Способ получения 1 , 24/ /диокси-холекальциферола или 1 , 24 / /-диоксихолекальциферола или их производных

 

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

К.flАTEHТУ (11) е»

Союз Советских

Социалистических

Республик (61) Дополнительный к патенту(22) ЗаЯвлено 070775 (21) 2151531/23-04 (51) М. Кл.

С 07 С 172/00//

A 61 К 31/56 (23) Приоритет - (32) 09. 12. 74.

141329/74; 141330/74; 27.12.74 (31) 149017/74; 149018/74 у

149020/74; 149021/74»1 (33)

Опубликовано 250979. Бюллетень в 35

Государственный комитет

СССР по делам изобретений и открытий (53) У@К 547.689, .6.07(088.8) Дата опубликования описания 250979

Иностранцы

Тору Такесита, Есинобу Хасимото, Хироюки Кавасима, Сачио Исимото, Нобуо Икекава и Масуо Морноаки (72) Авторы изобретения

Иностранная фирма Тейдзин Лимитед (Япония) (71) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ 1А, 24 (S) -ДИОКСИХОЛЕКАЛЬЦИФЕРОЛА

ИЛИ ld s 24 (R) -ДИОКСИХОЛЕКАЛЬЦИФЕРОЛА ИЛИ ИХ

ПРОИ ЗВОДНЫХ

OR к„о o@

Изобретение относится к способу получения новых активных аналогов витамина D ., а именно ld,, 24 (S) -диоксихолекальциферола или 1А, 24(И)—

-диоксихолекальциферола или их производных общей формулы где R< R, R> — одинаковые или различные, водород или защитная группа, которая представляет собой остаток алифатической или ароматической кар-, боновой кислоты, такой как ацетил или бензоил.

Использование известного метода расщепления связи 9-10 стероидного скелета с помощью ультрафиолетового излучения (11 позволяет получать но2 вые аналоги витамина D3 общей формулы I.

Цель изобретения — расширение класса аналогов витамина 0З .

6 Это достигается предлагаемым способом, заключающимся в том, что 1А., 3, 24 (S) -тригидроксихолеста-5, 7-диен или 1 ),, 3, 24 (R) -тригидроксихолеста-5,7-диен или их производные

10 общей формулы где R<, R®, и ИЗ имеют вьваеуказанные значения, подвергают ультрафиолетовому облучению с длиной волны в области 200 600. н,к предпочтительно в области 260-310 н в среце инертного органического растворителя с последующей изомеризацией полученного продукта, который или выделяют, 688125 или в случае необходимости проводят щелочной гидролиз в среде спирта или восстановительное разложение с помощью литийалюминийгидрида в среде инертного органического растворителя °

Пример 1. 1А, 24-диоксихолекальциферол.

16 мг 1 1, 3 (, 2 4-триоксихоле ста-5,7-диена растворяют в 500 мл диэтилового эфира, после чего приготовленный раствор облучают.УФ-лучами в течение 2,5 мин при температуре 5 С в атмосфере аргона с применением ртутной лампы высокого давления мощностью 200 вт/654А-Зб. Часть раствора отделяют и определяют УФ-спектр.

Обнаруживают повышенную интенсивность 15 поглощения при 262 и 263 н,ч, что го,ворит о присутствии 1À, 24-диоксипрехолекальциферола. После завершения реакции серный эфир выпаривают при комнатной-температуре и понижен- 20 ном давлении, К остатку прибавляют

50 мл бензола, а затем проводят изомеризацию в течение 4 ч. при кипячении бензола с обратным холодильником, 25

После завершения реакции бензол выпаривают при пониженном давлении, а получают 16 мг белого твердого вещества. Продукт разделяют препаративной тонкослойной хроматографической Зр обработкой с использованием силикагелевого носителя, который содержит приблизительно 1,5Ъ нитрата серебра, причем проявление осуществляют дважды с использованием смеси 6Ъ метано- 35 ла с хлороформом. Для этого продукта получают три полосы при облучении

УФ-лучами. Из наименее полярной поло.сы получают 2,8 мг белого твердого продукта.Он идентифицируется как 1с(, 24-диоксихолекальциферол, имеет следующие свойства.

