Штамм лиа-0841, обладающий репеллентными свойствами в отношении грызунов

 

и

О П-Й- C" "А"- - И И Е

ИЗОБРЕТЕНИЯ

Союз Советских

Социалистических

Республик

vi)690071

Ф

/) К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) Дополнительное к авт. саид-ву— (22) Заявлено 04.0578 (21) 2612513/30-15 с присоединением заявки Но— (23) Приоритет— (5Ф)М, Кл.

С 12 К 1/00

Государствеииый комитет

СССР по делам изобретеиий и открытий

Опубликовано 0510.79 Бюллетень Hо 37

Дата опубликования описания 08,10.79 (53) УДК63. 576.8 (088.8) Ю.E. Конев, В.М. Мицкевич, H.Â. Кандыбин, Г.Н. Корешкова, Л. Е. Алексеева, Л.Б. Соколов и g.Ì. Йичуговская (72) Авторы изобретения

Всесоюзный научно-исследовательский институт сельскохозяйственной микробиологии и Всесоюзный научноисследовательский технологический институт антибиотиков и ферментов медицинского назначения (71) Заявители (54) ШТАММ Actinosporangium aIbidum ЛИА-0841,.

ОБЛАДАЮЦИЙ РЕПЕЛЛЕНТНЕМИ СВОЙСТВАМИ

В ОТНОШЕНИИ ГРЫЗУНОВ

Изобретение относится к сельскохозяйственной микробиологии, в частности к штаммам микроорганизмов, которые продуцируют метаболиты, обладающие репеллентными свойствами в отношении грызунов.

В настоящее время наиболее перспективными способами борьбы с вредителями сельского хозяйства являются способы, направленные не на сплошное уничтожение популяции вредителей, а на уменьшение размеров— вплоть до ликвидации вредного их воздействия.

Один иэ таких способов состоит в применении препаратов, обладающих репеллентным действием, т.е. препаратов, которые отпугивают вредителей, в частности грызунов.

В ряде стран выпускаются химйческие репелленты, отпугивающие грызунов (1).

Основу этих препаратов составляют хлорорганические соединения группы терпенов, тиоурониевые соединения.

Однако эти репелленты, как и прочие препараты химической природы, накапливаются в почве, воде, растениях и загрязняют окружающую среду.

Поэтому важное значение приобретает изыскание и применение репеллентов биологической природы.

Известно применение с этой целью актидиона — побочного продукта производства стрептомицина, получаемого иэ штамма Actinomyces griseus(2).

Однако указанные препараты характеризуются повышенной токсичностью для человека и полезных животных °

Кроме того, стоимость их высока.

Целью изобретения является штамм

Actinosporangium aIbidum ЛИА-0841, обладающий четко выраженньм репеллентньм действием по отношению к грызунам.

Предлагаемый штамм Actinosporan—

gium aIbidum ЛИА-0842 выделен иэ луговой почвы окрестности г. Саки

Крымской области ° Хранится в коллекции Всесоюзного научно-исследовательского технологического института антибиотиков и ферментов медицинского йазначения под номером JINA-0841.

Культуральные признаки.

Среда Чапека с крахмалом. Рост хороший, пушистый. Колонии выпуклые.

Воздушный мицелий белый, субстратный мицелий беловатый. Растворимый

ЗО пигмент отсутствует, 690071

Среда 9 2 Гаузе. Рост умеренный, Воздушный мицелий белый, субстратный мицелий кремовый. Растворимый пигмент отсутствует.

Глюкоэо-аспарагиновая среда.

Рост умеренный, колонии плоские, в 5 центре опушенные. Воздушный мицелий белый, субстратный мицелий бесцветный. Растворимый пигмент отсутствует

Овсяный агар. Рост слабый. Колонии опушенные и голые. Воздушный lO мицелий белый, субстратный мицелий темно-желтый. Растворимый пигмент отсутствует.

Крахмало-аммиачная среда. Рост обильный, пушистый. Колонии крупные, выпуклые. Воздушный мицелий белый (белоснежный), субстратный мицелий соломенно-желтый, Растворимый пигмент отсутствует, Ломтики картофеля. Рост очень хороший. Воздушный мицелий белый, субстратный мицелий бесцветный. Картофель не чернеет.

Морфологические признаки.

