Патент ссср 285631

 

63!

ОП ИСА

ИЗОБРЕТЕНИЯ

Союз Советскил

Социалистическив

Республик

К ПАТЕ НТУ

Зависимьш от патента ¹

Кл. 6b, 16/03

МПК С 12d 13/06

Заявлено 07 111.1969 (№ 1312143/28-13)

Приоритет 9.111,1968 (j¹ 14944/68, Япония)

Опубликовано 29.Х.1970. Бюллетень № 33

Дата опубликования описания 13.1.1971

Комитет по делам изобретений и открытий при Совете Министров

СССР

УДК 576.809.32+547..466 (088. 8) Авторы изобретения

Иностранцы

Катцунобу Танака, Кацуо Кимура и Масаки Ямамото (Япония) Иностранная фирма

«Кийова Хакко Когио Компани Лимитед» (Япония) Заявитель

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ l-ГЛУТАМИНОВОЙ КИСЛОТЫ

Настоящее изобретение относится к микробиологической промышленности и касается микробиологического способа получения !-глутаминовой кислоты на углеводородны« среда«.

Известен способ получения l-глутамиповой кислоты культивированием штаммов Brevihacterium H Corynebacterium в аэробных условиях в водной питательной среде, содержащей углеводороды в качестве основного источника углерода, в частности газообразные углеводороды, н-алканы, керосин и т. п. источники азота и неорганические соединения.

При осуществлении предложенного способа используются штаммы Brevibacterium paraffinoIyticum АТСС 21195, Вгevibacterium butauiсшп АТСС 21196, Corynebacterium aikanum

АТСС 21194, способные ассимировать газообразные углеводороды в качестве основного источника углерода и обеспечивать при этом высокий выход l-глутампновой кислоты.

Ниже приведены биологические характеристики предложенных штаммов.

Corynebacterium a 1kanum.

Морфологические свойства. Короткие палочки, разветвленные клетки или клетки типа прерывистой конденсации. Размер клеток

0,5+2,5 лтк. Неподвихкные. Спор не образуют.

Грам — положительные. Неустойчивые к кислотам.

Культуральные свойства. Агар-агар. Средний рост, круглые, гладкие, сплошиыс, выгнутые, желтовато-серые, блестящие и мутные.

Косой агар. Средний рост, блсстягц:!e. нитевидные, желтовато-серые, без запа«а. Питательный бульон. Рост слабый, умеренная мутность. желатин. Рост на повер«ности слабый или отсутствует. Желатин не разжихкается.

Физиологические свойства. Оптимальная

10 температура 25 — 30 С (слабый рост при 35 С).

Оптимальный рН 5,0 — 9,0 (нет роста прп pll

4,0). Потребление кислорода. Аэробное. Лакмусовое молоко. Не меняется или щелочное.

Сероводород. Образуется. Индол. Не образуется. Крахмал. Не разлагается. Из нитратов образуются нитрпты. Каталаза. Положительная. Получение аммиака. Положительное. Тест

Вога — — Проскоуэра, Отрицательный. Потребление са«аров. Кислота образуется из глюкозы, фруктозы, маннозы, сахарозы, лактозы, маннита и сорбита.

Ассимиляция углеводородов. Ассимилирует пронин, н-бутан, н-додекап, н-тридекан, н-тетрадекан, н-пентадекан, н-гексадскан и и-гепта декан.

Brevibactcr!um butanicum имеет те же морфологические свойства, за исключением размеров клеток (10,о — 3,0 лк), те же физиологические свойства, кроме следующих «арактери285631

Предмет изобретения

Составитель Г, Голева

Техред Т. П. Курилко

Редактор А. Б. Бер

Корректор Г, С. Мухина

Заказ 3796 3 Тираж 480 Подписи:e

ЦНИИП11 Комитета по делам изобретений и открытий при Совете Мш:.истров ГССР москва, >К-35, Раугиская ваб., д. 4г5

Сапунова, 2

Типография, пр. стик. Получение аммиака. Отрицательное. Потребление сахаров. Кислота образуется из глюкозы, фруктозы, арабинозы, маннозы, сахарозы, ксилозы, маннита и сорбита. Ассимиляция углеводородов. Ассимилирует пропан, н-гутан, н-декан, н-ундекан, н-гептедеканы.

Агар-агар, Обильный рост, колония круглая, гладкая, сплошная светло-коричневая, матовая, тусклая. Косой агар. Обильный рост, колония тусклая, светло-коричневая, без запаха, скользкая. Питательный бульон. Колония на поверхности дисковидная, почти прозрачная, осадка нет. желатин. Рост лучше в верхней части, чем

B нижней, желатин не разжижается.

