Спосод получения диагностикума для серологических реакций

 

О Il И С А Н И Е < 1544431

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Сова Советских

Социалистических

Республик

-7 (61) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 21.07.75 (21) 2158239/13 с присоединением заявки Ме (51) М. Кл А 61К 39/00

Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

Опубликовано 30.01.77. Бюллетень М 4

Дата опубликования описания 17.02.77 (53) УДК 615.373.34 (088.8) (72) Авторы изобретения

В. Н. Милютин, А. H. Наркевич, С. ф. Алимова, С. М. Рассудов, В. В. Дервоед и Ю. А. Жданов

Ростовский-на-Дону государственный научно-исследовательский противочумный институт и Ростовский государственный университет (71) Заявители (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ДИАГНОСТИКУМА

ДЛЯ СЕРОЛОГИЧЕСКИХ РЕАКЦИЙ

ГосУдарстввнный комитет (23) Приоритет

Изобретение относится к медицинской микробиологии.

Известен способ получения диагностикума для серологических реакций путем соединения активного компонента с инертным носителем в виде различных природных соединений неорганических веществ.

Однако известный способ не обеспечивает высокой стабильности препарата.

Целью изобретения является повышение стабильности препарата путем обеспечения прочной ковалентной связи субстрата с носителем.

Для этого по предлагаемому способу используют носитель со свободной сульфохлориднои группои — $О С1.

Способ осуществляют следующим образом.

Берут 1 вес. ч. высушенного и суспендированного в 16 вес. ч. диметилформамида сульфированного полистирола (диаметр частиц

1,5 — 8,0 мк) и добавляют к ней 2,8 вес. ч. тионилхлорида при охлаждении льдом и перемешивании. Реакционную смесь выдерживают

24 час при комнатной температуре (20 С).

Избыток реагентов отмывают сухим диоксаном. Полистиролсульфохлорид вьгсушивают в вакууме при 80 С.

Коньюгацию иммуноглобулинов или антигенов с полистиролсульфохлоридом проводят в буферном растворе (рН 7,2 — 8,5) в течение

3 — 4 час при 20 С и 12 час при +4 С. Диагностикум отмывают от несвязавшегося биологического субстрата. Количество привитого биологического субстрата: 20 мг N на 1 г носителя. Связь носителя и биологического субстрата устойчива к действию 0,1н. НС! и 0,1н.

NaOH. Рабочее разведение диагностикума—

1%-ный раствор в буфере для реакции агломерации на стекле и 0 500-ный раствор для объемной серологической реакции. Лиофилизпрованный плп находящийся в виде суспензип в буфере дигностикум можно сохранять при +4"C неограниченно долго.

Пример 1. К 10 мг гаммаглобулина, выделенного из чумной агглютинирующей сыворотки, в физиологическом растворе (рН 7,8) в присутствии пирпдина (0,2 мл) добавляют

500 мг полимерного носителя (сополимер стирола и дивинилбензола), содержащего свободные сульфохлоридные группы. Выдерживают в течение 3 час при +20 С при перемешивании и в течение 12 час — при +4 С.

Полученный диагностикум 7 — 8 раз промывают буферным реактивом (фосфатным, рН

25 7,2) при 2000 об/мин в течение 15 мин, каждый раз меняя буфер. В смывах и в конечном супернатанте определяют количество несвязавшегося белка. В осадек определяют количество связанного азота. Химически связыва30 ется 9,96 мг белка. Для постановки сероло544431

Формула изобретения

Составитель С. Малютина

Редактор Н. Хубларова Техред Е. Петрова Корректор Л. Котова

Заказ 201/4 Изд. № 169 Тираж 654 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, К-35, Раушская наб., д. 4/5

Типография, пр. Сапунова, 2 гических реакций диагностикум разводят буферным реактивом (pH 7,2) до 1 — 0,5%-ного раствора.

П р им ер 2. В целях индикации и идентификации возбудителей особо опасных инфекций (чума, холера...) на стекле используют антительные варианты суспензионного диагностикума. Методика постановки реакции обычная. Количество микробных клеток для возбудителя чумы не менее 1 (10в — 1 (10 м.т. в мл, холеры — 2 — 3 10 м.т, в мл. Учет реакции через 30 — 60 сек. Степень агломерации не менее +++.

П р и м ер 3. Для развернутых серологических реакций на полистироловых пластинах или в пробирках в каждую опытную и контрольную лунку или пробирку добавляют по

1 капле суспензионного диагностнкума. Учет реакции через 35 — 50 мин. Чувствительность реакции 0,03 у/мл для + фракции чумного микроба, 1 — 10;к,104 м. т. в мл для чумного микроба; 0,03 у/мл для Ш фракции холерного вибриона; 5к,10"" м, т. в»;r для холерного вибриона.

Суспензионный диагностикум на основе полистиролсульфохлорида обеспечивает стандартизацию серологических реакций, сокращает время учета реакций (в 2 — 20 раз), повышает чувствительность реакций на 2 — 3 порядка.

Приготовленный диагностикум может храниться в жидком виде с добавлением консервантов нли в лиофилизированном состоянии неограниченно долго при +4 С.

Способ получения диагностикума для серологических реакций путем соединения активного компонента с носителем, о т л и ч а юшийся тем, что, с целью повышения стабильности препарата путем обеспечения прочной ковалентной связи субстрата с носителем, используют носитель со свободной сульфохлориднои группои — SO>C1.