При росте на всех указанных питательных средах штамм JINA-0841 среду не:окрашивает. Спороносцы прямые, . длинные. Спорангий неправильно округлой формы, встречаются с оболочкой и без оболочки, Споры 0,4-0,6 х х 0,7-1,0 ммк.

Физиологические признаки. Умеренно разжижает желатину. Молоко не изменяет, восстанавливает нитраты.

Хорошо растет на клетчатке, не инвертирует сахарозу. Тирозиназа отрицательная. Крахмал гидролиэует.. Меланоидного пигмента не образует, почернения при росте на среде Треснера-Данга не дает. Отношение к углеводам (на среде Придхэма-Готтлиба): 40 растет на среде с арабиноэой, ксилозой, инозитом, маннитом, фруктозой и глюкозой. Слабо растет на среде с рамнозой и раффинозой. Не растет на среде с сахарозой. 45

Антагонистические свойства, Проявляет антагонистические свойства в отхбшении некоторых грамположительных и грамотрицательных бактерий, микобактерий, дрожжей и дрожжеподобных грибов, некоторых мицелиальных грибов и актиномицетов.

Эталонный экстракт мицелия, а также раствор выделенного действующего начала — актиноспорангина — обладают репеллентным действием в отношении грызунов, Культура хранится на агаре 21/12 при 4 С (кукурузный экстракт 0,5% (по сухому весу); (NH>) PO> 4 г;

КН РО1, 2 г; крахмальный раствор 20 г; ®

Са СО 1 г; NgSOj, 0,25 г; агар 21 г; вода водопроводная 1 л) .. рН до стерилизации 7, 2 — 7, 3. Стерилизация при 0,8 атм в течение 30, мин, рН после стерилизации 6,9-7,0. 65

Пример выполнения.

Культуру штамма Actinosporangiurn

aIbidum ЛИА-0841 выращивают на следующих средах:

Посевная среда Р 5 состава,Ъ: соевая мука 1; глюкоза 1; NaCI 0,5;

СаСО3 0,1; вода водопроводная остальное. Стерилизация при 0,8 ати в течение 30 мин.

Ферментйая среда Р 16 состава,Ъ: кукурузный экстракт О, 35 (по сухому весу); соевая мука 1,8; глюкоза 4,0;

NH NOg 0,8; СаСО> 0,7; вода водопров бдн а я ос таль ное . Стерили эаци я при

0,8 ати в течение 30 мин. рН после стерилизации 6,4-6,7, Культуру выращивают в колбах

Эрленмейера на качалке при встряхивании при 220 об/мин в течение 5 суток при 26-28 С.

Двойной экстракцией метанолом при соотношении 1:3 иэ отжатого мицелия выделяют действующее начало— актиноспорангин. Экстракты объединяют и концентрируют в вакууме до водного остатка, При стоянии на холоду -иэ водного осадка выпадает сырец актиноспорангина, имеющий в

УФ-спектре максимум поглощения при

366 нм. Затем сырец актиноспорангина растворяют в метаноле, пропускают через слой окиси алюминия. Прозрачный слабожелтый фильтрат упаривают до 1/10 первоначального объема и осаждают актиноспорангин в ацетоне в соотношении 1:50 (по объему). Выпавший осадок отфильтровывают, высушивают в вакууме и получают очищенный актиноспорангин. Он представляет собой порошок светло-кремового цвета, т.пл. 82-84 С, хорошо растворимый в спиртах, кислых водных растворах, плохо растворимый в воде, не растворимый в ацетоне, эфире, углеводородах.

Полученный акТиноспорангин имеет в УФ-спектре максимум поглощения при 306 нм (E = 110).

1Ъ

1 см

И<-спектр (таблетки КВч, прибор

ИК-20), см : 3400-3200, 2950,2870, 1720, 1700, 1680, 1660, 1650, 1640, 1620, 1570, 1560, 1550, 1470, 1450, 1220, 1200, 1120, 1050, 1020, 950, 830, 780, По данным элементарного анализа молекула актиноспорангина содержит

С 49Ъ, Н 8,6Ъ, N 19,52%. Сера и галогены не обнаружены. Молекулярный вес, определенный с помощью массспектрометра, составляет 825. Молекулярная формула актиноспорангина

CgH> N3O> . По физико-химическим свойствам он относится к азотсодержащим гетероциклическим соединениям.

