Комбинации и их использование
Изобретение относится к области биохимии, в частности к применению синергической комбинации в лечении неходжкинской лимфомы, хронического лимфоцитарного лейкоза или острого лимфобластного лейкоза, ассоциированных с экспрессией CD19. Раскрыт способ лечения неходжкинской лимфомы, хронического лимфоцитарного лейкоза и/или острого лимфобластного лейкоза, ассоциированных с экспрессией CD19 с помощью указанного применения синергетической комбинации. Изобретение позволяет эффективно лечить лимфому, хронический лимфоцитарный лейкоз или острый лимфобластный лейкоз, ассоциированные с экспрессией CD19. 2 н. и 42 з.п. ф-лы, 10 ил., 32 табл., 4 пр.
Область техники, к которой относится изобретение
Настоящее раскрытие относится к фармацевтической комбинации антитела к CD19 и ингибитора фосфоинозитид-3-киназы для лечения неходжкинской лимфомы, хронического лимфоцитарного лейкоза и/или острого лимфобластного лейкоза.
Предпосылки изобретения
В-клетки - это лимфоциты, которые играют большую роль в гуморальном иммунном ответе. Они продуцируются в костном мозге большинства млекопитающих и составляют 5-15% циркулирующего лимфоидного пула. Основная функция В-клеток состоит в создании антител к различным антигенам, и они являются неотъемлемым элементом адаптивной иммунной системы.
Вследствие их критической роли в регулировании иммунной системы расстройство регуляции В-клеток связано с различными нарушениями, такими как лимфомы и лейкозы. Среди таких нарушений находятся неходжкинская лимфома (НХЛ), хронический лимфоцитарный лейкоз (ХЛЛ) и острый лимфобластный лейкоз (ОЛЛ).
НХЛ - это гетерогенная группа злокачественных новообразований, возникающих из лимфоцитов. В Соединенных Штатах Америки (США) заболеваемость оценивается в 65000/год с числом смертельных случаев примерно 20000 (по данным Американского онкологического общества, 2006 г., и сводной статистики рака SEER). Болезнь встречается во всех возрастных группах, обычно ее начало наблюдается у взрослых старше 40 лет, причем заболеваемость растет с возрастом. НХЛ характеризуется клональной пролиферацией лимфоцитов; которые накапливаются в лимфатических узлах, крови, костном мозге и селезенке, хотя может быть вовлечен любой крупный орган. В настоящее время системой классификации, используемой патологоанатомами и лечащими врачами, является Классификация опухолей Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ), по которой НХЛ различают как новообразования прекурсорных и зрелых В-клеток или Т-клеток. PDQ (база данных для врачебных запросов) в настоящее время делит НХЛ на индолентную (медленно прогрессирующую) или агрессивную форму на входе в клинические испытания. Индолентная группа НХЛ состоит в основном из фолликулярных подтипов, малой лимфоцитарной лимфомы, MALT (слизистой оболочки лимфоидной ткани) и маргинальной зоны; в число пациентов с индолентной формой входит примерно 50% вновь диагностированных пациентов с В-клеточной НХЛ. Агрессивная форма НХЛ включает пациентов с гистологическим диагнозом преимущественно диффузной крупноклеточной В-клеточной лимфомы (DLBL, DLBCL или DLCL) (у 40% всех вновь диагностированных пациентов наблюдается диффузная крупноклеточная форма), лимфомы Беркитта и лимфомы из клеток мантии. Клиническое течение НХЛ сильно варьируется. Основной детерминантой клинического течения является гистологический подтип. Большинство индолентных форм НХЛ считаются неизлечимыми. Изначально пациенты реагируют либо на химиотерапию, либо на терапию антителами, и у большинства из них произойдет рецидив заболевания. Исследования, проведенные до настоящего времени, не продемонстрировали улучшения выживаемости при раннем лечении. В случае пациентов без выраженных симптомов принято "наблюдать и выжидать", пока у пациента не появятся симптомы или болезнь не станет прогрессировать. С течением времени заболевание может принять более агрессивную гистологическую форму. Средняя выживаемость составляет 8-10 лет, и пациенты с индолентной формой часто получают 3 или более курсов лечения в ходе лечебной фазы их заболевания. Так сложилось, что первоначальное лечение больного с симптоматической индолентной НХЛ состоит из комбинированной химиотерапии. Наиболее часто применяемые средства включают: циклофосфамид, винкристин и преднизон (CVP); или циклофосфамид, адриамицин, винкристин, преднизон (CHOP). Примерно 70-80% пациентов будут реагировать на их первоначальную химиотерапию, продолжительность ремиссий длится порядка 2-3 лет. В конечном итоге у большинства пациентов произойдет рецидив заболевания. Разработка и клиническое использование антитела к CD20 - ритуксимаба - обеспечило значительное улучшение реакции и выживаемости. В настоящее время стандартное лечение для большинства пациентов состоит из ритуксимаба + CHOP (R-CHOP) или ритуксимаба + CVP (R-CVP). Для начального лечения НХЛ одобрен интерферон в комбинации с алкилирующими средствами, но в США он широко не применяется. Было показано, что терапия ритуксимабом эффективна при нескольких типах НХЛ, и в настоящее время он одобрен в качестве лечения первой линии как для индолентой формы (фолликулярной лимфомы), так и агрессивной НХЛ (диффузной крупноклеточной В-клеточной лимфомы). Однако для монклонального антитела (mAb) к CD20 есть серьезные ограничения, включая первичную невосприимчивость (50% ответов у пациентов с рецидивом индолентной формы), приобретенную невосприимчивость (50% ответов при повторном лечении), редкий полный ответ (2% полной ремиссии в популяции с рецидивом заболевания) и продолжающуюся картину рецидива. И наконец, многие В-клетки не экспрессируют CD20, и поэтому многие В-клеточные расстройства не поддаются лечению антителами к CD20.
Кроме НХЛ существуют несколько других типов лейкозов, которые возникают вследствие расстройства регуляции В-клеток. ХЛЛ - это тип лейкоза взрослого возраста, который вызван ненормальным накоплением В-лимфоцитов. При ХЛЛ злокачественные лимфоциты могут выглядеть нормальными и зрелыми, но они не способны эффективно действовать против инфекций. ХЛЛ является наиболее часто встречающейся формой лейкоза у взрослых. У мужчин ХЛЛ развивается, как правило, в два раза чаще, чем у женщин. Однако основным фактором риска является возраст. Свыше 75% новых случаев заболевания выявляют у пациентов в возрасте старше 50 лет. Каждый год выявляется более 10000 случаев заболевания, и смертность составляет почти 5000 в год (по данным Американского онкологического общества, 2006 г., и сводной статистики рака SEER). ХЛЛ является неизлечимой болезнью, но в большинстве случаев прогрессирует медленно. Многие люди с ХЛЛ многие годы ведут нормальный и активный образ жизни. Вследствие своего замедленного изначального развития ХЛЛ на ранних стадиях не лечат, поскольку считается, что раннее лечение ХЛЛ не улучшает выживаемость или качество жизни. Вместо этого проводят наблюдение за состоянием больного с течением времени. Первоначальное лечение ХЛЛ варьируется в зависимости от точного диагноза и прогрессирования болезни. Для лечения ХЛЛ применяют десятки средств. Схемы комбинированной химиотерапии, такой как FCR (флударабин, циклофосфамид и ритуксимаб) и BR (иделалисиб и ритуксимаб), эффективны как при вновь выявленном ХЛЛ, так и при рецидивирующем заболевании. Пересадка аллогенного костного мозга (стволовых клеток) редко используется в качестве лечения ХЛЛ первой линии вследствие связанного с ней риска.
Другим типом лейкоза является ОЛЛ, также известный как острый лимфоцитарный лейкоз. ОЛЛ характеризуется сверхпродуцированием и продолжающимся увеличением числа злокачественных и незрелых белых кровяных телец (также называемых лимфобластами) в костном мозге. "Острый" относится к недифференцированному, незрелому состоянию циркулирующих лимфоцитов ("бластов"), и эта болезнь быстро прогрессирует, и при отсутствии лечения продолжительность жизни составляет недели или месяцы. ОЛЛ особенно характерен для детского периода и наиболее часто встречается к возрасту 4-5 лет. Особенно смертность от этого заболевания высока для детей в возрасте 12-16 лет. В настоящее время считается, что по меньшей мере 80% ОЛЛ детского возраста излечимо. Каждый год выявляется почти 4000 случаев заболевания, и смертность составляет почти 1500 в год (по данным Американского онкологического общества, 2006 г., и сводной статистики рака SEER).
