включая, но не ограничиваясь ими, например, кристаллизацию или перекристаллизацию из подходящей смеси растворителей; сублимацию; выращивание из расплава; твердофазную трансформацию из другой фазы; кристаллизацию из сверхкритической жидкости; и струйное распыление. Технологии кристаллизации или перекристаллизации кристаллических форм из смесей растворителей включают, но не ограничиваются ими, например, выпаривание растворителя; снижение температуры смеси растворителей; внесение кристалла затравки в пересыщенный раствор соединения и/или его соли в смеси растворителей; внесение кристалла затравки в пересыщенный раствор соединения и/или его соли в смеси растворителей; сушку смеси растворителей замораживанием; и добавление антирастворителей (осадителей) в смесь растворителей. Для получения кристаллических форм, включая полиморфы, могут быть использованы высокопроизводительные технологии кристаллизации.

[0085] Кристаллы лекарственных соединений, включая полиморфы, способы получения и характеристики кристаллов лекарственных форм описаны в публикациях Solid-State Chemistry of Drugs, S.R. Byrn, R.R. Pfeiffer, и J.G. Stowell, 2^ое издание, SSCI, Уэст-Лафейетт, штат Индиана (1999).

[0086] В технологии кристаллизации, в которой используют растворитель, растворитель(-и) обычно выбирают на основании одного или более факторов, включая, но не ограничиваясь этим, например, растворимость соединения; используемую технологию кристаллизации; и давление паров растворителя. Могут быть использованы комбинации растворителей. Например, соединение может быть солюбилизировано в первом растворителе с получением раствора, к которому затем добавляют антирастворитель для снижения растворимости соединения в растворе и осаждения образующихся кристаллов. Антирастворитель представляет собой растворитель, в котором соединение слаборастворимо.

[0087] В одном способе, который может быть использован для получения кристаллов, фумаратная соль Соединения I может быть суспендирована и/или перемешана в подходящем растворителе с получением суспензии, которая может быть нагрета для ускорения растворения. Термин «суспензия» в данном контексте означает насыщенный раствор соединения, причем такой раствор может содержать дополнительное количество соединения для обеспечения гетерогенной смеси соединения и растворителя при данной температуре.

[0088] К любой кристаллизационной смеси могут быть добавлены затравочные кристаллы для ускорения кристаллизации. Внесение затравки может быть использовано для контролирования роста конкретного полиморфа и/или для контролирования распределения частиц по размеру кристаллического продукта. Соответственно, расчет необходимого количества затравочных кристаллов зависит от размера доступной затравки и от требуемого размера средней частицы продукта, как описано, например, в публикации ʺProgrammed Cooling Batch Crystallizers,ʺ J.W. Mullin and J. Nyvlt, Chemical Engineering Science, 1971, 26, 3690377. В целом, для эффективного контролирования роста кристаллов в смеси необходимы затравки малого размера. Затравки малого размера могут быть получены просеиванием, измельчением или микронизацией крупных кристаллов или микрокристаллизацией раствора. При измельчении или микронизации кристаллов следует соблюдать осторожность во избежание изменения кристалличности требуемой кристаллической формы (т.е. превращения в аморфную или другую полиморфную форму).

[0089] Охлажденная кристаллизационная смесь может быть отфильтрована под вакуумом, а выделенный твердый продукт может быть промыт подходящим растворителем, таким как, например, холодный растворитель для перекристаллизации. После промывания продукт может быть высушен под потоком азота с получением требуемой кристаллической формы. Продукт можно анализировать подходящими спектроскопическими или аналитическими приемами, включая, но не ограничиваясь ими, например, дифференциальную сканирующую калориметрию (ДСК); рентгеновскую порошковую дифракцию (ПРД); и термогравиметрический анализ (ТГА) для подтверждения образования определенной кристаллической формы соединения. Готовая кристаллическая форма может быть получена с практическим выходом более чем около 70% масс. относительно массы соединения, первоначально использованного для кристаллизации, и предпочтительно с практическим выходом более чем около 90% масс.. Необязательно, продукт можно протереть посредством совместного измельчения или пропускания через ячеечное сито.

[0090] Признаки и преимущества настоящего описания могут быть более понятны специалистам в данной области техники при прочтении следующего подробного описания. Следует понимать, что некоторые признаки настоящего изобретения, которые для ясности описаны выше и ниже в контексте отдельных вариантов реализации, также могут быть комбинированы с образованием одного варианта реализации. И наоборот, различные признаки настоящего описания, которые для краткости описаны в контексте одного варианта реализации, также могут быть комбинированы с образованием их субкомбинаций. Настоящее описание дополнительно иллюстрировано следующими примерами, которые не следует толковать как ограничивающие настоящее изобретение в его рамках или общей идее конкретными способами, описанными в них.

[0091] Определения, встречающиеся далее, имеют преимущество над определениями, представленными в любых патентах, патентных заявках и/или публикациях патентных заявок, включенных в настоящий документ посредством ссылки. Все измерения допускают экспериментальную погрешность и входят в общую идею настоящего изобретения.

[0092] В данном контексте «аморфный» относится к твердой форме молекулы и/или иона, которая не является кристаллической. Аморфное твердое вещество не имеет определенной диаграммы рентгеновской дифракции с острым максимумом.

[0093] В данном контексте термин «по существу чистый» означает, что Форма A содержит по меньшей мере около 90% масс.по отношению к общей массе такой кристаллической формы. Термин «по меньшей мере около 90% масс.», не предполагающий ограничения применимости доктрины эквивалентов до границ объема формулы изобретения, включает, но не ограничивается этим, например, около 90, около 91, около 92, около 93, около 94, около 95, около 96, около 97, около 98, около 99 и около 100% масс. по отношению к массе указанной кристаллической формы. Остальная часть Формы A может содержать другую форму(-ы) фумаратной соли Соединения I и/или реакционные примеси и/или технологические примеси, которые образуются, например, при получении кристаллической формы. Присутствие реакционных примесей и/или технологических примесей можно определить аналитическими приемами, известными в данной области техники, такими как, например, хроматография, спектроскопия ядерного магнитного резонанса, масс-спектроскопия и/или инфракрасная спектроскопия.

[0094] В другом аспекте настоящее изобретение относится к способу получения кристаллической фумаратной соли Соединения I, обозначенной как Форма A, включающему:

добавление фумаровой кислоты, растворенной в растворителе, к смеси Соединения I, растворенного в растворителе, с получением кристаллической фумаратной соли Соединения I, обозначенной как Форма A; и

сбор полученных кристаллов кристаллической фумаратной соли Соединения I, обозначенной как Форма A.

[0095] В данном варианте реализации используемые растворители представляют собой полярные растворители. В зависимости от растворимости фумаровой кислоты и/или Соединения I в конкретном растворителе, для полного растворения может потребоваться небольшое нагревание (40-80 °С). Например, фумаровая кислота может быть растворена в полярном протонном растворителе, таком как спирт (например, метанол, этанол, н-пропанол или изопропанол, или т.п.), отдельно или в виде смеси с одним или более другими растворителями, или с водой. Альтернативно, фумаровая кислота может быть растворена в апротонном растворителе, таком как тетрагидрофуран, дихлорметан или т.п. Аналогично, Соединение I может быть растворено в дихлорметане или в полярном протонном растворителе, таком как спирт (например, метанол, этанол, н-пропанол или изопропанол, или т.п.), отдельно или в виде смеси с одним или более другими растворителями, или с водой. Затем раствор фумаровой кислоты добавляют к раствору Соединения I и оставляют полученную смесь стоять до образования осадка. В некоторых случаях для ускорения образования кристаллов полученную смесь охлаждают или добавляют затравочный кристалл. В других случаях для ускорения образования кристаллов используют антирастворитель, такой как неполярный углеводородный растворитель, такой как гептан или т.п.

[0096] Так, в другом аспекте настоящее изобретение относится к способу получения кристаллической фумаратной соли Соединения I, обозначенной как Форма A, включающему:

растворение Соединения I в первом растворителе с получением первой смеси;

растворение фумаровой кислоты во втором растворителе с получением второй смеси;

добавление первой смеси ко второй смеси при охлаждении с получением кристаллов в виде осадка; и

сбор кристаллов кристаллической фумаратной соли Соединения I, обозначенной как Форма A.

