Способ определения фибринолитической активности крови

 

Сова Советскик

Социалистическик

Республик ">632954 (61) Дополнительное к авт. свив-ву(22) Заявлено 03,05.77 {21) 2482291/28-13 с присоединением заявки М— (23) Приоритет— (43) Опубликовано 15.11.78,Бюллетень Ме42 (51) М. Кл (01 К ЗЗ/16

Государственный комитет

Саветв Министров CCCP ва делам изеоретений и открытий (53) УДК 547.962..4 (088. 8) (45) Дата опубликования описания 16.11.78

К, Н. Ееремеенко, Л. H. Волконская н A. И. Кизим (72) Авторы изобретения (71) Заявитель

Киевский научно-исследовательский институт отоларингологии

{ -4) СПОСОБ ОПРЕ.1,1=ЛЕНИЯ

ФИБРИНОЛИТИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ КРОВИ

Ъ

Изобретение относится к обпасти ме= дицины и может быть использовано при диагностике сердечно-сосудистых заболеваний, в акушерско-гинекологической отопарингологической, уролог ической практике. 5

Известен способ определения фибринопитической активности (ФЛ) крови путем выделения фибринопптической фракции с поснедуюшим взаимодействием этон фракс 6oocorc"tecrurc< cy6cypczov fl). !

О Однако известный способ не обеспечивает высокой точности определения.

Пенью изобретения является повышение точности способа. цепь достигается тем, что по предпа- 5 гаемому способу в качестве субстрата используют протаминсульфат, поспе взаимодействия субстрата с ФА определяют копичество выделившегося аргинина и по нарастанию его концентрации определяют

ФА крови.

На чертеже показана калибровочная кривая дпя определения количества аргинина, на оси абсцисс — копичество арги2 нина в пробе, мкг; на оси ординат — оптическая плотность при 508 нм.

Способ осу шествпяют следуюшим образом. попиэтипеновые пробирки отмеривают 0,3 мп плазмы, прибавляют 5,55 мп ацетатного буфера, 0,01 М, рН 4,8, и

0,15 мп 1,0 -ного раствора каопина.

Смесь выдерживают 45 мин при 37 С, перемешивая через каждые 5 мин. Затем суспензию центрифугпруют 5 мин при

3000 об/мш., полученный осадок суспендируют в 0,3 мл мединалового буфера, 0,05 М, рН 7,6. К 0,1 мп суспензии эуглобулинового осадка прибавпяют 0,5 мп мединапового буфера, 0,05 М, рН 7,6 и 0,2 мл 1%-ного протаминсупьфата и инкубпруют в течение 30 мин при 37 С, после чего реак1ипо останавливают 0,8 мп

20оо-ной трихпоруксусной кислоты(1 X Y) .

Контрольную пробу проводят аналогично, но 0,2 мп протаминсупьфата вносят после ТХУ. Опытные и контрольные пробы цснтрифугируют 45 мин при 5000 об/мин и в 1 мп центрифугата определяют со632954 бав

1,Q

Составитель С. Малютина

Редактор В. Трубченко Техрел Н. Андрейчук КорректорП. Макаревич

Заказ 6546/36 Тираж 1070 Подписное

UHHHtIH Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д, 4/5

Филиал ППП Патент", г. Ужгород, уп. Проектная, 4 держание аргинина по цветной реакции

Сакагуши. Количество выделившегося нз протаминсупьфата аргинина находят по калибровочной кривой, ФА выражают в микромопях аргинина, отщеппенного от 5 протаминсупьфата за 1 мин 100 мп плазмы крови.

ФА рассчитывают по формуле

cV, 10 д4, ., где

С - количество аргмнина, определяемое по калибровочной кривой, мкг;

1 - время расщепления протаминсупьфата, мин; 15 — объем взятой дпя анализа плазмы, мпу

V1- объем реакционной смеси, мп;

174,2-молекулярный вес аргинина.

Предлагаемый способ обеспечивает вы-20 сокую точность определения ФА, что существенно дпя более точной диагностики сердечно-сосудистых, отоларингологических и других заболеваний, связанных с нарушением процесса гемостаза.

Формула изобретения

Способ определен ия фиб р иноп ити чес кой активности крови путем выделения фибринопитической фракции с последующим взаимодействием этой фракции с биологическим субстратом, о т и и ч а ю ш и й— с я тем, что, с цепью повышения точности способа, в качестве субстрата используют протаминсупьфат, после взаимодействия субстрата с фибринопитической фракцией определяют количество выделившегося аргинина и по нарастанию его концентрации определяют фибринолитическую активность крови.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе:

1, Заявка Франции N0 2019652, кп. Ci 01 и 33/00, 1970.