Способ получения гиалуронидазы
Оп ИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
Союз Советских
Социалистических
Республик (11) 623556
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) Дополнительное к авт. свнд-ву (2 ) Заявлено30,09,76 (21) 2408813/28-13 с присоединением заявки № (23) Приоритет (43) Опубликовано 15.09.78 Бюллетень №34 (4б) Дата опубликования описания О3.08.78
2 (51) М. Кл.
А 61 К 35/48
Гасударственный комхтет
Совета Мнннстроа СССР но делам нзобретеннй и аткрытнй
{53) УДК577.154. .365 (088.8) (72) Авторы изобретения
A. П. Левицкий и B, A. Марусич
Одесский научно-исследовательский институт стоматологии (71) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ГИАЛУРОНИДАЗЫ
Изобретейие относится к химико-фармацевтической промышленности, а именно к получению биологически активных веществ, которые могут быть использованы в медицине в качестве лекарственных препаратов.
Известен способ получения гиалуронидазы из семенников крупного рогатого скота, включающий в себя измельчение ткани, кислотный автолиэ в течение о
18-20 ч при 38 С, ацетоновое осажаение, растворение осажденного фермента в дистиллированной воде, отгонку ацетона под вакуумом, стерилизацию и лиофилиэацию )1) Недостатком этого способа является то, что испольэуемь»е в качестве сырья аля получения гиалуронидаэы семенники крупнаго рогатого скота не являются наиболее богатым источником этого фермента, что приводит к недостаточно высокой удельной активности конечного ферментного препарата. Кроме того, использование процедуры ацетонового осаждения значительно усложняет и удорожает производство гиалуронидазных препаратов и делает его опасным в пожарном отно. шении. Получаемые таким способом пре» нараты гиалуронидазы отличаются уделМ-» ной активностью
Наиболее близким к изобретению asляется способ получения гиалуронидаэы путем измельчения животного сырья, тв экстрагирования солевым раствором хлористого натрия и очистки (2), Недостатком этого способа является низкая уаельная активность получаемой гиалуронидаэы и незначительный ее esrт5 хоц, менее 10%, Целью изобретения является повышение чистоты и выхода целет ого продукта.
Эта цель аостигается тем, что в качестве сырья используют подчелюстные
20 железы собак, а очистку производят анализом против аистиллированной воды и отстаиванием Ilpa 0-6 С в течение о
3-4 нед.
Пример. 495 г поачелюстиых
2з слюнных желез. полученных у 62 свежеПредлагаемый способ позволяет существенно увеличить чистоту гиалурони5 дазы, значительно повысить ее выход.
Получаемый препарат содержит значительно меньше балластных белков и поэтому будет цавать значительно меньше аллергических осложнений, которые возни1О кают при применении других препаратов, 33 Способ получения гиалуронидаэы путем измельчения животного сырья, экстрагирования солевым раствором хлористого натрия и очистки, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью новь шенин чисто20 ты и выхода целевого продукта, в ка честве сырья используют подчелюстные железы собак, а очистку проводят диализом против дистиллированной водь1 и отстаиванием при 0-6 С в течение
25 3-4 нед.
3 ., 62 5 забитых собак различных пород непосред-— ственно после снятия шкуры, гомогениэируют с прмощью электрической мясорубки, После этого этапа получают всего
490 г гомогената, содержащего 85S4,5 F фермента с удельной активностью 0,140.
К гомогенату добавляют 2,45 л
1„5%-ного растворо хлористого натрия, Зкстракцию проводят в течение 30 мин при периодическом встряхивании и S С. о
Полученный экстракт центрифугируют при 6000 ф в течение 30 мин при о
4 С, K осадку вновь прибавляют 800 мл
1,5%ного раствора хлористого натрия и проводят повторную экстракцию. Полученные надосадочные жидкости соединяют и диализируют против дистиллированной воды в течение 24 ч при 5 С.
Диализат центрифугируют в течение о
ЗО мин при 4 С, После этого получают
3000 мл раствора гиалуронидаэь, содержащего 14833,2 Е фермента с удельной активностью 0,216. Выход прецарата на этом этапе составляет 173%, а чистота препарата повышается в 1,5 реза, Затем указанные выше 3000 мл надосадочной жидкости оставляют для отстаивания в течение 3-4 нед при о 0-6 С. Полученный гиалуронидазный препарат центрифугируют при 6000 ц в течение ЗО мин при 4 С.
Получают 2900 мл раствора гиалуронидаэы, содержащего 14841,2 Е фермента с удельной активностью 0,458.
56 4
Выход препарата 173%, а чистота препарата повышается в 3,3 раза.
Формула изобретения
Источники информации, принятые во внимание при экспертизе:
1. Технология мясньх и технических продуктов, Справочник, "Пищевая промыш ленность", М., 1973, с. 516-517.
2. Гуров В. А. Производство органопрепаратов. М., "Пищевая промышленность", . 1976, с. 80.
Составитель С. Малютина
Редактор Т. Девятко Техред H. Вабурка, Корректор Д. Мельниченко
Заказ 5052/2 Тираж 703 Подписное
ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий
113035, Москва, Ж-З5, Раушская наб., д. 4/5
Филиал ППП "Патент, r. Ужгород, ул. Проектная, 4
