Способ оценки криоустойчивости спермы жеребцов по уровню активности липазы в сыворотке крови

Авторы патента:

Зайцев Александр Михайлович (RU)

Фролова Наталья Александровна (RU)

Калашников Валерий Васильевич (RU)

Атрощенко Михаил Михайлович (RU)

Енгалычева Мария Германовна (RU)

Шитикова Анна Михайловна (RU)

Широкова Ольга Владимировна (RU)

Романова Алина Игоревна (RU)

G01N33/52 - использование соединений или составов для колориметрического, спектрофотометрического или флуорометрического анализа, например реактивной бумаги

G01N33/48 - биологических материалов, например крови, мочи (G01N 33/02-G01N 33/14,G01N 33/26,G01N 33/44,G01N 33/46 имеют преимущество; определение всхожести семян A01C 1/02); приборы для подсчета и измерения клеток крови (гемоцитометры) (подсчет клеток крови, распределенных по поверхности, путем сканирования этой поверхности G06M 11/02)

Владельцы патента RU 2788451:

Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Всероссийский научно-исследовательский институт коневодства" (RU)

Изобретение относится к области животноводства, в частности к коневодству, и может быть использовано для отбора жеребцов с высокой криоустойчивостью спермы. Способ включает отбор образцов крови. Далее в сыворотке крови определяют уровень активности липазы. При уровне активности липазы в сыворотке крови выше 17,8 МЕ/л жеребца следует относить к группе с высокой криоустойчивостью спермы, а при уровне активности липазы в сыворотке крови ниже 17,8 МЕ/л, соответственно, к группе с низкой криоустойчивостью спермы. Изобретение позволяет оценить криоустойчивость спермы жеребцов, не прибегая к отбору самой спермы. 2 табл.

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ, К КОТОРОЙ ОТНОСИТСЯ ИЗОБРЕТЕНИЕ

Изобретение относится к области животноводства, в частности к коневодству и может быть использовано для отбора жеребцов с высокой криоустойчивостью спермы.

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

Известен способ экспресс-оценки криоустойчивости спермы жеребцов (Патент RU №2675947, МПК A01D 19/02 (2006.01) Способ экспресс-оценки криоустойчивости спермы жеребцов: №2017129283; заявл. 01.08.2017; опубл. 25.12.2018; Бюл. №36 / Науменкова В.А.; заявитель ФГБНУ "ВНИИ коневодства". - Текст: непосредственный.), который включает подготовку мини-дозы спермы к замораживанию и оценку подвижности спермиев после ее оттаивания.

Главный недостаток этого способа - использование спермы хотя и в мини-дозах.

Мы же хотим разработать способ оценки криоустойчивости спермы жеребцов, используя другие, более доступные, биоматериалы.

Аналогом заявляемого способа является способ отбора жеребцов арабской чистокровной породы с высокой криоустойчивостью спермы по концентрации кадмия в волосах с гривы (Патент RU №2723951, МПК A01K 67/00 (2006.01) Способ отбора жеребцов арабской чистокровной породы с высокой криоустойчивостью спермы по концентрации кадмия в волосах с гривы: №2019138182; заявл. 26.11.2019; опубл. 18.06.2020, Бюл. №17 / В.В. Калашников, A.M. Зайцев, М.М. Атрощенко, С.А. Мирошников, О.А. Завьялов, А.Н. Фролов, М.Я. Курилкина, Л.В. Калинкова, Т.В. Калашникова, Н.В. Блохина; заявитель ФГБНУ "ВНИИ коневодства". - Текст: непосредственный.), в котором в качестве критерия оценки криоустойчивости спермы жеребцов используют уровень концентрации кадмия в волосах с гривы. При концентрации кадмия ниже 0,0065 мкг/г жеребца относят к группе животных с высокой криоустойчивостью спермы, при концентрации выше 0,0065 мкг/г - соответственно, к группе с низкой.

Недостаток этого способа состоит в том, что его применение требует наличия дорогостоящего оборудования для определения элементного состава волос.

