Способ получения уратоксидазы
О П И С А Н И Е (11)ае5938
ИЗОБРЕТЕНИЯ
Союэ Советских
Социалистических
Республик
К АВТОРСКОМУ СВИДВТЕЛЬСТЬУ (61) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 21.03.75(21) 2117038/13 (51) М. Кл.
С 12 10 13/10 с присоединением заявки № (23) Приоритет
Государствеииый комитет
Совета Мииистроа СССР оо делам изооретеиий и открытий (43) Опубликовано 25,07.77Би)ллетень № 27 (53) УДК 663.11 (088.8) (45) Дата опубликования описания16.08.77 (72) Авторы изобретения
Р, И. Акишина, А. П. Ткаченко, B. А. Миронов, Е. Е. Либер и 3. С. Каган
Я1
Всесоюзный научно-исследовательский витаминный институ т-(71) 3 а я в ит ел ь (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ УРАТОКСИБАЗЫ
Гидролизат БВК
1,0-2,5 (по сухим веществам)
0,2-0, 35
0,01-0, 1 5
0,01-0,07
0,01-0,07
Мочевая кислота к 1- иРО4 м ь04
КС1
Гидролизат БВК
Изобретение относится к микробиологической промышленности и может быть использовано для получения биологически активных веществ, выращенных на жидкой пи тательной среде, например yратоксидазы из мицелия Ас1<лок усе species 313-152, Известен способ получения уратоксидазы, предусматривающий культивирование 4с1йо нуdies Ьрес ео313-152 в аэробных условиях на ферментационной среде содержашей мочевую 1О кислоту и минеральные соли, с последуюшим выделением фетМента t fj, С целью повышения выхода и активности фермента по предложенному способу в посевную и ферментационную среды вводят гидролиэат белкововитаминного концентрата в количествах соответственно равных
1,0-2,0% и 1,0-2;5% по весу сухих веществ.
Способ осуществляют следуюшим образом.
Культуру Ас1< конусов species 313-152 вырашивают в аэробных условиях на посевной и ферментационных средах, содержащих м<>чевую кислоту, минеральные соли и гидролизат белково-витаминного концентрата (БВК) 25 в количествах соответственно равных 1,02,0% и 1 0-2,5% по весу сухих веществ с последующим выделением фермента.
Состав ферментационной среды, вес.%:
Р состав среды входят микроэлементы
Ре, Си
Состав посевной среды, вес. %:
1-2 (по сухим веществам)
КТО. 0,01-0,07 КСЕ, О, 01-0, 07
М 50
0,01-0,07
Дфеда тадке содержит микроэлементы е, Си
Пример 1. Посевную культуруДс1 ио т y cue а р е c i e e 31 3-1 52 вырашиваюч на среде, содержашей 1% гидролизате БВК .
565935
Гидролизат БВК
1,5(по сухим вещес тв ам )
0,3
0,1
0,05
0,05
Мочевая кислбте
КН2Р04
М УО4
КСИ т идролизет ЪЗ К
Мочевая кислота
1,5 (по сухим веществам)
0,3
0,1
0,05
0,05
ЦНИИПИ 3екез 2318/17 Тираж 541 Подписное
Филиал ППП Патент", r Ужгород, ул. Проектная, 4 з
Выращивание ведут в еэробных условиях о при 28 и 1 С в течение 24-28 чес„
Готовый посевной материал (5 об.Ъ) переносят в ферментационную среду состава, вес. %:
Среда также содержит,5 мг/л Fe О, 1 мг/n Си 504 и воду дистиллированную. рН среды (6,8-6,9) устанавливают до стерилизации.
Стерилизацию проводят ъри 0,5 ати, 30 мин, фдру йнФарию — 12 — 16 час. Полученный мицелий 8одержит уратоксидазу с активностью 8 — 20 ед, на 1 г влажного веса клеток и 150-400 ед. в расчете на
1 л культуральной жидкости.
Удельная активность экстракта составляет 0,25-0,6 ед. на 1 мг белка или 40-90 ед. на 1 г сухого мицелия.
Пример 2. Гидролизет БВК готовят.из 30 г«сухих дрожжей, которые вносят в 100 мл 1 í. HCI. Гидролиз проводят
30 мин при 0,5 ати. Затем объем суспензии доводят до 300 мл водой н фильтруют. ,Оля приготовления среды используют фильтрат гидролизета БВК.
Посевной материал готовят следующим обрезом . Суспейзию спор с 7-.14 — суточной культуры сбиои сее syec eBI 313-152j, з выращенной на овсяной агеризованной среде, переносят в 750 мл колбу со 100 мл j о . посевной среды состава, вес. /о:
Гидролизет 1,0 (по сухим веществам)
КН РО4 0,1 му go 0,5 ксР 0,05
Среда также содержит 5 мг/л Ре5О, и 4>
Х мг/л 0 f04 рН среды устанавливают до стерилизации 1н,"КОН (6,8-6,9).
Стерилизацию проводят 30 мин при
0,5 ати.
Посевную культуру ектиномицета выращивают в аэробных условиях на качалке при
220 o6/мин в течение 24-28 час при
28й1 С.
5 мл культуры переносит в 100 мл ферментапионной среды состава, вес. 7: 5
В состав среды также входит 5 мг/л
РеБО4,1 мг/л Си5О< и вода дистиллированная. рН среды устанавливают до стерилиза. ции 1 н. КОН вЂ” 6,8-6,9. Стерилизацию проводят 30 мин при 0,5 ати.
Ферментецию ведут в 750 мл колбах со (100 мл среды в еэробных условиях при встряхивании на качалке при 220 об/мин при 28+1 С. о
Через 12-16 час ферментацию прекрешают, мицелий отделяют оТ культуральной жидкости фильтрованием, промывают водой и разрушают ультразвуком на установке
MgE 100 в течение 4 мин.
При этом активность уратоксидезы в бесклеточном экстракте составляет 0,250,6 ед. на 1 мг белка или 8-20 ед, на 1г влажных клеток.
Последующее осаждение сульфатом аммония дает частично очищенный экстракт с активностью 3-4 ед/мл. Фермент уратоксидезы катализует окисление мочевой кислоты и может быть использован в диагностике, а в BbIcoKoo÷èøåííîM состоянии — для лечения заболеваний, связанных с нарушением пуринового обмена.
Формул а . изобретения
Способ получения уратоксидазы, предусматривающий культивирование let< vo w pce S
apecies 313-152 в аэробных условиях на посевной и ферментационной средах, содержащих мочевую кислоту и минеральные соли, с последующим выделением ферменте, о тл и ч а ю ш и и с я тем, что, с целью повышения выхода и активности фермента, в посевную и ферментационную среды вводят гидролизет белково-витаминного концентрата в количествах, соответственно равных
1,0-2,07 и 1,0-2,5% по весу сухих веществ.
Источники информации, принятые во внимание при экспертизе:
1. Авторское свидетельство СССР
¹ 457723, кл. С 12 Э 13/10, 01.09.74,
