Способ определения фагоцитарнобактерицидной активности лейкоцитов
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К АВТОРСКОМУ СВИДИЕЛЬСТВУ
Союз Советских
Социалистических
Республик
<и>709063 (6t} Дополнительное к авт. саид-ву (22) Заявлеио250978 (21)2661401/28-13 (51)М. Кл.
61 В 10/00
01 N 1/28 с присоединением заявки ¹
Государственный комитет
СССР по делам изобретений и открытий (23) Приоритет
Опубликовано150 1.80, Бюллетень №2
Дата опубликования описания 150180 (53) УДК 615. 475 (088, 8) (72) АвтО эы изобретения
В,П,Настенко, A.Ã.Àëàäàòoí, B.Е.Китаев и В,И,Огреба
{71) Заявитель
Кубанский государственный медицинский институт им. Красной Армии (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ФАГОЦИТАРНΠ— БАКТЕРИЦИДНОЙ
АКТИВНОСТИ ЛЕЙКОЦИТОВ
Изобретение относится к области медицины, а именно к иммунологии, и может быть использовано для определения функционального состояния нейтрофилов, а также диагностики патологических состояний в клинико-лабораторных условиях..Известен способ определения фагоцитарно-бактерицидной активности лей- о коцитов в препарате крови с последуюцим внесением в него микробной взвеси, окрашиванием, микроскопированием и определением фагоцитарной активности по времени и количеству 15 микробных клеток, поглощенных нейтрофилами,.и бактерицидной активности по соотношению убитых ко всем поглоценным бактериям (11 . Однако известный способ недостаточио объективен и чувствителен, потому что исследуются только активные. лейкоциты, обладающие достаточной адгезивностью к нокровному стеклу, другая большая часть лейкоцитов также характеризующая
25 защитные способности организмов, не прилипает к. стеклу из-за большой адгезивности к фибриновым волокнам в процессе образования сгустка, -что создает условия недостоверной оценки фагоцитарно-бактерицидной функции нейтрофилов.
Целью изобретения является упроцение и повышение чувствительности способа.
Это достигается тем, что по предлагаемому способу исследованию подвергают мазок крови, взятой из пальца, препарат высушивают, н аносят на него взвесь бактерий в растворе, содержащем декстран и зеленый прочный
FGF, далее после скрашивания препарат инкубируют и охлаждают перед микроскопированием.
Способ осуществляют следующим образом. На трех предметных стеклах иэ равных объемов крови, взятой из пальца, делают мазки. Их высушивают при комнатной температуре в течение 3 мин накладывают на каждый специально силиконированное покровное стекло с каплей 0,001 мл взвеси бактерий (в отношении 20: 1 к нейтрофилу) в определенной смеси растворов, Полученный препарат герметизируют быстросохнуцим лаком по краям покровного стекла, термостатируют при 37 С в течение
7-21-60 мин и через указанное время, предварительно охладив в течение минуты при 4 С для стабилизации про709063
Здоровые
j 2
Больные
Показатель
38, 9+О, 82 32, 4+0, 79
40, 4+О, 88
34, 1+0,74
Фагоцитарный
Фагоцит арнае число
1,95+0,16 2,16+0,13
3,23+0,21
3,27+0, 19
Индекс завершенности фагоцитоза
69 2 4+2, 37 74,1 4-"2, 88 44, 36+1, 85 58, 74+2, 12 цесса фагоцитоза, исследуют под иммерсией в поле зрения светового микроскопа, где отчетливо видны гранулоциты, содержащиеся в.них живые бактерии розового цвета и убитые бактерии темно-зеленого цвета. Этот эФФект изучен . при действии катианного белка гранулоцитов в растворах, содержащих (50-100)(500-1000) мг/мл на 106-10 бактерий
Е.кали, и последующем посеве и подсчете колоний на чашках Петри. Таким об-. разом, в предлагаемом способе представ ляется возможным простым приемом по цвету бактерий через определенное фиксированное время определять Фагоцитaðно-бактерицидную функцию нейтрофилов.