Для обнаружения репеллентного действия приманку — кусочек белой

690071

Формула изобретения

Составитель М. Мирзаев

Редактор 3. Бородкина Техред Н.Бабуркэ Корректор Я. Горват

Тираж 526 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Заказ 5912/24 филиал ППП Патент, r. Ужгород. Ул. Проектная, 4 булки †пропитывают 2,5%-ным спиртовым раствором актиноспорангина и предлагают грызунам. Контролем служит булка, пропитанная спиртом. Обе приманКи предлагают грызунам одновременно. 5

Установлено, что 2,5Ъ-ный раствор актиноспорангина обладает репеллентным действием по отношению к грызунам обыкновенным — полевкам.

Корм, обработаниый раствором актиноспорангина, не поедался в течение

5-6 суток. Контроль — корм, обработанный спиртом, поедался грызунами полностью, Аналогичные результаты получены при обработке корма этанольным экстрактом мицелия Actinosporangium aIbidum ЛИА-0841.Культуру выращивают на соевой среде в колбах на качалке в течение четырех суток при 28 С. Мицелий отфильтровывают через бумаж- 20 ный фильтр, соединяют с этанолом в отношении 1:3 и в течение 1 ч встряхивают в качалке. Опыты ставят в двух повторностях. Корм — кусочек белой булки, пропитанный этанольным 25 экстрактом, в условиях выбора корма не поедался полевками в течение 2 суток. Контроль — булка, пропитанная этанолом, поедался полностью.

При введении перорально белым 3О мышам смеси отфильтрованного мицелия и этанольного экстракта мицелия животные не погибали.

Штамм Ас 1nosporangium aIbidum

ЛИА-0841 обладающий репеллентными свойствами в отношении грызунов.

Хранится в коллекции Всесоюзного научно-исследовательского технологического института антибиотиков и ферментов медицинского назначения.

Морфологические при знаки . Спороносцы прямые, длинные. Спорангии неправильно округлой формы. Споры

0,4-0,6 х 0,7-1,0 ммк °

Культуральные признаки.

Среда Чапека с крахмалом. Рост хороший, пушистый. Колонии выпуклые.

Воздушный мицелий белый, субстратный мицелий беловатый, Растворимый пигмент отсутствует.

Среда Р 2 Гаузе. Рост умеренный.

Воздушный мицелий белый, субстратный мицелий кремовый. Растворимый пигмент отсутствует. Глюкозо-аспарагиновая среда. Рост умеренный,. колонии плоские, в центре опушенные.

Воздушный мицелий белый, субстратный мицелий бесцветный. Растворимый пигмент отсутствует °

Овсяный агар. Рост. слабый. Колонии опушенные и голые. Воздушный мицелий белый, субстратный мицелий темно-желтый, Растворимый пигмент отсутствует.

Крахмало-аммиачная среда. Рост обильный, пушистый. Колонии крупные, выпуклые. Воздушный мицелий белый, субстратный мицелий соломенно-желтый. Растворимый пигмент отсутствует.

Ломтики картофеля. Рост очень хороший. ВоздушНый мицелий белый, субстратный мицелий бесцветный. Картофель не чернеет. Физиологические признаки. Умеренно разжижает желатину. Молоко не изменяет, восстанавливает нитраты. Хорошо растет на клетчатке. Сахарову не инвертирует.

Тирозиназа отрицательная. Крахмал гидролизует. Меланоидного пигмента не образует, почернения при росте на срезе Треснера-Данга не дает.

Усваивает арабинозу, ксилозу, инозит, маннит, фруктозу, глюкозу. Слабо усваивает рамноэу и раффинозу.

Не усваивает сахарозу.

Антагонистические свойства.Проявляет антагонистические свойства в отношении некоторых грамположительных и грамотрицательных бактерий, микобактерий, дрожжей и дрожжеподобных грибов, некоторых мицелиальных грибов и актиномицетов.

Этанольный экстракт мицелия, а также раствор выделенного действующего начала — актиноспорангина— обладают репеллентным действием в отношении грызунов.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Патент Японии 48-38846, кл. ЗОГ 342, 1973.

2. Репелленты и аттрактанты в защите растений. Обзор 38 (143), М., 1967., с. 20-26.