Молекула человеческого CD19 представляет собой рецептор на клеточной поверхности с отличающейся структурой, экспрессируемый на поверхности В-клеток человека, включая, но не ограничиваясь ими, предшественники В-клеток, В-клетки на ранней стадии развития (т.е., незрелые В-клетки), зрелые В-клетки при окончательной дифференциации в клетки плазмы и злокачественные В-клетки. CD19 экспрессируется в большинстве случаев пре-В-клеточных острых лимфобластных лейкозов (ОЛЛ), неходжкинских лимфом, В-клеточных хронических лимфоцитарных лейкозов (ХЛЛ), пролимфоцитарных лейкозов, лейкозов ворсистых клеток, острых недифференцированных лимфоцитарных лейкозов и некоторых острых лимфобластных лейкозов с нулевым фенотипом (Nadler et al, J. Immunol., 131:244-250 (1983), Loken et al, Blood, 70:1316-1324 (1987), Uckun et al, Blood, 71:13- 29 (1988), Anderson et al, 1984. Blood, 63:1424-1433 (1984), Scheuermann, Leuk. Lymphoma, 18:385-397(1995)). Тот факт, что CD19 экспрессируется на клетках плазмы, также позволяет предположить, что он может экспрессироваться на дифференцированных В-клеточных опухолях, таких как множественная миелома, плазмацитомы, опухоли Вальденстрема (Grossbard et al., Br. J. Haematol, 102:509-15(1998); Treon et al, Semin. Oncol, 30:248-52(2003)).
Поэтому антиген CD19 представляет собой цель для иммунотерапии при лечении неходжкинской лимфомы (включая каждый подтип, описанный в данном документе), хронического лимфоцитарного лейкоза и/или острого лимфобластного лейкоза.
Были продемонстрированы некоторые CD19 терапии. Три пациента с ХЛЛ на поздней стадии получали Т-клетки, экспрессирующие химерный антигенный рецептор (CAR) к CD19, включая как 
, так и 4-ВВ костимулирующий домен. Публикация Kalos et al., Т cells with Chimeric Antigen Receptors Have Potent Antitumor Effects and Can Establish Memory in Patients with Advanced Leukemia, Science Translational Medicine, vol. 3, no. 95 (10 августа 2011 г.), которая включена в данный документ во всей своей полноте ссылкой. В публикации Sadelain et al., The promise and potential pitfalls of chimeric antigen receptors, Current Opinion in Immunology, Elsevier, vol. 21, no. 2, 2 апреля 2009 г., которая включена в данный документ во всей своей полноте ссылкой, также описаны химерные антигенные рецепторы (CAR) к CD19.
Применение антитела CD19 при неспецифических В-клеточных лимфомах обсуждается в публикации WO 2007076950 (US 2007154473), обе из которых включены в данный документ во всей своей полноте ссылкой.
Применение антитела CD19 при ХЛЛ, НХЛ и ОЛЛ описано в публикации Scheuermann et al., CD19 Antigen in Leukemia and Lymphoma Diagnosis and Immunotherapy, Leukemia and Lymphoma, Vol. 18, 385-397 (1995), которая включена в данный документ во всей своей полноте ссылкой.
Дополнительные антитела, специфичные к CD19, описаны в публикациях WO 2005012493 (US 7109304), WO 2010053716 (US 12/266999) (Immunomedics); WO 2007002223 (US US 8097703) (Medarex); WO 2008022152 (12/377251) и WO 2008150494 (Xencor), WO 2008031056 (US 11/852106) (Medimmune); WO 2007076950 (US 11/648505) (Merck Patent GmbH); WO 2009/052431 (US 12/253895) (Seattle Genetics); и WO 2010095031 (12/710442) (Glenmark Pharmaceuticals), WO 2012010562 и WO 2012010561 (International Drug Development), WO 2011147834 (Roche Glycart) и WO 2012/156455 (Sanofi), которые включены в данный документ во всей своей полноте ссылкой.
Комбинации антител, специфичных к CD19, и других средств описаны в публикациях WO 2010151341 (US 13/377514) (The Feinstein Institute); US 5686072 (University of Texas) и WO 2002022212 (PCT/US01/29026) (IDEC Pharmaceuticals), WO 2013/024097 (14/126928) (MorphoSys AG) и WO 2013/024095 (14/127217) (MorphoSys AG), которые включены в данный документ во всей своей полноте ссылкой. В реферате 4765 Ежегодной встречи Американской ассоцииации исследования рака (AACR Annual Meeting) 2014, 5-9 апреля 2014 г. в Сан Диего, Калифорния, под названием "Drug synergies observed for antibody and toxin components of SAR3419 ADC contribute to overall conjugate efficacy and can be combination drug or tumor cell line dependent" сообщается о лекарственном конъюгате антитела (ADC) SAR3419 к CD19 с ингибиторами PI3K в некоторых клеточных линиях.
В продажу поступают некоторые ингибиторы фосфоинозитид-3-киназы. Иделалисиб, также известный как GS-1101 или CAL-101, производится компанией Gilead и имеет торговое наименование Зиделиг (Zydelig) в Соединенных Штатах. Иделалисиб описывается в патентах США №№6800620; 8865730; 8980901; RE44599; и RE44638, которые включены в данный документ во всей своей полноте ссылкой.
Очевидно, что несмотря на недавний прогресс в обнаружении и разработке противоопухолевых средств, многие формы рака, в которые вовлечены опухоли, экспрессирующие CD19, по-прежнему имеют плохой прогноз. Поэтому существует потребность в усовершенствованных способах лечения таких форм рака.
Краткое описание
Ни в каком из документов предшествующего уровня техники, ни в их комбинации, не предполагается наличие синергического действия комбинации приведенных антител и Иделалисиба в лечении неходжкинской лимфомы, хронического лимфоцитарного лейкоза и/или острого лимфобластного лейкоза.
В одном аспекте настоящее изобретение относится к синергической комбинации антитела, специфичного к CD19, и ингибитора фосфоинозитид-3-киназы. Такие комбинации полезны при лечении В-клеточных злокачественных новообразований, таких как неходжкинская лимфома (НХЛ), хронический лимфоцитарный лейкоз и/или острый лимфобластный лейкоз (ОЛЛ).
Считается, что по моделям in vitro можно судить о том, как определенные соединения или комбинации соединений будут вести себя в ходе применения у людей. Испытания проводились на многих клеточных линиях, например, клетках МЕС-1 (DSMZ# АСС497) клеточной линии хронического В-клеточного лейкоза. По клеткам МЕС-1 в такой модели in vitro можно судить о том, как комбинация будет работать в ходе лечения хронического лимфоидного лейкоза (ХЛЛ) у людей.
Кроме того, при комбинировании соединений in vitro предполагается, что они будут иметь только совокупное воздействие. Неожиданно изобретателями было обнаружено, что комбинация определенного антитела, специфичного к CD19, и Иделалисиба опосредовала синергический уровень специфического клеточного уничтожения in vitro по сравнению с одним только антителом и одним только Иделалисибом.
В частности, изобретателями было обнаружено, что комбинация MOR00208 и Иделалисиба опосредовала синергический уровень специфического клеточного уничтожения in vitro в случае клеток МЕС-1 по сравнению с одним только антителом и одним только Иделалисибом.
Кроме того, и также неожиданно, изобретателями было обнаружено, что комбинация определенного антитела, специфичного к CD19, и Иделалисиба имела определенные улучшенные функциональные свойства по сравнению с одним только антителом и одним только Иделалисибом.
В целом, комбинация названного антитела к CD19 и Иделалисиба продемонстрировала синергическое поведение в моделях, относящихся к ХЛЛ. Поскольку ХЛЛ относится к В-клеточным расстройствам, и CD19 сверхэкспрессируется на В-клетках, названная комбинация будет иметь такой же механизм действия и должна также проявлять синергическое действие в лечении других В-клеточных расстройств, например, НХЛ и ОЛЛ.
Поэтому комбинация названных антитела, специфичного к CD19, и Иделалисиба должна быть эффективной при лечении людей в случаях неходжкинской лимфомы, хронического лимфоцитарного лейкоза и/или острого лимфобластного лейкоза. Ожидаемая действенность комбинации названных антитела, специфичного к CD19, и Иделалисиба будет подтверждена в клинических исследованиях.
Поскольку механизмы действия Иделалисиба и других ингибиторов фосфоинозитид-3-киназ похожи, так как все они действуют путем подавления одного или нескольких ферментов фосфоинозитид-3-киназ, которые являются частью сигнального пути PI3K/AKT/mTOR - важного сигнального пути многих клеточных функций, таких как регулирование роста, метаболизм и инициация трансляции, считается, что синергия также будет наблюдаться при лечении людей с выявленными неходжкинской лимфомой, хроническим лимфоцитарным лейкозом и/или острым лимфобластным лейкозом комбинацией названного антитела к CD19 и ингибитора фосфоинозитид-3-киназы, отличающегося от Иделалисиба.
Поскольку названное антитело к CD19 и другие антитела к CD19 связываются с CD19, считается, что синергия также будет наблюдаться при лечении людей с выявленными неходжкинской лимфомой, хроническим лимфоцитарным лейкозом и/или острым лимфобластным лейкозом комбинацией любого антитела к CD19 и ингибитора фосфоинозитид-3-киназы, например, Иделалисиба.
Один аспект настоящего раскрытия включает в себя синергическую комбинацию, где антитело, специфичное к CD19, содержит участок HCDR1 с последовательностью SYVMH (SEQ ID NO: 1), участок HCDR2 с последовательностью NPYNDG (SEQ ID NO: 2), участок HCDR3 с последовательностью GTYYYGTRVFDY (SEQ ID NO: 3), участок LCDR1 с последовательностью RSSKSLQNVNGNTYLY (SEQ ID NO: 4), участок LCDR2 с последовательностью RMSNLNS (SEQ ID NO: 5), участок LCDR3 с последовательностью MQHLEYPIT (SEQ ID NO: 6) и Иделалисиб. В предпочтительных аспектах комбинацию применяют для лечения неходжкинской лимфомы, хронического лимфоцитарного лейкоза и/или острого лимфобластного лейкоза.
