Способ определения количества куриного пепсина в молокосвертывающих препаратах

 

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союз Советскими

Социалистических

Республик (61) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 160278 (21) 2579439/28 — 13 (51)М

Ъ с присоединением заявки ¹â€” (23) Приоритет

A 23 С 19/02

G 01 N 33/16

Государственный комитет

СССР оо делам изобретений и открытий

Опубликовано 1505.80. Бюллетень ¹ 18

Дата опубликования описания 20. 05. 80 (53) УДК 637.333 (088. 8) (72) Авторы изобретения

И. П. Вузов, Н. С. Новгородова, М. С. Уманский, В. К. Неберт и P. П. Малоземова (71) Заявитель

Всесоюзный научно-исследовательский институт маслодельной и сыродельной промышленности (54) СПОСОБ ОПРЕ((ЕЛЕНИЯ КОЛИЧЕСТВА КУРИНОГО

ПЕПСИНА В МОЛОКОСВЕРТЫВАЮЩИХ ПРЕПАРATAX

Изобретение относится к молочной промышленности и может быть использовано в лабораториях заводов медицинских препаратов, заводов сычужного фермента и других органиэаций, производящих молокосвертывающие ферменты для сыроделия и контролирующих его качество.

Непрерывный рост объема производства сыра с оцной стороны и ограничен-10 ность сырьевых ресурсов дчя производства сычужного фермента — с другой явились основным фактором поиска протеолитических энзимов для замены дефицитного сычужного фермента. Одним 15 из результатов проведения указанных работ явилось создание ферментного препарата для сыроделия, представляющего собой смешанный препарат состава сычужной фермент — куриный пепсин. 20

При составлении нормативно-технической документации на производство препарата указанного состава выявилась необходимость разработки метода контроля препарата.

Наиболее близким решением технической задачи í предложенному является способ определ ния сы нужного фермента и пепсина н смешанном препарате, предусматрннаки,нi> инес..ение иссле- 30 дуемого и эталонного ферментов в молоко и установление продолжительности свертывания молока под действием смешанного препарата и фермента эталона и определение ферментов расчетным путем (1).

Недостатком способа является то, что он недостаточно точен, так как при рН 5,0-5,4 свиной пепсин, как один иэ компонентов, частично восстанавливает свою активность.

Целью изобретения является повышение точности определения.

Поставленная цель достигается тем, что в качестве эталона используют куриный пепсин, а ингибирование ферментов осуществляют в молоке путем выдержки их в течение 5-15 мин в фосфатном буфере при рН 7,4 и температуре

40-43 С, при этом содержание куриного пепсина определяют по формуле (I)

Т оо9Ь .(1)

2 где Х вЂ” содержание куриного пепсина в бинарном ферменте;

Т вЂ” время свертывания молока под ( действием куриного пепсина;

То — время свертывания молока под действием моле косвертывающего препарата .

733614

Ингибирование сычужного или гоняжьего Пепсина осуществляют в буферном растворе, имеющем рН 7, 4 и температуру 40-43 С. Величина рН 7,4, как пока= зали проведенные исследования, является наиболее оптимальной для полного ингибирования сычужного фермента (при 40 С) и говяжьего пепсина (при

43ОC) . В то же время при указанных режимах (рН 7, 4, Т 40-43 C) куриный пепсин инактивируется незначительно (до 5 — 15%) °

Применение в качестве эталона куриного пепсина,подвергнутого аналогичной обработке, позволяет учесть его частичную инактивацию при обработ ке смешанного препарата и повышает точность способа.

Сущность способа заключается в следующем.

Взятые в равных количествах смешанный препарат и куриный пепсин растворяют в одинаковых количествах на

1/15 М фосфатном буфере, имеющем рН

7,4, выдерживают параллельно при 4043 С.в течение 5-15 мин. После этого по 0,5-1,0 мл раствора каждого ферментного препарата вносят в одинаковые объемы молока и определяют продолжительность свертывания молока.

Содержание куриного пепсина в смешанном исследуемом препарате рассчи- .тывают по формуле (1). у = 100 — 48 = 523

g 2q -уса г . = г -, =:- С io 45

Содержание говяжьего пепсина

Формула. изобретения

Концент рация к рино о пепсЖа в всв!