УФ-спектр: )(этанол — 265 н макс

= 228 н ч; ямР-спе р этанол макс 4S (О) г 0,57 (бН, d, 18 СН ); 0,86 (6Й, d Р = 7 гц, 26 — 27 -СЙ ) у 0,96 (ЗН| й, Д =5 гц 21-СН ) 1 3,19 (1Н, m, 24-H) 4, 15 (1Н, щ, .1 $ — Н); 4, 36 (1Н щ| Зс(Н) 4i 85 (1Hi Ъ Я 19 Н) 5р

5,30 (1Н, Ь, Я, 19 H) 6,05 (1Н, Й, — 11 гц, б или 7-Н); 6,16 (1Н, d 3А,= ll гц, б или 7 — Н) °

Масс-спектр. 416 (М ), 398, 380, 269, 251, 134.

Масс-спектр с высокой разрешающей способностью:

Найдено: 416, 32768 С Н„ О

Вычислено: 416,32927 т. пл. от

84 до 85 С.

Пример 2. 1с(, 24 (R) -диокси- 6() холекальциферол.

10 мг 1с(, 3, 24 (R) -триоксихолеста-5,7-диена растворяют в 140 мл диэтилового эфира, а образовавшийся раствор подвергают облучению УФ-лу- б5 чами при 5 С в течение 2 мин. Часть раствора отцеляют и определяют УФ-спектр. Поглощение при 262 и 263нр указывает на наличие исходного продукта. После завершения реакции серный эфир выпаривают при комнатной температуре и пониженном давлении

К остатку прибавляют 50 мл бензола и в атмосфере аргона при кипячении бензола с обратным холодильником проводят реакцию изомеризации в течение 4 ч.

После завершения реакции реакционную смесь обрабатывают аналогично примеру 1 с последующим выделением и очисткой путем препаративной онкослойной хроматографии, Получают 1,8 мг белого твердого продукта.

Продукт идентифицируется как 1с(>

24(R) -диоксихолекальциферол, имеет следующие свойства.

УФ-спектр: A = 265 н,ц;

) „„„кс = 228 н,ч; ЯМР-спектр (C>D О):

0,59 (ЗН, S, 18-CH3); 0,87 (6Н| d, 3 = 7 гц, 26-27-СЙ ); 3 20 (1Н, m, 29-Н); 4, 14 (1Í, m, 1 -Н); 4, 42 (1Н, щ, ЗА -Н); 4,87 (1Н, Ь, Я, 19-Н);

5,32 (1Н, Ъ| S, 19 — Н);6,08 (1Í, d, „= ll гц| 6 - или — 7 H); 6,30 (1Н, d, З„з .- 11 гц, б- или 7-Н) 7.

Масс-спектр: 416(М+), 398, 380, 269, 251.

Масс-спектр с высокой разрешающей способностью:

Найдено: 416,33084. С | H44С |

Вычислеио 416,32927

Пример 3. 34, 24 (S) -диоксихолекальциферол

15 мг ld,., 3), 24 (S) -триоксихолеста-5,7-диена, растворяют в 140 мл диэтилового эфира, а образовавшийся раствор облучают УФ-лучами 2 мин при 5 С. После этого повторяют часть процесса, которая описана в примере

2, в результате.получают 2,8 мг белого твердого продукта. Продукт идентифицируют как 1А, 24(S) -диоксихолекальцйферол, имеет следующие свойстваг

УФ-спектр 3 макс

= 228 нр . ЯМР-спектр (C В О): 0,58 (ЗН, S, 18-СН ): 0,87 (6Й, с1,,3 = 7 гц, 26 — Н, 27-СЩ |

