Штамм дрожжей candida guilliermondll ф5-121

 

ОП ИСА.М-Иг Е

ИЗОБРЕТЕНИЯ

330I89

Союз Советских

Социалистических

Республик

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Зависимое от авт. свидетельства №вЂ”

Заявлено 27.XI.1969 (№ 1380800/28-13) с присоединением заявки №вЂ”

Приоритет

Опубликовано 13.IX.1972. Бюллетень № 27

Дата опубликования описания 9.Х.1972

М, Кл, С 12d 5 04

Комитет по делам изобретений и аткрмтий при Совете Министров

СССР

УД К 577,16 (088. 8) Авторы изобретения

Заявитель

Г. М. Шавловский и Г. П. Кшеминская

Львовский ордена Ленина государственный университет им. Ивана франко

ШТАММ ДРОЖЖЕЙ CANDIDA 6111ШЕРМОМ011 Ф5-121

Изобретение относится к области получения витаминов биохимическим путем и касается получения нового штамма дрожжей

Candida guilliermondii Ф5-121, синтезирующего рибофлавин в присутствии железа.

Извсстны дрожжи Candida guilliermondii, продуцирующие рибофл авин.

Однако практическое применение указанных дро>кжсй ограничено вследствие высокой чувствительности флавиногенсза Candida р uillicrmondii к железу.

Предлагаемый штамм Candida guilliermondii Ф5-121 синтезирует значительные количества рибофлавина не только на неочищенных от железа средаi, но даже после прибавления к ним больших количеств этого металла.

Штамм Ф5-121 является мутантом. Получен из штамма дрожжей Candida guilliermondii

ЛТСС 9058 многоэтапной селекцией путем обработки клеток исходного штамма ультрафиолетовыми лучами в дозе 2,1 10 эргlльтт, а затем клеток полученного 1=1114 раствором

N -метил - N - нитро - N - нитрозогуанидина

1,0 мг/.1тл в течение 35 лшн и ультрафиолетовыми лучами в указанной выше дозе.

Штамм лишен ксантиноксидазной активности.

Предлагаемый штамм имеет следующую кар актср исти ку.

Клетки штамма Ф5-121 полиморфны (удлипенные, овальные, круглые); часто образуюг пссмдомицелий.

Дрожжи хорошо растут в аэробных условиях на сложных органических средах, таких как солодовое сусло, и на синтетических сахаро-минеральных средах. На сусло-агаре и

»а агаризованной среде Беркгольдера вырастают плотные колонии, желтеющие прн длительном xðàIIåíèè, на жидких питательныx

10 средах в статических условиях дрожжи обраДля nai on ieHIIH больших масс необходима хорошая аэрация.

В качестве источников углеродного питания дрожжи могут использовать D-глюкозу, D15 фруктозу, D-ксилозу, D-маннит, сахарозу, мальтозу, яблочную, янтарную, фумаровую н

2-оксоглутаровую кислоты, но в отличие от исходного штамма С. guilliermondii не используют лимонную кислоту; они растут так20 жс на средах с и-алканами (смесь С,о — Стз) илн с мелассой, прибавленными в качестве единственных источников углеродного питания.

Хорошими источниками азотного питания

25 служат ссрнокислый аммоний и мочев1ша.

Как и исходная культура, штамм Ф5-121 нуждается в биотине на синтетической среде

Беркгольдера, содержащей (NH4) з504 в качестве единственного источника азота

50 (3,0 г/л), мутант накапливает в 1 л среды

330189

Спс О» 5I-IgO (NH4) вМогО г 4НаО

ZnSO 7H 0

Биотин 1,000 мкг/л рН 5,0.

0,039

0,120

0,308

Предмет изобретения

Сосгавнтель В. Дунье

Тсхред Л. Богданова

Редактор В, Блохина

Корректор T. Бабакина

Заказ 3033/6 Изд. Л" 1262 Тираж 406 Подписное

ЦНИИПИ Комитета по делам изобретений и открытий ири Совете Министров СССР .11осква, )К-35, Раугиская í 10., д. 4/5

Типография, вр. Сапунова, 2 биомассу порядка 8 — 9 г сухого веса и 30—

50 мг рибофлавина. Основная часть витамина В2 синтезируется дрожжами в процессе роста клеток и выделяется в культуральпую жидкость, Кроме свободного рибофлавина, в среде прнсутствугот следы флавин-монопуклеотида и флавии-адспип-дипуклеотида. Клетки содержат небольшие (около 40 мкг/г сухой биомассы) количества рибофлавина. Колонии штамма Ф5-121, выросшие на агаризованной среде

Беркгольдера, содергкат кристаллы рибофлавина.

