Установка для получения и разлива клеточной суспензии из почечной ткани

 

f:.

О П И C А Н Й Е 382683

ИЗОБРЕТЕНИЯ

K АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Со)оз гооеlсниx

Соцнзпистичеснии

Респрблин

Зависимое от авт. свидетельства №

Заявлено 23.XI.1971 (№ 1715443/30-15) с присоединением заявки №

Приоритет

Опубликовано 23.Ч.1973. Бюллетень № 23

Дата опубликования описания 24.1Х.1973

Ч. Кл. С 12k 9,00, с.,, РфвФЯф 5

Комитет по аепом изобретений и атирытий при Совете Министров

УДК 578.085.23(088.8) Авторы изобретения

А. Н. Курносов, Д. Е. Сухин, В. И, Морозов, В. H. Кадетов, Д. Ф. Осидзе, В, А. Зуев и В. Н. Опарин

Всесоюзный научно-исследовательский институт ветеринарной вирусологии и микробиологии

Заяви, тель

УСТАНОВКА ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ И РАЗЛИВА КЛЕТОЧНОЙ

СУСПЕНЗИИ ИЗ ПОЧЕЧНОЙ ТКАНИ

Изобретение относится к области биологических исследований прн культивировании тканей.

Известная установка подобного назначения, содержащая камеру для дезагрегации почек, емкости для разлива суспензии и рабочих жидкостей и систему трубопроводов, не приспособлена для дезагрегации почечной ткани путем ферментативной перфузии изолированных почек и не обеспечивает разлива суспензии в виде беспрерывного цикла.

В предлагаемой установке в отличии от известн ых камера для дезагрегации имеет закрепленный на внутренн ей поверхности крышки коллектор, состоящий из соединенного с насосом патрубка с канюлями, на которые надевают артерии подготовленных для дезагрегации почек, и блок установленных горизонтально на валу плоских ножей с вертикально расположенными противорежущими пластинами, имеющими радиальные пазы для п рохождения ножей при измельчении почки.

При этом камера для дезагрегации расположена над емкостью для разлива суспензии и соединяется с последней через фильтр.

На фпг. 1 схематически изображена предлагаемая установка, на фиг. 2 — камера для дезагрегации и емкость для разлива суспензии, вид сбоку (в разрезе); на фпг. 3 разрез по А — А на фиг. 2.

Предлагаемая установка содержит аппарат, состоящий пз камеры 1 для дезагрегации почек, соединенной трубопроводами 2, 8, 4 через перистальтический насос 5 с емкостью

5 6 для ферментативного раствора и емкостью

7 с питательной средой и разливочной емкости 8, соединенной трубопроводами 9 и 10 с емкостью 6 и дозатором 11.

На всех трубопроводах смонтированы вен10 тили. Емкость для ферментативного раствора помещена в водяную ванну 12, температура которой автоматически поддерживается па заданном уровне. Разлив клеточной суспензип производится из разливочной емкости в

15 культуральные сосуды с помощью поршневого дозатора промышленного выпуска. Камера и емкости снабжены воздушными фильтрами 13, препятствующими проникновению мпкрофлоры из окружающей среды. Для слп20 ва отмывочной жидкости предусмотрен отдельный трубопровод с запорным вентнлет 14.

Корпус камеры 1 выполнен пз прозрачного термостойкого стекла, позволяющего осу25 ществлять визуальный контроль за процессами отмывки и дезагрегации почечной ткани

?KlIBoTIIbIx. Она герметп-! Ilo закрывается крышкой 15 с резиновой прокладкой 16 посредством фланца 17. Б крышке смонтирован

30 вентиль 18 с воздушным фильтром 19, в цен38268,3 то аль!!ОЙ ч асти крышки камеры сделано Отверстие, которое герметично закрывается откиднol. крышкой 20, поджимаемой винтовым

i стро !ством 21. 1С1а Pèóòpcíllåé 1:овеp;;.",oñòè этой «р ..1щ.и смонтировано устройство для фсрмситативной пер! ".узин почcê, сос,оящее нз -.рубчатого коллектора 22 с канюля. и 23 для подсоединения артерий почек и вывсдснного нар,жу патрубка 24, служа!1.,его для сосди!!ения ко !лектора с насосом, ос .ществля1Ор або 1их iкидкостси. Камера гcpметично крепится на крышке 25 разливочной емкости 26 и сообщается с ней посредство;l выполненного в днище 27 отверстия 28, плотно закрыьасмого заслонкой 29, соединенной со штоком 30, проходящим !ерез камеру и имеющим маховичок 31. Б крышке шток уплотняется фторопластовым сальником. Внутри камеры на валу установлен блок режущнх элементов и лопастная мешалка 32, с помощью которой производи тся механическая дезагрегация кусков перфузионной почечной ткани в питательной среде, Блок содержит один плоский нож 33 для отсечения почечных артерий и три пары ножей 34 для рассечения перфузионных почек, Парные ножн выполнены плоскими и расположены на определен!ном расстоянии друг от друга, вполне обеспечивающим рассечение почек независимо от их величины. Для осуществления рассечения почек в камере на стойках 35 установлены вертикальные опорные пластины 36 с радиальн!Ыми пазами 37 для прохода ножей.

Вал 38 камеры соединен с валом 39 емкости легко разъемной муфтой 40 и крепится в верхней части с помощью кронштейна 41, установленного на крышке 15.