В условиях санаторного комплекса пионерских лагерей были изучены,фагоПолученные данные указывают на та, 35 что фагацитарный показатель и фагацитарное число детей, Гольных бранхиальной астмой, достоверно отличаются (Р < 0,05) в начале и после проведенного лечения от этих показателей здоровых детей, при этом самое большое отличие в индексах завершенности фагацитаза P < 0,001. В результате проведенного санаторно-курортнога лечения бактерицидная функция ьейтрайилав детей, .бальных бронхи-45 алькой BcTMof повысилась (P 0,02), но осталась ниже показателя здоровых детей Р .= О, 01, чта указывает на достаточную информативность предлагаемого способа при изучении даже одного $() периода инкубации. В процессе проверки чувствительности метода применяли раз" ные Гактерии и штаммы: Е.коли - K12S, Е.коли М, Saureus. Пр!-. этом отмечалась равнозначность получаемых результатов.55
Предлагаемый способ высоко специфичен с незначительной интерференцией веществ, применяемых в растворах с бактериальной взвесью. При определении воспроизводимости в группе здоровых детей предел чувствительности не пре- ®О вышал величины двух среднеквадратичных отклонений, Коэффициент вариации, отражающий васпроизводимость способа, определенный для группы здоровых и больных 65 цитарно-бактерицидные свойства нейтрофилов в двух группах детей одного возраста 9-10 лет,после предварительного клиника-лабораторного обследования, Первую группу составили дети, бальные бронхиальной астмой инфекционно-аллергической формы средней тяжести в стадии ремиссии, вторую группу— практически здоровые, которая служила контролем. Исследование проводилось дважды: перед и после проведенного санаторно-курортного лечения.
В таблице приводятся данные, полученные и обработанные статистически для 21 минуты инкубации. Испольэовали Е. коли — К 12: Р 1 в начале адаптационного периода да начала лечения, Р 2 — данные в конце заезда после санаторно-курортного лечения. детей (при n=14) оказался равным
V--4,1Ъ и 3,6Ъ соответственно. Коэффициент корреляции рангов Спирмена,. характеризующий степень статистичес-. кой связи, оказался равным P=0,95, что указывает на правильность результатов, получаемых заявленным способом.
Применение предлагаемого способа и санаторно-курортных условиях подтверждает диагностическую ценность получаемых результатов, отражающих неспецифическую реактивность организма, способ прост и в выполнении, а также более информативен ° Получаемые результаты отражают изменение фагоцитарно-бактерицидной функции нейтрафилов под воздействием различных факторов. Наличие простого для тех:нического исполнения и достаточно информативного способа позволит как с диагностической,. так и с прогностической целью шире проводить анализы ao scex лечебна-профилактических учреждениях, имеющих обычные лаборатории как стационарного, так и портативного типа при наличии обычнога светового микроскопа, при этом затрата времени лаборантом на выполнение анализа сокращается на 70% в сравнении с выполнением его известным способом, требующим к тому же сложного оборудования.
709063
Формула изобретения
Составитель С. Малютина
Редактор Л,Новожилова Техред Н.Ковалева Корректор Е.Папп
Заказ 10041/5 „Тираж 673 Подписное
ЦНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий
113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5
Филиал ППП Патент, r.Ужгород, ул.Проектная, 4
Применение предлагаемого способа позволит получать диагностически ценные результаты при повышенной производительности труда лаборантов беэ увеличения дополнительных штатов.
Способ определения фагоцитарнобактерицидной активности лейкоцитов в препарате крови с последующим внесением в него микробной взвеси, окрашиванием, микроскопированием и определением фагоцитарной активности по времени и количеству микробных клеток, поглощенных нейтрофилами, и бактерицидной активности по соотношению убитых ко всем поглощенным бактериям, отличающийс ятем,что,с целью упрощения и повышения чувствительности способа, исследованию подвергают мазок крови, взятой из пальца, препарат высушивают, наносят на. него взвесь бактерий э растворе, содержащем декстран и зеленый PGF, далее после скрашивания препарат инкубируют и охлаждают .перед микроскопиров ание м.
Источники информации, принятые во внимание при экспертизе
1. .*Г, of 1пюгеп stethool s
1977, vol 17, Р 3-4, р 241-247.
