Кимчи для предотвращения или лечения связанных с helicobacter pylori заболеваний
Изобретение относится к области биотехнологии и пищевой промышленности. Описан способ получения Кимчи, включающий: соление и заправку специями капусты Кимчи и ферментацию их с помощью Leuconostoc mesenteroides KCTC 13043BP и Lactobacillus plantarum KCTC 11403BP, где капуста Кимчи представляет собой капусту Кимчи с высоким содержанием ликопина. Также описана композиция для облегчения рака желудка, включающая спиртовой экстракт Кимчи, полученного указанным способом, и применение Кимчи для облегчения рака желудка. Изобретение позволяет применять полученный продукт для облегчения рака желудка. 3 н. и 5 з.п. ф-лы, 11 ил., 6 пр.
ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ, К КОТОРОЙ ОТНОСИТСЯ ИЗОБРЕТЕНИЕ
[0001] Настоящее изобретение относится к кимчи, содержащему молочнокислые бактерии, которое может быть эффективно использовано для предотвращения и лечения связанных с Helicobacter pylori заболеваний.
ПРЕДПОСЫЛКИ СОЗДАНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ
[0002] В 1983 г. австралийские микробиологи Marchall и Warren впервые обнаружили изогнутую бактерию в биоптатах слизистой оболочки желудка у пациентов с гастритом типа В, затем они культивировали бактерию и установили, что она представляет собой новый вид, относящийся к роду Campylobacter. С тех пор были проведены активные исследования связи между Helicobacter pylori и заболеваниями верхних отделов желудочно-кишечного тракта, такими как гастрит, язва желудка и двенадцатиперстной кишки и тому подобное. Helicobacter pylori представляет собой грамотрицательную бациллу, имеет жгутики, окруженные тонкой мембраной, секретирует большое количество уриназы, как известно, распространяется фекально-пероральным путем и является патогеном, вызывающим большой интерес во всем мире, поскольку в 1994 году Всемирная организация здравоохранения (ВОЗ) определила его как несомненный канцероген.
[0003] В настоящее время известно, что патогенез заболевания, вызываемого Helicobacter pylori, является следующим: бактерии, попавшие в просвет желудка вместе с пищей, проникают в слой желудочной слизи за счет жгутиков, обладающих большой подвижностью, населяют верхний эпителиальный слой и межклеточные соединения в слое желудочной слизи и секретируют большие количества уриназы, делая слизистый слой щелочным, что приводит к аномально избыточной стимуляции секреции желудочной кислоты за счет гастрина, что, в свою очередь, ведет к воспалению и возникновению язвы. Кроме того, вследствие недавнего исследования, которое показало, что Helicobacter pylori является важным фактором риска в патогенезе аденокарциномы желудка, Всемирная организация здравоохранения признала Helicobacter pylori канцерогеном I группы.
[0004] В частности, инфекция, вызываемая Helicobacter pylori, по сообщениям, часто встречается в развивающихся странах, в том числе в Южной Корее. По данным национального эпидемиологического обследования, проведенного с участием 5732 человек без симптомов заболеваний верхних отделов желудочно-кишечного тракта, общая распространенность инфекции Helicobacter pylori составляла 46,6%, и степень инфицирования составляла 69,4% у взрослых людей старше 16 лет и была особенно высока у людей в возрасте старше 40 лет (78,5%). Кроме того, согласно исследованию, проведенному с участием 1031 пациента с язвой желудка и двенадцатиперстной кишки, 66% пациентов с язвой желудка и 79% пациентов с язвой двенадцатиперстной кишки были инфицированы Helicobacter pylori, и 71% пациентов с язвами желудка и двенадцатиперстной кишки, согласно сообщениям, были инфицированы Helicobacter pylori.
[0005] В качестве способа лечения вышеуказанных заболеваний, вызываемых инфекцией Helicobacter pylori, в настоящее время в основном используют химиотерапию антибиотиками. Однако, хотя широкое применение данного способа может быть эффективным в течение короткого времени, данный способ является проблематичным, что связано с риском возникновения устойчивых к антибиотику штаммов вследствие продолжительного использования антибиотиков. Кроме того, как сообщают, продолжительное использование антибактериальной терапии вызывает различные побочные эффекты, такие как диарея, рефлюкс-эзофагит, подавление нормальной флоры в кишечнике, появление устойчивых штаммов и тому подобное.
[0006] Таким образом, существует потребность в разработке подходящего противомикробного материала или продукта питания, который способен подавлять Helicobacter pylori, заменяя при этом терапевтическое средство, вызывающее вышеописанные побочные эффекты и бактериальную устойчивость в организме человека.
[0007] Между тем, используемые для ферментации молочнокислые бактерии кимчи, которое является традиционным ферментированным продуктом питания, являются бактериями категории GRAS (в целом, признанными безопасными), которые люди давно употребляют с ферментированными продуктами. Вследствие преимуществ функциональности и безопасности молочнокислых бактерий уделяется большое внимание разработке функциональных продуктов питания и лекарственных средств с использованием молочнокислых бактерий. Например, авторы настоящего изобретения сообщали о штамме Leuconostoc mesenteroides CJLM119, продуцирующем меньшее количество газа, и о способе получения кимчи с использованием данного штамма, а также о штамме Lactobacillus plantarum CJLP133 и о содержащей его композиции для лечения кишечных заболеваний и повышения иммунитета (патентные документы 1-3). Однако исследования, посвященные способам предотвращения или лечения заболевания, вызываемого инфекцией Helicobacter pylori, за счет использования ферментированных продуктов питания, таких как кимчи, которое часто употребляют в пищу, не завершены и все еще продолжаются.
[0008] Документы предшествующего уровня техники
[0009] Патентные документы
[0010] (Патентный документ 1) Корейский патент № 1807995
[0011] (Патентный документ 2) Корейский патент № 1486999
[0012] ((Патентный документ 3) Корейский патент № 1406168.
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Техническая проблема
[0013] Настоящее изобретение относится к кимчи, содержащему молочнокислые бактерии, оказывающие ингибирующее действие на Helicobacter pylori, в качестве активного ингредиента, и к применению кимчи и его экстракта для предотвращения и лечения связанного с Helicobacter pylori заболевания.
Техническое решение
[0014] Для решения вышеуказанной проблемы один аспект настоящего изобретения относится к кимчи, содержащему Leuconostoc mesenteroides CJLM119 и Lactobacillus plantarum CJLP133, представляющие собой полученные из кимчи молочнокислые бактерии, и к способу его получения.
[0015] Другой аспект настоящего изобретения относится к композиции для облегчения связанного с Helicobacter pylori заболевания, содержащей кимчи или его экстракт.
[0016] Другой аспект настоящего изобретения относится к способу предотвращения, лечения или облегчения связанного с Helicobacter pylori заболевания с использованием кимчи или его экстракта.