[0097] Как и в предшествующем аспекте, используемые растворители представляют собой полярные растворители. В конкретном варианте реализации первый и второй растворители являются одинаковыми и представляют собой смесь изопропанола и воды. В одном варианте реализации отношение изопропанола к воде составляет 9:1. В другом варианте реализации отношение изопропанола к воде составляет 4:1. В другом варианте реализации отношение изопропанола к воде составляет 85:15. Как правило, используют около 7-11 массовых эквивалентов первого растворителя для каждого одного массового эквивалента Соединения I, и используют 2,0-3,0 массовых эквивалентов второго растворителя для каждого одного массового эквивалента фумаровой кислоты. Более конкретно, используют около 8-10 массовых эквивалентов первого растворителя для каждого одного массового эквивалента Соединения I, и используют 2,4-2,7 массовых эквивалентов второго растворителя для каждого одного массового эквивалента фумаровой кислоты.

[0098] Одна молекула фумаровой кислоты образует соль с двумя молекулами Соединения I с образованием гемифумаратной соли Соединения I. Следовательно, используют около 0,5 эквивалента фумаровой кислоты для каждого одного эквивалента Соединения I. Обычно используют 0,51-0,53 эквивалента для каждого одного эквивалента Соединения I.

[0099] В типичном примере, перед добавлением фумаровой кислоты, Соединение I, растворенное в первом растворителе, фильтруют, например, через активированный уголь. Затем фумаровую кислоту, растворенную во втором растворителе, медленно добавляют к раствору Соединения I в первом растворе при небольшом нагревании при температуре около 40-90 °С; более предпочтительно 60-85 °С; и более предпочтительно 75-80 °С. В некоторых случаях к смеси Соединения I и фумаровой кислоты в растворителе из пропанола/воды могут быть добавлены затравочные кристаллы. Для завершения процесса кристаллизации смесь может быть охлаждена до около 20 °С. Полученные кристаллы выделяют фильтрацией.

[00100] В дополнительном аспекте настоящее изобретение относится к способу получения кристаллической фумаратной соли Соединения I, обозначенной как Форма A, включающему:

добавление фумаровой кислоты, растворенной в растворителе, к смеси Соединения I, растворенного в растворителе, с получением кристаллической фумаратной соли Соединения I, обозначенной как Форма A, в виде осадка.

[00101] В одном варианте реализации данного аспекта указанный способ дополнительно включает добавление к указанной смеси затравочных кристаллов фумаратной соли Соединения I, обозначенной как Форма A.

[00102] В дополнительном варианте реализации настоящее изобретение относится к способу получения кристаллической фумаратной соли Соединения I, обозначенной как Форма A, включающему растворение аморфной формы Соединения I в растворителе при небольшом нагревании при 65-80 °С с последующим охлаждением полученной смеси до образования кристаллов. В одном варианте реализации к смеси могут быть добавлены затравочные кристаллы. В другом варианте реализации смесь может быть охлаждена до около 20 °С. Затем полученные кристаллы выделяют фильтрацией.

Варианты реализации изобретения

[00103] Настоящее изобретение характеризуется следующими неограничивающими вариантами реализации.

[00104] Вариант реализации 1. Кристаллическая фумаратная соль (S)-[3,4-дифтор-2-(2-фтор-4-йодфениламино)фенил][3-гидрокси-3-(пиперидин-2-ил)азетидин-1-ил]метанона, обозначенная как Форма A.

[00105] Вариант реализации 2. Кристаллическая фумаратная соль (S)-[3,4-дифтор-2-(2-фтор-4-йодфениламино)фенил][3-гидрокси-3-(пиперидин-2-ил)азетидин-1-ил]метанона в соответствии с вариантом реализации 1, обозначенная как Форма A, отличающаяся тем, что указанная соль характеризуется по меньшей мере одним из следующих:

(i) ¹H ЯМР спектр в d₆ ДМСО, по существу такой, как показано на Фиг. 2;

(ii) 13C ЯМР спектр в d₆ ДМСО, по существу такой, как показано на Фиг. 3;

(iii) твердофазный ¹³C ЯМР спектр с тремя или более пиками, выбранными из 175,3, 173,6, 117,5, 155,5 и 153,5, ± 0,2 м.д.;

(iv) твердофазный ¹³C ЯМР спектр, по существу такой, как показано на Фиг. 4;

(v) диаграмма порошковой рентгеновской дифракции (CuKα λ=1,5418Å), содержащая три или более значений 2θ, выбранных из 4,6, 12,1, 13,2, 13,6 и 14,5 ±0,2 °2θ при проведении измерений кристаллической формы при комнатной температуре;

(vi) диаграмма порошковой рентгеновской дифракции (ПРД), по существу соответствующая диаграмме, представленной на Фиг. 10; и

(vii) термограмма дифференциальной сканирующей калориметрии, по существу соответствующая Фиг. 8.

[00106] Вариант реализации 3. Кристаллическая фумаратная соль (S)-[3,4-дифтор-2-(2-фтор-4-йодфениламино)фенил][3-гидрокси-3-(пиперидин-2-ил)азетидин-1-ил]метанона в соответствии с вариантом реализации 1, обозначенная как Форма A, отличающаяся тем, что указанная соль характеризуется твердофазным ¹³C ЯМР спектром с тремя или более пиками, выбранными из 175,3, 173,6, 117,5, 155,5 и 153,5 ± 0,2 м.д.

[00107] Вариант реализации 4. Кристаллическая фумаратная соль (S)-[3,4-дифтор-2-(2-фтор-4-йодфениламино)фенил][3-гидрокси-3-(пиперидин-2-ил)азетидин-1-ил]метанона в соответствии с вариантом реализации 1, обозначенная как Форма A, отличающаяся тем, что указанная соль характеризуется диаграммой порошковой рентгеновской дифракции (CuKα λ=1,5418Å), содержащей три или более значений 2θ, выбранных из 4,6, 12,1, 13,2, 13,6 и 14,5 ± 0,2 °2θ при измерении кристаллической формы при комнатной температуре.

[00108] Вариант реализации 5. Кристаллическая фумаратная соль (S)-[3,4-дифтор-2-(2-фтор-4-йодфениламино)фенил][3-гидрокси-3-(пиперидин-2-ил)азетидин-1-ил]метанона в соответствии с вариантами реализации 1-4, отличающаяся тем, что указанная соль содержит по меньшей мере 90% масс. Формы A по массе указанной соли.

[00109] Вариант реализации 6. Фармацевтическая композиция, содержащая кристаллическую фумаратную соль (S)-[3,4-дифтор-2-(2-фтор-4-йодфениламино)фенил][3-гидрокси-3-(пиперидин-2-ил)азетидин-1-ил]метанона в соответствии с любым из вариантов реализации 1-3, обозначенную как Форма A; и фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество.

[00110] Вариант реализации 7. Применение кристаллической фумаратной соли (S)-[3,4-дифтор-2-(2-фтор-4-йодфениламино)фенил][3-гидрокси-3-(пиперидин-2-ил)азетидин-1-ил]метанона в соответствии с любым из вариантов реализации 1-5, обозначенной как Форма A, для производства лекарственного средства для лечения рака.

[00111] Вариант реализации 8. Кристаллическая фумаратная соль (S)-[3,4-дифтор-2-(2-фтор-4-йодфениламино)фенил][3-гидрокси-3-(пиперидин-2-ил)азетидин-1-ил]метанона в соответствии с любым из вариантов реализации 1-5, обозначенная как Форма A, для применения в терапии при лечении рака.

[00112] Вариант реализации 9. Кристаллическая фумаратная соль (S)-[3,4-дифтор-2-(2-фтор-4-йодфениламино)фенил][3-гидрокси-3-(пиперидин-2-ил)азетидин-1-ил]метанона, обозначенная как Форма A, для применения в качестве лекарственного средства для лечения рака, выбранного из группы, состоящей из меланомы (включая BRAF V600 мутантную меланому), рака молочной железы (включая трижды негативный рак молочной железы), рака толстой и прямой кишок (включая KRAS мутантный рак толстой и прямой кишок), немелкоклеточного рака легких, острого миелоидного лейкоза и рака поджелудочной железы.