Ближайшим аналогом (прототипом) заявляемого способа является способ оценки качества спермы жеребцов по уровню активности α-амилазы в сыворотке крови (Патент RU №2751138, МПК G01N 33/49 (2006.01) Способ оценки качества спермы жеребцов по уровню активности α-амилазы в сыворотке крови: №2020140448; заявл. 09.12.2020; опубл. 08.07.2021; Бюл. №19 / Атрощенко М.М., Романова А.И., Зайцев A.M., Калашников В.В., Енгалычева М.Г., Шитикова A.M., Широкова О.В., Фролова Н.А.; заявитель ФГБНУ "ВНИИ коневодства". - Текст: непосредственный.), который позволяет оценить качество спермы жеребца по уровню активности одного из ферментов сыворотки крови - α-амилазы: при уровне активности α-амилазы в сыворотке крови ниже 24,5 МЕ/л жеребца следует относить к группе с высоким качеством спермы, а при уровне активности α-амилазы в сыворотке крови выше 24,5 МЕ/л, соответственно, к группе с низким. Изобретение позволяет оценить качество спермы жеребцов, не прибегая к отбору самой спермы.

Недостаток этого способа - невозможность оценить криоустойчивость спермы жеребца.

Мы решили оценить криоустойчивость спермы жеребцов, используя другой фермент, циркулирующий в крови - липазу. Как известно активность липазы в сыворотке крови может резко повышаться или снижаться в зависимости от состояния организма животного.

Мы поставили задачу количественно оценить значение предельно допустимого уровня (ПДУ) активности липазы в сыворотке крови жеребцов и выяснить его влияние на криоустойчивость спермы. Другими словами, не имея продукта (в данном случае спермы), мы надеемся оценить некоторые его качества.

РАСКРЫТИЕ СУЩНОСТИ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Образцы спермы, предназначенной для исследования (n равно 36), отбирают по ранее разработанной методике (Науменкова, В.А. Рекомендации по взятию, разбавлению и замораживании спермы жеребцов / В.А. Науменкова. - Дивово: «Изд-во «ВНИИ коневодства», 2006. - 23 с. Далее - Рекомендации). После получения спермы, каждый эякулят оценивают по следующим показателям: объем эякулята, концентрация и общее количество сперматозоидов в эякуляте, прогрессивная подвижность сперматозоидов в криоконсервированной сперме.

Одновременно с получением спермы производят забор крови от каждого жеребца из яремной вены однократно до кормления животных.

Уровень активность липазы в сыворотке крови определяют колориметрическим методом.

ПДУ активности липазы в сыворотке крови жеребцов в границах 50 процентиля репрезентативной выборки рассчитывают, используя полученные результаты и известную методику (Назаренко, Г.И. Клиническая оценка результатов лабораторных исследований / Г.И. Назаренко, А.А. Кишкун. - М.: Медицина, 2002. - 544 с.).

В нашем случае ПДУ активности липазы оказался равным 17,8 МЕ/л.

Подопытных животных (n равно 36) разбивают на две группы в зависимости от уровня активности липазы. Таким образом, в первой группе оказались жеребцы со значением уровня активности липазы больше 17,8 МЕ/л, во второй группе, соответственно, меньше 17,8 МЕ/л.

Из полученных данных видно, что жеребцы с уровнем активности липазы в сыворотке крови больше 17,8 МЕ/л превосходят по прогрессивной подвижности сперматозоидов в криоконсервированной сперме на 161,44% аналогов из группы с меньшим значением данного показателя (Р не больше 0,01).

Согласно Рекомендациям жеребцов, в сперме которых после оттаивания прогрессивная подвижность сперматозоидов составляет не менее 2,5 баллов, что в переводе на проценты соответсвует 25%, относят к группе с высокой криоустойчивостью.

Следовательно, сперму жеребцов, в которой показатель прогрессивной подвижности сперматозоидов после оттаивания равен 25% или выше его, тоже можно смело отнести к группе с высоким уровнем криоустойчивости.