Brevibacterium paraffinolytium u ee e >«e морфологические свойства (размер клеток

0,5 — 2,5 — 3,0 ли), те же физиологические свойства, что и В. butanicum, за исключением следующих характеристик. Утилизация сахаров.

Кислота образуется из глюкозы, фруктозы,сахарозы, лактозы, маннита и сорбпта. Ассимиляция углеводородов. Ассимилирует пропан, н-бутан, к-ундекан, н-гептадекап. Культуральные свойства. Агар-агар. Обильный рост, колония круглая, гладкая, сплошная, выгнутая, светло-розовая, блестящая и матовая. Косой агар. Обильный рост, культура нитевидная, блестящая, желтовато-серая, без запаха, слизистая. Питательный бульон. Рост на поверхности слабый, умеренная мутность. >Келатин, Р;..с., ua;.о.: е>хпостп сл..бый илп отс тств,"ет, желатин не разжижается.

Штаммы хранятся в американской коллекции культур.

В качестве источника rëeðoäà используются газообразные углеводороды: этан, пропан, изопропан, н-бутан, вгор-бутан, изобутан, третбутан; жидкие углеводороды С; †С, и-пентан, к-октан, н-декан, н-додекан, к-гексадекан, изопентан, изооктан; циклопарафины: циклогексан, циклооктан; олефины: пентен-2, гексен-l, октен-l, октен-2; циклоолефины: циклогексан; ароматические углеводороды: бензол, изомеры ксилола; смеси углеводородов: керосин, легкие и тяжелые масла, парафинистая нефть.

В среду можно добавлять дополнительные источники углерода, например сахара, низкомолекулярные спирты и кислоты. Источники азота могут быть неорганическими (соли аммония) и органическими (кукурузпая барда, дрожжевой экстракт и т. п.). К неорганическим соединениям относятся сульфат магния, 5

35 фосфат натрия, кислый и средний фосфаты калия, сульфат железа, хлориды марганца, кальция, натрия, сульфат цинка. Процесс ферментации ведут при 20 — 50 С и рН 4 — 9. Если используют газообразные углеводороды, их подают в среду в смеси с воздухом или кислородом. Для увеличения скорости ферментации в среду можно добавлять небольшие количес1ва пеутилизируемых углеводородов или поверхностно-активных веществ.

Выделение 1-глутаминовой кислоты из культуральной жидкости проводят любым известным способом.

Пример 1. Посевную культуру штамм

Corynebact. alkanum АТСС 21194 выращивают в аэробных условиях при встряхивании в течение 24 час па среде следующего состава, /о. 0,5 мясного хлористого натрия; 0,2 сорби-,а; 0,25 дрожжевого экстракта; рН 7,2. Полученной культурой засевают предварительно стерилизованную среду ферментации, в которую входяr 0,05 0 КНгРО», 0,05% Еà РО».

12НгО; 0,01 /в NgSO»; 0,001",в NnSO, 4НзО;

0,001 0 Ее$0». 7НвО; 0,001 /е Хп$0» 7НгО;

0,001% СаС1. 2Н О; 10 у/л Н,,ВО,,; 10 1:, .г ХавМоО» 2Н О; 50 у/л CuSO» 5НвО; 10 у/»г

СоС4 2Н.О; 50у/л Х1С1 6Н О; 0,05% кукурузной барды; 1,5% (МН») в$0» рН 5,2.

Среду аэрируют смесью я-бутана с воздухом в соотношении 1:1 по объему. Ферме;по ведут в 5-литровом фепментепе при 30 С, скорости перемешивания b00 об, лгин, под че, азовой смеси 1 л/хл/.яи,".. Через 96 час накапливается 18 л»г/л /-глутаминовой кислоты.

Пример 2. Процесс ведут так же, как в примере 1, только с культурой В. butanicum

АТСС 21196. Получат 15 лгг/л l-глутаминовой кислоты.

Способ получения l-глутаминовой кислоты культивированием штаммов Brevibacterium u

Corynebacterium в аэробных условиях в водной питательной среде, содержащей углеводороды, например газообразные, в качестве основного источника углерода, источники азот а и неорганические соединения, отлиаа ощийся тем, что, с целью повышения выхода продукта используют штаммы Corynebacterium alkanum

АТСС 21194, Brevibacterium paraffinolyticum

АТСС 21195, Brevibacterium butanicum ATCC

21196.