[00113] Вариант реализации 10. Применение в соответствии с вариантом реализации 9, отличающееся тем, что рак представляет собой BRAF V600 мутантную меланому.

[00114] Вариант реализации 11. Кристаллическая фумаратная соль (S)-[3,4-дифтор-2-(2-фтор-4-йодфениламино)фенил][3-гидрокси-3-(пиперидин-2-ил)азетидин-1-ил]метанона, обозначенная как Форма A, в комбинации с вемурафенибом для применения в качестве лекарственного средства для лечения меланомы.

[00115] Вариант реализации 12. Способ лечения BRAF V600 мутантной меланомы у субъекта, включающий введение субъекту, нуждающемуся в лечении, терапевтически эффективного количества кристаллической фумаратной соли Соединения I, отдельно или в комбинации с вемурафенибом.

[00116] Вариант реализации 13. Способ в соответствии с вариантом реализации 12, отличающийся тем, что кристаллическую фумаратную соль Соединения I вводят до или после, или одновременно с вемурафенибом.

[00117] Вариант реализации 14. Способ получения кристаллической фумаратной соли Соединения I, обозначенной как Форма I, включающий добавление фумаровой кислоты, растворенной в растворителе, к смеси Соединения I, растворенного в растворителе, с получением кристаллической фумаратной соли Соединения I.

[00118] Следующие примеры иллюстрируют объем настоящего изобретения. Следующие примеры и способы получения приведены для более полного понимания и практического осуществления настоящего изобретения специалистами в данной области техники. Их следует толковать не как ограничивающие объем настоящего изобретения, а лишь как иллюстрирующие и демонстрирующие его.

Пример 1

Синтез трет-бутилового эфира 3-((3S,5R,8aS)-5-циано-3-фенилгексагидрооксазоло[3,2-a]пиридин-5-ил)-3-гидроксиазетидин-1-карбоновой кислоты

[00119] Смесь (3S,5R,8aS)-3-фенилгексагидрооксазоло[3,2-a]пиридинкарбонитрила (20,0 г, 87,6 ммоль, 1,0 экв.) и диметилтетрагидропиримидона (DMPU, 11,3 г, 87,6 ммоль, 1,0 экв.) в ТГФ (95,1 мл) перемешивали в течение 10 минут до образования прозрачного раствора. Затем смесь охлаждали до температуры от -70 до -80 °С и добавляли диизопропиламид лития (28% раствор в гептане, ТГФ и этилбензоле) (35,2 г, 92 ммоль, 1,05 экв.) в течение 30 минут, поддерживая внутреннюю температуру от -70 до -80 °С. После завершения добавления смесь перемешивали при температуре от -70 до -80 °С еще 2 часа, затем постепенно вводили раствор трет-бутилового эфира 3-оксоазетидин-1-карбоновой кислоты (16,2 г, 94,6 ммоль, 1,08 экв.) в ТГФ (16,4 г) в течение 30 минут, поддерживая внутреннюю температуру от -70 до -80 °С. После завершения добавления реакционную смесь перемешивали при температуре от -70 до -80 °С в течение 1 часа.

[00120] В отдельной колбе получали раствор хлорида натрия (10,3 г), деионизированной воды (103,0 г) и уксусной кислоты (5,29 г, 87,6 ммоль, 1,0 экв.) и охлаждали до 0 °С. Реакционную смесь постепенно вводили в гасящую смесь в течение 30 минут, поддерживая внутреннюю температуру ниже 10 °С. Колбу с реакционной смесью промывали ТГФ (26,7 г) и объединяли промывочный раствор с гашеной смесью. После энергичного перемешивания в течение 20 минут при 5 °С перемешивание прекращали и оставляли слои разделяться. Нижнюю водную фазу отбрасывали. К органической фазе добавляли этилацетат (61,8 г) и деионизированную воду (68,5 г). После энергичного перемешивания при 5 °С в течение 10 минут перемешивание прекращали, слои оставляли разделяться, и отбрасывали нижнюю водную фазу. Процедуру промывания повторяли еще раз с деионизированной водой (68,5 г).

[00121] Органическую фазу концентрировали при пониженном давлении (температура рубашки около 40-45 °С, давление=200-180 мбар) до общего объема около 120 мл дистиллята, который собирали с получением желтоватого раствора. Вакуум сбрасывали и в течение 10 минут добавляли гептан (102,0 г). Дистилляцию при пониженном давлении продолжали (температура рубашки около 35-40 °С, давление около 250-110 мбар), добавляя гептан (177 г) с такой скоростью, чтобы остаточный объем был постоянным. Через 10 минут перегонки получали густую, пригодную для перемешивания суспензию. Вакуум сбрасывали и в течение 15 минут добавляли изопропанол (10,2 г) при 35 °С. Суспензию нагревали при 45 °С и перемешивали в течение 30 минут. Затем суспензию охлаждали до 0 °С в течение 2 часов и выдерживали при 0 °С в течение 1 часа. Суспензию фильтровали через стеклянный фильтр. Колбу и осадок на фильтре промывали предварительно охлажденным (около 5 °С) гептаном (46,6 г) и сушили влажный осадок на фильтре в течение ночи при 40 °С при пониженном давлении до постоянной массы, с получением указанного в заголовке соединения в виде слегка бежевых кристаллов. Чистота по ВЭЖХ: 91,9% площади. Тпл. (ДСК): экстраполированный пик: 151,80 °C. ¹H-ЯМР (600 МГц, CDCl₃): δ 7,30-7,50 (м, 5 H), 4,17-4,27 (м, 3 H), 3,94-4,01 (м, 2 H), 4,11-4,1 (м, 2 H), 4,09 (д, 1 H), 3,95 (д, 1 H), 3,87 (дд, 1 H), 3,76 (дд, 1 H), 3,54-3,70 (ш, 1 H), 2,85-3,03 (ш, 1 H), 2,18-2,25 (м, 1 H), 2,12 (ш, 1 H), 1,97-2,04 (м, 1 H), 1,85-1,94 (м, 1 H), 1,61-1,79 (м, 3 H), 1,41 (с, 9 H). МС (ЭИ): m/z=400,48 ([M+H]⁺, 100%).

Пример 2

Синтез трет-бутилового эфира 3-гидрокси-3-[(S)-1-((S)-2-гидрокси-1-фенилэтил)пиперидин-2-ил]азетидин-1-карбоновой кислоты

[00122] Смесь трет-бутилового эфира 3-((3S,5R,8aS)-5-циано-3-фенилгексагидрооксазоло[3,2-a]пиридин-5-ил)-3-гидроксиазетидин-1-карбоновой кислоты (12,0 г, 30,0 ммоль, 1,0 экв.) и цианоборгидрида натрия (3,18 г, 50,6 ммоль, 1,68 экв.) в EtOH (70 мл) нагревали до 30 °С и медленно добавляли в течение 2 часов к теплой смеси (70 °C) уксусной кислоты (3,63 мл, 63,5 ммоль, 2,1 экв.) в EtOH (20 мл). Затем полученную смесь перемешивали еще 3 часа при 70-75 °С. После завершения реакции смесь охлаждали до 23 °С и медленно, в течение 30 минут вводили в смесь толуола (100 мл) и водного раствора NaOH (60 г, 10%- масс./масс.) и перемешивали в течение 15 минут. Реакционную колбу промывали гашеной смесью. Слои разделяли и промывали органическую фазу толуолом (30 мл). Объединенные органические фазы концентрировали под вакуумом (200-85 мбар при температуре рубашки 35-40 °С) до получения 80 мл (70,82 г) желтоватого раствора продукта. Чистота по ВЭЖХ: 97,6% площади.