Описание графических материалов
На Фигуре 1 показана аминокислотная последовательность вариабельных доменов MOR00208.
На Фигуре 2 показана аминокислотная последовательность Fc участков MOR00208.
На Фигурах 3-6 показаны кривые ADCC в зависимости от дозы для комбинации MOR00208 и Иделалисиба в клетках МЕС-1, полученные в четырех независимых экспериментах.
На Фигурах 7-10 показаны кривые CI для комбинации MOR00208 и Иделалисиба при изменяющихся дозах, полученные в четырех независимых экспериментах.
Подробное описание изобретения
"Синергия", "синергизм" или "синергический" означают больше, чем ожидаемый суммарный эффект комбинации. "Синергия", "синергизм" или "синергический" эффект комбинации определены в данном документе с помощью способов в публикации Chou et al., Clarke et al. и/или Webb et al. См. Ting-Chao Chou, Theoretical Basis, Experimental Design, and Computerized Simulation of Synergism and Antagonism in Drug Combination Studies, Pharmacol Rev 58:621-681 (2006), которая включена в данный документ во всей своей полноте ссылкой. Также см. публикацию Clarke et al., Issues in experimental design and endpoint analysis in the study of experimental cytotoxic agents in vivo in breast cancer and other models, Breast Cancer Research and Treatment 46:255-278 (1997), которая включена в данный документ во всей своей полноте ссылкой. Также см. публикацию Webb, J. L. (1963) Enzyme and Metabolic Inhibitors, Academic Press, New York, которая включена в данный документ во всей своей полноте ссылкой.
Термин "антитело" означает моноклональные антитела, включая любой изотип, такой как IgG, IgM, IgA, IgD и IgE. Антитело IgG состоит из двух идентичных тяжелых цепей и двух идентичных легких цепей, которые соединены дисульфидными связями. Каждая тяжелая и легкая цепь содержит константную область и вариабельную область. Каждая вариабельная область содержит три сегмента, называемых "участками, определяющими комплементарность" ("CDR") или "гипервариабельными участками", которые в первую очередь отвечают за связывание с эпитопом антигена. На них ссылаются как CDR1, CDR2 и CDR3, нумеруя последовательно от N-конца. Более консервативные фрагменты вариабельных участков за пределами CDR называют "каркасными участками". "Фрагмент антитела" означает фрагмент Fv, scFv, dsFv, Fab, Fab', F(ab')2 или другой фрагмент, который содержит по меньшей мере одну вариабельную тяжелую или вариабельную легкую цепь, каждая из которых содержит CDR и каркасные участки.
"Ингибитор фосфоинозитид-3-киназы" - это тип лекарственного средства, которое действует путем подавления одного или нескольких фосфоинозитид-3-киназных ферментов, которые являются частью сигнального пути PI3K/AKT/mTOR - важного сигнального пути многих клеточных функций, таких как регулирование роста, метаболизм и инициация трансляции.
Существует несколько различных классов и изоформ PI3K. Класс 1 PI3K имеет каталитическую субъединицу, известную как р110, четырех типов (изоформ) - р110-альфа, р110-бета, р110-гамма и р110-дельта. Исследуемые здесь ингибиторы ингибируют одну или несколько изоформ Класса 1 PI3K.
Ингибиторы фосфоинозитид-3-киназы включают, по меньшей мере, Иделалисиб, Дувелисиб и Копанлисиб.
Иделалисиб поступает в продажу от Gilead Sciences, Inc. (торговое наименование Зиделиг (Zydelig), также называемый GS-1101 или CAL-101). Иделалисиб в настоящее время одобрен для лечения рецидивирующего хронического лимфоцитарного лейкоза (ХЛЛ) в комбинации с ритуксимабом у пациентов, для которых ритуксимаб отдельно считается приемлемой терапией вследствие других сопутствующих заболеваний; рецидивирующей фолликулярной В-клеточной неходжкинской лимфомы (ФЛ) у пациентов, которые до этого получили по меньшей мере две системные терапии; рецидивирующей малой лимфоцитарной лимфомы (МЛЛ) у пациентов, которые до этого получили по меньшей мере две системные терапии. Активная субстанция действует как ингибитор фосфоинозитид-3-киназы, более конкретно - она блокирует P110δ - дельта-изоформу фермента фосфоинозитид-3-киназы. Иделалисиб имеет следующую формулу:
Дувелисиб (Duvelisib) (IPI-145, INK1197) - это новый и селективный ингибитор PI3K δ/γ (дельта и гамма). Дувелисиб имеет следующую формулу:
Копанлисиб (Copanlisib, BAY 80-6946), разработанный компанией Bayer, представляет собой селективный ингибитор Класса 1 фосфоинозитид-3-киназы. Копанлисиб имеет следующую формулу:
"VH" относится к вариабельной области тяжелой цепи иммуноглобулина антитела или фрагмента антитела. "VL" относится к вариабельной области легкой цепи иммуноглобулина антитела или фрагмента антитела.
Термин "CD19" относится к белку, известному как CD19, имеющему следующие синонимы: В4, В-лимфоцитарный антиген CD19, В-лимфоцитарный поверхностный антиген В4, CVID3, дифференцировочный антиген CD19, MGC12802 и Т-клеточный поверхностный антиген Leu-12.
Аминокислотная последовательность человеческого CD19:
"MOR00208" представляет собой антитело к CD19. Аминокислотная последовательность вариабельных доменов представлена на Фигуре 1. Аминокислотная последовательность Fc участков тяжелой и легкой цепей MOR00208 представлена на Фигуре 2. "MOR00208", "XmAb 5574" и "MOR208" используются в качестве синонимов для описания антитела, показанного на Фигурах 1 и 2. Антитело MOR00208 описывается в публикации заявки на патент США за порядковым номером 12/377251, где полная легкая цепь представляет собой SEQ ID NO: 106, а полная тяжелая цепь представляет собой SEQ ID NO: 87, которая включена в данный документ во всей своей полноте ссылкой.
MOR00208 прошло испытание в клинических исследованиях на людях в отношении ОЛЛ, НХЛ, ХЛЛ и малой лимфоцитарной лимфомы (МЛЛ).
Дополнительные антитела, специфичные к CD19, описаны в патенте США №7109304 (Immunomedics), который включен в данный документ во всей своей полноте ссылкой; заявке на патент США за порядковым номером 11/917750 (Medarex), которая включена в данный документ во всей своей полноте ссылкой; заявке на патент США за порядковым номером 11/852106 (Medimmune), которая включена в данный документ во всей своей полноте ссылкой; заявке на патент США за порядковым номером 11/648505 (Merck Patent GmbH), которая включена в данный документ во всей своей полноте ссылкой; патенте США №7968687 (Seattle Genetics), который включен в данный документ во всей своей полноте ссылкой; и заявке на патент США за порядковым номером 12/710442 (Glenmark Pharmaceuticals), которая включена в данный документ во всей своей полноте ссылкой.
"Fc участок" означает константный участок антитела, который у людей может относиться к подклассу IgG1, 2, 3, 4 или другим подклассам. Последовательности человеческих Fc участков можно узнать на сайте IMGT, Human IGH C-REGIONs, http://www.imgt.org/IMGTrepertoire/Proteins/protein/human/IGH/IGHC/Hu_IGHCallgenes.html (найдено 16 мая 2011 г.).
«RefmAb33" представляет собой антитело со следующей аминокислотной последовательностью:
Тяжелая цепь, включая Fc участок:
Легкая цепь, включая Fc участок:
RefmAb33 специфичен к RSV и используется в качестве изотипического контроля, поскольку он имеет такой же Fc участок, как и MOR00208.
"Комбинация" означает более чем один компонент, например, соединение, такое как антитело, и Иделалисиб.
Настоящее раскрытие также относится к комбинациям, фармацевтическим препаратам и фармацевтическим композициям, содержащим описанные комбинации. Два компонента синергической комбинации данного изобретения, например, антитело, специфичное к CD19, и Иделалисиб, можно вводить вместе, одновременно, отдельно или последовательно, как физически, так и во времени.
В настоящее время Иделалисиб предписано принимать перорально по 150 мг дважды в день. В настоящее время MOR00208 вводят внутривенно при дозировании либо раз в неделю, либо один раз в две недели. В одном варианте осуществления Иделалисиб принимают до введения антитела, специфичного к CD19, например, MOR00208. В одном варианте осуществления Иделалисиб принимают после введения антитела, специфичного к CD19, например, MOR00208.
Предпочтительно, чтобы введение обоих лекарственных средств позволяло обоим лекарственным средствам проявлять свое действие в пациенте одновременно. Например, если MOR00208 дозируют еженедельно, а Иделалисиб дозируют ежедневно, то активные субстанции обоих лекарственных средств желательно присутствуют в пациенте одновременно, даже если оба лекарственных средства не всегда вводят в один и тот же день.