ПОЛЕЗНЫЕ ЭФФЕКТЫ
[0017] Кимчи, содержащее Leuconostoc mesenteroides CJLM119 и Lactobacillus plantarum CJLP133, которые представляют собой полученные из кимчи молочнокислые бактерии, или его экстракт, по настоящему изобретению обладает ингибирующей активностью в отношении Helicobacter pylori и при продолжительном введении может предотвращать, лечить или отсрочивать прогрессирование атрофического гастрита и язвы желудка, вызываемых Helicobacter pylori, и также может с пользой применяться для предотвращения или лечения рака желудка, вызываемого Helicobacter pylori.
[0018] Однако полезные эффекты настоящего изобретения не ограничены вышеперечисленными эффектами, и другие, не упомянутые, эффекты будут понятны для специалистов в области, к которой относится настоящее изобретение, из следующего далее описания.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ
[0019] На ФИГ. 1 представлен график, демонстрирующий ингибирующий эффект кимчи по настоящему изобретению на бактерии Helicobacter pylori.
[0020] На ФИГ. 2 представлены результаты электрофореза, демонстрирующие эффект кимчи по настоящему изобретению на экспрессию различных сосудистых факторов роста.
[0021] На ФИГ. 3 представлены результаты электрофореза, демонстрирующие эффект кимчи по настоящему изобретению на экспрессию различных факторов воспаления.
[0022] На ФИГ. 4 представлен график, демонстрирующий эффект кимчи по настоящему изобретению на плотные межклеточные контакты в модели инфекции Helicobacter pylori.
[0023] На ФИГ. 5 представлен график, демонстрирующий эффект кимчи по настоящему изобретению на рост линии клеток рака желудка.
[0024] На ФИГ. 6 представлен график, демонстрирующий эффект кимчи по настоящему изобретению на апоптоз в линии клеток рака желудка.
[0025] На ФИГ. 7 представлены результаты электрофореза, демонстрирующие эффект кимчи по настоящему изобретению на экспрессию различных факторов апоптоза в линии клеток рака желудка.
[0026] На ФИГ. 8 представлены результаты электрофореза, демонстрирующие эффект кимчи по настоящему изобретению на экспрессию связанных с клеточным циклом факторов в линии клеток рака желудка.
[0027] На ФИГ. 9 показан дизайн экспериментов с животными для определения эффекта кимчи по настоящему изобретению на связанное с Helicobacter pylori заболевание.
[0028] На ФИГ. 10 представлен график, демонстрирующий эффект кимчи по настоящему изобретению на показатель в баллах макроскопического поражения в животной модели инфекции Helicobacter pylori.
[0029] На ФИГ. 11 представлена фотография, демонстрирующая эффект кимчи по настоящему изобретению на развитие рака желудка в животной модели инфекции Helicobacter pylori.
СПОСОБ ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ
[0030] Далее в настоящем документе настоящее изобретение описано подробно.
[0031]
[0032] 1. Кимчи, содержащее Leuconostoc mesenteroides CJLM119 и Lactobacillus plantarum CJLP133, и способ его получения
[0033] Настоящее изобретение относится к кимчи, содержащему Leuconostoc mesenteroides CJLM119 и Lactobacillus plantarum CJLP133, и к способу его получения.
[0034] Leuconostoc mesenteroides CJLM119 представляет собой микробный штамм, депонированный в Генном банке Корейского научно-исследовательского института биологических наук и биотехнологии под регистрационным номером KCTC 13043BP, и способ выделения и идентификации штамма описан в корейском патенте № 1807995. Кроме того, Lactobacillus plantarum CJLP133 представляет собой микробный штамм, депонированный в Генном банке Корейского научно-исследовательского института биологических наук и биотехнологии под регистрационным номером KCTC 11403BP, и способ выделения и идентификации штамма описан в корейском патенте 1486999.
[0035] В настоящей заявке термин «кимчи» должен охватывать, без ограничения, продукты питания, приготовленные путем соления и заправки специями овощей, с последующей их ферментацией. В одном варианте осуществления настоящего изобретения овощи могут представлять собой капусту кимчи, дайкон, зеленый лук, листья горчицы, огурцы и тому подобное. В частности, овощи могут представлять собой капусту кимчи, а также любые другие овощи могут быть использованы в качестве сырья для кимчи, которое является объектом настоящего изобретения. В одном варианте осуществления настоящего изобретения овощи могут представлять собой, но без ограничения, овощи с высоким содержанием ликопина. В другом варианте осуществления настоящего изобретения ликопин может содержаться в количестве 0,05-5 мг, например, 0,1-3 мг, 0,2-2 мг, 0,3-1 мг, 0,5-0,8 мг на 100 г овощей, однако его содержание не ограничено перечисленным.
[0036] Овощ с высоким содержанием ликопина может представлять собой капусту кимчи и, в частности, капусту кимчи сорта TheHan1ho (публикация заявки на сорт 2015-688, опубликованная 15 декабря 2015 г.). При ферментации овощей с высоким содержанием ликопина с использованием Leuconostoc mesenteroides CJLM119 и Lactobacillus plantarum CJLP133 предотвращается снижение содержание ликопина и, таким образом, может сохраняться присущая ликопину функция предотвращения рака.
[0037] В одном варианте осуществления настоящего изобретения набор специй получают путем смешивания таких ингредиентов, как порошок красного перца, чеснок, имбирь, соленая рыба и так далее, и в дополнение к ним, в качестве ингредиентов, составляющих смесь специй, можно добавлять, или исключать, любые другие ингредиенты, по мере необходимости, в зависимости от личных предпочтений, методов ферментации, периода ферментации и так далее.
[0038] В одном варианте осуществления настоящего изобретения кимчи по настоящему изобретению можно получать способом, включающим смешивание засоленных овощей, например, капусты кимчи, с набором специй, с последующей их ферментацией, в соответствии с общепринятым способом получения кимчи. В качестве овощей может быть более уместно использовать овощ, имеющий высокое содержание ликопина. Однако настоящее изобретение не ограничено им, и обычные овощи можно использовать без ограничения для получения кимчи по настоящему изобретению.
[0039] В другом варианте осуществления настоящего изобретения кимчи по настоящему изобретению может дополнительно содержать известные добавки, допустимые в продуктах питания. В качестве добавок в кимчи по настоящему изобретению можно включать, без ограничения, различные натуральные ароматизаторы, такие как сливовый ароматизатор, лимонный ароматизатор, сосновый ароматизатор, травяной ароматизатор или тому подобные; различные натуральные пигменты, такие как натуральный фруктовый сок, хлорофиллин, флавоноиды или тому подобное; подсластители, такие как фруктоза, мед, сахарный спирт или сахар; или подкислители, такие как лимонная кислота или цитрат натрия.