[00123] Для аналитических целей раствор продукта полностью концентрировали в ротационном испарителе, обрабатывали EtOH и снова полностью концентрировали с получением 19,2 г пенистого продукта. Остаток растворяли в смеси этилацетата (30 мл) и MeOH (15 мл) и очищали флэш-хроматографией на 120 г силикагеля, используя этилацетат в качестве элюента. Фракции 3-5 из 6 фракций по 100 мл объединяли и полностью концентрировали под вакуумом в ротационном испарителе с получением 14,6 г бесцветной пены. Полученный остаток снова растворяли в минимальном количестве смеси гептана/этилацетата, 2:1 (об./об.), и очищали флэш-хроматографией на 190 г силикагеля, используя смесь гептана/этилацетата, 2:1 (об./об.), в качестве элюента. После головного погона 700 мл, объединяли десять последующих фракций (всего 800 мл), полностью выпаривали в ротационном испарителе под вакуумом (температура бани 35 °С, давление ≥ 20 мбар) и сушили остаток в течение ночи при 35 °С и под вакуумом до постоянной массы, с получением указанного в заголовке соединения в виде бесцветного твердого вещества. Тпл. (ДСК): экстраполированный пик: 220,9°C (плавление сопровождалось экзотермическим разложением). ¹H ЯМР (600 МГц, CDCl₃): δ 7,38-7,41 (м, 2 H), 7,34-7,38 (м, 2 H), 7,27-7,30 (м, 1 H), 4,28-4,50 (ш, 1 H), 4,19 (дд, 1 H), 4,11-4,1 (м, 2 H), 4,09 (д, 1 H), 3,95 (д, 1 H), 3,87 (дд, 1 H), 3,83 (т, 1 H), 3,08-3,16 (м, 1 H), 2,85 (ддд, 1 H), 2,57 (ддд, 1 H), 1,76-1,84 (м, 1 H), 1,68-1,75 (м, 1 H), 1,53-1,58 (м, 1 H), 1,41-1,48 (шс, 9 H), 1,31-1,41 (м, 2 H), 1,21-1,31 (м, 2 H). МС (ЭИ): m/z=377,24 ([M+H]⁺, 100%). ЭА для C₂₁H₃₂N₂O₄: рассчитано: C 66,99, H 8,57, N 7,44; найдено C 67,38, H 8,50, N 7,29.

Пример 3

Синтез дигидрохлорида 3-[(S)-1-((S)-2-гидрокси-1-фенилэтил)пиперидин-2-ил]азетидин-3-ола

[00124] Раствор трет-бутилового эфира 3-гидрокси-3-[(S)-1-((S)-2-гидрокси-1-фенилэтил)пиперидин-2-ил]азетидин-1-карбоновой кислоты (69,8 г, 29,6 ммоль, 1,0 экв.) в толуоле обрабатывали при 23-27°C в течение 12 минут смесью воды (30,1 г) и HCl (37%, 7,22 г, 73,3 ммоль, 2,5 экв.) и перемешивали в течение 10 минут. Полученную двухфазную смесь нагревали до 50 °С в течение 30 минут и продолжали перемешивание в течение 4 часов при 50 °С. После завершения превращения смесь охлаждали до комнатной температуры и оставляли для разделения фаз. Водную фазу промывали толуолом (36 мл) и оставляли фазы разделяться с получением 44,2 г желтоватого водного раствора продукта. Чистота по ВЭЖХ: 96,3% площади.

[00125] Для аналитических целей раствор продукта полностью концентрировали в ротационном испарителе (температура бани 45 °С). Желтый маслянистый остаток растворяли в MeOH (190 мл) и снова полностью концентрировали в ротационном испарителе и под вакуумом. Остаток растворяли в минимальном количестве смеси MeOH/этилацетата, 1:1 (об./об.), и очищали флэш-хроматографией на силикагеле (150 г), используя смесь MeOH/этилацетата, 1:1 (об./об.), в качестве элюента. Получали и отбрасывали 400 мл головного погона, а следующие фракции (1,5 л) объединяли и полностью концентрировали в ротационном испарителе под вакуумом (температура бани 40 °С, давление ≥ 20 мбар) с получением желтого маслянистого вещества, которое растворяли в MeOH (20 мл). Маслянистое вещество по каплям добавляли при комнатной температуре к этилацетату (80 мл), что привело к осаждению продукта. Твердое вещество фильтровали и промывали этилацетатом (30 мл). После высушивания при 30 °С под вакуумом до постоянной массы получали указанное в заголовке соединение (22,0 г) в виде бесцветного твердого вещества. Тпл. (ДСК): T_начала 114,2 °C, экстраполированный пик: 123,4 °C. ¹H ЯМР (600 МГц, ДМСО-d₆): δ 9,50-9,64 (ш, 1 H), 8,91-9,03 (ш, 1 H), 7,78 (с, 1 H), 7,62-7,56 (м, 2 H), 7,41-7,52 (м, 3 H), 6,03 (шс, 1 H), 4,56-4,67 (м, 1 H), 4,45 (дд, 1 H), 4,25-4,33 (м, 2 H), 4,23 (дд, 1 H), 4,18 (дд, 1 H), 3,95-4,05 (м, 1 H), 3,83 (дд, 1 H), 3,45-3,54 (м, 1 H), 3,26-3,40 (м, 1 H), 1,67-1,86 (м, 4 H), 1,55-1,65 (м, 1 H), 1,37-1,51 (м, 1 H). МС (ЭИ): m/z=277 ([M+H]⁺ свободного основания, 100%). ЭА для C₁₆H₂₆N₂O₂Cl₂, с поправкой на воду (9,2% -масс./масс.) и HCl (2,1 экв. вместо 2,0 экв.): рассчитано: C 49,44, H 7,80, N 7,21, O 16,40, Cl 19,15; найдено C 48,76, H 7,48, N 7,36, O 16,44, Cl 19,11.

Пример 4

{3-Гидрокси-3-[(S)-1-((S)-2-гидрокси-1-фенилэтил)-пиперидин-2-ил]-азетидин-1-ил}-(2,3,4-трифторфенил)метанон

2,3,4-Трифторбензоилхлорид:

[00126] 2,3,4-Трифторбензойную кислоту (100 г, 568 ммоль, 1,0 экв.) суспендировали в толуоле (1000 мл) и обрабатывали пиридином (0,254 мл, 3,15 ммоль, 0,0055 экв.). Полученную суспензию нагревали до 60-70 °С, в результате чего смесь стала прозрачным желтоватым раствором. При этой температуре медленно добавляли оксалилхлорид (94,4 г, 729 ммоль, 1,3 экв.) в течение 156 минут. После завершения добавления смесь перемешивали в течение 10 минут до завершения. Толуол (360 мл) частично удаляли перегонкой под вакуумом (температура рубашки: 60-70 °С, давление: 200-100 мбар). Раствор охлаждали до комнатной температуры с получением 636 г желтоватого и слегка мутного раствора, который хранили в атмосфере N₂ и использовали на следующей стадии без дополнительной очистки. Чистота по ВЭЖХ: 99,2% площади.

{3-Гидрокси-3-[(S)-1-((S)-2-гидрокси-1-фенилэтил)-пиперидин-2-ил]-азетидин-1-ил}-(2,3,4-трифторфенил)метанон:

[00127] Водный раствор дигидрохлорида 3-[(S)-1-((S)-2-гидрокси-1-фенилэтил)пиперидин-2-ил]азетидин-3-ола (43,5 г) обрабатывали EtOH (24 мл) и перемешивали в течение 10 минут при комнатной температуре. К полученной смеси добавляли раствор фосфата трикалия (28,8 г, 136 ммоль, 4,7 экв.) в 261 мл воды в течение 14 минут при температуре бани 10-20 °С, и перемешивали смесь в течение 15 минут при 15 °С (рН 11,9). К полученному раствору через капельную воронку добавляли 34 г описанного выше раствора 2,3,4-трифторбензоилхлорида (34,0 г, 29,8 ммоль, 1,0 экв.) в течение 32 минут при температуре бани 10-20 °С при энергичном перемешивании. Капельную воронку промывали толуолом (1,2 мл) и перемешивали двухфазную смесь при комнатной температуре в течение 60 минут. Слои оставляли разделяться и отбрасывали водную фазу. Органическую фазу промывали раствором карбоната натрия (3,36 г, 31,5 ммоль, 1,09 экв.) в воде (42 г) и перемешивали в течение 30 минут при комнатной температуре. Слои оставляли разделяться и промывали органическую фазу водным раствором хлорида натрия (30 г, 10% -масс./масс.). В ротационном испарителе (температура бани 50 °С, давление < 200 мбар) органическую фазу концентрировали до объема около 30%. Остаток растворяли в EtOH (23 мл) и перемешивали в течение 5 минут при 40-50 °С. Раствор снова концентрировали в ротационном испарителе (температура бани 50 °С, давление менее 200 мбар, 17 мл дистиллята) с получением очень вязкого маслянистого вещества. Остаток снова растворяли в EtOH (23 мл) и перемешивали в течение 10 минут, и снова дополнительно разбавляли EtOH (12 мл) для достижения требуемого объема (53 мл, 46,06 г). Чистота по ВЭЖХ: 85,0% площади.

