Способ определения биологической активности химических препаратов

 

Г

ПАТЕ..

368308

О ПЪГС А Н И Е

ИЗОБРЕТЕНИЯ

Сова Советских

Социалистических

Республик

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Зависимое от авт. свидетельства ¹

Заявлено 01.Х11.1970 (№ 1495139/30-15) М. Кл. С 12k 1/00

G 01п 33/16 с присоединением заявки №

Приоритет

Комитет по делам иаобретеииЯ и открытиЯ при Совете Министров

СССР

УДК 63:576.8:543.9(088.8) Опубликовано 26.1.1973. Бюллетень ¹ 9

Дата опубликования описания 9.IV.1973

Авторы изобретения

К. 3. Гамбург, Л. M. Ошарова и Е. Ф. Высоцкая

Заявитель

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ БИОЛОГИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ

ХИМИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТОВ

Предлагаемое изобретение относится к способам,испытания химических препаратов на их биологическую активность. Кроме того, способ может быть применен для определения токсичности, антимитотической и антипролиферационной активности химических препаратов для р а стительных клеток.

Известен способ определения биологического действия ядохимикатов на растение. Недостатком этого способа является то, что об активности химического препарата судят не непосредственно по изменению состояния и скорости роста растения, а по изменению количества микроорганизмов корневой микрофлоры.

С целью быстрого и точного определения абсолютной и относительной биологической активности химических препаратов предлагается использовать суспензионные культуры клеток табака или сои. Для оценки токсичности, антимитотической и антипролиферационной активности препаратов предлагается вводить в питательную среду ауксин {а — нафтилуксусную или 2,4-дихлорфеноксиуксусную кислоты), необходимый для нормального размножения клеток.

По предлагаемому способу активность препарата определяется непосредственно по его действию:на растительные клетки. Для определения требуется 5 — 7 дней, одновременно может быть испытано от трех до восьми препаратов в пяти, шести концентрациях каждый.

Это позволяет дать сравнительную оценку активности р азличных препаратов путем на5 хождения концентраций, необходимых для получения одинакового эффекта. Расход препарата на одно испытание не превышает 0,2—

0,5 лг. Средняя квадратпчная ошибка одного определения из пяти повторностей не превы10 шает 5%.

Для осуществления предлагаемого способа в пробирки размером 16 150 лтлт вносят по

0,5 лл водных растворов испытуемых препаратов в нескольких концентрациях и по 3,5 лтл

15 суспензии клеток табака или сои, разбавленной свежей средой Мурашпге и Скуга в 10 раз

Пробирки закрывают ватными пробками и помещают в наклонный вращающийся со скоростью 60 об/вин барабан и затем культиви20 руют 5 — 7 дней при 26 в темноте. По окончании срока культивации содержимое каждой пробирки переносят на стеклянный фильтр, среду отсасывают, а ткань взвешивают. При использовании ткани табака помимо определе25 ния веса необходим подсчет количества клеток, при работе с тканью сои этого не требуется. Если требуется оценить токсичность, антимитотическую или антипролиферативную активность, то одновременно с испытываемыми

ЗО веществами в пробирки добавляется а-нафти368308

Предмет изо бретен и я

Составитель К. Гамбург

Редактор В. Фельдман Техред Т. Курилко Корректоры: Л. Чуркина и В. Жолудева

Заказ б69/1 2 Изд. М 210 Тираж 467 Подписное

ЦНИИПИ Комитета по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССР

Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4g

Типография, пр. Сапунова, 2 луксусная кислота 2 гиг/л .или 2,4 -дихлорфеноксиуксусная кислота 0,05 мг/л. Для определения антпмитотической активности ткань в процессе выращивания используется для подсчета митотического индекса стандартными цитологическими методами.

На основании полученных результатов строится график, на оси абсцисс которого откладывается логарифм концентрации препарата, а на оси ординат вес ткани (соя) или количество клетой (табак). С помощью интерполяции находят концентрацию, обеспечивающую половину максимального эффекта, которая и служит мерой биологической актив ности. Для работы необходимо сохранение стерильности суспензии. Поэтому все растворы автоклавируются или стерилизуются фильтрованием, операции по закладке опыта проводятся в стерильном боксе.

1. Способ определения биологической активности химических препаратов с использовани5 ем суспензионной культуры клеток растительного происхождения в качестве биологическг го теста, отличающийся тем, что, с целью повышения скорости и точности определения, в качестве суспензио|вной культуры клеток рас10 тительного происхождения берут культуру клеток ткани табака,или сои.

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что, с целью оценки токсичностК, антимитотической и антипролиферационной активности химичес15 ких препаратов, в суспензионную культуру клеток табака,или сои в самом начале их культивирования добавляют вещества типа ауксинов, например а-нафтилуксусную и/или

2,4-дихлорфеноксиуксусную кислоты.