[0040] В одном варианте осуществления настоящего изобретения кимчи по настоящему изобретению может содержать 0,01-5 масс%, в частности, 0,02-3 масс%, более конкретно 0,05-2,0 масс% Leuconostoc mesenteroides CJLM119 в расчете на общую массу кимчи.
[0041] В другом варианте осуществления настоящего изобретения кимчи по настоящему изобретению может содержать 0,01-5 масс%, в частности, 0,02-3 масс%, более конкретно 0,05-2,0 масс% Lactobacillus plantarum CJLP133 в расчете на общую массу кимчи.
[0042] В одном варианте осуществления настоящего изобретения кимчи по настоящему изобретению может быть получено путем добавления 0,0-5 масс%, в частности, 0,02-3 масс%, более конкретно 0,05-2,0 масс% Leuconostoc mesenteroides CJLM119 и 0,01-5 масс%, в частности, 0,02-3 масс%, более конкретно 0,05-2,0 масс% Lactobacillus plantarum CJLP133 к засоленным овощам, например, засоленным овощам с высоким содержанием ликопина, с последующей ферментацией при определенной температуре в течение определенного периода времени.
[0043] Температура в процессе ферментации не имеет конкретных ограничений, однако ферментацию можно проводить, например, при температуре 1°C - 30°C, в частности, 3°C - 15°C или 5°C - 10°C.
[0044] Период ферментации не имеет конкретных ограничений, однако ферментацию можно проводить, например, в течение 1-365 дней, в частности, 5-180 дней, 10-90 дней, 15-60 дней или 20-40 дней.
[0045] В одном варианте осуществления настоящего изобретения можно использовать сами штаммы Leuconostoc mesenteroides CJLM119 и Lactobacillus plantarum CJLP133, но также можно использовать культуры, включающие эти штаммы. В одном варианте осуществления настоящего изобретения штаммы Leuconostoc mesenteroides CJLM119 и Lactobacillus plantarum CJLP133 можно использовать в виде живых клеток, мертвых клеток или их смесей.
[0046] В настоящей заявке термин «культура» означает материал, полученный в результате культивирования штаммов Leuconostoc mesenteroides CJLM119 и Lactobacillus plantarum CJLP133 после инокуляции в среду. Например, культура может включать саму культуру, полученную путем культивирования штаммов Leuconostoc mesenteroides CJLM119 и Lactobacillus plantarum CJLP133 в среде (то есть, культура может включать штаммы Leuconostoc mesenteroides CJLM119 и Lactobacillus plantarum CJLP133, среду или продукты метаболизма штаммов), фильтрат (например, супернатант после центрифугирования), полученный путем фильтрования или центрифугирования культуры для удаления штаммов, или тому подобное. Кроме того, культура по настоящему изобретению может включать, без ограничения, культуру, полученную путем сушки (например, лиофилизации) и порошковую культуру.
[0047] В одном варианте осуществления настоящего изобретения культивирование штаммов можно проводить при температуре от 10°C до 30°C в течение 6-48 часов, в частности, при температуре от 20°C до 30°C в течение 12-36 часов или 18-30 часов. Однако настоящее изобретение не ограничено перечисленным.
[0048] В качестве среды можно использовать, без ограничения, любую известную среду для молочнокислых бактерий. Среда может содержать источник углерода и источник азота. Источник углерода может включать одно или более из сахарозы, глюкозы, фруктозы и тому подобного, и источник азота может включать одно или более из, но без ограничения, дрожжевого экстракта, пептона, говяжьего экстракта, солодового экстракта, кукурузного экстракта, цитрата аммония, сульфата аммония, хлорида аммония, фосфата аммония, карбоната аммония, нитрата аммония и тому подобного. Кроме того, среда также может содержать одно или более из Tween 80, цитрата натрия, фосфата калия, ацетата натрия, сульфата марганца, сульфата магния и дистиллированной воды.
[0049] 2. Композиция для облегчения связанного с Helicobacter pylori заболевания, содержащая кимчи по настоящему изобретению или его экстракт
[0050] Настоящее изобретение относится к композиции для облегчения связанного с Helicobacter pylori заболевания, содержащей кимчи, содержащее Leuconostoc mesenteroides CJLM119 и Lactobacillus plantarum CJLP133, или его экстракт.
[0051] Кимчи по настоящему изобретению и способ его получения являются такими, как описано в разделе «Кимчи, содержащее Leuconostoc mesenteroides CJLM119 и Lactobacillus plantarum CJLP133, и способ его получения», и, следовательно, соответствующее описание опущено.
[0052] В настоящей заявке связанное с Helicobacter pylori заболевание может включать, но не ограничивается ими, гастрит, язву желудка, рак желудка и тому подобное.
[0053] В настоящей заявке «экстракт кимчи» означает материал, экстрагированный любым способом из кимчи, которое является сырьевым материалом, и должен включать, без ограничения, целый экстракт, экстрагированный таким способом, полученный из него концентрат, высушенный продукт и порошки концентрата.
[0054] При получении экстракта путем экстракции кимчи, которое представляет собой сырьевой материал, можно использовать без ограничения общепринятые методы экстракции, такие как экстракция растворителем, ультразвуковая экстракция, экстракция фильтрованием и кипячением с обратным холодильником. В частности, можно использовать экстракцию растворителем или экстракцию кипячением с обратным холодильником, однако настоящее изобретение не ограничено этими методами. Процесс экстракции можно повторять несколько раз, после чего экстракт можно подвергать дополнительным этапам, таким как концентрирование или лиофилизация. В частности, высококонцентрированные порошки экстракта кимчи можно получать путем концентрирования полученного экстракта кимчи при пониженном давлении для получения концентрата, лиофилизации концентрата и использования устройства для измельчения.
[0055] В одном варианте осуществления настоящего изобретения следует считать, что экстракт кимчи включает, без ограничения, экстракт, полученный путем экстракции кимчи водой, органическим растворителем или смешанным из них растворителем, концентрат или порошки экстракта. Органический растворитель может быть любым растворителем, выбранным из группы, состоящей из спиртов, в частности, C1-C4 низших спиртов, таких как метанол, этанол, пропанол или бутанол, гексана (н-гексана), эфиров, глицерина, пропиленгликоля, бутиленгликоля, этилацетата, метилацетата, дихлорметана, хлороформа, бензола, а также смешанного из них растворителя. В частности, растворитель для экстракции может быть любым растворителем, выбранным из группы, состоящей из воды, C1-C4 спирта, а также смешанного растворителя из C1-C4 спирта и воды. Например, растворитель для экстракции может представлять собой водный раствор метанола или водный раствор этанола. Водный раствор метанола или этанола может представлять собой водный раствор в концентрации от 10% (об/об) до 99% (об/об), в частности, водный раствор в концентрации от 20% (об/об) до 70% (об/об), и более конкретно, водный раствор в концентрации от 30% (об/об) до 60% (об/об), однако настоящее изобретение не ограничено перечисленным.
