Способ выделения комплекса бацитрацина
Сок1з саветскик
Социалистических
Республик
М ПАТЕНТУ
Зависимый от патента ¹
М. Кл. С 120 9 12
С 07О 11/00
Заявлено 06.1Ч.1970 (№ 1426995/3i0-15) Приоритет
Комитет по делам
УДК 615.779.9(OSS.8) Опубликовано 15.Ч.1973. Бюллетень ¹ 21
Дата опубликования описания 20.Ч11.1973 изобретений и открытии при Совете Министров
СССР
Авторы изобретения Иностранцы
Ласло Жарка, Ева Мадьяр, Иштван Хорват, Габор Амбрус, Гула Колар, Иштван Иншефи, Иштван Шандор, Ласло Гоша, Ференц Варга и Ласло Белла (Венгерская Народная Республика) Иностранное предприятие
«Хииоин джогишер еш вегьежети термекек гьяра» (Венгерская Народная Республика) 1
Заявитель
СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ КОМПЛЕКСА БАЦИТРАЦИНА
ИЗ ФИЛЪТРАТА КУЛЬТУРАЛЪНОЙ ЖИДКОСТИ
БАКТЕРИИ-ПРОДУЦЕНТА
Изобретение относится к способам выделения антибиотика бацитрацина, синтезируемого микроорганизмами Вас. subtilis и Вас. lichenformis, в особенности к способам, при которых комплекс бацитрацина выделяют путем осаждения.
Известен способ выделения комплекса оацитрацина из фильтрата культуральной жидкости бактерии-продуцента, при котором комплекс бацитрацина осаждают алкил- или арилсульфонатом или диизонафтилсульфонатом. При этом получают продукт с содержанием бацитрацина от 14 до 20%. Кроме того, для выделения бацитрацина требуется применить вспомогательное фильтрующее вещесгво.
Для повышения выхода бацитрацина по предлагаемому способу осаждение производят воднорастворимой солью конденсата формальдегиднафтилинсульфокислоты, причем, при значении рН от 2 до 9 — предпочтительно ее щелочной солью, а при значении рН от 5,5 до
9 — в присутствии солей двухвалентных металлов.
Бацитрацин, легко растворимый в воде, с конденсатами формальдегиднафталинсульфокислоты образует в кислой водной среде нерастворимый комплекс, и этот комплекс в присутствии двухвалентных солей металлов также нерастворим н водной среде. Выгоднее выделять бацитрацин из нодных растворов, чем известными средствами осаждеш1я. Для этого образуют с кондепсатами 1рормальдепзднафталинсульфокислоты трудно растворимый, но легко осаждаем ы!1 ост1док с содержанием C)i3цитрацина значительно большим, чем н известных осадках. B качестве осадителя берут смесь конденсатов формальдеп1днафталин10 сульфокислоты с различным числом знеш ен, причем, степень конденсации находится н интервале числа звеньев от 2 до 9.
Большим преимуществом изобретения яв15 ляется образование осадка без добавлен»1 двухналентного металла 13 кислой среде в интервале значений рН от 2 до 5,5. Можно также конденсат формальдеп1днафталинсульфокислоты и соль двухвалентного металла одно20 временно вводить н раствор бацитрацина. В этом случае лучше устанавливать значение рН выше 5,5, предпочтительно между 7 и 8.
Выпавший осадок отделяют фильтрованием и высушивают, Содержание бацитрацина н по25 лученном таким способом продукте почти совпадает с количеством бацитраципа, находившимся н фильтрате.
Этот продукт можно непосредственно использовать для кормления животных, 381227
Составитель М. Дранишников
Редактор О. Филиппова Техред Е. Борисова Корректор Н, Аук
Заказ 2028/14 Изд. Ке 532 Тираж 467 Подписное
ЦНИИПИ Комитета по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССР
Москва, )K-35, Раушская наб., д. 4/5
Типография, пр. Сапунова, 2
Пример 1. В 500 мл фильтрата, содержащего 232 ед./мл бацитрацина со значением рН 3,5, вводят 6 мл 33%-ного водного раствора конденсата формальдегиднафталинсульфокислоты (тамол 1U.N.O.) и 1 г сульфата цинка.
При помощи 40 /о-ного раствора едкого патра рН раствора доводят до 7,5 .Смесь, содержащую осадок, перемешивают 30 мин и фильтруют. Осадок сушат в вакуумсушильном шкафу при 45"С. Получают 5,3 г продукта, содер кащего 41,8 /о бацитрацина, что составляет
95,7 /, содер>кания бацитрацина в исход |ом фильтрате.
Пример 2. В 500 мл фильтрата, содер>кащего 321 гд/мл бацитрацина со значением рН 3,5, добавляют 6 мл 33%-ного водного раствора конденсата формальдегиднафталинсульфокислоты (кортамол iU.N.Î.) и 1 г сульфата цинка. При помощи 40 /о-ного раствора едкого натра устанавливают значение рН раствора на уровне 7,6. После 30 мин переме шивания осадок отфильтровывают и сушат в вакуумсушильном шкафу при 45 С. В результате получают 7 г продукта, содержащего 47 /о бацитрацина. Этот продукт сохраняет 100% активность исходного фильтрата.
Пример 3. В 500 мл фильтрата, содержащего 321 ед./мл бацитрацина, полученного ферментацией (рН 6), добавляют 6 мл ЗЗо/оного водного раствора конденсата формальдегиднафталинсульфокислоты (кутамол N.N.O.) и 1 г сульфата цинка. Затем при помощи 40 ного раствора едкого натра рН раствора доводят до 7,7 и после 30 мин перемешивания отфильтровывают осадок. Осадок сушат в вакуумсушилке при 45 C. Получают 7,75 г продукта, содер>кащего 41 /, бацитрацина, что сп4 ставляет 98,7о/о бацитрацина, содержащегося в исходном фильтрате.
Пример 4. В 500 мл фильтрата, содержащего 321 ед./мл бацитрацина, имеющего ферментационное происхо>кдение, добавляют
6 мл 33 /о-ного водного раствора конденсата формальдегидчафталинсульфокислоты (кутамол N.N.O.). Затем при помощи 25о/о-ного раствора серной кислоты рН доводят до 3. Вы10 павший осадок фильтруют и затем сушат в вакуумсушилке при 45 С. Получают 7,55 г продукта, содержащего 42 /о бацитрацина. В этом продукте содержится 98,7% бацитрацина исходного раствора.
15 Пример 5. В 2500 мл раствора, содержащего 157 ед./мл бацитрацина, имеющего ферментационное происхождение, добавляют
43 мл 33%-ного водного раствора конденсата формальдегиднафталинсульфокислоты (тамол
20 N.N.Î.). Затем при помощи 10/о-ной соляной кислоты рН доводят до 3,5 н отфильтровывают осадок. Получают 22,2 г продукта, содер>кащего 35,3% бацитрацина. В этом продукте содержится 100 /о бацитрацина, содержавше25 гося в исходном растворе.
Предмет изобретения
Способ выделения комплекса бацитрацина из фильтрата культуральной жидкости бакге30 рии-продуцента путем осаждения, отлича ои1ийся тем, что, с целью получения более высокого выхода бацитрацина, осаждение осуществляют солью конденсата формальдегиднафталинсульфокислоты, причем в интервале
35 рН от 2 до 9 — предпочтительно ее щелочной солью, а в интервале рН от 5,5 до 9 — в присутствии солей двухвалентных металлов,