[00128] Для аналитических целей раствор продукта (90 мл) фильтровали и промывали остаток на фильтре EtOH (15 мл). В ротационном испарителе (температура бани 40 °С, давление < 150 мбар) раствор полностью концентрировали и растворяли остаток в МТБЭ (40 мл), затем снова полностью концентрировали, затем растворяли в смеси этилацетата (29 мл) и гептана (40 мл), затем полностью концентрировали, затем снова растворяли в смеси МТБЭ (20 мл) и гептана (50 мл) и снова полностью концентрировали с получением, в конечном итоге, пенистого твердого вещества (32,5 г). Твердый остаток (32,0 г) растворяли в этилацетате (20 мл) и очищали флэш-хроматографией на силикагеле (150 г), используя этилацетат в качестве элюента. После 200 мл головного погона объединяли 6 фракций (800 мл) и полностью концентрировали в ротационном испарителе (температура бани: 40 °С, давление ≥ 20 мбар) с получением 28,0 г слегка желтоватого маслянистого вещества. При комнатной температуре маслянистый остаток растворяли в дихлорметане (20 мл), разбавляли гептаном (150 мл) и снова полностью концентрировали в ротационном испарителе, затем растворяли остаток в МТБЭ (20 мл) и снова полностью удаляли растворитель в ротационном испарителе с получением каучукоподобной пены. Полученное пенистое вещество растворяли в толуоле (30 мл, комнатная температура) и по каплям, в течение 20 минут, через капельную воронку, при комнатной температуре добавляли к гептану (400 мл), в результате чего продукт начал выпадать в осадок. Капельную воронку промывали толуолом (4 мл) и продолжали перемешивать суспензию в течение 1 часа при комнатной температуре. Твердое вещество отфильтровывали и дважды промывали реактор и осадок на фильтре фильтратом, а затем гептаном (15 мл). После высушивания под вакуумом при 35 °С до постоянной массы получали 17,88 г бесцветного твердого вещества. Чистота по ВЭЖХ: 97,0% площади, остаточные растворители: толуол (1,2%- масс./масс.) и гептан (2,3% -масс./масс.). Тпл. (визуально): T_начала: 55-73 °С (плавление сопровождалось экзотермическим разложением). ¹H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆, 120 °С): δ 7,41-7,47 (м, 2 H), 7,27-7,32 (м, 2 H), 7,21-7,26 (м, 2 H), 7,12-7,19 (м, 1 H), 5,21 (шс, 1 H), 4,35 (шд, 1 H), 4,22 (шс, 1 H), 4,05 (дд, 1 H), 3,91-4,01 (м, 1 H), 3,74-3,90 (м, 4 H), 3,01 (дд, 1 H), 2,75-2,84 (м, 1 H), 2,49-2,59 (м, 1 H), 1,68-1,81 (м, 1 H), 1,51-1,65 (м, 1 H), 1,23-1,50 (м, 3 H), 1,09-1,22 (м, 1 H). МС (ЭИ): m/z=435 ([M+H]⁺, 100%). ЭА для C₂₃H₂₅F₃N₂O₃, с поправкой на остаточный толуол (1,2%- масс./масс.) и гептан (2,3%- масс./масс.): рассчитано: C 64,38, H 6,07, F 12,66, N 6,22; найдено C 64,01, H 6,04, F 12,63, N 6,35.

Пример 5

Синтез гидрохлорида ((S)-3-гидрокси-3-пиперидин-2-ил-азетидин-1-ил)-(2,3,4-трифторфенил)метанона

[00129] В стеклянный автоклав объемом 185 мл в атмосфере аргона загружали Pd/C (3,37 г, 1,3 ммоль, 0,04 экв., 60,2% масс./масс. воды, 10% масс./масс. Pd на C), воду (0,22 г) и раствор {3-гидрокси-3-[(S)-1-((S)-2-гидрокси-1-фенилэтил)пиперидин-2-ил]азетидин-1-ил}-(2,3,4-трифторфенил)метанона в EtOH (53 мл, 46 г, 29 ммоль, 1,0 экв.). Смесь обрабатывали EtOH (13 мл), уксусной кислотой (4,15 мл, 72 ммоль, 2,5 экв.) и водным раствором хлористоводородной кислоты (2,5 мл, 37% -масс./масс., 30 ммоль, 1,0 экв.). Обеспечивали инертность автоклава, закачивали H₂ под давлением 2 бар и проводили реакцию при давлении H₂ 2 бар при 25 °С в течение 12 часов. Из автоклава сбрасывали давление и обрабатывали суспензию MeOH (25 мл) и продолжали перемешивать в течение 30 минут, и фильтровали под аргоновой защитой через фильтровальную бумагу. Автоклав и осадок на фильтре промывали MeOH (4 мл). Объединенные фильтраты выпаривали при пониженном давлении до около 20-30 процентов от исходного объема. Остаток обрабатывали изопропанолом (38,5 мл) при 30-35 °С, перемешивали в течение 1 часа, охлаждали до 20-25 °С и обрабатывали водой (0,58 г) и водным раствором хлористоводородной кислоты (2,5 мл, 37% - масс./масс., 30 ммоль, 1,0 экв.). Полученную суспензию концентрировали под вакуумом при 25-35 °С до достижения объема около 22 мл, и добавляли МТБЭ (31 мл) при 25-35 °С. Конечную суспензию охлаждали до 5-10 °С, перемешивали в течение 1 часа, а затем фильтровали. Осадок на фильтре промывали холодным МТБЭ (12 мл) и сушили под вакуумом при 35 °С до постоянной массы с получением указанного в заголовке соединения (5,08 г) в виде бесцветного твердого вещества. Чистота по ВЭЖХ: 99,6% площади. Тпл. (ДСК): T_начала: 246,3 °С, экстраполированный пик: 248,8 °С (плавление сопровождалось экзотермическим разложением). ¹H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆, 120 °С): δ 8,59 (шс, 2 H), 7,14-7,48 (м, 2 H), 6,54 (шс, 1 H), 4,39 (дд, 1 H), 4,23 (дд, 1 H), 3,85-3,97 (м, 2 H), 3,27-3,35 (м, 1H), 3,20-3,27 (м, 1 H), 2,80-2,95 (м, 1 H), 1,78-1,88 (м, 2 H), 1,64-1,78 (м, 2 H), 1,40-1,64 (м, 2 H). МС (ЭИ): m/z=315 ([M+H]⁺ свободного основания, 100%). ЭА для C₁₅H₁₇F₃N₂O₂ x HCl: рассчитано: C 51,36, H 5,17, N 7,99, F 16,25; найдено C 51,19, H 4,89, N 7,91, F 16,06.

