Способ выявления хроматина

 

° Мэ ю ВСЕСОЮЗНАЯ ;:1.,:(улс, Союз Советскик

Социалистическик республик 433660

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

4r

„.ъ г

« ««« " (6() Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 06 01.78 (2() 2565632/28-13 с присоединением заявки № (23) Приоритет

Опубликовано 15, 05.8Q,Бюллетень № 18

Дата опубликования описания 15.05.80 (51)NL. Кд.

А 61 В 10/00

G 01N 1/28 гасударственный камитет ссср на денем изобретений и аткрытнй (53) YAK 615.

° 475(088. 8) Л, Е. Немировский, Э. М. Коган, Н. М. Вахтель, В. П. Гартштейн,И. Г. Суворова и А. В. Жукоцкий (72) Авторы изобретения

Второй Московский ордена Ленина государственный медицинский институт им. Н. И. Пирогова (7l) Заявитель (54) СПССОБ ВЫЯВЛЕНИЯ ХРОМАТИНА

Изобретение относится к области цитологии и биохимии и может быть использовано в клинической практике при медикогенетическом консультировании, при диагностике новообразований.

Известей способ выявления хроматина при использовании цитологических и био.химических препаратов, включающий фиксацию препаратов, их обработку защитным веществом, гидролиз и окраску красителем (1)

Однако известный способ вызывает потери и нарушение структуры хроматина и не обеспечивает высокого качества препаратов.

1f

Целью изобретения является повышение качества препаратов за счет предотвращения потери хроматина и сохранение его структуры.

Эта цель достигается тем, что в качестве защитного вещества используют раствор .хромовых квасцов, причем обработку проводят в течение 2-8 ч при рН-1,65-1> 75.

Способ осуществляют следующим образом.

Для исследования ДНК ядерных эритроцитов голубя используют стандартную методику получения мазка цельной периферической крови. Полученный: препарат . подсушивают под вентилятором, фиксируют в абсолютном метаноле в течение 1 ч и обрабатывают в растворе хромовых квасцов. Раствор хромовых квасцов готовят следующим образом: 5%ный раствор хро» мовых квасцов кипятят в течение 4-10мин и медленно охлаждают до комнатной температуры, затем доводят рН раствора до

1,65 с ломошью соляной кислоты (НС ) и едкого натра (г(аОН). Обработку сухих препаратов проводят в избытке хромовых квасцов в течение 2 ч. После этого препараты промывают в проточной во1 де, высушивают и проводят кислотный гидролнз в 5н. при 20 С.

Полученные препараты исследуют с помощью автоматизированной прецезионной

73:3660

1,65 25+2

6,8 30+ 2

1,6 300+10

1 65 370+10

1, 75 320+10

1, 55 260+ 10

Раствором .хлорида .хрома

1,65 280+7

1 8 270+7

Цб аб з сканирующей микрофотометрической системы микроскоп-цитофотометр 05 .

Результаты эксперимента представлены на чертеже в виде кривых ультрафиолето» мой абсорбцИи QHK клеточньгк ядер в процессе кислотного гидролиза, где 1— кривая гидролиза без предобработки; 2кривая гидролиза с предобработкой полиэтиленгликолем; 3» кривая гидролиза с предобработкой хромовыми квасцами (P- Тp величина абсорбции, с --время). длительность плато кривых гидролиэа .характеризует устойчивость flHK к фрагментации.

Аналогичные эксперименты были проведены при РН раствора хромовых квасцов 1,6 и 1,75, а также при использовании при тех же рН другой соли хрома, хлорида .хрома (C9CХ ).

Результаты экспериментов сведены в таблицу в виде длительностей плато кри- уо вых гидролиза, полученных в экспери- . ментах., Без предобработки (} 0)

Полиэтил енгликоп ем

5%ным раствором .хромовых квасцов

Предлагаемый способ удлиняет плато кривой Гидроли бл по крайней мерв В 1 э ра Ф, что свидетельствует о значительном увеличении резистентности хроматина. Аналогичные результаты получены на ядрах гепатоцитов крысы и голубя, а также на лейкоцитах голубя и человека.

Предлагаемый способ сохраняет структуру .хроматина в широком интервале времени гидролиза, позволяет повысить качество препарата и может бьггь и спользован в практической медицине, обеспечивая .хорошую воспроиэводимость результатов цитодиагностического анализа.

Формула изобр ет ени я

Способ выявления хроматина при исследованиях цитологических и биохимических препаратов, включающий фиксацию препаратов, их обработку защитным веществом, гидролиз и окраску красителем, о т л и ч а ю ш и и с я тем, что, с целью повышения качества препаратов за счет предотвращения потери хроматина и сохранения его структуры, в качестве защитного вещества используют раствор хромовых квасцов, причем обработку проводят в течение 2-8 ч при рН 1,65-1,75, Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

q p y ЕИ МТ аоК р.тт." Pe unpen ac4d 1 гаММв ", Ьций,Ю 16,100.

ШИИПИ Заказ 1938/7

Тираж 673 11олписное

Фил иал Г1111 " Па тент, е . УжГОТх)п,ул.111юек гпая, 4