3 20 (1Н| m 24 Н); 4 | 14 (1H| щ|

Н); 4,42 (1H, m, 3g-H); 4,87 (1Н, Ъ| Я, 19-Н);. 5 | 32 (1Н| Ъ | Я, 19-Н) |

08 (1 Н, С1, де. = 11 гц, б — или

7 — Н); 6,30 (1Н| d; Зра б — или 7 — Н) . Масс-спектр: 416(М }, 398, 380, 269, 251., 134. Масс-спектр с высокой разрешающей способностью:

Найдено: 416,33096 С 1 Нц О. Найдено:

416,32927

Пример 4. lс(3 ), 24-триацетоксихолест-5,7-диен °

200 мг 1Ы,, З, 3)|, 24-триоксихолеста-5,7-диена используют для про-! веденияя реакции с 2 мл уксусного аи688125 гидрида и 5 мл пиридина при темпера- туре 95 С в течение 3 ч. Реакционную о смесь далее помещают в смес воды со льдом и экстрагируют 40 мл диэтилового эфира. Эфирную фазу промывают разбавленной соляной кислотой, 5 . затем щелочью и еще раз водой, после чего сушат. Серный эфир выпаривают, получают 14, З, 24-триацетоксихолеста-5,7-диена в виде желтоватого маслянистого продукта.

В) 1А 24-диацетоксихолекальциферол-З -ацетат.

50 мг 1*, 24-диацетоксихолекальциферол-3Р-ацетата растворяют в 500мл диэтилового эфира. Приготовленный раствор облучают УФ-лучами в атмосфере аргона при 5оC в течение 4 мин.

Часть этого раствора отделяют и определяют его УФ-спектр.

Поглощение в интервале 262 до

263 нм указывает на наличие исход- 20 ного соединения. После завершения реакции серный эфир выпаривают при пониженном давлении и комнатной температуре. К остатку добавляют 100 мл бенэола и в течение 2 ч в атмосфере 25 аргона кипятят с обратным холодильником. После завершения реакции большую часть бензола выпаривают при пониженном давлении, а к остатку добавляют 2 мл 5%-ного раствора гид- 30 рата окиси калия в метаноле, 2 мл метанола и 2 мл бензола. Смесь выстаивают 1 день при комнатной температуре для завершения гидролиза.

Реакционный продукт разбавляют водой и экстрагируют этилацетатом.

Этилацетатную фазу несколько раз промывают водой и сушат. Этилацетат выпаривают при пониженном давлении с получением 35 мг.слабо-желтого

40 маслянистого продукта.

Этот продукт выделяют и очищают гонкослойной хроматографией с применением силикагелевого носителя, который содержит нитрат серебра.

Получают 5,7 мг твердого продукта.

Этот продукт, полученный после изомеризации, идентифицируют как 1d,, 24-диацетоксихолекальциферол-З-ацетат.

Пример 5. А) 2<4, 3, 24-трибензоилоксихолеста-5,7-диен. 50

Проводят реакцию 260 мг ld. 3)5, 24-триоксихолеста-5,7-диена, с 410мг бенэоилхлорида и 15 мл пиридина.

Реакционную смесь разбавляют водой и экстрагируют 40 мл дизтилово- 55 го эфира. Эфирную фазу промывают разбавленной соляной кислотой, затем щелочью и наконец водой с последующей сумкой.

Серный эфир выпаривают с получе- 60 нием 1А, З, 24-трибензоилоксихолеста-5,7-диена . в виде белого аморфного продукта.