"Одновременно" или "вводят вместе" означает, что два компонента вводят в момент времени, когда оба компонента (лекарственные средства) проявляют свое действие в пациенте в одно и то же время. Под "синергизмом" подразумевается, что оба лекарственных средства проявляют свое действие в пациенте в одно и то же время. "Одновременно" или "вводят вместе" не обязательно означает, что два лекарственных средства вводят в один и тот же момент времени или всегда в один и тот же день.
Эти два компонента могут быть составлены в различных фармацевтических композициях.
Фармацевтическая композиция включает активный агент, например, антитело, для терапевтического применения у людей. Фармацевтическая композиция может включать приемлемые носители или вспомогательные вещества.
"Вводимый", "введение" или "прием" включают, но не ограничиваются этим, доставку в форме инъекции, и включают, например, внутривенный, внутримышечный, внутрикожный, наружный, чрескожный, внутрибрюшинный, внутриглазничный, имплантационный или подкожный путь, или через слизистую оболочку, например, в виде назального спрея или аэрозоля для ингаляции, или в виде усваиваемого в пищеварительном тракте раствора, или перорально в виде капсулы или таблетки.
"Терапевтически эффективное количество" соединения или комбинации относится к количеству, способному вызвать заметное улучшение, облегчить или частично прекратить клинические проявления данного заболевания или расстройства. Количество, эффективное для конкретной терапевтической цели, будет зависеть от тяжести заболевания или травмы, а также от веса и общего состояния субъекта. Понятно, что подходящую дозу можно определить, используя обычные эксперименты, путем построения таблицы значений и тестирования различных точек в таблице; все из этих приемов являются обычными навыками подготовленного врача или клинического ученого.
"CDR" в данном документе определены, как у Chothia et al., либо как у Kabat et al. См. публикацию Chothia С, Lesk AM. (1987) Canonical structures for the hypervariable regions of immunoglobulins. J Mol Biol., 196(4):901-17, которая включена в данный документ во всей своей полноте ссылкой. См. публикацию Kabat Е.А, Wu Т.Т., Perry Н.М., Gottesman K.S. and Foeller С. (1991). Sequences of Proteins of Immunological Interest. 5th edit., NIH Publication no. 91-3242, US Dept. of Health and Human Services, Washington, DC, которая включена в данный документ во всей своей полноте ссылкой.
"Перекрестно конкурирует" означает способность антитела или другого связывающего агента препятствовать связыванию других антител или связывающих агентов с CD19 в стандартном анализе конкурентного связывания. Способность или степень, с которой антитело или другой связывающий может препятствовать связыванию другого антитела или связывающей молекулы с CD19, и, таким образом, его способность перекрестно конкурировать в соответствии сданным изобретением, можно определить, используя стандартные анализы конкурентного связывания. В одном подходящем количественном анализе используется технология Biacore (например, если использовать прибор BIAcore 3000 (Biacore, Uppsala, Sweden)), который может измерять степень взаимодействия, используя технологию поверхностного плазмонного резонанса. Другой количественный анализ для измерения перекрестной конкуренции использует подход, основанный на ELISA. Процесс с высокой пропускной способностью для "биннинга эпитопов" антител, основанный на их перекрестной конкуренции, описан в международной патентной заявке №WO 2003/48731.
Термин "эпитоп" включает в себя любую детерминанту белка, способную специфически связываться с антителом или иным образом взаимодействовать с молекулой. Эпитопные детерминанты обычно состоят из химически активных поверхностных скоплений молекул, таких как боковые цепи аминокислот или углеводов или Сахаров, и могут иметь специфические свойства 3-х мерных структур, а также определенные свойства, обусловленные наличием электрического заряда. Эпитоп может быть "линейным" или "конформационным". Термин "линейный эпитоп" относится к эпитопу со всеми точками взаимодействия между белком и взаимодействующей молекулой (такой как антитело), расположенными линейно вдоль первичной аминокислотной последовательности белка (непрерывной). Термин "конформационный эпитоп" относится к эпитопу, в котором прерывистые аминокислоты объединяются в трехмерную конформацию. В конформационном эпитопе точки взаимодействия расположены по аминокислотным остаткам на белке, которые отделены друг от друга.
"Связывается с тем же эпитопом, что и" означает способность антитела или другого связывающего агента связываться с CD19 и иметь тот же эпитоп, что и описываемое антитело. Эпитопы описываемого антитела и других антител к CD19 могут быть определены с использованием стандартных методов картирования эпитопов. Методы картирования эпитопов, широко известные в области техники, включают Протоколы картирования эпитопов (Epitope Mapping Protocols) в публикации Methods in Molecular Biology, Vol. 66 (Glenn E.Morris, Ed., 1996) Humana Press, Totowa, New Jersey. Например, линейные эпитопы можно определять путем, например, одновременного синтеза большого количества пептидов на твердых подложках, пептидов, соответствующих частям молекулы белка, и взаимодействия пептидов с антителами, в то время как пептиды все еще связаны с подложками. Такие методики известны в уровне техники и описаны, например, в патенте США №4708871; публикациях Geysen et al, (1984) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 8:3998-4002; Geysen et al, (1985) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82:78-182; Geysen et al, (1986) Mol. Immunol. 23:709-715. Аналогичным образом, конформационные эпитопы легко идентифицируются путем определения пространственной конформации аминокислот, такого как, например, обмен водорода / дейтерия, рентгеновская кристаллография и двумерный ядерный магнитный резонанс. См., например, Epitope Mapping Protocols, выше. Антигенные области белков также могут быть идентифицированы с использованием стандартных графиков антигенности и гидрофобности, таких как рассчитанные с использованием, например, программного обеспечения Omiga версия 1.0, которое можно получить у Oxford Molecular Group.В этой компьютерной программе используется способ Hopp / Woods, Hopp et al, (1981) Proc. Natl. Acad. Sci USA 78:3824-3828 для определения профилей антигенности, и методика Kyte-Doolittle, Kyte et al, (1982) J. Mol. Biol. 157:105-132 для построения графиков гидрофобности.
Варианты осуществления
Один аспект настоящего раскрытия включает комбинацию антитела, специфичного к CD19, и ингибитора фосфоинозитид-3-киназы для применения в лечении неходжкинской лимфомы, хронического лимфоцитарного лейкоза и/или острого лимфобластного лейкоза. В вариантах осуществления комбинация является синергической.
В данном документе, комбинация названного антитела к CD19 и Иделалисиба продемонстрировала синергическое поведение в моделях in vitro, относящихся к ХЛЛ. Поскольку ХЛЛ относится к В-клеточному расстройству, a CD19 сверхэкспрессируется на В-клетках, названная комбинация должна иметь такой же механизм действия и должна также проявлять синергическое действие в лечении других В-клеточных расстройств, например, НХЛ и ОЛЛ. Поэтому комбинация названных антитела, специфичного к CD19, и Иделалисиба должна быть эффективной при лечении людей в случаях неходжкинской лимфомы, хронического лимфоцитарного лейкоза и/или острого лимфобластного лейкоза. Ожидаемая действенность комбинации названных антитела, специфичного к CD19, и Иделалисиба будет подтверждена в клинических исследованиях.
Испытания проводили на клетках МЕС-1 (DSMZ# АСС497) - клеточной линии хронического В-клеточного лейкоза.
Были оценены дополнительные клеточные линии: Клетки-Ramos (АТСС номер CRL-1596) - человеческие клетки лимфомы Беркитта. HG-3 (DSMZ#ACC765) и CII (DSMZ#ACC773) - клеточная линия хронического лимфоцитарного лейкоза. Su-DHL 6 (DSMZ#ACC572) и U2932 (DSMZ#ACC633) - клеточная линия диффузной крупноклеточной В-клеточной лимфомы (DLBCL). JVM-2 (АТСС® CRL-3002) - клеточная линия лимфомы из клеток мантии. BALL-1 (DSMZ#ACC742) - клеточная линия острого лимфобластного лейкоза.
По клеткам МЕС-1 в такой модели in vitro можно судить о том, как комбинация будет действовать в ходе лечения хронического лимфоидного лейкоза (ХЛЛ) у людей. По клеткам-Ramos в такой модели in vitro можно судить о том, как комбинация будет действовать в ходе лечения неходжкинской лимфомы (НХЛ) у людей. По клеткам HG-3 и CII в такой модели in vitro можно судить о том, как комбинация будет работать в ходе лечения хронического лимфоидного лейкоза (ХЛЛ) у людей. По клеткам Su-DHL 6 и U2932 в такой модели in vitro можно судить о том, как комбинация будет работать в ходе лечения неходжкинской лимфомы у людей. По клеткам JVM-2 в такой модели in vitro можно судить о том, как комбинация будет работать в ходе лечения неходжкинской лимфомы у людей. По клеткам BALL-1 в такой модели in vitro можно судить о том, как комбинация будет работать в ходе лечения острого лимфобластного лейкоза у людей.
Значения по Clarke et al. и значения индекса Chou однозначно указывают на синергизм комбинации MOR00208 и Иделалисиба для специфического уничтожения клеток МЕС-1 по сравнению с одним только MOR00208 и только одним Иделалисибом.
