Осадитель для определения активности фермента рибонуклеазы

 

(ii) 493731

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ (ЯТ(1 сggQ+g (АМИДЕ е Елтв(fgУ

Союз Советских

Социалистических

Республик (61) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 02.11.73 (21) 1970737/28-13 с присоединением заявки № (23) Приоритет

Опубликовано 30.11.75. Бюллетень № 44

Дата опубликования описания 20.02.76 (51) М. Кл. G Oln 33/16

Государственный комитат

Совета Министров СССР по делам изобретений и открмтнй (53) УДК 612.015.1 (088.8) (72) Авторы изобретения

А, Д. Скридоиенко и Г. А. Горчакова

Одесский научно-исследовательский институт курортологии (71) Заявитель (54) ОСАДИТЕЛЬ ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ

ФЕРМЕНТА РИБОНУКЛЕАЗЫ

Изобретение относится к биологии и медицине и предназначено для определения активности рибонуклеазы в неочищенных тканевых экстрактах, гомогенатах, культуральных жидкостях микроорганизмов, а также в сыворотке крови.

Известен осадитель для определения активности фермента рибонуклеазы в биологических объектах, содержащий 0,01 М раствор хлористого магния в 50%-ном эталоне.

Однако известный осадитель не обеспечивает необходимой точности воспроизведения результатов анализа определения активности рибонуклеазы.

С целью повышения точности определения активности рибонуклеазы в состав магнийэтанолового осадителя включают лантан ацетат и ацетатный буфер рН 5,0 — 5,4 при следующем соотношении компонентов, вес. %:

Лантан ацетат 0,07 — 0,2

Хлористый магний 0,4 — 1,0

Этанол 75,0 — 80,0

0,1 М ацетатный буфер рН 50 — 54 Остальное

Пример. 1 мл стандартной инкубационной смеси, состоящей из 0,05 М трис-ацетатного или другого буфера рН 5,0 — 9,0, 0,5 мг дрожжевой РНК и 0,02 — 0,2 мл источника фермента (экстракт, гомогенат и др.), перемешивают и инкубируют при 37 С в течение

15 — 60 мин.

Контрольная проба содержит те же компоненты, что и опытная, и выдерживается на

5 холоде при 0 С.

После инкубации к пробам добавляют по

2 мл холодного осаждающего реагента. Смеси перемешивают, выдерживают на холоде в течение 5 — 10 мин и центрифугируют при

)О 2000 об/мин в течение 10 мин. Надосадочную жидкость спектрофотометрируют,при 260 ммк против контроля.

Расчет активности фермента производят общепринятым способом.

Предмет изобретения

Осадитель для определения активности фермента рибонуклеазы, содержащий хлористый магний и эталон, отличающийся тем, 20 что, с целью повышения точности определения активности фермента, он дополнительно содержит лантан ацетат и ацетатный буфер при следующем, соотношении компонентов, вес. %:

25 Лантан ацетат 0,07 — 0,2

Хлористый магний 0,4 в 1,0

Этанол 75,0 — 80,0

0,1 М ацетатный буфер рН 5,0 — 5,4 Остальное