Способ получения фермента на носит

 

ОП ИСАНИЕ (И)414301

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союз Советских

Социалистических

Респубттик (61) Зависимое от авт. свидетельства— (22) Заявлено 30.09.71 (21) 1702973/28-13 с присоединением заявки №вЂ” (32) Приоритет—

Опубликовано 05.02.74. Бюллетень ¹ 5

Дата опубликования описания 29Л.75. (51) М. Кл. С 12d 13/10

С 07О 7/02

Гасударственный комитет

Совета Министров СССР

II0 делам изобретений и открытий (53) УДК 576.15.08(088.8) (72) Авторы изобретения

A. И. Кестнер, К. А. Кивисилла, М. О. Мандель и Э. Х. Сиймер (71) Заявитель

Таллинский политехнический институт (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ФЕРМЕНТА НА НОСИТ

Изобретение относится к производству ферментных препаратов, а именно к способам получения фермента на носителе.

Известный опособ получения фермента на носителе, предуаматривающий приготовление

pBcTIBop0B фермента с мо номером и катализатора, смешивание этих распворов с последующей полимеризацией полученной смеси, не обеапечивает получения фермента на носителе в виде гранул.

Для:получения фермента на носителе в виде гранул в предлагаемом способе смесь перед полимеризацией подвергают вибрации, а полимеризацию осуществляют в не смешивающемся с водой растворителе, например вазелиновом масле, при освещении.

При этом полимеризацию осуществляют в непрерывном потоке, например, в колонке, внутренняя стенка которой обработана кремнеорганичеаким соединением.

Вибрацию омеси осуществляют в процессе подачи ее на полимеризацию через вибрирующий капилляр.

Предлагаемый способ осуществляют следующим образом.

Готовят расвворы фермента с мономером и катализатора и затем полученные растворы смеши вают. Полученную смесь подвергают последующей полимеризации в не смешивающемся с водой растворителе, например вазелиновом масле, при освещении.

Для предотвращения,преждевременной полимеризации исходной смеси растворов последние готовят раздельно и смешивают непосредственно перед подачей на полимеризацию.

При этом полимеризацию осуществляют в непрерывном потоке, например, в стеклянной колонке,,внутренняя стенка которой обрабо10 тана кремнеорганичеоким соединением. Обработка таким соединением предотвращает прилипание материала к стенькам колонки, а освещение обеспечивает необходимую скорость полимеризации.

15 Для получения однородных микрогранул требуемого размера реакционную смесь подвергают вибрации, которую осущесввляют в процессе подачи ее на полимеризацию через вибрирующий капилляр.

20 В качестве исходных ферментов применяют гидролазы, оксидоредуктазы или трансферазы. Носитель получают из растворимых в,воде электронейтральных, иатионных или анионных мономеров, содержащих достаточное количе25 ство бифункцпонального смешивающего агента.

П р им е р. Для связывания пн вертазы в полиакриламидный гель .в установке непрерывного действия готовят растворы: мономеров и

30 фермента путем смешивания 5 объемов раст414301

Составитель А. Бражникова

Техред Т. Ускова 1(орректор И. Позняковская

Редактор Л. Гончарова

Заказ 809/7 Изд. № 457 Тираж 456 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий. Москва, Я(-35, Раушская наб., д. 4/5

Пол|играфическое объединение «Полиграфист» Управления издательств, полиграфии и книжной торговли Мосгорисполкома. Москва, ул. Макаренко, 5/16. вора инвертазы с а ктивностью 100 международных единиц iB 1 мл и 5 объемов смешанного раствора 18,6% акриламида и 1,4% N-метилен- бис-акриламида; и катализаторов — из

0,5 ч. надсернокислого аммония, 0,5 ч. диметила минопропионитрила, 0,02 ч. рибофлавина в 10 ч. раствора.

Все растворы готовят в 0,05 М ацетатном буфере, Приготовленные растворы подают с одинако вой скоростью в смеситель, а полученную реакционную омесь через вибрирующий капилля|р iB стеклянную, колонку, внутренняя стенка которой обработана крем неорганическим соеди нением.

В ту же колояыу вводят вазелиновое масло со скоростью, превышающей в 10 раз скорость ввода реакционной смеси.

Образующаяся в верхней части колонки эмульсия стекает через интенсивно освещаемую колонку, проходя освещенную зону в течение 3 — 5 мин.

Из нижней части коловки посту пает суспензия пол ученньгх ми крогранул фермента в масле, которые затем отделяют от масла центрифугированием и промывают петролейным эфиром или раствором поверхностно-активного вещества.

Активность полученного фермента определяют в потоке раствора сахарозы при 30 С, при этосом она равна 30 ед/мл, что соответствует выходу 78о/о от теоретического.

5 Микроскопическая проверка полученных гранул подтверждает их сферичность.

Предмет изобретения

1. Способ получения фермента на носителе, 10 предусматривающий приготовление растворов фермента с мономером и катализатора, смешивание этих растворов с;последующей полимерпзацией полученной смеси, отличающийся тем, что, с целью получения фермента на носи15 теле в виде гранул, смесь перед полимеризацией подвергают вибрации, а полимеризацию осуществляют в не омешивающемся с водой расвворителе, на пример вазелиновом масле, при освещении.

20 2. Способ.по п. 1, отличающийся тем, что полимеризацию осуществляют в непрерывном потоке, например, в колонке, внутренняя стенка которой обработана кремнеорганичеоким соединением.

25 3. Способ по пп. 1 — 2, отличающийся тем, что вибрацию смеси осуществляют в процессе подачи ее на полимеризацию через вибрирующий капилляр.