В целом, комбинация названного антитела к CD19 и Иделалисиба продемонстрировала синергическое поведение в моделях, относящихся к ХЛЛ. Поэтому комбинация названных антитела, специфичного к CD19, и Иделалисиба должна быть эффективной при лечении людей в случаях неходжкинской лимфомы, хронического лимфоцитарного лейкоза и/или острого лимфобластного лейкоза.
Поскольку механизмы действия Иделалисиба и других ингибиторов фосфоинозитид-3-киназ похожи, так как все они действуют путем подавления одного или нескольких ферментов фосфоинозитид-3-киназ, которые являются частью сигнального пути PI3K/AKT/mTOR - важного сигнального пути многих клеточных функций, таких как регулирование роста, метаболизм и инициация трансляции, считается, что синергия также будет наблюдаться при лечении людей с выявленными неходжкинской лимфомой, хроническим лимфоцитарным лейкозом и/или острым лимфобластным лейкозом комбинацией названного антитела к CD19 и ингибитора фосфоинозитид-3-киназы, отличающегося от Иделалисиба.
Поскольку названное антитело к CD19 и другие антитела к CD19 связываются с CD19, считается, что синергия также будет наблюдаться при лечении людей с выявленными неходжкинской лимфомой, хроническим лимфоцитарным лейкозом и/или острым лимфобластным лейкозом комбинацией любого антитела к CD19 и ингибитора фосфоинозитид-3-киназы, где антитело к CD19 представляет собой, например, описанное в публикациях заявок на патент США за номером 12/377251 (Xencor), WO 2005012493, WO 2010053716 (Immunomedics), WO 2007002223 (Medarex), WO 2008022152 (Xencor), WO 2008031056 (Medimmune), WO 2007/076950 (Merck Patent GmbH), WO 2009/052431 (Seattle Genetics) и WO 2010095031 (Glenmark Pharmaceuticals), все из которых включены в данный документ во всей своей полноте ссылкой.
В вариантах осуществления антитело, специфическое к CD19, включает в себя антитело, которое перекрестно конкурирует с антителом, содержащим участок HCDR1 с последовательностью SYVMH (SEQ ID NO: 1), участок HCDR2 с последовательностью NPYNDG (SEQ ID NO: 2), участок HCDR3 с последовательностью GTYYYGTRVFDY (SEQ ID NO: 3), участок LCDR1 с последовательностью RSSKSLQNVNGNTYLY (SEQ ID NO: 4), участок LCDR2 с последовательностью RMSNLNS (SEQ ID NO: 5), и участок LCDR3 с последовательностью MQHLEYPIT (SEQ ID NO: 6).
В вариантах осуществления антитело, специфическое к CD19, включает в себя антитело, которое связывается с тем же эпитопом, что и антитело, содержащее участок HCDR1 последовательности SYVMH (SEQ ID NO: 1), участок HCDR2 с последовательностью NPYNDG (SEQ ID NO: 2), участок HCDR3 с последовательностью GTYYYGTRVFDY (SEQ ID NO: 3), участок LCDR1 с последовательностью RSSKSLQNVNGNTYLY (SEQ ID NO: 4), участок LCDR2 с последовательностью RMSNLNS (SEQ ID NO: 5), и участок LCDR3 с последовательностью MQHLEYPIT (SEQ ID NO: 6).
В вариантах осуществления антитело, специфическое к CD19, включает в себя участок HCDR1 с последовательностью SYVMH (SEQ ID NO: 1), участок HCDR2 с последовательностью NPYNDG (SEQ ID NO: 2), участок HCDR3 с последовательностью GTYYYGTRVFDY (SEQ ID NO: 3), участок LCDR1 с последовательностью RSSKSLQNVNGNTYLY (SEQ ID NO: 4), участок LCDR2 с последовательностью RMSNLNS (SEQ ID NO: 5), и участок LCDR3 с последовательностью MQHLEYPIT (SEQ ID NO: 6).
В вариантах осуществления антитело, специфическое к CD19, включает в себя вариабельную тяжелую цепь последовательности
и вариабельную легкую цепь последовательности 
В некоторых вариантах осуществления указанное антитело содержит константный домен легкой цепи последовательности
В вариантах осуществления антитело, специфическое к CD19, включает в себя константный домен легкой цепи последовательности
В вариантах осуществления ингибитор фосфоинозитид-3-киназы представляет собой Иделалисиб.
В вариантах осуществления компоненты комбинации - антитело, специфичное к CD19, и Иделалисиб - вводят отдельно. В одном варианте осуществления Иделалисиб принимают до введения антитела, специфичного к CD19. В одном варианте осуществления Иделалисиб принимают после введения антитела, специфичного к CD19. В вариантах осуществления компоненты комбинации - антитело, специфичное к CD19, и Иделалисиб - вводят одновременно или вместе.
В вариантах осуществления комбинация представляет собой фармацевтическую композицию. В вариантах осуществления композиция включает в себя приемлемый носитель. В вариантах осуществления комбинацию вводят в эффективном количестве.
В другом аспекте синергическая комбинация антитела, специфичного к CD19, содержащего участок HCDR1 с последовательностью SYVMH (SEQ ID NO: 1), участок HCDR2 с последовательностью NPYNDG (SEQ ID NO: 2), участок HCDR3 с последовательностью GTYYYGTRVFDY (SEQ ID NO: 3), участок LCDR1 с последовательностью RSSKSLQNVNGNTYLY (SEQ ID NO: 4), участок LCDR2 с последовательностью RMSNLNS (SEQ ID NO: 5), участок LCDR3 с последовательностью MQHLEYPIT (SEQ ID NO: 6), и Иделалисиба способна опосредовать уничтожение клеток МЕС-1 с помощью ADCC в присутствии выделенных человеческих РВМС с действенностью, которая по меньшей мере вдвое, втрое, вчетверо или впятеро лучше действенности одного только Иделалисиба.
Один аспект настоящего раскрытия включает в себя синергическую комбинацию антитела, специфичного к CD19, содержащего участок HCDR1 с последовательностью SYVMH (SEQ ID NO: 1), участок HCDR2 с последовательностью NPYNDG (SEQ ID NO: 2), участок HCDR3 с последовательностью GTYYYGTRVFDY (SEQ ID NO: 3), участок LCDR1 с последовательностью RSSKSLQNVNGNTYLY (SEQ ID NO: 4), участок LCDR2 с последовательностью RMSNLNS (SEQ ID NO: 5), участок LCDR3 с последовательностью MQHLEYPIT (SEQ ID NO: 6), и Иделалисиба для лечения неходжкинской лимфомы, хронического лимфоцитарного лейкоза и/или острого лимфобластного лейкоза. В вариантах осуществления неходжкинскую лимфому выбирают из группы, состоящей из фолликулярной лимфомы, малой лимфоцитарной лимфомы, лимфоидной ткани слизистых оболочек, лимфомы маргинальной зоны, диффузной крупноклеточной В-клеточной лимфомы, лимфомы Беркитта и лимфомы из клеток мантии.
Другой аспект включает в себя способ лечения неходжкинской лимфомы, хронического лимфоцитарного лейкоза и/или острого лимфобластного лейкоза у лица, нуждающегося в лечении; этот способ включает в себя введение антитела, специфичного к CD19, и ингибитора фосфоинозитид-3-киназы. В вариантах осуществления способа антитело, специфичное к CD19, содержит участок HCDR1 с последовательностью SYVMH (SEQ ID NO: 1), участок HCDR2 с последовательностью NPYNDG (SEQ ID NO: 2), участок HCDR3 с последовательностью GTYYYGTRVFDY (SEQ ID NO: 3), участок LCDR1 с последовательностью RSSKSLQNVNGNTYLY (SEQ ID NO: 4), участок LCDR2 с последовательностью RMSNLNS (SEQ ID NO: 5), участок LCDR3 с последовательностью MQHLEYPIT (SEQ ID NO: 6). В вариантах осуществления способа антитело включает в себя описываемое антитело, специфичное к CD19. В вариантах осуществления способа ингибитор фосфоинозитид-3-киназы представляет собой Иделалисиб.
Другой аспект включает в себя применение антитела, специфичного к CD19, и ингибитора фосфоинозитид-3-киназы для производства лекарства для лечения неходжкинской лимфомы, хронического лимфоцитарного лейкоза и/или острого лимфобластного лейкоза у лица, нуждающегося в лечении; этот способ включает в себя введение лекарства, содержащего антитело, специфичное к CD19, и ингибитор фосфоинозитид-3-киназы. В вариантах осуществления способа антитело, специфичное к CD19, содержит участок HCDR1 последовательности SYVMH (SEQ ID NO: 1), участок HCDR2 последовательности NPYNDG (SEQ ID NO: 2), участок HCDR3 последовательности GTYYYGTRVFDY (SEQ ID NO: 3), участок LCDR1 последовательности RSSKSLQNVNGNTYLY (SEQ ID NO: 4), участок LCDR2 последовательности RMSNLNS (SEQ ID NO: 5), и участок LCDR3 последовательности MQHLEYPIT (SEQ ID NO: 6). В вариантах осуществления способа антитело включает в себя описываемое антитело, специфичное к CD19. В вариантах осуществления способа ингибитор фосфоинозитид-3-киназы представляет собой Иделалисиб.
