Способ получения/-лизина

 

» 4I5890

Союз Советекии

Социапиотииеооа

Ра<пубйиа

К ее А и И Н Т У (51) М.Кл. С 12d 1306

Государственный комитет

Совета Министров СССР по делам изооретений и открытий (53) УДК 576.809.32+

+547,466 (088.8) (72) Авторы изобретения

Иностранцы

Катсунобу Танака, Казуо Охсима, Йо Токоро и Матсуйоси Окии (Япония) Иностранная фирма

«Киова Хакко Когио Ко. Лтд.» (Япония) (7!) Заявитель

Точечные, гладкие, цельные.

Умеренный рост, нитевидная форма, блестящая, красноватооранжевая, маслянистая.

Слегка мутная, на noLñð«íoñòè напоминающая мембрану. компактный осадок.

«ар актсристики

25 — 37 С, наилучший, рост ппн 37 С. тельном arape мутные, блестящ .с

Косой агар

Питательный бул| он

Физиологические

Опитамальная температура

Оптимальное значе1ь ние рН

Потребление кислорода

Лакмусовое молоко

20 желатина

Сероводород

Индол

Крахмал

Нитрат ог

Катал:I a

Уреа;a

Ферментацпя-. уг те водор ) QB

Зо

О П И С АН И Е

ИЗОБРЕТЕН ИЯ (61) Зависимый от патента— (22) Заявлено 18.10.68 (2!) 127?382/28-13 (32) Приоритет 20.12.67 (31) 81194/67 (33) Япония

Опубликовано 15.02.74. Бюллетень ¹ 6

Дата опубликования описания 18.09.74 (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ 1-ЛИЗИHA

Изобретение относится к микробиологической промышленности и касается способа получения l-лизина.

Известен способ получения 1-лизина культивированием штаммов Brevibacterium u

Arthrobacter в аэробных условиях в водной питательной среде, содержащей источники углерода, например глюкозу, источники азота и неорганические соединения.

Для получения высокого лизина на дешевом сырье по предлагаемому способу используют новые мутантные штаммы Brevibacteriшп ketoglutamicum 2473-NP-107 АТСС 21297 и Arthrobacter paraffineus 2411-NP-82 АТСС

21298, полученные из штаммов Brevibacterium

ketoglutamicum АТСС 15588 и Arthrobacter

paraffineus АТСС 15591 обработкой N-метил-N -нитро-N-нитрозогуанидином. Эти штаммы способны синтезировать l-лизин с высоким выходом, используют в качестве основного источника углерода углеводороды. Оба штамм а деф ицитн ы по метионину.

Ниже приводится биологическая характеристика штаммов. Brevibacterium ketoglutamicum 2473-NP-107 АТСС 21297.

Морфологические свойства. Палочки размер клеток 0,7 — 0,9Х0,8 — 3,0 .як, длинные клетки наблюдаются редко, споры не образуются, неподвижны.

Культуральные свойства. Колонии нa пита6,0 — 8,0.

Аэробная, случайно анаэробная.

Не изменяется или щелочная реакция.

Не ожпжается.

Не образуется.

Нс образуется.

Не гидролизуется

Восстанавливается до ннтрита.

Положительная.

П еложительн а я.

Штамм растет хорошо, потребляя н-парафин в качестве единственного

415890 источника углерода и вырабатывает кетоглутаровую кислоту, глютаминовую кислоту и аланин.

Усвояемость угле- Из глюкозы, фруктозы и водов сукрозы,вырабатывается ничтожное количество кислот, мальтоза не утилизируется.

Требования к питательной среде — нуждается в метионине «Arthrobacter paraffineus

2411-NP-82 АТСС 21298».

Морфологические характеристики. Палочки обычно 0,8 — 1,2 Q 1,3 лж. Клетки различаются по размеру и форме. Формы неоднородныс: кривые, вздутые, или разветвленные.

1-1аблюдаются также удлиненные клетки и коккоидные клетки. Неподвижны. Реакция

Грамма переменная. Удлиненные клетки проявляются .как грам-отрицательные, коккоидные клетки — грамм-положительные.

Характеристика культуры

Колония на пита-Обильный рост, круглая тельном агаре гладкая, целиком светлая, желтовато-коричневая, непрозрачная, блестящая.