[0056] В одном варианте осуществления настоящего изобретения экстракцию можно проводить при температуре от 5°C до 100°C, в частности, при температуре от 20°C до 95°C, и более конкретно, при температуре от 50°C до 90°C, однако настоящее изобретение не ограничено перечисленным. Кроме того, экстракцию можно проводить в течение 1-20 часов, в частности, в течение 2-16 часов, и более конкретно, в течение 3-12 часов, однако настоящее изобретение не ограничено перечисленным.
[0057] В одном варианте осуществления настоящего изобретения экстракцию можно проводить от одного до восьми раз, в частности, от одного до шести раз, и более конкретно, от одного до пяти раз, однако настоящее изобретение не ограничено перечисленным. Экстракт может представлять собой один экстракт, полученный при каждой экстракции, или смешанный экстракт из экстрактов, полученных при каждой экстракции, в частности, смешанный экстракт из экстрактов, полученных при каждой экстракции.
[0058] В тексте настоящей заявки термин «облегчение» означает, без ограничения, все действия, приводящие по меньшей мере к снижению таких параметров, как степень тяжести симптома, которые связаны с лечением путем введения кимчи по настоящему изобретению или его экстракта. Облегчение связанного с Helicobacter pylori заболевания по настоящему изобретению может быть эффектом самих Leuconostoc mesenteroides CJLM119 и Lactobacillus plantarum CJLP133, и может быть эффектом, вызванным ферментацией овощей данными штаммами, но механизм не ограничен перечисленным.
[0059] В соответствии с настоящим изобретением композиция может представлять собой функциональный оздоровительный продукт питания.
[0060] Термин «функциональный оздоровительный продукт питания» является синонимом термина «продукт здорового питания» (FoSHU) и означает продукт питания, который подвергают обработке для эффективного осуществления им регулирующей функции в организме в дополнение к питательным свойствам, и который, таким образом, в высокой степени обладает лекарственными и лечебными свойствами. В настоящем документе термин «функциональный» означает связанный с контролированием питательных веществ для структур и функций человеческого организма или оказывающий полезное влияние на здоровье, например, физиологические функции.
[0061] Композицию для здорового питания можно получать с использованием способа, обычно используемого в данной области. Для получения композиции для здорового питания можно использовать материалы и ингредиенты, обычно используемые в данной области. Кроме того, композицию для здорового питания можно получать в виде любого состава, который считается пищей, без ограничений. Композиция для здорового питания может быть получена в разных формах и имеет преимущество перед обычными лекарственными средствами в том, что композиция для здорового питания лишена побочных эффектов, которые могут возникать при долгосрочном приеме лекарственных средств, потому что она основана на пищевых материалах. Кроме того, композиция для здорового питания обладает высокой переносимостью, так что ее можно употреблять в качестве вспомогательного средства для оказания облегчающего действия на симптомы связанного с Helicobacter pylori заболевания.
[0062] Термин «продукт здорового питания» означает продукт питания, оказывающий активное воздействие на поддержание или улучшение здоровья, в сравнении с обычной пищей, и «продукт питания с биологически активными пищевыми добавками» означает продукт питания, предназначенный для снабжения организма полезными для здоровья добавками. В зависимости от обстоятельств термины «функциональный продукт питания», «продукт здорового питания» и «продукт питания с биологически активными пищевыми добавками» используются взаимозаменяемо.
[0063] В соответствии с настоящим изобретением композиция по настоящему изобретению может дополнительно содержать физиологически приемлемый носитель. Вид носителя не имеет конкретных ограничений, и может быть использован любой носитель без ограничения при условии, что он обычно используется в данной области. Кроме того, композиция по настоящему изобретению может содержать дополнительные ингредиенты, которые могут быть использованы в пищевых композициях для улучшения запаха, вкуса, внешнего вида и тому подобного. Например, композиция по настоящему изобретению может содержать витамин A, витамин C, витамин D, витамин E, витамин B1, витамин B2, витамин B6, витамин B12, ниацин, биотин, фолат, пантотеновую кислоту и тому подобное. Кроме того, композиция по настоящему изобретению может содержать минералы, такие как цинк (Zn), железо (Fe), кальций (Ca), хром (Cr), магний (Mg), марганец (Mn), медь (Cu) и тому подобное, а также аминокислоты, такие как лизин, триптофан, цистеин, валин и тому подобное.
[0064] Кроме того, композиция по настоящему изобретению может содержать пищевые добавки, такие как консерванты, стерилизующие средства, антиоксиданты, красители, закрепители цвета, осветлители, приправы, подсластители, вкусо-ароматические добавки, средства, вызывающие набухание, армирующие наполнители, эмульгаторы, загустители, покрытия, ингибиторы пенообразования, растворители, улучшители и так далее. Добавку можно выбирать в соответствии с видом пищевого продукта и использовать в соответствующем количестве. Относительное содержание такой добавки не является критичным, однако принято выбирать относительное содержание такой добавки в диапазоне от 0,01 до 5 частей по массе на 100 частей по массе композиции по настоящему изобретению.
[0065] Содержание кимчи или его экстракта в композиции по настоящему изобретению можно соответствующим образом определять в зависимости от цели применения. В одном варианте осуществления настоящего изобретения содержание кимчи или его экстракта в композиции по настоящему изобретению может составлять, но без ограничения, 0,0001-20,0 масс%, например, и в частности, 0,001-1,0 масс%, в расчете на общую массу композиции. Когда содержание кимчи или его экстракта находится в вышеуказанном диапазоне, может быть достигнут ослабляющий эффект на симптомы связанного с Helicobacter pylori заболевания с экономически целесообразным количеством. Однако количество кимчи или его экстракта при долгосрочном приеме для здоровья и гигиены, или поддержания здоровья, может быть ниже указанного диапазона. Поскольку кимчи или его экстракт не имеет проблем с безопасностью, его можно использовать в большем количестве, чем приведенные выше диапазоны.