Примеры
Пример 1: Цитотоксичность клеток МЕС-1 при использовании MOR00208 и Иделалисиба по отдельности и в комбинации друг с другом
Материалы
Клеточные линии клеток МЕС-1: (DSMZ №АСС497) клеточная линия хронического В-клеточного лейкоза; JVM-2 (АТСС® CRL-3002) - клеточная линия лимфомы из клеток мантии; клетки-Ramos (АТСС №CRL-1596), клетки человеческой лимфомы Беркитта; HG-3 (DSMZ №АСС765) и CII (DSMZ №АСС773) - клеточная линия хронического лимфоцитарного лейкоза; Su-DHL 6 (DSMZ №АСС572) и U2932 (DSMZ №АСС633) - клеточная линия диффузной крупноклеточной В-клеточной лимфомы (DLBCL); и BALL-1 (DSMZ №АСС742) - клеточная линия острого лимфобластного лейкоза.
Условия культивирования используемых клеточных линий в соответствии с инструкциями производителя.
Клеточная среда: Iscove's Modified Dulbecco's Medium (IMDM), Invitrogen, Кат. №:31980-048; RPMI1640, Invitrogen, Кат. №: 31870-074; GlutaMAX, Invitrogen, Кат. №: 35050-38 Партия №: 1654740; FCS: Sigma Кат. №:F7524 Партия №:111M3396.
NK: RPMI1640, с GlutaMAXTM, Invitrogen, Кат. №: 31870-074,10% FCS; Biocoll: Biochrome AG Кат. №:L6115 Партия №: 0034D; набор MACS NK для выделения клеток: Miltenyi Biotec Кат. №:130-092-657 Партия №:5150327376; Иделалисиб: Selleck Chem Кат. №:S2226; FCS: Sigma Кат. №:F7524 Партия №:111M3396; и RefmAb33 (анти-RSV) с таким же Fc участком, как и у MOR00208.
Методы
Цитотоксичность MOR00208 и Иделалисиба поодиночке и в комбинации друг с другом исследовали на клеточной линии МЕС-1.
Иделалисиб действует как ингибитор фосфоинозитид-3-киназы, более конкретно - он блокирует Р110δ - дельта-изоформу фермента фосфоинозитид-3-киназы. Иделалисиб сам по себе оказывает либо очень низкое цитотоксическое действие на клетки МЕС-1, либо оно отсутствует.MOR00208 нацелено на CD19 и способствует гибели клеток-мишеней посредством ADCC.
Следующие системы исследовали в качестве контрольных: а) клетки МЕС-1 + RefmAb33 + DMSO + NK клетки, b) клетки МЕС-1 + DMSO + NK клетки, с) клетки МЕС-1 + DMSO.
Гибель клеток-мишеней измеряли, используя следующие параметры: Иделалисиб при концентрациях 0,3, 1, 3 и 10 мкМ; MOR00208 при концентрациях 1,5, 0,015 и 0,0015 мкг/мл и комбинация MOR00208 и Иделалисиба при тех же концентрациях.
В группе Иделалисиба, в группе только одного MOR00208, а также в группе комбинации MOR00208 + Иделалисиб клетки-мишени предварительно обрабатывали Иделалисибом в течение 7 дней до проведения аналитических измерений ADCC. Клетки-мишени подсчитывали и окрашивали, используя CFSE в конечной концентрации 10 мкМ. В случае клеток-мишеней, обрабатываемых DMSO, выбрано соотношение действующее начало : мишень (Е:Т), равное 2:1, что соответствует плотности клеток, равной 5×105/мл. Воздействие на пролиферацию клеток-мишеней, оказываемое обработкой Иделалисибом, было учтено с помощью подгонки соотношения Е:Т для клеток, обработанных ингибитором. NK клетки подсчитывали и приводили к 1×106/мл. Количественный анализ гибели клеток-мишеней выполняли следующим образом: использовали 96-луночные планшеты, в каждую лунку вносили 100 мкл суспензии клеток-мишеней, а затем в каждую лунку вносили 100 мкл клеточной суспензии NK клеток, получая соотношение Е:Т, равное 2:1. Антитела разбавляли до концентрации в пределах 10-0,00001 нМ (соответствует 1,5-0,0000015 мкг/мл) в среде. Клетки центрифугировали и пеллеты из клеток-мишеней : действующего начала повторно суспендировали в 100 мкл среды, содержащей антитело, или в соответствующем контрольном растворе. Анализируемые суспензии инкубировали в течение 4 часов в CO2-инкубаторе при 37°C. После 10 мин инкубирования на льду в каждую лунку вносили 50 мкл раствора DAPI (конечная концентрация -1 мкг/мл) и инкубировали на льду в течение 10 мин. Измерение гибели клеток проводили, используя FACS-Verse. Погибшие клетки-мишени дали положительный результат в отношении DAPI.
Данные
В целом проводили шесть экспериментов, чтобы определить влияние на ADCC в клетках МЕС-1 со стороны комбинации MOR00208 и Иделалисиба. В двух из шести экспериментов данные исключали из анализа, поскольку контрольная группа RefmAb и контрольная группа только один DMSO показали гибель на 25% выше чем в контрольной группе только из клеток МЕС-1. В этих двух экспериментах нормальный анализ был невозможен вследствие аутореактивности NK клеток.
Кривые ADCC в зависимости от дозы для экспериментов 1-4 показаны на Фигурах 3-6.
Процент (%) погибших клеток (первичные данные исследования) для экспериментов 1-4 приведены в Таблицах 1-16 ниже.
Эксперимент 1
Расчет синергизма: По Clarke et al.
При низкой активности одного лекарства, как в данном случае, где только один Иделалисиб обладает низкой цитотоксичностью по отношению к клеткам МЕС-1, синергизм можно определять на основании статистических данных, свидетельствующих о том, что комбинация существенно отличается своим синергическим действием от действия одного только ингибирующего лекарства. См. публикацию Clarke et al., Issues in experimental design and endpoint analysis in the study of experimental cytotoxic agents in vivo in breast cancer and other models, Breast Cancer Research and Treatment 46:255-278 (1997), которая включена в данный документ во всей своей полноте ссылкой.
% мертвых клеток (первичные данные исследования) из Таблиц 1-16 анализировали следующим образом:
Несовместимые (АВ)/С<(А/С)×(В/С)
Аддитивные (АВ)/С=(А/С)×(В/С)
Синергичные (АВ)/С>(А/С)×(В/С)
где А - обработка одним MOR00208; В - обработка одним Иделалисибом; С - ответ контролей на DMSO + RefMab33; АВ - комбинированная обработка с А и В.
Эксперимент 1
Результаты
Эксперименты 2-4 при каждой концентрации продемонстрировали явную синергию комбинации MOR00208 + Иделалисиб при использовании методов по Clarke et al. Однако, в эксперименте 1 при нескольких концентрациях синергизм не наблюдался вследствие малого эффекта в группе Иделалисиба (см. Таблицы 1-3), этот эффект был несколько выше, чем в контрольной группе (на -4% выше, чем в контрольной группе). Эта небольшая (~ 4%) разница по сравнению с контрольным экспериментом находится в интервале значений результатов других контрольных экспериментов, поэтому ее можно отнести за счет условий эксперимента.
Расчет синергизма: Показатель аддитивности (CI)
С целью подтверждения результатов, касающихся синергизма, рассчитанных по Clarke et al. выше, применяли методику показателя аддитивности (CI) в отношении % погибших клеток (первичные данные исследования) из Таблиц 1-16. Для расчета CI мы использовали Иделалисиб в концентрациях 0,3, 1, 3 и 10 мкМ и три концентрации MOR208 (1,5, 0,015 и 0,0015 мкг/мл).
Такие вычисления приведены в публикации Ting-Chao Chou, Theoretical Basis, Experimental Design, and Computerized Simulation of Synergism and Antagonism in Drug Combination Studies, Pharmacol Rev 58:621-681 (2006), которая включена в данный документ во всей своей полноте ссылкой, и Chou TC, Talalay Р, Quantitative analysis of dose-effect relationships: the combined effects of multiple drugs or enzyme inhibitors. Adv Enzyme Regul 22: 27-55 (1984), которая включена в данный документ во всей своей полноте ссылкой. Способы Chou-Talalay выполняют с использованием метода CI-isobol (метода изоболограмм с показателем аддитивности).
Уравнение средней эффективной дозы
Уравнение средней эффективной дозы дает понятие о действии ингибитора (такого как лекарственное средство) в виде Fa/Fu=(D/D50)∧m, где D представляет собой дозу, Fa и Fu представляют собой часть системы, находящуюся под воздействием и не находящуюся под воздействием дозы D (Fa+Fu=1); D50 представляет собой дозу, оказывающую средний эффект (например, IC50, ED50, LD50). Постоянная т определяет форму кривой доза-эффект. Мы используем Graph Pad Prism для выполнения расчета нелинейной регрессии для оценки параметров m и D50.
