Способ получения антител против вируса клещевого энцефалита

 

ОЛКСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

Союз Советсиии

Социалистических

Республик (11) 6(.)75 72 (6l) Дополнительное к авт. свид-ву(22) Заявлеио11.05.76 (21) 2356296/28-13 с присоединением заявки №вЂ” (23) Приоритет—

{51) И. Кл.

А 61 К 35/16

Государственный комитет

Совета Министров СССР оо долом изооретвннй н открытий (43) Опубликовано25.05.78,Бюллетень № 19 (53) УДК615,45:Ь

>576.8.097.5 (088.8) (45) Дата опубликования описания 25.04.78

{72) Авторы изобретения

В. М. Минаева, М, С. Слуцкая, И. И. Райхер и М. Г. Старцева (71) Заявитель

Пермский ордена Трудового Красного Знамени научно-исследовательский институт вакцин и сывороток (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АНТИТЕЛ ПРОТИВ ВИРУСА

КЛЕЩЕВОГО ЗНЦЕФАЛИТА

Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано в медицине при получении сывороточных препаратов против вируса клешевого энцефалита.

Известен способ получения сывороточных препаратов, включающий выделение очищенных антитоксинов из противодифтерийных и противостолбнячных сывороток с помощью иммунсорбции с использованием в качестве основы для приготовления иммун- щ сорбента геля гндрата окиси алюминия 1

Однако этим способом не удается получить очищенные препараты антител против вируса клещевого энцефалита 15

Известен также способ получения сывороточных препаратов против клешевого, энце— фалита из крови людей, включающий выделение иммуноглобулинов риваноловым методом (2

„ днако такой способ не обеспечивает по.лучение высокоочишенных препаратов.

Целью изобретения является повышение. удельной специфической,:4ктивности препарата. М

Зто достигается тем, что сыворотку крови смешивают с иммуносорбентом на осноВе геля гндрата окиси алюминия, полученную смесь инкубируют, отделяют балластные белки при температуре 2-8 С, а затем антитела элюнруют дистиллированной войой при рН 11,0-11,1.и температуре 2 — 8 С.

Способ осуществляют следующим образом. Гель гидрата окиси ащоминия в количестве 3 мл смешивают в течение 5 мин со 150 мл антигена вируса клешевого энцефалита и выдерживают в течение 18 ч при о температуре - 4 С при периодическом перемешивации. Or избытка антигена нммуносорбент освобождают центрифугированием(надс салочную жидкость отбрасывают) и последующим трехкратным промыванием холодным боратным буферным раствором с рН

9,0 в объеме, равном объему антигена (в данном примере 150 млж), Центрифугирование проводят в рефрижераторной центрифуге при 4-8 С и 6000 об/мин в течение

10 мнн. Затем осушес гвляют сорбцию антител. Сырьем для получения препаратов ан607572

Составитель С. Малютина

Техред, К. Гаврон Корректор С. Гарасиняк

Редактор А. Бер

Заказ 2689/1 Тираж 703 Подписное

ПНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по.делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент, г. Ужгород, ул. Проектная, 4 тител являетси сыворотка доноров, содержащая антитела против вируса клешевого энцефалита в титре 1 40 и выше. Исходную сыворотку в количестве 50 мл смешивают с иммуносорбентом и инкубируют в те- чение 18 ч при 4 С. Для освобождения от о избытке сывороточных белков проводят че- тырехкратное промывание физиологическим раствором (рН 7,0-7,2) .в четырехкратном объеме. Центрифугирование проводят при 10

4-8 С и 6000 об/мин в течение 10 мин. о, Затем иммунсарбент, нагруженный анти телами, разводят дистиллированной водой в объеме, равном объему исходной сыворотки, рН в нем доводят до 11,0-11,1 с помощью 15

2 н ИаОН, Элюцию антител проводят на ледяной бане при постоянном перемешивании в течение 30 мин. После этого иммуносорбент отделяют от элюата центрифугированием в течение 15 мин при 18000 об/мин, 2О рН элюата и иммуносорбента доводит до

7,0-7,2. Нативные препараты антител (элюаты) обладают активностью 1:10-1:20 ах ы ar глютинцрующих единиц при белке 46-50 мг/%

Удельная активность 0,2-0,4 на единицу белка, Элюаты для лиофилизации разливают по 20 мл во флаконы емкостью 250 мл.

Пиофилизацию проводят в аппаратах Юзефруа, замораживание при 50 С 18 ч, сушка — Э б в течение 30-32 ч, температура в начале о о о суЬки — 42 С; в конце -26 - 28 С, вакуум 50-80 мк рт.ст.

Высушенные препараты перед употреблени-, ем разводят в 2 мл физиологического раст- вора, При этом титр раствора 1:200 при содержании белка 0,5%.

Использование предлагаемого способа получения антител человека против вируса клещевого энцефалита путем иммуносорбции и элюции на основе геля гидрата окиси алюминия обеспечивает получение гомологичного препарата антител против вируса клеще-, вого энцефалита, обладающего высокой противовирусной активностью при низком содержании белка. Средняя удельная активность препарата 0,2-0,4 антигемагглютиниру1,щих единиц на 1 мг белка (удельная активность в 10-20 раз выше, чем в существующем гомологичном сывороточном препарате) .

Формула. изобретения

Способ получения антител против вируса клещевого энцефалита, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью повышения удельной специфической активности препарата, сыворотку крови смешивают с иммуносорбентом, йа основе геля гидрата окиси алюминия, по лученную смесь инкубируют, отделяют бело ластные белки при температуре 2-8 С, а затем антитела элюируют дистнллированной водой прирН 11,0-11,1 и температуре 2-8 С, Источники информации, принятые во внимание при экспертизе:

1. Райхер И. И. Очищенные антитоксины, выделенные из противодифтерийных и противостолбнячных сывороток с помощью иммуносорбции, изучение перспективы практического применения, докт. диссерт. Пермь, 1973»

2. Ж. "Вопросы вирусологий"," 1, 1972, с. 84.