Дополнительное прибавление к среде солей железа (свыше 0,95 мг Fe»a 1 л) нс оказывает заметного влияния на интенсивность флавиногенеза штамма Ф5-121.

На срсдах с глюкозой или сахарозой мутант накапливает лимонную кислоту до 2,5 г/л культуральной жидкости.

Для обеспечения активного флавиногенеза штамма Ф5-121 пригодны среды, приготовленные на основе природных органических смесей, а также синтетические сахаро-минеральные среды. Их стерилизуют при 0,5 атм в течение 20 мин и засевают суспензией двухсуточной культуры дрожжей, выросших на солодовом сусло-агаре, из расчета 5 — 10 мкг сухого веса клеток на 1 мл среды. Дрожжи культивируют на круговой качалке (200 об/мин) в колбах Эрлеймейера объемом

500 мл, содержащих по 60 мл среды при

29 С в течение 3 — 4 суток.

При выращивании штамма Ф5-121 на солодовом сусле или среде, состоящей из свекловичной мелассы 5% и КН Р04 0,5 г/л, дрожжи накапливают примерно 30 мг рибофлавина на 1 л культуральной жидкости.

Прибавление D, 1-аспарагина 2,0 г/л к среде, приготовленной из мелассы, повышает выход рибофлавипа, который составляет свыше

80 мг/л.

В качестве исходной сахаро-минеральной среды используют модифицированную среду

Беркгольдера приведенную ниже. г/л

Сахароза 20,0 (ХН4) 2S04 3,0

kI I PO1 0,5

XgS0, Н,О 0,2

СаС1 61-IgO 0,2 мг/л

Соль Мора 1,404

МпЬОв . / 1-120 0,050

НаВОз 0,056

Прибавление к этой основной среде различных ингредиентов приводит к следующему увеличению синтеза рибофлавина, иг/л: основная среда 50,0

+Д, I -аспарагин 2,0 г/л 106,8

+1,/в дрожжевого автолизата 141,2

+7-и бал. солодовое сусло 133,0

15 „+1% пептона 83,0

+7-и бал. солодовое сусло+

Д, 1 -аспарагин 2,0 г/л 166,0

Можно использовать также среду упрощенного состава, г/л: сахароза 20,0 (А Н4) gS04 3,0

D,1 -аспарагин 2,0

1х 1-12Р 0 0,5

MgSO >. 7Н О 0,2

15-и бал. солодовое сусло 500,0 мг/л

На такой среде дрожжи синтезируют при концентрации рибофлавина свыше 220 мг/л.

Штамм дрожжей Candida guilliermondii

Ф5-121, синтезирующий рибофлавин в присутствии железа.

35 Морфология. При выращивании на суслоагаре клетки полиморфны (удлиненные, овальные, круглые), размером 2 — 5, 3 — 10 мк, часто образующие псевдомицелий.

Органическая среда. Сусло-агар. Колонии

40 складчатые, светло-кремовые, желтеющие при длительном хранении, клетки размножаются почкованием.

Полусинтетическая среда. Сахароза, (NH )2SO4, D,I -аспарагин, MgS04 7Н О, 45 КН Р04, солодовое сусло.

Отношение к источникам углеродного питания. Усваивает сахарозу, мальтозу, глюкозу, ксилозу, маннит, яблочную, фумаровую и

2-оксоглутаровую кислоты. Не усваивает ли50 монную кислоту. Биохимические свойства.

В процессе роста на среде с высоким содержанием железа штамм дрожжей Candida

guilliermondii Ф5-121 синтезирует рпбофлавин (свыше 200 мг/л) и накапливает в культу55 ральной жидкости лимонную кислоту, лишен ксантиноксидазной активности.