Метод CI-isobol (изоболограмм с показателем аддитивности)
Метод CI-isobol дает количественную оценку синергизма между лекарственными средствами. Показатель аддитивности (CI) устанавливают на основании данных о зависимости доза-эффект при лечении одним лекарственным средством и комбинированного лечения. Значение CI меньше 1 указывает на синергизм; CI=1 указывает на аддитивный эффект; и CI>1 указывает на несовместимость. Взаимодействие лекарственных средств (синергизм или несовместимость) тем более выражены, чем больше значение CI отличается от 1.
Формально показатель аддитивности (CI) комбинированного лечения лекарственными средствами определяется как CI=D1/Dx1+D2/Dx2
Здесь D1 и D2 представляют собой дозы лекарственного средства 1 и лекарственного средства 2 в комбинации, соответственно; a Dx1, и Dx2 - это дозы при лечении только одним лекарственным средством 1 и только одним лекарственным средством 2, которые дадут такой же эффект, что и комбинация. Дозы Dx1 и Dx2 нужно оценивать из данных о зависимости доза-эффект при лечении одним лекарственным средством. По существу, уравнение средней эффективной дозы подгоняется к данным каждого лекарственного средства. Из уравнения средней эффективной дозы лекарственного средства мы можем установить дозу (т.е. D), необходимую для получения эффекта (воздействия) (т.е. Fa, Fu). Чем дальше лежит точка от аддитивной линии, чем больше разница между 1 и ее CI, тем сильнее эффект (синергизм или несовместимость).
Результаты
Кривые, полученные для расчетов синергизма по Chou, показаны на Фигурах 7-10. Значения индекса Chou во всех экспериментах 1-4 однозначно указывают на синергизм комбинации MOR00208 и Иделалисиба для специфического уничтожения клеток МЕС-1 по сравнению с одним только MOR00208 и только одним Иделалисибом.
Комбинация MOR00208 и Иделалисиба проявляла синергическое действие в клеточной линии МЕС-1 ХЛЛ. Следовательно, есть основания ожидать, что комбинация MOR00208 и Иделалисиба является синергической при лечении ХЛЛ у людей.
Кроме того, считается также, что комбинация MOR00208 и Иделалисиба будет проявлять синергизм при лечении неходжкинской лимфомы (НХЛ), хронического лимфоидного лейкоза (ХЛЛ) и острого лимфобластного лейкоза (ОЛЛ) у людей.
Следует понимать, что описание, конкретные примеры и данные с указанием иллюстративных вариантов осуществления приведены в качестве иллюстрации и не предназначены для ограничения настоящего изобретения. Различные изменения и модификации в соответствии с настоящим изобретением станут очевидными для специалиста в данной области техники из обсуждения, раскрытия и данных, содержащихся в настоящем документе, и поэтому рассматриваются как часть изобретения.
--->
SEQUENCE LISTING
<110> MorphoSys AG
<120> Combinations and uses thereof
<130> MS228
<150> EP15181925.7
<151> 2015-08-21
<160> 13
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> CDR
<400> 1
Ser Tyr Val Met His
1 5
<210> 2
<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> CDR
<400> 2
Asn Pro Tyr Asn Asp Gly
1 5
<210> 3
<211> 12
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> CDR
<400> 3
Gly Thr Tyr Tyr Tyr Gly Thr Arg Val Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 4
<211> 16
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> CDR
<400> 4
Arg Ser Ser Lys Ser Leu Gln Asn Val Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Tyr
1 5 10 15
<210> 5
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> CDR
<400> 5
Arg Met Ser Asn Leu Asn Ser
1 5
<210> 6
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> CDR
<400> 6
Met Gln His Leu Glu Tyr Pro Ile Thr
1 5
<210> 7
<211> 556
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 7
Met Pro Pro Pro Arg Leu Leu Phe Phe Leu Leu Phe Leu Thr Pro Met
1 5 10 15
Glu Val Arg Pro Glu Glu Pro Leu Val Val Lys Val Glu Glu Gly Asp
20 25 30
Asn Ala Val Leu Gln Cys Leu Lys Gly Thr Ser Asp Gly Pro Thr Gln
35 40 45
Gln Leu Thr Trp Ser Arg Glu Ser Pro Leu Lys Pro Phe Leu Lys Leu
50 55 60
Ser Leu Gly Leu Pro Gly Leu Gly Ile His Met Arg Pro Leu Ala Ile
65 70 75 80
Trp Leu Phe Ile Phe Asn Val Ser Gln Gln Met Gly Gly Phe Tyr Leu
85 90 95
Cys Gln Pro Gly Pro Pro Ser Glu Lys Ala Trp Gln Pro Gly Trp Thr
100 105 110
Val Asn Val Glu Gly Ser Gly Glu Leu Phe Arg Trp Asn Val Ser Asp
115 120 125
Leu Gly Gly Leu Gly Cys Gly Leu Lys Asn Arg Ser Ser Glu Gly Pro
130 135 140
Ser Ser Pro Ser Gly Lys Leu Met Ser Pro Lys Leu Tyr Val Trp Ala
145 150 155 160
Lys Asp Arg Pro Glu Ile Trp Glu Gly Glu Pro Pro Cys Leu Pro Pro
165 170 175
Arg Asp Ser Leu Asn Gln Ser Leu Ser Gln Asp Leu Thr Met Ala Pro
180 185 190
Gly Ser Thr Leu Trp Leu Ser Cys Gly Val Pro Pro Asp Ser Val Ser
195 200 205
Arg Gly Pro Leu Ser Trp Thr His Val His Pro Lys Gly Pro Lys Ser
210 215 220
Leu Leu Ser Leu Glu Leu Lys Asp Asp Arg Pro Ala Arg Asp Met Trp
225 230 235 240
Val Met Glu Thr Gly Leu Leu Leu Pro Arg Ala Thr Ala Gln Asp Ala
245 250 255
Gly Lys Tyr Tyr Cys His Arg Gly Asn Leu Thr Met Ser Phe His Leu
260 265 270
Glu Ile Thr Ala Arg Pro Val Leu Trp His Trp Leu Leu Arg Thr Gly
275 280 285
Gly Trp Lys Val Ser Ala Val Thr Leu Ala Tyr Leu Ile Phe Cys Leu
290 295 300
Cys Ser Leu Val Gly Ile Leu His Leu Gln Arg Ala Leu Val Leu Arg
305 310 315 320
Arg Lys Arg Lys Arg Met Thr Asp Pro Thr Arg Arg Phe Phe Lys Val
325 330 335
Thr Pro Pro Pro Gly Ser Gly Pro Gln Asn Gln Tyr Gly Asn Val Leu
340 345 350
Ser Leu Pro Thr Pro Thr Ser Gly Leu Gly Arg Ala Gln Arg Trp Ala
355 360 365
Ala Gly Leu Gly Gly Thr Ala Pro Ser Tyr Gly Asn Pro Ser Ser Asp
370 375 380
Val Gln Ala Asp Gly Ala Leu Gly Ser Arg Ser Pro Pro Gly Val Gly
385 390 395 400
Pro Glu Glu Glu Glu Gly Glu Gly Tyr Glu Glu Pro Asp Ser Glu Glu
405 410 415
Asp Ser Glu Phe Tyr Glu Asn Asp Ser Asn Leu Gly Gln Asp Gln Leu
420 425 430
Ser Gln Asp Gly Ser Gly Tyr Glu Asn Pro Glu Asp Glu Pro Leu Gly
435 440 445
Pro Glu Asp Glu Asp Ser Phe Ser Asn Ala Glu Ser Tyr Glu Asn Glu
450 455 460
Asp Glu Glu Leu Thr Gln Pro Val Ala Arg Thr Met Asp Phe Leu Ser
465 470 475 480
Pro His Gly Ser Ala Trp Asp Pro Ser Arg Glu Ala Thr Ser Leu Gly
485 490 495
Ser Gln Ser Tyr Glu Asp Met Arg Gly Ile Leu Tyr Ala Ala Pro Gln
500 505 510
Leu Arg Ser Ile Arg Gly Gln Pro Gly Pro Asn His Glu Glu Asp Ala
515 520 525
Asp Ser Tyr Glu Asn Met Asp Asn Pro Asp Gly Pro Asp Pro Ala Trp
530 535 540
Gly Gly Gly Gly Arg Met Gly Thr Trp Ser Thr Arg
545 550 555
<210> 8
<211> 450
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> mab
<400> 8
Gln Val Thr Leu Arg Glu Ser Gly Pro Ala Leu Val Lys Pro Thr Gln
1 5 10 15
Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ala
20 25 30
Gly Met Ser Val Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu
35 40 45
Trp Leu Ala Asp Ile Trp Trp Asp Asp Lys Lys His Tyr Asn Pro Ser
50 55 60
Leu Lys Asp Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val
65 70 75 80
Val Leu Lys Val Thr Asn Met Asp Pro Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Arg Asp Met Ile Phe Asn Phe Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp
210 215 220
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly
225 230 235 240
Pro Asp Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
245 250 255
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
260 265 270
Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
275 280 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg
290 295 300
Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
305 310 315 320
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Glu Glu
325 330 335
Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
340 345 350
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
355 360 365
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
370 375 380
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met
385 390 395 400
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
405 410 415
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
420 425 430
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
435 440 445
Gly Lys
450
<210> 9
<211> 213
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> mab
<400> 9
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Ser Arg Val Gly Tyr Met
20 25 30
His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
35 40 45
Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Asp
65 70 75 80
Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly Ser Gly Tyr Pro Phe Thr
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro
100 105 110
Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr
115 120 125
Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys
130 135 140
Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu
145 150 155 160
Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser
165 170 175
Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala
180 185 190
Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe
195 200 205
Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 10
<211> 121
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> mab
<400> 10
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Val Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Ser Ser Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Thr Tyr Tyr Tyr Gly Thr Arg Val Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 11
<211> 112
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> mab
<400> 11
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser Leu Gln Asn Val
20 25 30
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Tyr Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Arg Met Ser Asn Leu Asn Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile
65 70 75 80
Ser Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Met Gln His
85 90 95
Leu Glu Tyr Pro Ile Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 12
<211> 330
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> mab
<400> 12
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Asp Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Glu Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
225 230 235 240
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 13
<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> mab
<400> 13
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
1 5 10 15
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
20 25 30
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
35 40 45
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
50 55 60
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
65 70 75 80
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
85 90 95
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
100 105
<---
1. Применение синергической комбинации, включающей в себя антитело, специфичное к CD19, где указанное антитело содержит участок HCDR1 с последовательностью SYVMH (SEQ ID NO: 1), участок HCDR2 с последовательностью NPYNDG (SEQ ID NO: 2), участок HCDR3 с последовательностью GTYYYGTRVFDY (SEQ ID NO: 3), участок LCDR1 с последовательностью RSSKSLQNVNGNTYLY (SEQ ID NO: 4), участок LCDR2 с последовательностью RMSNLNS (SEQ ID NO: 5), участок LCDR3 с последовательностью MQHLEYPIT (SEQ ID NO: 6), и иделалисиб, в лечении неходжкинской лимфомы, хронического лимфоцитарного лейкоза или острого лимфобластного лейкоза, ассоциированных с экспрессией CD19.
