Способ количественного определения гексозаминов

 

пц 493710 ОПИСАНЙЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

Союз Советских

Социалистических.Реслублик

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 16.05.73 (21) 1926742/23-4 с присоединением заявки № (23) Приоритет

Опубликовано 30.11.75. Бюллетень № 44

Дата опубликования описания 18.02.76 (51) М Кч G 01n 21/24

Государственный комитет

Совета аеинистров СССР ло делам изобретений и открытий (53) УДК 543 43(088 8) (72) Авторы изобретения

Л. И. Линевич, А. В. Болобова и Б. Н. Степаненко

Ордена Ленина институт биохимии им. А. H. Баха (71) Заявитель (54) СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ

ГЕКСОЗАМ И НОВ

Изобретение относится к области исследования и анализа полупродуктов, в частности к количественному определению гексозаминов.

Известен способ определения гексозаминов в биологическом материале, заключающийся в выделении гексозаминов на колонке с полистироловым сульфокатионитом, элюировании определяемого вещества водой, взаимодействии его с ацетилацетатом при 89 — 92 С в течение 45 мин в щелочной среде с последующим взаимодействием образовавшихся при этом хромогенов с и-диметиламинобензальдегидом в кислой среде в присутствии этилового спирта в течение 2 час и измерением оптической плотности полученных продуктов при 530 нм. Чувствительность этого способа (5 — 14) 10 5 моль/л.

Недостатком известного способа является невысокая чувствительность его и длительность (12,5 час).

Предложено в качестве катионообменной смолы использовать карбоксильный полиакриловый катионит и оптическую плотность измерять при 222,5 нм после обработки элюированных фосфорной кислотой гексозаминов с периодатом в щелочной среде.

Предлагаемый способ заключается в том, что гексозамины отделяют с помощью карбоксильного полиакрилового катионита, элюируют гексозамины 1 н. фосфорной кислотой, окисляют 0,0001 М раствором периодата калия в ацетатном буферном растворе с рН 6,3 при температуре 18 21 С с последующим определением измерением оптической плотности полученной смеси при 222,5 нм.

Пример. Количественное определение гексозаминов в растворах, содержащих глюкозамин, нейтральные и кислые сахара (глюкоза и галактуроновая кислота), и оксиаминокислоты (серии и треонин).

I0 2 мл раствора смеси наносят на колонку (7 35 мм) с карбоксильным полиакриловым катионитом амберлит СС-50 Шар колонку промывают тремя порциями воды по 5 мл.

Гексозамин элюируют с колонки 1 н. фосфор15 ной кислотой и доводят объем элюата до

10 мл.

К 2 мл элюата прибавляют 2 н. едкого калия до рН 6,3 и доводят объем до 3 мл. К элюату добавляют равный объем 0,0001 М

20 раствора КУ04 в ацетатном буфере с рН 6,3.

Смесь оставляют на 1 час в темноте при комнатной температуре.

Оптическую плотность реакционной смеси измеряют относительно ацетатного буфера

25 на СФ-16.

Количество гексозамина определяют по калибровочному графику, выражающему зависимость оптической плотности от содержания гексозамина в пробе (см. чертеж). Гексоза30 мины определяют в концентрациях (2 — 40) 10 моль/л.

493710

Определено, мкг/мл

Введено в пробу, мкг/мл предлагаемым способом известным способом

Средняя относительная ошибка способа 6,/.

То же 4;/.

Примечание.

16 ЯФ 72 40 48 56 64

/тг//ы

Составитель В. Чехлатов

Техред А. Камышникова

Редактор В. Лысенко

Корректор Л. Денискина

Заказ 124/17 Изд. № 2000 Тираж 902 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Типография, пр. Сапунова, 2

32,0

28,8

25,6

22,6

20,4

19,2

16,8

12,8

11,3

9,6

08 06

ОФ oz

32,0

30,0

25,4

24,0

20,0

21,0

14,0

13,6

11,0

11,0

8,4

32,0

28,0

24,5

23,0

20,4

19,5

15,6

13,0

10,8

10,5

8,6

Результаты, полученные в серии опытов известным и предлагаемым способами, сведены в таблицу.

Предмет изобретения

Способ количественного определения гексозаминов в биологических материалах, включающий выделение гексозаминов при помощи катионообменной смолы, злюирование их и

10 измерение оптической плотности реакционной смеси, отличающийся тем, что, с целью повышения чувствительности и ускорения способа, в качестве катионообменной смолы используют карбоксильный полиакриловый ка15 тионит, и оптическую плотность измеряют при

322,5 нм после обработки элюированных фосфорной кислотой гексозаминов периодатом в щелочной среде.