[0066] Композиция по настоящему изобретению может дополнительно содержать ингредиенты, обычно добавляемые при производстве продуктов питания, помимо кимчи по настоящему изобретению или его экстракта, и, например, композиция может содержать белки, углеводы, жиры, пищевые добавки, приправы, вкусо-ароматические добавки и тому подобное. Примерами таких углеводов являются моносахариды, такие как глюкоза, фруктоза и тому подобное; дисахариды, такие как мальтоза, сахароза, олигосахариды и тому подобное; а также обычные сахара, например, полисахариды, такие как декстрин, циклодекстрин, а также сахарные спирты, такие как ксилит, сорбит и эритрит. В качестве вкусо-ароматической добавки можно использовать натуральные вкусо-ароматические добавки, такие как тауматин и экстракты стевии, а также синтетические вкусо-ароматические добавки. Например, когда композиция для здорового питания по настоящему изобретению изготовлена в виде напитка, можно дополнительно включать лимонную кислоту, кукурузный сироп с высоким содержанием фруктозы, сахар, глюкозу, уксусную кислоту, яблочную кислоту, фруктовый сок, натуральные экстракты и тому подобное, в дополнение к экстракту кимчи по настоящему изобретению.
[0067] Вид композиции не имеет конкретных ограничений. Примерами продуктов питания, к которым можно добавлять кимчи по настоящему изобретению или его экстракт, являются мясо, колбасы, хлеб, шоколад, конфеты, закуски, кондитерские изделия, пицца, рамен, другие виды лапши, жевательные резинки, молочные продукты, включая мороженое, различные супы, напитки, чаи, неалкогольные напитки, алкогольные напитки, а также комплексы витаминов, и они могут включать все продукты здорового питания в их обычном смысле.
[0068] Поскольку кимчи по настоящему изобретению или его экстракт содержит Leuconostoc mesenteroides CJLM119 и Lactobacillus plantarum CJLP133, и эти две молочнокислые бактерии имеют характерную особенность, заключающуюся в сильном ингибировании активности Helicobacter pylori, композиция, содержащая кимчи по настоящему изобретению или его экстракт, может быть эффективно использована для предотвращения или лечения соответствующих заболеваний, вызываемых Helicobacter pylori.
[0069] 3. Способ предотвращения, лечения или облегчения связанного с Helicobacter pylori заболевания с использованием кимчи по настоящему изобретению или его экстракта
[0070] Настоящее изобретение относится к способу предотвращения, лечения или облегчения связанного с Helicobacter pylori заболевания, включающему этап введения субъекту, имеющему, или имеющему риск развития связанного с Helicobacter pylori заболевания, кимчи или его экстракта.
[0071] Настоящее изобретение относится к применению кимчи или его экстракта для предотвращения, лечения или облегчения связанного с Helicobacter pylori заболевания.
[0072] Настоящее изобретение относится к применению кимчи или его экстракта для получения композиции для предотвращения, лечения или облегчения связанного с Helicobacter pylori заболевания.
[0073] Кимчи по настоящему изобретению или его экстракт и способ их получения являются такими же, как те, которые описаны в разделе «1. Кимчи, содержащее Leuconostoc mesenteroides CJLM119 и Lactobacillus plantarum CJLP133, и способ его получения» и «2. Композиция для облегчения связанного с Helicobacter pylori заболевания, содержащая кимчи по настоящему изобретению или его экстракт», и, следовательно, соответствующее описание опущено.
[0074] В тексте настоящей заявки термин «предотвращение» должен охватывать все действия, приводящие к ингибированию или отсрочке возникновения симптома связанного с Helicobacter pylori заболевания путем введения кимчи по настоящему изобретению или его экстракта.
[0075] Кроме того, в тексте настоящей заявки термин «лечение» должен охватывать все действия, приводящие к ослаблению или изменению в лучшую сторону симптома связанного с Helicobacter pylori заболевания путем введения кимчи по настоящему изобретению или его экстракта.
[0076] Кроме того, в тексте настоящей заявки термин «введение» означает введение заранее определенного вещества субъекту соответствующим образом.
[0077] Кроме того, в тексте настоящей заявки термин «субъект» относится ко всем животным, таким как крысы, мыши и домашний скот, включая людей. Конкретным примером может быть млекопитающее, включая человека. В качестве другого примера субъектом может быть субъект, имеющий или имеющий риск развития связанного с Helicobacter pylori заболевания.
[0078] В способе по настоящему изобретению путь введения и способ введения кимчи по настоящему изобретению или его экстракта не имеют конкретных ограничений, и можно использовать любой путь введения и любой способ введения при условии, что композиция, содержащая кимчи по настоящему изобретению или его экстракт, может достигать желаемой целевой зоны. В частности, кимчи или его экстракт можно вводить различными путями введения, включая пероральный или парентеральный пути введения, однако обычным является пероральное введение.
[0079] В одном варианте осуществления настоящего изобретения заново изучена композиция предотвращающего рак кимчи в виде пищевой композиции для диетического лечения инфекции, вызываемой Helicobacter pylori. В другом варианте осуществления настоящего изобретения высказана гипотеза, что диетическое лечение с использованием предотвращающего рак кимчи в мышиной модели, как правило, способно предотвращать, облегчать или лечить связанные с Helicobacter pylori заболевания, такие как гастрит, язва желудка, рак желудка и тому подобное. Предотвращающее рак кимчи можно получать путем добавления к овощам с высоким содержанием ликопина штамма Leuconostoc mesenteroides CJLM119 и штамма Lactobacillus plantarum CJLP133 в общепринятом способе получения кимчи, однако настоящее изобретение не ограничено перечисленным. В одном варианте осуществления настоящего изобретения кимчи по настоящему изобретению или его экстракт демонстрирует превосходный профилактический и терапевтический эффект в отношении связанных с Helicobacter pylori заболеваний, в частности, гастрита, язвы желудка и рака желудка.
[0080] В одном варианте осуществления настоящего изобретения штаммы Leuconostoc mesenteroides CJLM119 и Lactobacillus plantarum CJLP133, которые представляют собой молочнокислые бактерии, используемые для получения кимчи по настоящему изобретению, обладают превосходной ингибирующей активностью в отношении Helicobacter pylori, в сравнении с другими штаммами, принадлежащими в тому же виду.
[0081] В другом варианте осуществления настоящего изобретения кимчи, содержащее штаммы Leuconostoc mesenteroides CJLM119 и Lactobacillus plantarum CJLP133, демонстрирует ингибирующий эффект в отношении Helicobacter pylori в заданной концентрации (смотри ФИГ. 1).
[0082] В другом варианте осуществления настоящего изобретения кимчи по настоящему изобретению может значительно подавлять экспрессию сосудистых факторов роста и факторов воспаления в нормальных клетках желудка и восстанавливать плотные межклеточные контакты (смотри ФИГ. 2-4).
[0083] В другом варианте осуществления настоящего изобретения кимчи по настоящему изобретению может значительно ингибировать рост клеток рака желудка, индуцировать апоптоз клеток рака желудка (смотри ФИГ. 5 и 6) и ингибировать развитие рака желудка у модельных животных, инфицированных Helicobacter pylori (смотри ФИГ. 10).