2. Применение по п. 1, где антитело содержит вариабельную тяжелую цепь с последовательностью
EVQLVESGGGLVKPGGSLKLSCAASGYTFTSYVMHWVRQAPGKGLEWIGYINPY NDGTKYNEKFQGRVTISSDKSISTAYMELSSLRSEDTAMYYCARGTYYYGTRVFDYWG QGTLVTVSS (SEQ ID NO: 10) и вариабельную легкую цепь с последовательностью DIVMTQSPATLSLSPGERATLSCRSSKSLQNVNGNTYLYWFQQKPGQSPQLLIYR MSNLNSGVPDRFSGSGSGTEFTLTISSLEPEDFAVYYCMQHLEYPITFGAGTKLEIK (SEQ ID NO: 11).
3. Применение по любому из предыдущих пунктов, где антитело содержит константный домен тяжелой цепи с последовательностью
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLY SLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPDVFLFP PKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLT VVHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPEEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVK GFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEAL HNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 12).
4. Применение по любому из предыдущих пунктов, где антитело содержит константный домен легкой цепи с последовательностью
RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKD STYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 13).
5. Применение по любому из предыдущих пунктов, где антитело, специфичное к CD19, и иделалисиб составлены в разных фармацевтических композициях.
6. Применение комбинации по любому из предыдущих пунктов, где указанное антитело, специфичное к CD19, и иделалисиб вводят отдельно.
7. Применение по п. 6, где введение указанного антитела, специфичного к CD19, и иделалисиба разделено физически.
8. Применение по п. 6, где введение указанного антитела, специфичного к CD19, и иделалисиба разделено во времени.
9. Применение по любому из пп. 1-5, где указанное антитело, специфичное к CD19, и иделалисиб вводят вместе.
10. Применение по любому из пп. 1-5, где иделалисиб вводят до введения антитела, специфичного к CD19.
11. Применение по любому из пп. 1-5, где иделалисиб вводят после введения антитела, специфичного к CD19.
12. Применение по любому из пп. 1-5, где иделалисиб и антитело, специфичное к CD19, вводят одновременно.
13. Применение по любому из предыдущих пунктов в лечении неходжкинской лимфомы.
14. Применение по п. 13, где неходжкинская лимфома представляет собой фолликулярную лимфому.
15. Применение по п. 13, где неходжкинская лимфома представляет собой малую лимфоцитарную лимфому.
16. Применение по п. 13, где неходжкинская лимфома представляет собой лимфому лимфоидной ткани слизистых оболочек.
17. Применение по п. 13, где неходжкинская лимфома представляет собой лимфому маргинальной зоны.
18. Применение по п. 13, где неходжкинская лимфома представляет собой диффузную крупноклеточную В-клеточную лимфому.
19. Применение по п. 13, где неходжкинская лимфома представляет собой лимфому Беркитта.
20. Применение по п. 13, где неходжкинская лимфома представляет собой лимфому из клеток мантии.
21. Применение по любому из пп. 1-12 в лечении хронического лимфоцитарного лейкоза.
22. Применение по любому из пп. 1-12 в лечении острого лимфобластного лейкоза.
23. Способ лечения неходжкинской лимфомы, хронического лимфоцитарного лейкоза и/или острого лимфобластного лейкоза, ассоциированных с экспрессией CD19, у субъекта, нуждающегося в лечении, включающий введение терапевтически эффективного количества антитела, специфичного к CD19, где указанное антитело содержит участок HCDR1 с последовательностью SYVMH (SEQ ID NO: 1), участок HCDR2 с последовательностью NPYNDG (SEQ ID NO: 2), участок HCDR3 с последовательностью GTYYYGTRVFDY (SEQ ID NO: 3), участок LCDR1 с последовательностью RSSKSLQNVNGNTYLY (SEQ ID NO: 4), участок LCDR2 с последовательностью RMSNLNS (SEQ ID NO: 5), участок LCDR3 с последовательностью MQHLEYPIT (SEQ ID NO: 6), и терапевтически эффективного количества иделалисиба.
24. Способ лечения по п. 23, где антитело содержит вариабельную тяжелую цепь с последовательностью
EVQLVESGGGLVKPGGSLKLSCAASGYTFTSYVMHWVRQAPGKGLEWIGYINPY NDGTKYNEKFQGRVTISSDKSISTAYMELSSLRSEDTAMYYCARGTYYYGTRVFDYWG QGTLVTVSS (SEQ ID NO: 10) и вариабельную легкую цепь с последовательностью DIVMTQSPATLSLSPGERATLSCRSSKSLQNVNGNTYLYWFQQKPGQSPQLLIYRMSNLNSGVPDRFSGSGSGTEFTLTISSLEPEDFAVYYCMQHLEYPITFGAGTKLEIK (SEQ ID NO: 11).
25. Способ лечения по любому из пп. 23 и 24, где антитело содержит константный домен тяжелой цепи с последовательностью
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLY SLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPDVFLFP PKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLT VVHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPEEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVK GFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEAL HNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 12).
26. Способ лечения по любому из пп. 23-25, где антитело содержит константный домен легкой цепи с последовательностью
RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKD STYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 13).
27. Способ лечения по любому из пп. 23-26, где антитело, специфичное к CD19, и иделалисиб вводят в разных фармацевтических композициях.
28. Способ лечения по любому из пп. 23-27, где указанное антитело, специфичное к CD19, и иделалисиб вводят отдельно.
29. Способ лечения по п. 28, где введение указанного антитела, специфичного к CD19, и иделалисиба разделено физически.
30. Способ лечения по п. 28, где введение указанного антитела, специфичного к CD19, и иделалисиба разделено во времени.
31. Способ лечения по любому из пп. 23-27, где указанное антитело, специфичное к CD19, и иделалисиб вводят вместе.
32. Способ лечения по любому из пп. 23-27, где иделалисиб вводят до введения антитела, специфичного к CD19.
33. Способ лечения по любому из пп. 23-27, где иделалисиб вводят после введения антитела, специфичного к CD19.
34. Способ лечения по любому из пп. 23-27, где иделалисиб и антитело, специфичное к CD19, вводят одновременно.
35. Способ лечения по любому из пп. 23-34, где субъект имеет неходжкинскую лимфому.
36. Способ лечения по п. 35, где неходжкинская лимфома представляет собой фолликулярную лимфому.
37. Способ лечения по п. 35, где неходжкинская лимфома представляет собой малую лимфоцитарную лимфому.
38. Способ лечения по п. 35, где неходжкинская лимфома представляет собой лимфому лимфоидной ткани слизистых оболочек.
39. Способ лечения по п. 35, где неходжкинская лимфома представляет собой лимфому маргинальной зоны.
40. Способ лечения по п. 35, где неходжкинская лимфома представляет собой диффузную крупноклеточную В-клеточную лимфому.
41. Способ лечения по п. 35, где неходжкинская лимфома представляет собой лимфому Беркитта.
42. Способ лечения по п. 35, где неходжкинская лимфома представляет собой лимфому из клеток мантии.
43. Способ лечения по любому из пп. 23-34, где субъект имеет хронический лимфоцитарный лейкоз.
44. Способ лечения по любому из пп. 23-34, где субъект имеет острый лимфобластный лейкоз.