Пример 6

Синтез (S)-[3,4-дифтор-2-(2-фтор-4-йодфениламино)фенил][3-гидрокси-3-(пиперидин-2-ил)азетидин-1-ил]метанона (Соединение I)

[00130] К раствору гидрохлорида ((S)-3-гидрокси-3-пиперидин-2-илазетидин-1-ил)-(2,3,4-трифторфенил)метанона (15,0 г, 42,8 ммоль, 1,0 экв.) и 2-фтор-4-йоданилина (11,1 г, 47 ммоль, 1,1 экв.) в ТГФ (90 мл) постепенно добавляли раствор LiHMDS в ТГФ (149 г, 20,7% масс./масс., 184 ммоль, 4,3 экв.) в течение 88 минут при 20-30 °С. Перемешивание продолжали в течение 2 часов. После завершения превращения смесь постепенно вводили в смесь серной кислоты (12,0 г, 96% - масс./масс., 118 ммоль, 2,75 экв.) в воде (75 мл) в течение 25 минут и продолжали перемешивание в течение 1 часа. Слои оставляли разделяться и промывали органическую фазу смесь воды (60 мл) и толуола (96 мл). Органическую фазу концентрировали под вакуумом до объема около 150 мл. Добавляли толуол (250 мл) и удаляли остаточный ТГФ перегонкой при температуре рубашки 55 °С и при давлении 84 мбар, поддерживая постоянный объем смеси посредством непрерывного добавления толуола (400 мл), в результате чего продукт медленно выпадал в осадок. Затем температуру смеси понижали до 10 °С в течение 2 часов и продолжали перемешивать суспензию в течение ночи при 10 °С. Продукт отфильтровывали и промывали осадок на фильтре холодным толуолом (150 мл). После высушивании в течение ночи под вакуумом при 35 °С до постоянной массы получали указанное в заголовке соединение (20,66 г) в виде бесцветного продукта. Чистота по ВЭЖХ: 99,7% площади. Тпл. (ДСК): T_начала: 166,7 °С, экстраполированный пик: 168,2°C (91,5 Дж/г). ¹H ЯМР (600 МГц, CDCl₃): δ 8,28-8,48 (ш, 1 H), 7,39 (дд, 1 H), 7,32 (ддд, 1 H), 7,09-7,14 (м, 1 H), 6,75-6,86 (ш, 1 H), 6,60 (ддд, 1 H), 4,10 (д, 2 H), 4,05-4,20 (ш, 1 H), 3,93-4,04 (ш, 1 H), 3,09 (д, 1 H), 2,70 (д, 1 H), 2,56-2,67 (ш, 1 H), 1,68-1,87 (м, 1 H), 1,50-1,64 (м, 2 H), 1,25-1,38 (м, 2 H), 1,07-1,24 (м, 1 H). МС (ЭИ): m/z=532 ([M+H]⁺, 100%). ЭА для C₂₁H₂₁F₃IN₂O₃: рассчитано: C 47,47, H 3,98, N 7,91, F 10,73; найдено C 47,68, H 4,00, N 7,66, F 10,80.

Пример 7

Получение кристаллической фумаратной соли (S)-[3,4-дифтор-2-(2-фтор-4-йодфениламино)фенил][3-гидрокси-3-(пиперидин-2-ил)азетидин-1-ил]метанона (Соединения I), обозначенной как Форма A

[00131] (S)-[3,4-Дифтор-2-(2-фтор-4-йодфениламино)фенил][3-гидрокси-3-(пиперидин-2-ил)азетидин-1-ил]метанон (80 кг) растворяли в смеси 2-пропанола/воды, 88:12 масс./масс. (9 массовых эквивалентов (м.экв.)) при 77°C и фильтровали через активированный уголь. Фумаровую кислоту (0,52 экв.) растворяли в смеси 2-пропанола/воды, 88:12 масс./масс. (2,6 м.экв.). Первоначальное количество раствора фумаровой кислоты (8% от общего количества) добавляли к отфильтрованному раствору (S)-[3,4-дифтор-2-(2-фтор-4-йодфениламино)фенил][3-гидрокси-3-(пиперидин-2-ил)азетидин-1-ил]метанона при 77 °С. Добавляли затравочные кристаллы (0,023 м.экв.) в виде суспензии в смеси 2-пропанола/воды, 88:12 масс./масс. (0,2 м.экв.) при 77 °С. Остальное количество раствора фумаровой кислоты добавляли в течение 6 часов при той же температуре. Для завершения кристаллизации суспензию охлаждали до 20 °С в течение 7 часов. Кристаллическую фумаратную соль Соединения I, Форму A, выделяли центрифугированием, промывали 2-пропанолом (например, 0,6 м.экв.), сушили при пониженном давлении при максимальной температуре 55 °С и протирали.

Примеры характеристик кристаллической фумаратной соли (S)-[3,4-дифтор-2-(2-фтор-4-йодфениламино)фенил][3-гидрокси-3-(пиперидин-2-ил)азетидин-1-ил]метанона, обозначенной как Форма A

Элементный анализ

[00132] Результаты элементного анализа, представленные в таблице 1, рассчитывали по относительной молекулярной массе 1178,71 г/моль и составу C₄₆H₄₆F₆I₂N₆O₈. Полученные результаты согласуются со структурой, изображенной выше.

Таблица 1: Элементный анализ C₄₆H₄₆F₆I₂N₆O₈

Элемент	Рассчитано	Найдено
C	46,87%	46,76%
H	3,93%	3,95%
N	7,13%	7,07%
F	9,67%	9,63%
I	21,53%	21,57%
O	10,86%	10,84%

Инфракрасная спектроскопия

[00133] Использовали инфракрасный спектрофотометр с преобразованием Фурье (Фурье-ИК) ThermoScientific iS5 (FTIR) с вспомогательным устройством iD5 ATR. Инфракрасный (ИК) спектр записывали как ИК измерение отражений в диапазоне 4000-650 см^-1 и представляли как Фиг. 1. ИК спектр согласуется со структурой, изображенной выше. Обобщение характеристик ИК полос представлено в таблице 2.

Таблица 2: Отнесение полос ИК фумаратной соли Соединения I

Волновое число (см-1)

Отнесение

3500-2800 3296 2978, 2957,2879 2700-2300 1632 1598,1563 1508 1443 1416 1319 1361, 1299, 1270, 1180, 1152, 1122 1054 862, 825,773, 725

Полоса OH (широкая) Полоса NH Полоса алкильного CH Полоса NH2 + Полоса C= амида I Ароматическое кольцо: валентное колебание и NH2+деформационное колебание Ароматическое кольцо: валентное колебание Деформационное колебание алкильного CH Деформационное колебание OH Деформационное колебание алкильного CH Деформационное колебание OH карбоновой кислоты и валентное колебание C-O,деформационное колебание N-C=O, валентное колебание арил-F Валентное колебание арил-I Деформационное внеплоскостное колебание CH ароматических колец

ЯМР спектры в растворе диметилсульфоксида

[00134] Измерения ядерного магнитного резонанса (ЯМР) проводили на спектрометрах Bruker Avance 600 и 400 МГц. Прибор 600 МГц был оснащен 5 мм, TCI, z-градиентным криогенным зондом, а прибор 400 МГц был оснащен 5 мм, BBFO, z-градиентным зондом. Образец получали растворением 6 мг кристаллической фумаратной соли Соединения I, обозначенной как Форма A, в 0,75 мл ДМСО-d6 (D, 99,8%) для всех экспериментов обнаружения протонов. Для ¹³C-ЯМР и ¹⁹F-ЯМР растворяли 62 мг в 0,75 мл ДМСО-d6.

[00135] ¹H ЯМР (600 МГц, ДМСО-d6 при 25 °С): ¹H ЯМР спектр при 600 МГц при 25 °С показал соотношение свободного основания и фумарата 2:1 при взятии интеграла сигналов при 6,62 и 6,42 м.д., что подтверждает существование гемифумарата. Наблюдали восемь протонных сигналов для азетидинового кольца, хотя ожидали только четыре, что свидетельствует о наличии двух наборов сигналов в соотношении 1:1.

[00136] ¹H ЯМР (d6 ДМСО) представлен на Фиг. 2. δ 8,54 (с, 1H) 8,50 (с, 1H), 7,57 (дд, 2H), 7,37 (дд, 2H), 7,31 (м, 2H), 7,18 (м, 2H), 6,67 (т, 2H), 6,42 (с, 2H), 4,25 (д, IH), 4,15 д, 1H), 4,09 (д, 1H) 4,01 (д, 1H), 3,92 (д, 1H), 3,86 (д, 1H), 3,71 (т, 2H) 3,03 (д, 2H), 2,79 (м, 2H), 8,38 (т, 2H), 1,62 (м, 6H) 1,24 (м, 6H) (2,50 квинтет, 1,9 ДМСО).

[00137] ¹³C ЯМР (d6 ДМСО) представлен на Фиг. 3. δ 168,0, 167,5, 152,3, 151,4, 143,6, 135,2, 133,2, 131,3, 130,5, 124,6, 123,7, 123,0, 122,7, 119,8, 119,6, 110,7, 81,6, 81,5, 70,3, 70,3, 63,0, 61,8, 60,7, 60,6, 59,0, 58,1, 45,5, 45,4, 24,1, 23,7, 23,1, 39,5 (ДМСО-d6).