Р мг/мл

44,0

43 . .6

44,8

46,0

42,2

4,4

8,72

13,58

18, 39

21 10

5 4

9,72

14 58

19,39

22, 10

3 3

2 5

2,0

Содержание второго компонента (сычужного фермента или говяжьего пепсина) определяют по формуле (2) У=400 — Х "(2)

Достоверность расчета содержании куриного пепсина по приведенной формуле подтверждается проведенными исследованиями.

Известно, что С вЂ (Т-t) = const (3) где С вЂ” концентрация фермента1

Т вЂ” ; свертывания молока;

ВРЕМЯ ПЕРВОЙ (СКРЫтой) СтаУРПв ферментации.

Результаты исследований приведены в таблице (t определено по графической зависимости времени свертывания от обратной величины концентрации в фермен1ов).

Как видно из таблицы, время свертывания молок" практически пропорционально концентрации куриного пепсина.

Пример 1. Приготовили 1Ъ-ный раствор смешанного препарата, содер5 жащего в своем сос-аве сычужный фермент и куриный пепсин, и 1о-ный раствор куриного пепсина на 1/15 фосфатном буфере, имевшем рН 7,4 (18 ч. раствора, содержащего 11, 876 r Na> НРО4 «2Н, О) в 1 л дистиллированной воды, смешивают с 2 ч. раствора, содержаще-. го 9,078 КН РО4 в 1 л дистиллированной воды.

По 10 мл этих растворов выдерживали в течение 12 мин при 40 С.

По истечении этого времени по 1 мл раствора внесли в две пробы молока (по 50 мл каждая).

Время свертывания молока с куриным пепсином составляет 12 мин, со сме20 шанным препаратом 25 ьин.

Содержание куриного пепсина в смешанном препарате подсчитывают по формуле

Х= — =48

424оо

Содержание сычужного фермента

П р и и е р 2. Приготовили 1%-ный щ раствор смеш-.ííî-о препара — à, содер>кащего куриный и. говяжий пепсины и

1Ъ вЂ” ный раствор куриного пепсина на

1/15 фосфатном буфере, имевшем рН 7,4.

По 10 мл этих растворов выдерживали в -ечение 5 мин- при 43 С.

По истечении этого времени по

1 мл раствора внесли в две пробы молока (по 50 мл каждая).

Время свертывания молока с куриным пепсином равно 5,23 мин, со смешанным препаратом 10,45 ми<=.

Содержание курина †.о пепе-;на. в смешан-.:oû препарате

/ у = 100 — 50,,0- = 49,95%

Таким образом, предлагаемый способ является нетрудоемкиь. и повышает точНОСТЬ ОПРЕДЕЛЕН"..и .СС <".аСпособ определения количества куриного пепсина в мслокосвертывающих препаратах, предусматривающий ингибирование ферментов,, в. .-е ение исследуемого и эталонного c";"рментс"= в молоко и установлени== п=одолжительности

СВЕРТЫВаНИЯ МО::"С.г:;;. . ДЕЙСТВИЕМ ИСсле; уемого преп.=.:. ; †.,га . : фермента-эталона,- а последуют им Определением ферментОв расчетным путем,, 0 T л и ч аю шийся тем, что, с целью повышения точности, в качестве эталона

733614 где Х содержание куриного пепсина в бинарном ферменте;

Составитель И. Привалова

Редактор Н. Потапова Техред A. Щепанская Корректор Н Стец

TNpB 569

Подписное

Заказ 19 32/5

ЦНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва„- Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП Патент, r. Ужгород, ул. Проектная, 4 используют куриный пепсин, а ингвбирование ферментов осуществляют в молоке путем их выдержки в течение 5-15 мин в фосфатном буфере при рН 7,4 и температуре 40-43 С, .при этом содержание куриного пепсина определяют по формуле т 4ОО

Х " o т

Т вЂ” время свертывания молока под действием куриного пепсина;

Т вЂ” время свертывания молока под воздействием молокосвер5 тывающего препарата.

Источники информации, принятые во внимание при зкспертиэе

1. Авторское свидетельство СССР

9 309691, кл. A 23 С 9/12, 197) прототип).