Косой агар Обильный рост, нитевидные формы, возвышенная или плоская, блестящая, светло-желтая до серовато-коричневого, маслянистая.

Питательный буль- Слегка мутная, легкий он хлопьевидный осадок

Физиологические характеристики

Оптимальная тем- 20 — 30 С, слабый рост при пература 37 С.

Оптимальное значение рН 6,0 — 8,0.

Потребление кисло- Аэробная, случайно анарода эробная.

Лакмусовое молоко Не изменяется или щелочная.

Желатина Не ожижается

Сероводород Не образуется.

Индол Не образуется.

Крахмал Не гидролизуется.

Нитрат Не восстанавливается до нитрита.

Каталаза Положительная.

Уреаза Положительная.

В качестве основного источника углерода используют углеводороды, в том числе н-парафины Cio — С;О, ароматические углеводороды: бензол, ксилол, толуол; газообразные углеводороды: метан, этан, пропан, бутан; нефтяные фракции: керосин, легкие масла; сырую нефть.

В питательную среду могут в водиться и другие источники углерода — сахара, органические кислоты.

В качестве источника азота используют обычно применяемые для этой цели аммонийные соли, аммиак, мочевину, кукурузный, 20

Предмет изобретения

1. Способ получения t-лизина культивированием штаммов Brevibacterium u Arthrobacter в аэробных условиях на водной питательной среде, содержащей источники углерода, азота и неорганичеакие соединения, отличаюи1ийся тем, что, с целью получения высокого лизина на дешевом сырье, используют штаммы Brevibacterium ketoglutamicum

60 2473-NP-107 АТСС 21297 и Arthrobacter paraffineus 2411-NP-82 АТСС 21298, полученные из штаммов Brevibacterium ketoglutamicum

АТСС 15588 и Arthrobacter paraffineus АТСС

15591 обработкой N-метил-N -HHTpo-N-нитро„"Б зогуанидином.

4 дрожжевой или мясной экстракт, рыбную муку и т.п.

Неорганические соединения, входящие в питательную среду, включают сульфат маг5 ния, фосфаты натрия и калия, сульфат двухвалентного железа, хлориды натрия и кальция, сульфаты цинка, марганца и др.

Процесс ферментации проводят- в аэробных условиях при встряхивании или перемешиваto нии, при 20 — 45 С и рН 6,0 — 8,0 рН среды в ходе ферментации регулируется подачей аммиака или гидроокиси натрия.

Выделение лизина из культуральной жидкости проводят любым известным способом.

Пример 1. Штамм Brevibacterium ketoglutamicum Ke 2473-NP-107 21297 культивируют иа стерильной питательной среде следующего состава, %. н-парафины С г — CI7 5

КН Р04 0,2

ИагНРО 0,2

Мд304 7Н О 0,1

FeSO4 7Н20 0,001

MnSO4 4Н20 0,001 рб ZnSO4 7Н20 0,001

ХН4ХОз 1

NZ — амин (гидролизат казеина) 0,5 рН 70

В питательную среду добавляют 2 стери30 лизованно го СаСОЗ.

Процесс ведут при 28 С и аэробном встряхивании в течение 4 дней. рН поддерживают на нейтральном уровне путем добавления аммиака. В питательной среде накапливается з5 3,2 лг/л л лизина.

Выделение 1-лизина проводят с помощью ионообменной смолы Diaion ЬКФ1 в Н-форме. Элюирование осуществляют аммиачной водой.

40 Пр имер 2. Процесс проводят как в примере 1, только с культурой Arthrobacter paraffineus Мэ 2411-NP-82 АТСС 21298. В питательную среду вместо NZ-амина и МН4NO> вводят 0,5 дрожжевого экстракта и 1 /О

45 МН4С1.

Через 96 час выращивания в культуральной жидкости накапливается 3,4 мгlл л лизина.

415890

Составитель Г. Голева

Техред Т. Миронова

Редактор В. Блохина

Корректор В. Брыкснна

Заказ 3070

Изд. М 1288 Тираж 456

ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

Москва, Ж-35, Раугпская наб., д. 4/5

11одписиое

Загорская типография

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что в качестве источника углерода используют углеводороды, например и-парафины Сто — Сзо, ароматические углеводороды, нефть.

xòлеводоролы газообразные нефтяные фракции, сырую