В)1А, 24-дибензоилоксихолекальдиферол-Зр-бенэоат, \Ъ

30 мг 14, 3), 24-трибензоилоксихолеста-5,7-диена растворяют в 500мл бензола и приготовленный раствор облучают УФ-лучами в атмосфере аргона при 10 С 2 мин. После завершения реакции в течение 2 ч. в атмосфере аргона и при кипячении бензола с обратным холодильником проводят реакцию изомеризации, После завершения реакции большую часть бензола выпаривают при пониженном давлении и к остатку добавляют 2 мл 5%-ного раствора гидрата окиси калия в метаноле и 2 мл бензола. Смесь выдерживают при комнатной температуре в течение 28 ч, в атмосфере аргона, осуществляют гидролиз. Затем ðåàêционный продукт разбавляют водой и экстрагируют этилацетатом. Этилацетатный слой несколько раз промывают водой и сушат. Этилацетат выпаривают при пониженном давлении. Остаток разделяют и очищают получают

1,9 мг 1 (, 24-диоксихолекальциферола, свойства которого идентичны свойствам продукта, полученного по примеру 4.

Получают продукт, который после проведения реакции изомеризации,идентифицируют как 1А, 24-дибензоилхолекальциферол-З-бензоат.

Пример 6. A) 24-окси-3, 24-дибензоилоксихолеста-5,7-диен.

250 мг 1À, 3, 24-триоксихолеста-5,7-диена смешивают с 210 мг хлористого бензоила и 5 мл пиридина, после чего смесь выстаивают при 23 С один день. Затем смесь обрабатывают . аналогично примеру 5, .получают 14-ок24-дибензоилоксихолеста-5,7 -диен.

В) 1оокси-24 -бензоилоксихолекальциферол-3 -бензоат.

20 мг 1п -окси-З, 24-дибензоилоксихолеста-5,7-диена растворяют в 500 мл диэтилового эфира. Раствор облучают уФ-лучами, проводят реакцию иэомеризации и гидролиза аналогично примеру 5В, получают 1,9 мг

1К, 24-диоксихолекальциферола, который характеризуется теми же свойствами, что и продукт, полученный по примеру 4.

Продукт, полученный после реакции изомеризации, представляет собой Ц -окси-24-бензоилхолекальциферол-З -бензоат.

Пример 7. 1А 24 (R) -диацетоксихолекальциферол-3 -ацетат.

1d,, 3 jf, 24 (R) -триоксихолеста-5, 7-диен, подвергают ацетилированию аналогично примеру 4В, получают 14, 3 ) (R) -тиоксихолеста-5, 7-диен, 25 мг продукта обрабатывают аналогично примеру 4В, облучают УФ-лучами 2 мин.

Получают 3,4 мг продукта, свойства которого соответствуют свойствам 14, 24 (R) -диаксихолекальциферола.

688125

Продукт, полученный после проведения реакции изомеризации, представляет собой 1А, 24(R) -диацетоксихолекальциферол-З) -ацетат.

Пример 8. 1, 24 (В)-дибензоилоксихолекальциферол- 3 -бенэоат. 5

1А, 3)3, 24(R) -триоксихолеста-5,7-диен подвергают бензоилированию аналогично примеру 5А, получают 1À, 3, 24(R) -трибензоилоксихолеста-5,7-диен. Продукт подвергают обработке аналогично примеру 5В эа исключением того, что в данном случае используют 30 мг этого продукта, а операцию облучения УФ-лучами проводят при температуре 12 С 2 мин.

Получают 3,4 мг продукта, свойства . которого соответствуют свойствам

lot, 24(R) -диоксихолекальцифеГола.

Таким образом, продукт полученный после реакции иэомеризации, идентифицируют так 1, 24(R) -дибенэоилоксихолекальцифеРол- З -бензоат.

Пример 9. 1А-окси-24 (R) -бензоилоксихолекальциферол-3-бен зоат.

1, 3), 24 (R) -триоксихолеста-5, 7-диен подвергают бензоилированию аналогично изложенному в примере

6А, получают ld.-окси, 1), 24(В)-дибензоилоксихолеста-5,7-диен.

10 мг продукта обрабатывают аналогично примеру 6В, получают 1,2 мг 3() продукта, свойства которого соответствуют свойствам 1d, 24(R) -диоксихолекальциферола.