[00138] Для подтверждения результатов ЯМР спектроскопии в жидком состоянии проводили также твердофазную ЯМР спектроскопии для выяснения структуры. В жидкофазной ЯМР спектроскопии некоторые сигналы дублированы вследствие наблюдаемых затруднений свободного вращения, приводящих к ротамерной смеси, тогда как результат твердофазной ЯМР спектроскопии не зависит от стерического затруднения. Следовательно, можно сделать более точное отнесение пиков фумаратной соли Соединения I с помощью твердофазной ЯМР спектроскопии.

[00139] ¹³C твердофазная ЯМР Формы A представлена на Фиг. 4. δ 175,3, 173,6, 168,9, 155,5, 153,5, 144,4, 142,5, 137,0, 136,0 135,5, 132,0, 130,5, 127,2, 125,0, 124,0, 117,9м, 108,0, 82,2, 71,7, 64,0, 59,3, 56,2, 45,0, 25,3, 24,0, 22,2.

[00140] ¹³C твердофазная ЯМР Формы A подтверждает результаты других аналитических способов, использованных для выяснения структуры (S)-[3,4-дифтор-2-(2-фтор-4-йодфениламино)фенил][3-гидрокси-3-(пиперидин-2-ил)азетидин-1-ил]метанона. В спектрах обнаружены все атомы углерода, присутствующие в структуре свободного основания, а также в структуре противоиона.

[00141] ¹⁹F ЯМР (600 МГц, ДМСО-d6 при 25 °С): 19-F ЯМР показал три различных атома фтора.

Масс-спектрометрия

[00142] Использовали спектрометр Agilent 6520 QTOF для МСМС CID с ИЭР в режиме положительных ионов и для МС с ИЭР в режиме отрицательных ионов. Масс-спектр, записанный для фумаратной соли Соединения I при ионизации электрораспылением в режиме положительных ионов, представлен на Фиг. 5. Значение [M+H]⁺ при m/z 562,0714 согласуется с формулой Соединения I (свободное основание). Характеристики фрагментации M+H исследовали с помощью диссоциации, индуцированной столкновениями (CID). В качестве газа для соударений использовали азот. Все фрагменты хорошо коррелировали со структурой Соединения I.

[00143] Масс-спектр, записанный для фумаратной соли Соединения I при ионизации электрораспылением в режиме отрицательных ионов (Фиг.6), [M-H]^-, обнаружен при m/z=115,0045 (рассчитано: m/z=115,0037; разность m/z=0,0008), что свидетельствует о присутствии фумаратного противоиона.

Анализ кристаллической структуры фумаратной соли (S)-[3,4-дифтор-2-(2-фтор-4-йодфениламино)фенил][3-гидрокси-3-(пиперидин-2-ил)азетидин-1-ил]метанона, Формы A, с помощью рентгеновской дифракции

Исследования порошковой рентгеновской дифракции (ПРД)

[00144] Монокристалл устанавливали в петлю и измеряли при температуре окружающей среды. Данные записывали на экспериментальной станции источника синхротронного излучения X10SA компании Swiss Light Source, оснащенном детектором DECTRIS Pilatus 6M с синхротронным излучением, и обрабатывали данные в программе XDS. Кристаллическую структуру определяли и уточняли с помощью программы ShelXTL (Bruker AXS, Карлсруэ).

[00145] Структура фумаратной соли Соединения I, обозначенной как Форма A, содержит один хиральный центр с (S)-конфигурацией в соответствии с правилами Кана-Ингольда-Прелога. Для подтверждения структуры проводили определение монокристалла. Монокристаллы кристаллизовали из разбавленного раствора в ацетонитриле/воде, 1:1, посредством медленного испарения растворителя. Для подтверждения того, что конформация не меняется в процессе кристаллизации, помимо этого проводили хиральную высокоэффективную жидкостную хроматографию (ВЭЖХ). Данные о кристалле приведены в таблице 3.

Таблица 3: Данные о кристалле Формы A

Форма	---	A
Кристаллическая система	---	Тетрагональная
Пространственная группа	---	P43212
Форма кристаллизации	---	Пластинки
Размеры элементарной ячейки	[Å] [Å] [Å]	a=7,8825 b=7,8825 c=76,846
	[°] [°] [°]	α=90 β=90 γ=90
Температура	[K]	293
Объем ячейки	[Å3]	4774,7
Молекул в элементарной ячейке	---	8
Расчетная плотность	(г/см3)	1,637

Молекулярная конформация и параметры кристаллической структуры Формы A представлены в таблице 3. В кристаллической структуре Формы A пиперидиновый атом азота протонирован, а фумаровая кислота депротонирована. Фумарат координирован двумя пиперидинами и двумя OH-группами из разных молекул активного соединения. Кристаллическая упаковка характеризуется бесконечными цепями межмолекулярных водородных связей. Подтверждено, что хиральный атом углерода в пиперидиновом кольце имеет (S) конфигурацию, что показано параметром абсолютной структуры (параметр Флэка: 0,048, расчетное стандартное отклонение 0,013).

Ультрафиолетовый спектр фумаратной соли (S)-[3,4-дифтор-2-(2-фтор-4-йодфениламино)фенил][3-гидрокси-3-(пиперидин-2-ил)азетидин-1-ил]метанона

[00146] Максимумы абсорбции в УФ-видимом диапазоне около 200 нм, 239 нм, 276 нм и 310 нм свидетельствуют о π→π* переходах фрагментов ароматических колец и n→π* электронов неподеленных пар, соответственно. Спектр, представленный на Фиг. 7, согласуется со структурой фумаратной соли Соединения I и демонстрирует характеристики, ожидаемые для хромофоров, присутствующих в структуре.

Выяснение структуры фумаратной соли (S)-[3,4-дифтор-2-(2-фтор-4-йодфениламино)фенил][3-гидрокси-3-(пиперидин-2-ил)азетидин-1-ил]метанона: Полиморфизм

[00147] Оценивали более 15 солевых форм Соединения I на предмет их пригодности для клинических испытаний, включая, например, соли, полученные из бензойной кислоты, малоновой кислоты, фумаровой кислоты, миндальной кислоты, уксусной кислоты и оротовой кислоты. Если бензойная кислота, малоновая кислота, миндальная кислота, уксусная кислота и оротовая кислота образовывали аморфные соли, кристаллические соли или смеси аморфных и кристаллических солей в зависимости от растворителя и условий, то соль, полученная из фумаровой кислоты, была наиболее подходящей, как описано ниже.

[00148] Всесторонний скрининг кристаллических твердых форм фумаратной соли Соединения I выявил одну кристаллическую форму (Форма A) и одну аморфную форму (аморфная форма). Форма A, которая не содержит растворителя и является негигроскопичной, представляет собой термодинамически стабильную форму и форму, стабильно образующуюся в процессе производства. Аморфная форма является некристаллической и гигроскопичной. Наблюдали, что аморфная форма превращается в Форму A при нагревании и посредством фазового перехода, опосредованного растворителем, в воде. В около 3000 экспериментах кристаллизации, проведенных во время скринингов полиморфизма, не наблюдали дополнительных полиморфных форм. На основании измерений ДСК, а также ПРД с регулируемой температурой, не наблюдали превращение указанной полиморфной формы при нагревании вплоть до плавления. В эксперименте, проведенном на суспензии с применением технологических условий (растворитель 2-пропанол/вода, 88:12, температура: 20 °С), аморфная форма быстро превращалась в Форму A. При нагревании аморфная форма начинала превращаться в Форму A при температуре от 90 °С до 200 °С.

[00149] Форму A и аморфную форму можно различить с помощью дифференциальной сканирующей калориметрии (ДСК) и рентгеновской порошковой дифракции (ПРД). Кроме того, разница между Формой A и аморфной формой также продемонстрирована с помощью спектроскопии Рамана и твердофазной ¹³C спектроскопии ядерного магнитного резонанса (ЯМР).

