Штамм arthrobacter simplex инми-6 продуцент ацетилхолинэстеразы

 

ОП ИСАНИ Е

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союз Советских

Социалистммеских

Реслублик

Зависимое от авт. свидетельства №вЂ”

Заявлено 04.V111.1971 (№ 1689065/31-16) с присоединением заявки №вЂ”

Приоритет—

Опубликовано 28 1/111.1973. Бюллетень ¹ 35

Дата опубликования описания 20.XII.1973

М. Кл. С 120 13/00

Государствениый комитет

Совета Мииистроа СССР

Il0 делам изооретений и откРытий, ДК 5 (.158.47(088.8) Лвторы изобретения

А. А. Имшенецкнй, Л. С. Попова и H. Ф. Кириллова

Институт микробиологии АН СССР

Заявитель

ШТАММ Arthrobacter simplex ИНМИ-6

ПРОДУЦЕНТ АЦЕТИЛХОЛИНЭСТЕРАЗЫ

Изобретение относится к оолaсти микробиологии и касается штамма АгйгоЬа "ter

simplex ИН.ЧИ-6.

Известен штамм Pseudom011as Пцоreseeïs

11150, продуцирующий ацетилхолинэстер азу, 5 активность, которого после 5 суток культнвирования на триптическом бульоне ссставляет

0,8 ед.

Однако извесгный штамм спнтезир .ет ацетилхолинэстеразу в небольших количест- 1о в ах.

Цель изобретения — получение ш-.амма с более высокой ацетилхолинэстеразной активностью.

Поставленная цель достигается тем, что предложен штаьмм Arthrohacter simpiex

ИНМИ-6, продуцирующий ацетилхоли,.эстеразу, у которого бесспоровые неподвижные палочки размером 2,0 — 4,0X0,5 — О,бй со старением укорачиваюгся до размеров кокков

0,5 — 0,8X0,5 — О,бй. Штамм грам вариабилен, кокки в ос новном грамположительные гетеротроф, факультативный аэроб, оп.,имальная температура роста 28 — 30 С. Хорошо растет на естественных средах: мясо-пептонных, картофельных, сусле, на средах с пептоном, отдельными аминокислотами, мочевиной. КолоHiHH белого цвета и ногда с кремовым оттенком, выпуклые, матовые, глад(кие или слегка складчатые, бельшей частью с ровным краем.

На мясо-чептонном бульоне образует обильную муть и слизистый осадок на дне. На emlтегических средах с глюкозой и фосфорнокислым двузамещенным аммонием растет хорошо; колонии белого цвета, мелкие, блестящие, гладкие, с розным краем. /Молоко подщелачивает, пептонизирует без коагуляцпп на 4-ые сутки. %елагину не разжижает, но образует плотную пленку на IIOBepxHocTH. Использует глюкозу, галактозу, сахарозу, дульцит,,инозит, сорбит, уксусную, яблочную, фумаровую, янтарчую и лимонную кислоты без выделения

СО2, С выделением углекислоты использует маннозу, фруктозу, арабинозу, раффинозу и маннит. Не ассимилирует .ксилозу, крахмал и целлюлозу. Хорошо использует аммонпйный минеральный азот, аминокислоты, в том числе серусодержащие: цистин и цистеин, мочевину и пелтон, хуже использует нитраты; ооразует ацетилхолинэстер азу и уреазу, активность ацетилхолинэстеразы после двух с;ток культивирования на синтетической среде с глю озой составляет 60 ед.

Пример. Предложенный штамм выращивают на среде следующего ссстава (в %):

К2НРО 0 1 КН Р04 0 01 (NH4) НРО

0,2; NgSO4 — 0,03; CaCI> — 0,01; NaCI — 0,01;

NnSO4 и FeSO4 — следы, дрожжевой экстракт

0,01, глюкоза — 1,0; в качестве и нду ктора добавляют ацетил iOJIHH — 0,01 /0, pH — 7,0.

395435

П р е д м е т,из о б р е т ен и я

Составитель С. Щенева

Техред Е. Борисова

Редактор Д. Пинчук

Корректоры Е. Михеева и Е. Миронова

Заказ 693/2275 Изд, ¹ 944 Тираж 467 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

Москва, %-35, Раушская наб., д. 4/5

Тип. Харьк. фил. пред, «Патент»

Ферментацию ведут 48 час в аэрооных условиях на ка|чалке при 180 об/иин при 30 C.

И нокуляцию проводят водной суспензией клеток одно-двухсуточной .культуры, выращенной на скошенном мясо-пептонном агаре. Посе вной,материал вносят из расчета 50 иг на

50 ял питательной среды. При таком режпи е культивирс ваиия получают до 350 — 400 иг оиомассы со 100 ил среды. Для извлечения ацетилхоли|нэстеразы огцентрифугированную .и промытую 2 раза 1/15 м фосфатным буфером рН вЂ” 7,2, биомассу разрушают на ультразвуковом дезвнтеграторе «MSE» прои 9 .игц

7 мин. Раз|рушенную биомассу отделяют центрифугиро ванием при 30000 об/гвин З,иин.

1 лг бел|ка полученной надосадоч ной жидкости разлагает 0,7жМ ацетилхолина за

20 иин или 2,1,ЦЧ за 1 час.

Штамм Arthr obacter simplex ИНМИ-6 продуцент ацетилхолинэстеразы, отличающийся тем, что бесспоровые 1непо|движные палочки размером 2,0 — 4,0X0,5 — О,бр, со старением у корачиваются до кокков 0,5 — 0,8Х0,5 — 0,6Р, грамвариа билен, кокки в основном грамположительные гете ротроф, фа культатив ный аэроо, оптималыная температура роста 28—

30 С; хорошо растет на естественных средах: мясо-пептонных, картофельных, ".óñëå; на средах с пептоном, отдельными аминокислотам:I, мочевиной; .колснии белсго цвета, иногда с кремовым оттенком, выпуклые, матовые, гладк»e или слегка складчатые, большей частью с ровным краем; на мясо-пептснном бульоне образует обильную муть и слизистый

oãадок на дне; на синтетических средах с глюкозой и фосфорнокислым двузамещенным

1О аммонием растет хорошо; колонии белого цвета, мелкие, блестящие, гладкие с ро вным краем; молоко подщелачи вает, IIeIITOIHизирует без коатуляции Ia 4-ые сутки; желатину не разжижает, но образует плотную пленку на поверх ности. Использует глюкозу, галактозу, саха розу, дульцит, инозит, сорбит, уксусную, яблочную, фумаровую, янтарную и лимонную кислоты .без выделения СО2, с выделением угле!кислоты IIспользует маинозу, фруктозу, араби нозу, раффинозу и маннит; не ассимилирует ксилозу, крахмал, целлюлоз1у, хорошо использует аммонийный минеральный азот, аминокислоты, в том числе серусодержащие: цистин и цистеин, мочевину, пептон, хуже Нс25 пользует нитраты; образует ацетилхолwнэстeразу и уреазу, активность ацетилхолинэстеразы после двух суток культив иро вания на синтетической среде с глю козой соста вляет 60 ед.