Разливочная емкость 2б выполнена цилиндрической формы с конусообразным днищем, Она служит для разбавления концен!Трированной клеточной суспензии и ее розлива в культуральные сосуды. На валу емкости смонтирована лопастная мешалка 42 для перемешивания клеточной суспензии при ее розливе, чтобы концентрация разливаемой суспензии была одинаковой. Вверху под днищем камеры установлен! фильтр 43 для фильтрации концентрированной клеточной суспензии сливасмой в емкость после дезагрегации почек в питательной среде. В днище емкости вал мешалки герметизируется торцовым уплотнением подшипника скольжения и на выходе имеет шкив 44, с помощью которого он соединяется с выходным валом редуктора 45 электродвигателя 4б. Кроме того, в днище камеры смонтирован патрубок 47 с отводом

48 для отбора проб и штуцер 49 для подсоединения мерной трубки 50, по уровню которой определяется объем, занимаемый разбавленной клеточной суспен зии.

Для получения клеточной суспензии на предлагаемой установке почки берут от животных-доноров с сохранением капсул и артерий.

20 гз

55 бО ь5

Поворотом вала 38 ре>ку1ц1.е элемен!ты устанавливаются в исходное положение, не препятствующее размещенщо почек в камере 1. В асептических услсв,1ях при открытой крышке 20 почки посредством Нх артерий подсоединяются к кан1ол11м 23, после чего крышка герметично закры" астся ВинтОВым устройством 21 с одновременным опусканием почек внутрь камеры. Поворотом маховичка

31 открывается отверстие 28 в днище камеры.

Затем открываются вентили 14 и 18, включается насос 5 и производится отмь|вание ткани почек от крови. Для этого подогретый до 35 — 37 С ферментативный раствор подается через канюли 23 в сосудистую сеть кахкдой почки. Вытесненная из них кровь через вен ы и мочеточники стекает на дно камеры, а из нее через отверстие 28 в емкость 2б, из которой по патрубку 47 она удаляется в отдельную емкость.

В зависимости от вида и размеров почек на промывку их от крови расходуется 150—

250 мл ферментативного раствора.

Когда отмывочная жидкость будет прозрачной, включается система рециркуляции ферментативного раствора. С этого момента начинается процесс дезагрегации почечной ткани путем ферметативной перфузии. При этом ферментативный раствор в виде пульсирующего потока из емкости б подается насосом

5 через коллектор с кан!юлями в сосуды почек, затем он через камеру 1, разливочную емкость 8 по трубопроводу 9 поступает обратно в емкость б. За счет циркуляции раствора по замкнутому контуру достигается значительное снижение расхода рабочей жидкости. Фермен!Тативная перфузия почек продолжается в течение 10 — 30 мин и заканчивается, когда под капсулами почек образуется разветвленная сеть «трещинок», свидетельствующих о достаточном разрыхлении парен!химы почек за счет разрушения межклеточных связей. По окончании перфузии почек пропусканием небольшого количества питательной среды они отмываются от ферментативного раствора.

3 атем проводится процесс получения концентрированной клеточной суспензии. Для чего вентиль 14 и отверстие в днище камеры закрываются, а камера заполняется питательн оЙ средой примерно на 1/3 ее объема.

При выключенном насосе ножи приводятся во вращение. Сначала почки рассекаются парными ножами 34, а затем ножом ЗЗ отсекаются их артерии. При рассечении куски почек подают в питательную среду, в которой они под действием перемешивания лопастной мешалкой 32 дезагрегируются на отдельные клетки . Эта операция длится !в

2 мин.

По окончании дезагрегации почек открывается отверстие 28 камеры, и кон центрированная клеточная суспензия через него и фильтр

42 сливается в разливочн ую емкость. Проходя через фильтр, она очищается от остатков

38268,3 капсул и лоханок. Через пробоотборник берется проба, и по результатам подсчета клеток суспензия разбавляется необходимым количеством питательной среды, подаваемой насосом через камеру для дезагрегации почечной ткaíè.

Окончание процесса разбавления определяется по уровню мерной трубки 50. После этого включается мешалка 42 и через дозатор 11 производится разлив клеточной суспензии в культуральные сосуды.

Таким образом, при эксплуатации предлагаемой установки все технологические операции от загрузки почек до разлива готовой суспензии выполняются в виде непрерывного цикла в условиях, изолированных от окружающей среды, в результате чего во много раз повышается степень стерильности процесса получения клеточной суспензии. Благодаря механизации большинства операций резко сокращаются затраты ручного труда, а также во много раз (по сравнению с известными) облегчается обслуживание предлагаемой установки.

Предмет изобретения

1. Установка для получения и разлива клеточной суспензии из почечной ткани, содер5 жащая камеру для дезагрегации почек, емкость для разлива суспензии и рабочих жидкостей и систему трубопроводов, отличаюи аяся тем, что, с целью осуществления дезагрегации почечной ткани путем ферментатпв10 ной перфузии изолированных почек и обеспечения разлива суспен зии в виде беспрерывного цикла, камера для дезагрегации имеет закрепленный на внутренней поверхности крышки коллектор,,состоящий из соединев15 ного с насосом патрубка с канюлями, на ко торые надевают артерии подготовленных для дезагрегации почек, и блок установленных горизон|тально на валу плоских ножей с вертикально расположенными противорежущнми

20 пластинами, имеющими радиальные пазы для прохождения ножей прп измельчении почки.

2. Установка по п. 1, отлпчающаяся тем, что камера для дезагрегации расположена над емкостью для разлива суспензин и соеди25 няется с последней через фильтр.

Реда ктор А. Л иб кина

Составитель В. Фогельман

Texpeä Л. Богданова

Корректоры: Г. Запорожец и В. Федулова

Заказ 2448/16 Изд. 5о 668 Тираж 467 Подписное

UI-!ИИПИ Комитета по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССР

Москва, Ж-35, Ра jlllcKB5t иаб., д. 4,5

Типография, пр. Сапунова, 2