Таким образом, продукт, получен ный после реакции изомеризации пред- 35 (ставляет собой lot-окси-24 (К) -бензоилоксихолекальциферол-3 ) -бенэоат.

Пример 10. 1а, 24(S)- диацетоксихолек альциферол-3 ф-ацетат .

1d,, 3 (, 24 (S) -триоксихолеста-5, 7-диен, подвергают ацетилированию аналогично примеру 4А, получают 1, З, 24 (S} -триоксихолеста-5,7-диен.

20 мг продукта подвергают обработке аналогично примеру 7, получают 3,1 мг продукта, свойства которого соответствуют свойствам 1>, 24(S)—

-диоксихолекальциферола.

После реакции изомеризации получают продукт, который представляет собой 1, 24(8) -диацето сихолекальциферол-3p—

-ацетат.

Пример 11. 1А-окси-24(S)—

-бензоилоксихолекальциферол-,З -бензоат.

1+, 3)3, 24(S) -триоксихолеста-5,7-диен, подвергают бенэоилированию аналогично примеру 6А, вследствие чего получают И-окси-Зф, 24 (S) -дибензоилоксихолеста-5,7-диен. 15 мг продукта, оорабатынают, аналогично примеру 9, получают продукт, свойства которого соответствуют свойствам lä, 24(S) -диоксихолекальциферола.

Продукт, полученный после провелзения реакции изомеризации, представляет собой 14 — окси-24 (S) -бензоилоксихол альциферол- 3 -бенэоат .

Пример 12. 14-ацетокси-24 (S) -бен эоилокс ихолек альциферол-З-бензоат.

lо, — окси-3)(), 24(S) -дибенэоилоксихолеста-5,7-диен, полученный аналогично примеру 11, подвергают ацилированию, получают ld, — àöåòoêñè-3

24(S) -дибенэоилоксихолеста-5,7-диен.

15 мг продукта подвергают обработке аналогично примеру 10 облучают УФ-лучами при 8 С 1 мин. Получают 1,5 мг продукта, свойства которого соответствуют свойствам 1А, 24(S) -диоксихолекальциферола. Продукт„ полученный после проведения реакции изомеризации, представляет собой ld, — ацетокси — 24(S} -бенэоилоксихолекальциферол-3,6-бенэоат.

Пример 13. 1d., 24-диоксихолекальциферол.

l0 мг смеси ld. 3/, 24-триоксихолеста-5,7-диена c lo(3), 24-триоксихолеста-4,6-диена в молярном соотношении 3:1, растворяют в 500 мл диэтилоного эфира, после чего раствор облучают УФ-лучами при 5 С 2 мин.

После завершения реакции диэтиловый эфир осторожно выпаривают при пониженном давлении. К остатку прибавляют 50 мл бенэола и в атмосфере аргона Н в течение 2 ч. кипятят с

4 обратным холодильником. После эанер= ения реакции бензол выпаривают, получают 10 мг коричневого маслянистого продукта, Получают УФ-спектр продукта. Полоса поглощения при 265 нм, характерная для 1".(, 24-диоксихолекальциферола, отсутствует. Сравнение продукта реакции с образцом 1А, 24-диоксихолекальциферолом методом тонкослойной хроматографии на силикагеле указывают на отсутствие 1с), 24-диоксихолекальциферола.

Таким образом, в том случае, когда стeïåíü чистоты 14 3 8, 24-триоксихолеста-5,7-диена оказывается низкой, н ходе проведения реакции изомериэации с использованием УФ-облучения 1), З, 24-триоксихолекальциферол не образуется вообще.

Пример 14. 1d, 24-диацетоксихолекальциферол-З) -ацетат, 10 мг смеси, которая содержит

1d,„ 3Р, 24-триацетоксихолеста-5,7-диен и 14,, ЗД, 24-триацетокси-4,6-

-диен в молярном соотношении 3:1, растворяют н 500 мл диэтилоного эфира и растнор подвергают облучению о

УФ-лучами при 5 С 2 мин. окраска реакционной смеси станонится желтовато-коричневой. После завершения реакции диэтиловый эфир осторожно зыпаринают при пониженном давлении.

