Способ определения адъювантных свойств препаратов сапонина

 

пэтФн Нс ть н ч КЭЯ

4i.,е иете.;а 1.1 БА

Союз Соеетских

Социалистичесюа

Рвспублик

Оп ИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕН ИЯ п1 673919

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) Дополнительное к авт. свид-ву— (22) Заявлено 26.05.76 (21) 2363067/23-15 с присоединением заявки №вЂ” (23) Приоритет— (51) М, Кл

G 01 N 33/00

Государственный квинтет

СССР по делам нзооретеннй н открытнй

Опубликовано 15.07.79. Бюллетень № 26

Дата опубликования описания 2,5.07 p g (53) УДК 543.89 (088.8) А. А. Бойко, М. М. Иванов, P. В. Складчиков, А. Н. Литвинов и Л. С. Стогова (72) Авторы изобретения

Всесоюзный государственный научно-контрольный институт ветеринарных препаратов (71) Заявитель (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АДЪ1ОВАНТНЫХ СВОЙСТВ

ПРЕПАРАТОВ САПОНИНА

Изобретение относится к ветеринарии, в частности к способу определения качества адъювантов, например, сапонинов, которые широко используются в качестве адъювантной добавки к инактивированным вакцинам против различных заболеваний сельскохозяйственных животных и наиболее широко к вакцинам ппотив ящура.

До настоящего времени контроль качества сапонинов, используемых для этой цели, осуществляют исключительно биологическим методом путем постановки опытов на лабораторных и крупных животных (1), Для этого животным вводят раствор сапонина и спустя 14 — 21 день проводят заражение определенной дозой ви руса. При этом часто в результате ряда причин необходимо неоднократно повторять опыты и использовать значительные средства на приобретение и содержание животных.

Целью изобретения является разработка более дешевого и более экономичного способа определения адъювантных свойств сапонина.

Поставленная цель достигается тем, что проводят диализ раствора сапонина и учитывают интенсивность поглощения им инфракрасных (ИК) лучей в зоне полиглюкозидов 900 см — 1100 см, и активными считают препараты, имеющие интенсивность поглощения выше 40%.

Исследования химической структуры сапонинов методами ультрафиолетовой и инфракрасной спектроскопии показали, что они слабо поглощают ультрафиолетовые лучи и весьма интенсивно инфракрасные.

ИК-спектры сапонинов, поступающих в виде отдельных партий (серий) на предприятия биологической промышленности (см. фиг. 1) имеют невыразительный характер со слабо выраженными характеристическими зонами и мало чем отличаются друг от

ts друга. Однако после диализа 20%-ного раствора в объеме 25 мл в целлофановом мешочке против дистиллированной воды в течение

72 ч спектр сапонина изменяется (см. фиг. 2).

В этих спектрах особенно четко выявляется зона поглощения 1100 см — 900 см с максимумом в 1070 см, которая характерна для полиглюкозидов. Как показали многочисленные исследования, выраженность зоны полиглюкозидов (максимум !070 см ) 673919 э

1О

1$ о и зо и оказалась различной у разных серий сапонинов и связана с их биологической активностью.

На фиг. 1 и 2 графически изображена зависимость между степенью поглощения

ИК-лучей и биологической активностью препаратов сапонина, где а, б — сапонины фирмы «Мерк» (ФРГ) серий 8920423 и 1907518, в, r — сапонины фирмы «ВДН» (Англия) серий 44091 и 1520030;

Опыты на лабораторных животных по изучению адъювантных свойств представленных серий сапонинов показали, что например, сапонины серий «ВДН» обладают более высокой протективной активностью. При заражении морских свинок вирусом ящура в дозе 100 ИДs< сапонин серии 44091 значительно более активен. чем сапонин серии 1907518 фирмы «Мерк».

Сапонин фирмы «ВДН» обладает также более высокой адъювантной акт ивностью при добавлении к ящурной ГОА формолвакцине и менее токсичен, чем сапонин фирмы «Мерк».

Полученные результаты показали прямую зависимость между интенсиновтью поглощения в зоне 1070 см ИК-спектра 20О/оного раствора сапонина после диализа в течение 72 ч против дистиллированной воды и его биологическими свойствами.

Способ определения качества препаратов сапонинов по их ИК-спектрам заключается в следующем.

Проводят диализ 20О/р-ного раствора сапонина в объеме 25 мл против дистиллированной воды в целлофановом мешочке в течение 72 ч. После диализа 0,1 — 0,2 мл раствора наносят на подложку, прозрачную для ИК-лучей, подсушивают до сухого состоянии при 40 — 60 С. Исследуют образец в ИК-лучах на ИК-спектрофотометре в диапазоне 2000 см — 600см, измеряют интенсивность поглощения ИК-света в диапазоне

900 см — 1100 см (при максимуме в

1070 см ).

На приводимом графике показано, что активными считают препараты, у которых степень поглощения ИК-лучей превышает40

Способ может быть использован в качестве контроля при изготовлении сапонина, для определения качества закупаемых партий сапонинов, при контроле сроков годности и условий сохраняемости препарата, а также перед добавлением сапонинов в вакцину.

Способ позволяет значительно сократить время анализа адъювантных свойств сапонинов, а также экономит значительные средства по проведению контроля сапонинов за счет резкого сокращения числа животных, необходимых для проверки адъювантных свойств препаратов.

Формула изобретения

Способ определения адъювантных свойств преператов сапонина, отличаюшипся тем, что, с целью упрощения и удешевления способа, проводят диализ раствора сапонина и учитывают интенсивность поглощения им инфракрасных (ИК) лучей в зоне полиглюкозидо 900 см — 1100см, и активными считают препараты, имсюгцие интенсивность поглощения свыше 40 /о.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

I. Инструкция по изготовлению и контролю инактивированной ГОАформолвакцины из лапинизированного вируса ящура с сапонином, утверждена ГУВ МСХ СССР.

1971, с. 20 — 23.

673919

2000 1000 1б00 Я00 1200 1000 000

+o о

Вопнвбае ниспо, cæ PL@.1

1000 1000 1Н00 1200 1000 8N

Виновное ниспо, аi

P z. 2

Редактор Н. Коган

Заказ 4064/40

Составитель В. Завьянцев

Техред О. Луговая / Корректор Ю. Макаренко

Тираж 1089 Подписное

ЦН И И П И Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж вЂ” 35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП «Патент», г. Ужгород, ул. Проектная, 4