По результатам нашего эксперимента можно сделать следующее заключение - при уровне активности липазы в сыворотке крови больше 17,8 МЕ/л средние значения прогрессивной подвижности сперматозоидов в криоконсервированной сперме находятся в интервале 37-46%, что значительно больше 25%.

Сам собой напрашивается вывод: при значениях ПДУ активности липазы в сыворотке крови больше 17,8 МЕ/л сперма жеребцов имеет высокую криоустойчивость.

ОСУЩЕСТВЛЕНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Применимость предлагаемого способа была проверена в условиях Терского племенного конного завода №169 Ставропольского края.

Для оценки криоустойчивости спермы производят отбор ее образцов у жеребцов и оценивают по следующим показателям: объем эякулята, концентрация и общее количество сперматозоидов в эякуляте, прогрессивная подвижность сперматозоидов в криоконсервированной сперме. Одновременно с получением спермы производят забор крови от каждого жеребца из яремной вены однократно до кормления животных.

Полученные образцы крови оценивают по уровню активности липазы в ней (колориметрический метод). Кроме того, определяют прогрессивную подвижность (ПП) сперматозоидов в криоконсервированной сперме.

Вывод: при уровне активности липазы в сыворотке крови выше 17,8 МЕ/л жеребца следует относить к группе с высокой криоустойчивостью спермы, а при уровне активности липазы в сыворотке крови ниже 17,8 МЕ/л, соответственно, к группе с низкой.

Таким образом, при практическом использовании предлагаемого способа, для определения криоустойчивости спермы жеребцов, не нужно знать прогрессивную подвижность сперматозоидов в криоконсервированной сперме, а достаточно знать уровень активности липазы в сыворотке крови.

Способ оценки криоустойчивости спермы жеребцов по уровню активности липазы в сыворотке крови, включающий определение уровня активности липазы в сыворотке крови, отличающийся тем, что при уровне активности липазы в сыворотке крови выше 17,8 МЕ/л жеребца относят к группе с высокой криоустойчивостью спермы, а при уровне активности липазы в сыворотке крови ниже 17,8 МЕ/л, соответственно, к группе с низкой криоустойчивостью спермы.

Изобретение относится к медицине, а именно к медицинской диагностике, и может быть использовано для прогнозирования риска развития диабетической дистальной полинейропатии у женщин с сахарным диабетом 2 типа. Осуществляют забор образца периферической венозной крови.

Способ количественного определения суммы флавоноидов в траве бодяка полевого // 2786835

Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности, а именно к способу количественного определения суммы флавоноидов в траве бодяка полевого. Заявленный способ включает получение водно-спиртового извлечения из 1 г точной навески измельченной до размера частиц 2 мм травы бодяка полевого 40%-ным спиртом этиловым, при соотношении «сырье-экстрагент» - 1:30, трехкратно по 30 минут, добавление к полученному извлечению 2% спиртового раствора алюминия хлорида в количестве 1 мл для комплексообразования, взаимодействие проводят в течение 45 минут, количественное определение флавоноидов методом дифференциальной спектрофотометрии с использованием стандартного образца апигенина с алюминия хлоридом при длине волны 389 нм в пересчете на апигенин и абсолютно сухое сырье по формуле ,где X - содержание суммы флавоноидов в траве бодяка полевого в пересчете на апигенин и абсолютно сухое сырье, %; А - оптическая плотность анализируемого раствора; А0 - оптическая плотность комплекса стандартного образца апигенина с алюминия хлоридом; а - навеска сырья, г; а0 - навеска стандартного образца апигенина, г; W - потеря в массе сырья при высушивании, %.

Способ прогнозирования риска развития диабетической ретинопатии у мужчин с сахарным диабетом 2 типа на основе генотипирования полиморфизма rs836478 гена rac1 // 2786820

Изобретение относится к медицине, а именно к медицинской диагностике, и может быть использовано для прогнозирования риска развития диабетической ретинопатии у мужчин с сахарным диабетом 2 типа. Осуществляют забор образца периферической венозной крови.

