Дата опубликования описания 24.08.77 (53) УДК 576,858.9 (088.8) (72) Авторы изобретения И. М. Ллутин, Б. Н. Мишанькин, В. И. Марченков, Н. Н. Новосельцев, К. К. Рожков и A. В. Суичмезова

Ростовский-на-Дону государственный научно-исследовательский противочумный институт (71) Заявитель (54) СПОСОВ ПОЛУт1ЕНИЯ ДИЗЛГЛ ВЛКтГРИОФЛГЛ

Полученные табл. 1. результагы приведены в

Таблица 1

Температура выращиваиия смеси, С

Титр фага в лизате, частиц/мл

1;(10

4,4Х108

1><10

6,4Х 10"

3,3 108

1Х10

3X10

1 Х 108

1;10

21,3

26,4

36,4

20 изобретение относится к медицинской микробиологии, в частности к получению бактериофагов микроорганизмов, которые применяются для диагностических целей.

Известен способ получения лизата бактериофага путем совместного выращивания культур бактерий и фага на твердых или жидких питательных средах, при котором температура для выращивания бактериофагов является температурой оптимума роста бактерии вЂ” хозяина фага (11.

Однако титр полученного лизата бактерио,фага недостаточно высок.

С целью повышения титра фага по предлагаемому способу культуры выращивают прои температуре ниже оптимальной для культивирования бактерий.

Для получения чумного фага «Д Эрелля» культуры выращивают при 21 вЂ” 25 С, для получения холерного фага «С» культуры выращивают при 30 вЂ” ЗЗ С.

Пример 1. Опытные пробы, содержащие смесь 5)(10 бактерий чумы штамма ЕВ

1290 и 5р, 16 частиц чумного фага Д Эрелля в 5 мл казеиново-ферментативного бульона, BbIpGIlIèâàþò в течение 20 ч при разных температурах, и клетки бактерий убивают хлороформом. Полученный фаголизат осветляют центрифугированием, титруют, подсчитывают образовавшиеся негативные пятна и вычисляют титр фага.

Наиболее высский титр фага в лизате получен при 23 С, в то время как при 28вЂ”

30 С вЂ” общепринятой оптимальной для чумного микроба температуре выращива иявЂ” только 1 вЂ” 3 10а.

Таким образом, за счет снижения температуры выращивания смеси «бактерии - фаг»

30 мо кно пол) чить величение титпа фага в

21 вЂ” 64 раза, Пример 2. Опытнн1е пробы, содержащие по 5 мл бульона Мартена рН 7,6 со смесью клеток холерного вибриона штамма М-124 с холерным фагом «С» (концентрация клеток бактерий 1у, 10, концентрация фага 1Х 10 частиц на 1 мл среды), выдерживают при заданных температурах в политермостате 18 ч.

По окончании инкубации фаголизаты обрабатывают хлороформом, осветляют центрифугированием и раститровывают. В зависимости от температуры выращивания титры фага в лизатах изменяются следующим образом (см. табл. 2).

Таблица 2

Титр фага в лизате, части ц/мл

Температура выращивания, смеси, С

Следовательно, при температуре 33 вЂ” 35 С титр фага в лизате был в 3 вЂ” 3,5 раза выше, чем при 37 С вЂ” общепринятой оптимальной

Составитель С. Малютина

Техред А. Камышникова

Корректор Л. Орлова

Редактор В. Блохина

Заказ 1661/12 Изд. № 596 Тираж 563 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-З5, Раушская наб., д. 4 5

Типография, пр. Сапунова, 2

23,6

34,6

36,5

38,3

1у,10

2,9y,10

2>(10в

1у10

5,1 y,10 бу 10

1,8Х 10

1,4у,10

Зу10 температуре для выращивания холернйМ вибрионов.

Таким образом, выращивание смеси бактерий и фагов при температурах нийе обще5 принятых оптимальных для данного вида микроорганизмов постоянно сопровождается повышением титра фага в полученных лизатах. Поэтому введение предлагаемого способа в производственные условия позволит noI0 лучать исходные фаголжзаты с более высокой литической активностью, чем обычно выпускаемые препараты, что значительно улучшит их качество и приведет к снижению как себестоимости готовой продукции, так и по15 следующих операций, связанных с получением чистых препаратов бактериофагов.

Формула изобретен ия

1, Способ получения лизата бактериофага

20 путем совместного выращивания культур бактерий и фага на питательной среде с последующим отбором фаголизата, о т л и ч а ющийся тем, что, с целью повышения титра фага, культуры выращивают при температу25 ре ниже оптимальной для культивирования б а ктер ий.

2. Способ по и. 1, отл ич а ющи и ся тем, что для получения чумного фага «Д Эрелля» культуры выращивают при 21 вЂ” 25 С.

30 3. Способ по п. 1, отличающийся тем, что для получения холерного фага «С» культуры выращивают при 30 вЂ” 35 С.

Источниии информации, принятые во внимание при экспертизе

35 1. Адамс M. «Бактериофаги», M., Изд. Иностранная литература, 19б1, стр. 29, 30, 401вЂ”

403.