К остатку добавляют 50 мл бенэола и

688125

OR

)(0 ОН, OR

30 во

Формула изобретения

ЦНИИПИ Заказ 5557/56 Тираж 513 Подпи сн се

4ылиал ППП Патент, r. Ужгород, ул. Проектная, 4 в течение 2 ч, в атмосфере аргона кипятят с обратным холодильником, проводят реакцию изомеризац;.и. После завершения реакции большую часть бензола выпаривают при пониженном давлении. В остаток добавляют 1 мл

5%-ного раствора гидрата окиси калия в метаноле и смесь оставляют стоять при комнатной температуре в течение

24 ч. в атмосфере аргона для проведения гидролиза. После завершения реакции- бензол выпаривают.

Пример 15. 60 мг 14, 3, 24(R)-триацетоксихолеста-5,7-диена растворяют в 500 мл диэтилового эфира. Полученный раствор подвергают

УФ-облучению в атмосфере аргона при температуре 5 С 5 мин После заверЬ щения реакции, эфир выпаривают при комнатной температуре и пониженном давлении. В остаток добавляют 150мл бензола и осуществляют изомеризацию в течение 2,ч, в атмосфере аргона при температуре .дефлегмирования бензола. После завершения реакции, бензол испаряют при пониженном давлении, а в остаток добавляют 20 мл сухого диэтилового эфира и 50 мг

ИАРН4 . Реакционную смесь перемешивают 2 ч при температуре дефлегмирования диэтилового эфира до восстановления.

Реакционный продукт разбавляют

)диэтиловым эфиром, насыщенным водой и экстрагируют. Фазу эфира промывают последовательно водой и сушат над Na>S04, Диэтиловый эфир испаряют ,при пониженном давлении в результате образуется 38 мг светло-желтого мас- лянистого продукта.

Продукт выделяют, очищают при помощи тонкослойной хроматографии с использованием в качестве носителя силикагеля, содержащего нитрат серебра. Спектры и другие характеристики этого продукта полностью соответствуют 1d, 24(R)- диоксихолекальциферолу.

Аналогичным образом, из.lg 3)3, 24(S) -триацетоксихолеста-5 7-диена получают 1À, 24 (S) -диоксихолекальциферол.

1. Способ получения 1А, 24(S) -диоксихолекальцкферола или 1А, 24(R)-дноксихолекальциферола или их производных общей формулы где R, R, Rg — одинаковые или различные, водород или защитная группа, 15 которая представляет собой остаток алифаткческой или.ароматической карбоновой, кислоты, такой, как ацетил или бензоил, отличающийся тем, что 1А, Зр 24(S) -тригидроксихолеста-5,7-диен или 14, З,У, 24(R)-тригидроксихолеста-5,7-диен или их производные общей формулы где R, Rg u Rg имеют выаеуказанные значения, подвергают ультрафнолето35 soMy Облучению с ДлинОЙ ВОлны в Области 200-600 н и в среде инертного органического растворителя с последующей изомеризацией полученного продукта, который или выделяют, илн

40 в случае необходимости проводят щелочной гидролиз в среде спирта нли восстановительное разложение с помощью литнйалюмнннйгидрнда в среде инертного органического растворите„ля.

45 2. Способ по п.1, о т л н ч а юшийся тем, что применяют-9льтрафиолетовое излучение,в области

260-310 н/ч.

Приоритет по признакам

50 09.12.74 при R, Rz, R †. водород;

27.12.74 при R, Н, R — ацетил, (бензоилгруппа.

Источники информации, принятые во

55 внимание при экспертизе

1. Hess А. F. Weinstock М.,)

Bio6 Chem. 64, 181, 193, (1925) .