Дифференциальная сканирующая калориметрия (ДСК)

[00150] Термограммы ДСК записывали с помощью прибора Mettler-Toledo (DSC820/821e/1; датчик FRS05). Приблизительно 2-6 мг образца помещали в алюминиевые тигли и закрывали алюминиевыми крышками. Крышки автоматически прокалывали перед нагреванием. В целом, образцы в атмосфере азота нагревали со скоростью 10 K/мин. до максимальной температуры 250 °С.

[00151] Кристаллическая Форма A подвергалась плавлению при 239,6°C (T_начала). Поскольку плавление и разложение происходили одновременно, то теплоту плавления и T_{экстрапол.} не определяли (Фиг. 8).

[00152] Аморфная форма демонстрировала температуру стеклования при 116,2 °С (при получении измельчением) и при 120,6 °С (при получении сублимационной сушкой), с последующим экзотермическим событием, обусловленным кристаллизацией, при температуре от 150 °С до 200 °С, в Форму A. Выше температуры около 225 °С материал начинал плавиться (Фиг. 9).

Рентгеновская порошковая дифракция Формы A и аморфной формы

[00153] Диаграммы рентгеновской дифракции записывали при условиях окружающей среды в геометрии пропускания с помощью дифрактометра STOE STADI P (излучение Cu K α [1,54 Å], первичный монохроматор, детектор в виде кремниевой полоски, угловой диапазон от 3° до 42° 2θ, общее время измерения около 30 минут). Образцы получали и анализировали без дополнительной обработки (например, измельчения или просеивания) вещества.

[00154] Как показано в Таблице 4, кристаллическая Форма A селективно идентифицирована набором характеристических положений пиков дифракции, выраженных в градусах 2θ. Дифрактограммы ПРД, характерные для отдельных форм, представлены на Фиг. 10 и Фиг. 11.

Таблица 4

Значения 2θ для Формы A (+/- 0,2θ)

4,6 12,1 13,2 13,8 14,5 16,3 16,6 17,8 18,5 19,7 21,1 22,6 23,0 23,3 24,5

Скорость истинного растворения кристаллической Формы A и аморфной формы

[00155] Для каждого измерения истинного растворения получали гранулу из образца кристаллической Формы A или аморфной формы, используя приложенную нагрузку около 15 кН, с получением плоского диска (площадь поверхности=0,5 см²). После прессования каждую гранулу проверяли с помощью ПРД для подтверждения отсутствия полиморфного превращения в процессе получения гранулы. Использованные экспериментальные условия представлены в таблице 5.

Таблица 5

Метод испытания	В соответствии с USP <1088>
Экспериментальный объем	0,05 М ацетатный буфер, рН=4,5
Образец (гранула)	500 мл
об./мин.	100
Температура	37 °С
Аналитический метод	Онлайн УФ спектроскопия (при 278 нм)

[00156] Партии Формы A и аморфной формы (полученной сублимационной сушкой) использовали для определения скорости истинного растворения обеих твердых форм. Истинное растворение позволяет охарактеризовать различные кристаллические формы посредством воздействия на постоянную площадь поверхности растворяющей среды. Результаты представлены в Таблице 6.

Таблица 6

Форма	Скорость истинного растворения (мг*см-2*мин.-1)
Форма А	0,0756
Аморфная форма	2,6996

[00157] Скорость истинного растворения обеих форм очень разная. На основании полученных данных, аморфная форма имеет примерно в 35 раз более высокую скорость истинного растворения, чем кристаллическая Форма A.

Гигроскопичность кристаллической Формы A и аморфной формы

[00158] Данные сорбции/десорбции влаги получали с помощью системы весов для определения содержания влаги DVS-1/DVS-HT/DVS-intrinsic (SMS Surface Measurements Systems). Изотермы сорбции/десорбции измеряли поэтапно в диапазоне от 0% ОВ (относительная влажность) до 90% ОВ при 25 °С. Изменение массы < 0,002 мг/мин. выбирали в качестве критерия для перехода на следующий уровень ОВ (при максимальном времени уравновешивания 24 часа, если критерий массы не был достигнут). Данные корректировали по первоначальному содержанию влаги в образцах; то есть массу после высушивания образца при 0% ОВ брали за нулевую точку. Гигроскопичность данного вещества описывали по увеличению массы при повышении ОВ с 0% ОВ до 90% ОВ, как показано в Таблице 7.

Таблица 7

Характеристика вещества	Увеличение массы Δm от 0% ОВ до 90% ОВ
Негигроскопичное	Δm< 0,2%
Незначительно гигроскопичное	0,2% < Δm< 2,0%
Гигроскопичное	Δm<
Очень гигроскопичное	Δm>
Расплывающееся при поглощении влаги	Поглощает достаточное количество жидкости для образования жидкости

[00159] Данные адсорбции/десорбции влаги для кристаллической Формы A представлены на Фиг. 12. На всей временной шкале стандартных экспериментов динамической сорбции паров не наблюдали никакого превращения. От 0% ОВ до 90% ОВ Форма A демонстрировала минимальный и обратимый прирост или потерю массы+0,1%, и поэтому ее классифицировали как негигроскопичную.

[00160] Данные сорбции/десорбции влаги аморфной формы представлены на Фиг. 13 (формы, полученной сублимационной сушкой). На всей временной шкале стандартных экспериментов динамической сорбции паров не наблюдали никакого превращения. От 0% ОВ до 90% ОВ аморфная форма демонстрировала обратимый прирост или потерю массы+12,1%, и поэтому ее классифицировали как гигроскопичную.

[00161] Изложенное выше описание было описано в некоторых деталях в качестве иллюстрации и примера, для ясности и понимания. Настоящее изобретение описано со ссылкой на различные конкретные и предпочтительные варианты реализации и способы. Однако следует понимать, что в рамках общей идеи и границ настоящего изобретения могут быть сделаны многие вариации и модификации. Специалистам в данной области техники понятно, что в границах объема прилагаемой формулы изобретения на практике могут быть сделаны изменения и модификации. Поэтому следует понимать, что представленное выше описание является иллюстративным, а не ограничивающим. Следовательно, границы объема настоящего изобретения следует определять не со ссылкой на представленное выше описание, а вместо этого определять со ссылкой на следующую прилагаемую формулу изобретения, вместе с полным диапазоном эквивалентов, на которые дают право ее пункты.

1. Способ получения кристаллической фумаратной соли (S)-[3,4-дифтор-2-(2-фтор-4-йодфениламино)фенил][3-гидрокси-3-(пиперидин-2-ил)азетидин-1-ил]метанона Соединения I:

,

обозначенной как Форма A, характеризующейся по меньшей мере одним из следующих:

(iii) твердофазным ¹³C ЯМР-спектром с тремя или более пиками, выбранными из 175,3, 173,6, 117,5, 155,5 и 153,5 ± 0,2 м.д.;

(v) диаграммой порошковой рентгеновской дифракции (CuKα λ=1,5418Å), содержащей три или более значений 2θ, выбранных из 4,6, 12,1, 13,2, 13,6 и 14,5 ± 0,2°2θ, при проведении измерений кристаллической формы при комнатной температуре;

или

диаграммой порошковой рентгеновской дифракции (CuKα λ=1,5418Å) при проведении измерений кристаллической формы при комнатной температуре, содержащей значения 2θ ± 0,2°2θ, представленные в следующей таблице:

Значения 2θ для Формы A (+/- 0,2°θ)

4,6 12,1 13,2 13,8 14,5 16,3 16,6 17,8 18,5 19,7 21,1 22,6 23,0 23,3 24,5

где способ включает добавление фумаровой кислоты, растворенной в растворителе, к смеси Соединения I, растворенного в растворителе, с получением кристаллической фумаратной соли Соединения I, обозначенной как Форма A; и

сбор полученных кристаллов кристаллической фумаратной соли Соединения I, обозначенной как Форма A,

и где растворитель включает полярный протонный растворитель, апротонный растворитель или их смесь.

2. Способ по п.1, где полярный протонный растворитель выбран из группы, состоящей из метанола, этанола, н-пропанола, изопропанола, воды и их смесей.

3. Способ по п.1, где апротонный растворитель выбран из группы, состоящей из тетрагидрофурана, дихлорметана ацетонитрила и их смесей.