[0084] Соответственно, кимчи, содержащее штаммы Leuconostoc mesenteroides CJLM119 и Lactobacillus plantarum CJLP133, по настоящему изобретению проявляет значительную ингибирующую активность в отношении Helicobacter pylori и, таким образом, может быть использовано для предотвращения, лечения или облегчения различных заболеваний, которые могут возникать из-за Helicobacter pylori, таких как гастрит, язва желудка и рак желудка.
[0085]
[0086] Далее настоящее изобретение описано более подробно с помощью примеров.
[0087] Однако следующие далее примеры всего лишь иллюстрируют настоящее изобретение, и содержание настоящего изобретения не ограничено следующими далее примерами.
[0088]
[0089] Сначала описан способ получения, способ тестирования и статистические данные для кимчи по настоящему изобретению. Статистический анализ проводили с использованием программ GraphPad Prism (GraphPad Software, La Jolla, CA, USA) и SPSS (версия 12.0; SPSS Inc., Chicago, IL, USA). Статистически значимые различия между группами определяли с использованием U-критерия Манна-Уитни. Статистически значимыми считали различия при p <0,05.
[0090] Пример 1: Выделение штаммов, обладающих высокой ингибирующей рост активностью в отношении бактерий Helicobacter pylori
[0091] <1-1> Выделение и идентификация штаммов
[0092] Штамм Leuconostoc mesenteroides CJLM119, который представляет собой молочнокислую бактерию, полученную из кимчи, и используется для получения кимчи по настоящему изобретению, представляет собой микробный штамм, депонированный в Генном банке Корейского научно-исследовательского института биологических наук и биотехнологии под регистрационным номером KCTC 13043BP, и способ выделения и идентификации штамма конкретно описан в корейском патенте № 1807995. Кроме того, штамм Lactobacillus plantarum CJLP133, который представляет собой молочнокислую бактерию, полученную из кимчи, и используется для получения кимчи по настоящему изобретению, представляет собой микробный штамм, депонированный в Генном банке Корейского научно-исследовательского института биологических наук и биотехнологии под регистрационным номером KCTC 11403BP, и способ выделения и идентификации штамма конкретно описан в корейском патенте № 10-1486999. Соответственно, их подробное описание опущено.
[0093] В соответствии с настоящим изобретением кимчи было получено с использованием штаммов Leuconostoc mesenteroides CJLM119 и Lactobacillus plantarum CJLP133 общепринятым способом получения.
[0094] <1-2> Селекция штаммов, обладающих высокой ингибирующей активностью в отношении бактерий Helicobacter pylori
[0095] Определяли ингибирующую Helicobacter pylori активность штаммов Leuconostoc mesenteroides CJLM119 и Lactobacillus plantarum CJLP133, которые были выделены и идентифицированы в примере <1-1>, а также Leuconostoc mesenteroides KCTC3100/KCTC3722 и Lactobacillus plantarum KCTC3108/DSM17853, которые были использованы в качестве контролей.
[0096] В результате установлено, что штаммы Leuconostoc mesenteroides CJLM119 и Lactobacillus plantarum CJLP133 показали превосходную ингибирующую активность в отношении Helicobacter pylori, в сравнении с другими штаммами, которые были использованы в качестве контролей и принадлежат к тому же виду.
[0097] Пример 2: Получение кимчи
[0098] Стандартное кимчи (далее в настоящем документе иногда называемое «сКимчи» или «СК»), которое является контролем, и предотвращающее рак кимчи (далее в настоящем документе иногда называемое «прКимчи» или «ПРК») по настоящему изобретению получали следующим образом.
[0099] <2-1> Получение стандартного кимчи (сКимчи)
[00100] Используя стандартизированный рецепт кимчи Всемирного института кимчи, получали стандартное кимчи путем смешивания засоленной капусты кимчи с набором специй, включающим порошок красного перца, чеснок, имбирь, анчоусный соус, тертый дайкон, зеленый лук, клейкую рисовую пасту и сахар, с последующим проведением ферментации при низкой температуре.
[00101] <2-2> Получение предотвращающего рак кимчи (прКимчи)
[00102] Предотвращающее рак кимчи в основном получали из капусты кимчи с высоким содержанием ликопина. Приобретали семена «TheHan1ho» (публикация заявки на сорт № 2015-688, опубликованная 15 декабря 2015 г.), который представляет собой сорт капусты кимчи с высоким содержанием ликопина, что нехарактерно для обычной капусты кимчи. С фермерами, выращивающими капусту кимчи, заключали договора на выращивание капусты кимчи, и собранный урожай капусты кимчи использовали для получения предотвращающего рак кимчи после засолки в соответствии со способом изготовления кимчи. Предотвращающее рак кимчи получали таким же образом, как и стандартное кимчи, за исключением того, что: в качестве капусты кимчи использовали капусту кимчи с высоким содержанием ликопина и добавляли два штамма молочнокислых бактерий, полученных из кимчи, Leuconostoc mesenteroides CJLM119 и Lactobacillus plantarum CJLP133, которые были выделены и идентифицированы в примере <1-1>.
[00103] <2-3> Получение концентрата экстракта кимчи
[00104] Кимчи, полученное в примерах <2-1> и <2-2>, лиофилизировали, а затем измельчали в порошок. К порошку добавляли 20-кратный избыток по массе метанола, а затем проводили экстракцию с перемешиванием в течение 12 часов. Экстрагированный супернатант фильтровали через фильтровальную бумагу, к оставшемуся преципитату вновь добавляли метанол для проведения экстракции в течение 12 часов. Экстракт концентрировали путем нагревания при температуре примерно 40°C в устройстве для концентрирования, получая концентрат, и концентрат хранили при 4°C для использования в последующих экспериментах.
[00105] Пример 3: Определение ингибирующего рост эффекта в отношении Helicobacter pylori
[00106] <3-1> Культура штамма Helicobacter pylori
[00107] Штамм Helicobacter pylori ATCC 43504 (Американская коллекция типовых культур, штамм типа cagA+ и vacA s1-m1) культивировали при 37°C в BBL триптиказо-соевой (TS) агаровой среде (TSAII; BD Biosciences, Franklin Lakes, NJ) с 5% овечьей кровью в микроаэрофильных условиях (газогенерирующие системы BD GasPaK EZ, BD Biosciences) в течение 3 дней. Штамм Helicobacter pylori собирали в TS среде, центрифугировали при 3000 X g в течение 5 минут и ресуспендировали в среде в конечной концентрации 109 колониеобразующих единиц (КОЕ)/мл. Во всех экспериментах использовали культуры, выращенные в течение 72 часов в TS агаровой среде.