Способ определения активности лизоцима в ротовой жидкости // 2786802

Изобретение относится к медицине, в частности к стоматологии и биотехнологии и может быть использовано для оценки уровня иммунной защиты от патогенной микрофлоры в ротовой жидкости и касается способа определения активности лизоцима в ротовой жидкости. Готовят культуру Micrococcus lysodeicticus ГИСК им.

Способ определения показателей коагуляции плазмы крови - активности тромбина, времени рекальцификации плазмы и толерантности плазмы к гепарину // 2786591

Изобретение относится к области медицины, а именно к лабораторным способам исследования гемостаза, и касается определения показателей коагуляции плазмы крови – активности тромбина, времени рекальцификации плазмы и толерантности плазмы к гепарину. Используют флуоресцентный метод в видимом диапазоне излучения 420-600 нм в присутствии соединений бордипиринового ряда (BODIPY), таких как 4,4-дифторо-8-фенил-1,3,5,7-тетраметил-2,6-диэтил-4-бор-3а,4а-диаза-s-индацен; 4,4-дифторо-8-(пара-диметиламинофенил)-1,3,5,7-тетраметил-2,6-диэтил-4-бор-3а,4а-диаза-8-индацен; 4,4-дифторо-8-(ди-ортометилфенил)-1,3,5,7-тетраметил-2,6-диэтил-4-бор-3а,4а-диаза-s-индацен, флуоресценция которых зависит от присутствия биомолекул фибриногена.

Способ прогнозирования синдрома задержки развития плода у беременных женщин с ожирением // 2785904

Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству и гинекологии, и может быть использовано для прогнозирования синдрома задержки развития плода у беременных женщин с ожирением. В крови беременной женщины определяют содержание общей меди (Cuоб.) и церулоплазмина (ЦП).

Способ обнаружения возбудителя псевдотуберкулеза // 2783710

Изобретение относится к лабораторной диагностике и иммунологии, и может быть использовано для обнаружения возбудителя псевдотуберкулеза. Способ включает: нанесение исследуемого материала на подложку с размером пор 0,17-0,45 мкм, на которую точечно наносят исследуемый материал в объеме 1-2 мкл, после полного впитывания исследуемого материала подложку промывают дважды физиологическим раствором, затем помещают в 2% раствор бычьего сывороточного альбумина на физиологическом растворе на 15 мин, затем подложку двукратно промывают физиологическим раствором, однократно дистиллированной водой и помещают в раствор иммуноглобулина G, выделенного из агглютинирующей псевдотуберкулезной сыворотки, меченного частицами коллоидного серебра размером 5-9 нм, с экспозицией на 40 мин.

Способ дооперационной дифференциальной диагностики доброкачественных и злокачественных узловых образований щитовидной железы // 2783304

Изобретение относится к медицине, а именно к хирургической эндокринологии, и может быть использовано для дооперационной дифференциальной диагностики доброкачественной или злокачественной природы узловых образований щитовидной железы. Выполняют тонкоигольную аспирационную биопсию узловых образований щитовидной железы под контролем УЗИ.

Способ превентивной оценки риска снижения уровня здоровья юношей подросткового возраста // 2782491

Изобретение относится к медицине, а именно к педиатрии, и может быть использовано для превентивной оценки риска снижения уровня здоровья юношей подросткового возраста. Проводят исследование капиллярной крови и количественное определение с помощью спектрофотометра степени гемолиза эритроцитов.

Способ диагностики лимфомы ходжкина // 2782326

Изобретение относится к биотехнологии и диагностической медицине и может быть использовано для диагностики лимфомы Ходжкина (ЛХ). Выделяют тотальную популяцию внеклеточных нановезикул (ВНВ) из плазмы крови с помощью двухфазной полимерной системы.

Способ дифференциальной диагностики сосудистого или воспалительного поражения диска зрительного нерва // 2788393

Изобретение относится к медицине, а именно к офтальмологии. Определяют наличие при офтальмоскопии отека диска зрительного нерва и перипапиллярного слоя нервных волокон сетчатки; геморрагий в виде полос на поверхности диска и в перипапиллярной зоне.