[00108] <3-2> Определение ингибирующей рост активности в отношении Helicobacter pylori
[00109] Для определения ингибирующего эффекта кимчи по настоящему изобретению в отношении Helicobacter pylori среду, покрытую штаммом Helicobacter pylori примера <3-1>, обрабатывали и культивировали в присутствии полученного в примере <2-3> концентрата экстракта кимчи в разных концентрациях, и измеряли размер зоны ингибирования.
[00110] В результате было обнаружено, что концентрат экстракта кимчи по настоящему изобретению обладает ингибирующим действием на бактерии Helicobacter pylori в концентрации 500 мг/мл или более (ФИГ. 1).
[00111] Пример 4: Определение эффектов на связанное с Helicobacter pylori заболевание в линии нормальных клеток желудка (RGM1; нормальные клетки слизистой желудка)
[00112] <4-1> Определение ингибирующей активности на ангиогенные факторы
[00113] Для определения эффекта кимчи по настоящему изобретению на сосудистые факторы роста клетки линии нормальных клеток желудка RGM1 обрабатывали 50 MOI Helicobacter pylori, а затем концентратом экстракта кимчи, полученным в примере <2-3>, в концентрации 5 мг/мл в течение 6 часов. После обработки компоненты среды удаляли, и клетки дважды промывали раствором PBS (Дульбекко). Затем в чашку добавляли RiboEX (500 мкл, GeneAll, Seoul, South Korea), инкубировали при 4°C в течение 10 минут для проведения ОТ-ПЦР. RiboEX собирали и помещали в 1,5-мл пробирку, добавляли 100 мкл хлороформа и медленно перемешивали. После 10 минут инкубации на льду образцы центрифугировали при 10000 g в течение 30 минут. Супернатант экстрагировали, смешивали с 200 мкл изопропанола, и смесь инкубировали при 4°C в течение 1 часа. После центрифугирования при 13000 g в течение 30 минут осадок промывали 70% (об/об) этанолом. Этанол полностью выпаривали, осадок растворяли в 100 мкл обработанной DEPC воды (Invitrogen Life Technologies, Carlsbad, Calif.). Затем проводили ПЦР для определения изменений в соответствующих генах.
[00114] В результате было установлено, что экспрессия VEGF и bFGF, являющихся показателями факторов ангиогенеза, содержание которых повышалось при обработке Helicobacter pylori, была снижена в группе обработки предотвращающим рак кимчи (ПРК) (ФИГ. 2).
[00115] <4-2> Сравнение противовоспалительного эффекта
[00116] Для подтверждения противовоспалительного эффекта кимчи по настоящему изобретению клетки RGM1 обрабатывали 50 MOI Helicobacter pylori, а затем концентратом экстракта кимчи, полученным в примере <2-3>, в концентрации 5 мг/мл. Затем определяли изменения в соответствующих генах методом ОТ-ПЦР примера <4-1>.
[00117] В результате было установлено, что экспрессия COX-2 и iNOS, являющихся показателями воспаления, содержание которых повышалось при обработке Helicobacter pylori, была снижена в группе обработки предотвращающим рак кимчи (ПРК) (ФИГ. 3).
[00118] <4-3> Сравнение эффекта на межклеточные контакты
[00119] Для определения эффекта кимчи по настоящему изобретению на показатели плотных межклеточных контактов клетки RGM1 обрабатывали 100 MOI Helicobacter pylori, а затем концентратом экстракта кимчи, полученным в примере <2-3>, в концентрации 5 г/мл и 10 г/мл в течение 6 часов. В это время верхнюю часть одноклеточного слоя, который стал конфлюэнтным вследствие пролиферации клеток, промывали три раза по 0,5 мл холодного D-PBS(-), заливали 0,5 мл холодного HBSS и переносили в новую лунку, содержащую 1,5 мл холодного HBSS. Лунку оставляли покоиться на 30 минут, затем измеряли трансэпителиальное электрическое сопротивление (ТЭЭС%) между верхним и нижним слоями.
[00120] В результате было установлено, что в модели инфекции Helicobacter pylori плотные межклеточные контакты восстанавливались при обработке предотвращающим рак кимчи по настоящему изобретению в высокой концентрации (ФИГ. 4).
[00121] Пример 5: Определение эффектов на связанное с Helicobacter pylori заболевание в линии клеток рака желудка (MKN28; клетки рака желудка)
[00122] <5-1> Определение ингибирующего рост эффекта на линию клеток рака желудка
[00123] Для определения ингибирующего рост эффекта кимчи по настоящему изобретению на линию клеток рака желудка клетки MKN28 обрабатывали концентратами экстрактов кимчи, полученными в примере <2-3>, из стандартного кимчи и предотвращающего рак кимчи в концентрациях 10, 20 и 50 мг/мл в течение 6 часов, соответственно. Затем сравнивали жизнеспособность клеток в каждой группе обработки.
[00124] В результате было установлено, что предотвращающее рак кимчи по настоящему изобретению может более значительно ингибировать рост линии клеток рака желудка зависимым от концентрации образом, в сравнении со стандартным кимчи (ФИГ. 5).
[00125] <5-2> Определение эффекта индукции апоптоза в линии клеток рака желудка
[00126] Для определения эффекта индукции апоптоза вследствие обработки предотвращающим рак кимчи в раковых клетках, для которых характерно отсутствие апоптоза, каждые клетки обрабатывали концентратами экстрактов кимчи, полученными способом примера <2-3>, из стандартного кимчи и предотвращающего рак кимчи в соответствующей концентрации в течение 48 часов, а затем извлекали 1X PBS, содержащим 1% ЭБС. Аннексин V и реагент для определения мертвых клеток добавляли в соотношении 1:1 к каждым клеткам, извлеченным в случае разных концентраций, а затем клетки инкубировали в течение 20 минут в темноте при комнатной температуре, и относительное содержание клеток с индуцированным апоптозом определяли и анализировали.
[00127] В результате было установлено, что при обработке линии клеток рака желудка MKN28 предотвращающим рак кимчи по настоящему изобретению апоптоз был индуцирован в 70% или более клеток (ФИГ. 6).
[00128] <5-3> Определение факторов регуляции апоптоза в линии клеток рака желудка
[00129] Для определения эффекта кимчи по настоящему изобретению на факторы регуляции апоптоза в линии клеток рака желудка клетки линии MKN28 рака желудка обрабатывали концентратом экстракта кимчи, полученным в примере <2-3>, в концентрации 20 мг/мл, затем компоненты среды удаляли, и клетки дважды промывали раствором PBS (Дульбекко). Клетки лизировали ледяным буфером для лизиса клеток (Cell Signaling Technology, Denver, MA), содержащим 1 мМ PMSF (фенилметилсульфонилфторид, Sigma Aldrich, St Louis, MO). После 20-минутной реакции каждый образец центрифугировали при 10000 x g в течение 10 минут. Затем получали супернатант. Белки лизата разделяли электрофорезом в полиакриламидном геле с додецилсульфатом натрия (SDS-ПААГ), переносили на мембрану из поливинилиденфторида (PVDF), проводили реакцию с первичным антителом, промывали, а затем проводили реакцию со вторичным антителом, конъюгированным с пероксидазой, вновь промывали, после чего изменения в экспрессии факторов регуляции апоптоза определяли при помощи системы ECL (GE Healthcare, Buckinghamshire, UK).
[00130] В результате было установлено, что экспрессия расщепленной каспазы 3, расщепленной каспазы 8 и расщепленной PARP, которые принимают участие в апоптозе, была значительно повышена в группе обработки предотвращающим рак кимчи (ПРК) по настоящему изобретению в сравнении с таковой в группе обработки стандартным кимчи (СК) (ФИГ. 7).
[00131] <5-4> Определение связанных с клеточным циклом факторов в линии клеток рака желудка
[00132] Для определения эффекта кимчи по настоящему изобретению на связанные с клеточным циклом факторы в линии клеток рака желудка раковые клетки линии MKN28 обрабатывали концентратом экстракта кимчи, полученным в примере <2-3>, в концентрации 20 мг/мл, затем компоненты среды удаляли, и клетки дважды промывали раствором PBS (Дульбекко). Клетки лизировали ледяным буфером для лизиса клеток (Cell Signaling Technology, Denver, MA), содержащим 1 мМ PMSF (Sigma Aldrich, St Louis, MO). После 20-минутной реакции каждый образец центрифугировали при 10000 x g в течение 10 минут. Затем получали супернатант. Белки лизата разделяли SDS-ПААГ, переносили на PVDF мембрану, проводили реакцию с первичным антителом, промывали, а затем проводили реакцию со вторичным антителом, конъюгированным с пероксидазой, вновь промывали, после чего изменения в экспрессии связанных с клеточным циклом белков определяли при помощи системы ECL (GE Healthcare, Buckinghamshire, UK).
[00133] В результате было установлено, что экспрессия циклина D1, CDK4, CDK2, циклина E и циклина A, которые вовлечены в клеточный цикл, была значительно снижена в группе обработки предотвращающим рак кимчи (ПРК) по настоящему изобретению в сравнении с таковой в группе обработки стандартным кимчи (СК). Исходя из этого, было установлено, что механизм апоптоза в линии клеток рака желудка является следствием регуляции клеточного цикла (ФИГ. 8).
[00134] Пример 6: Определение эффекта на связанное с Helicobacter pylori заболевание в долгосрочной модели с инфицированием животных Helicobacter pylori
[00135] Для определения ингибирующего эффекта кимчи по настоящему изобретению на параметры патологии в долгосрочной модели с инфицированием животных Helicobacter pylori самок мышей C57BL/6 (Charles River Japan) в возрасте пяти недель кормили стерилизованным коммерческим гранулированным кормом (Biogenomics, South Korea), давали стерильную воду без ограничения и содержали в кондиционированном помещении при температуре 24°C. После 1 недели адаптации животным вводили инъекцией 20 мг/кг пантопразола три раза для облегчения колонизации Helicobacter pylori вследствие пониженной кислотности желудка. Затем каждому животному инокулировали в желудок суспензию Helicobacter pylori (содержащую 109 КОЕ/мл) с равным объемом (0,3 мл) чистого TS бульона при помощи желудочных зондов. Животные в контрольной группе получали инъекции чистого TS бульона, и все экспериментальные группы получали инъекции Helicobacter pylori всего четыре раза в течение недели. Мышей в течение 4 недель кормили специальным гранулированным кормом на основе AIN76 с содержанием 7,5% NaCl для вызывания гастрита.
[00136] Затем положительных по Helicobacter pylori мышей случайным образом разделяли на четыре группы (n=10). Животных кормили гранулированным кормом AIN76 с содержанием 7,5% NaCl в течение 24 недель для стимуляции вызываемого Helicobacter pylori канцерогенного процесса у всех инфицированных животных. Контрольная группа и экспериментальные группы показаны на ФИГ. 9, соответственно. Группа 1: контрольная группа, группа 2: инфицированная Helicobacter pylori группа, группа 3: инфицированная Helicobacter pylori и получающая предотвращающее рак кимчи в низкой концентрации группа, группа 4: инфицированная Helicobacter pylori и получающая предотвращающее рак кимчи в высокой концентрации группа, группа 5: инфицированная Helicobacter pylori и получающая стандартное кимчи группа, соответственно.
[00137] В результате было установлено, что показатель макроскопического поражения был значительно повышен в контрольной группе G2, и при этом значительно снижен в группах получения предотвращающего рак кимчи G3 и G4 (p<0,01). Кроме того, раковая опухоль желудка значительного размера развивалась у животных в контрольной группе G2, в то время как образование раковых опухолей желудка было снижено в группах получения предотвращающего рак кимчи G3 и G4 (ФИГ. 10 и 11).
[00138]
[00139] Хотя иллюстративные варианты осуществления настоящего изобретения описаны выше, объем настоящего изобретения не ограничен конкретными вариантами осуществления, описанными выше; специалист в данной области может вносить в настоящее изобретение изменения в пределах объема, определяемого формулой изобретения.
1. Способ приготовления Кимчи для применения при облегчении рака желудка, включающий:
- соление и заправку специями капусты Кимчи и
- ферментацию их с помощью Leuconostoc mesenteroides KCTC 13043BP и Lactobacillus plantarum KCTC 11403BP, где капуста Кимчи представляет собой капусту Кимчи с высоким содержанием ликопина.
2. Способ по п. 1, где ликопин содержится в количестве 0,05-5 мг на 100 г капусты Кимчи.
3. Способ по п. 1, где Leuconostoc mesenteroides KCTC 13043BP содержится в количестве 0,01-5 мас.% в расчете на общую массу Кимчи и Lactobacillus plantarum KCTC 11403BP содержится в количестве 0,01-5 мас.% в расчете на общую массу Кимчи.
4. Композиция для облегчения рака желудка, содержащая Кимчи, полученный способом по любому из пп. 1-3 в виде спиртового экстракта, и физиологически приемлемый носитель; где экстракт Кимчи содержится в количестве от 0,0001 мас.% до 20,0 мас.% в расчете на общую массу композиции.
5. Композиция по п. 4, где спирт выбран из группы, состоящей из C1-C4 спирта и водного раствора C1-C4 спирта.
6. Композиция по п. 5, где спирт представляет собой водный раствор метанола или водный раствор этанола.
7. Композиция по п. 4, где экстракт Кимчи выбран из группы, состоящей из экстракта, концентрата экстракта, высушенного концентрата и порошков.
8. Применение Кимчи, полученного способом по любому из пп. 1-3, для облегчения рака желудка.
