Способ количественного определениягликогена b крови
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
Союа Сеаетскик
Социалистических
Ресвублик
К АВТОРСКОМУ СВИ ВТВЛЬСТВУ (61) Дополнительное к &IT. саид-ву (22)Заявлено 30.07.79 (21) 2793881/28-13 (5 )+ с присоединением заявки Йа (23) Приоритет
G N 33/66
Государстваявмй квинтет
СССР яе аеааи изобретения н вткРытяя (53) УДК 612;12.2 (088.8) Опубликовано 230431. Бюллетень ЙЯ 15
Дата опубликования описания 23. 04 . 81 (72) Автор изобретения
П.M. Бабаскин
2-й Московский ордена Ленина государств медицинский институт им. Н.М. Пирог (71) Заявитель (54) СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ
ГЛИКОГЕНА В КРОВИ
Изобретение относится к медицине, а именно к клинической биохимии для изучения углеводного обмена.
Известен способ количественного определения гликогена в крови путем ее кипячения в присутствии КОН с последующим охлаждением смеси, обработкой ее этиловым спиртом, после чего промывают полученный осадок гликогена этиловым спиртом, раство- 1© ряют его в горячей воде, обрабатывают
Н S04 и фотоколориметрируют 31) ..
Недостаток известного способа низкая точность количественного определения гликогена в крови. 15
Цель изобретения — повышение точности способа.
Указанная .цель достигается тем, что в способе количественного определения гликогена в крови путем ее 20 кипячении в присутствии КОН с последующим охлаждением смеси, обработкой ее этиловым спиртом, после чего промывают полученный осадок гликогена этиловым спиртом,- растворяют его в горячей воде, обрабатывают H 7:30 40:5,7, а полученную после центрифугирования надосадочную жидкость обрабатывают раствором NaCI u этиловым спиртом, извлекают из нее гликоген, обрабатывают его концентрированной HgSOy и реактивом Антро» на. Способ осуществляют следующим образом. Кровь кипятят с 40% раствором КОН, затем смесь охлаждают и добавляют в нее этиловый спирт в присутствии йаС1, при етом кровь, щелочь, этиловый спирт и хлористый натрий берут s соотношении 1:5; 7:30;40:5,7. Полученную после центрифугирования надосадочную жидкость обрабатывают раствором МаС! и этиловым спиртом, извлекают нз нее гликоген, обрабатывают его концентрированной H 50 и реактивом Антрона. Пример. В центрифужной пробирке 0,1 мл капиллярной крови смешивают с 0,5 мл 40% раствора KOH. Смесь ставят на 45 мин в кипящую водяную баню, потом охлаждают до комнатной температуры, прибавляют ,0,5 мл насыщенного раствора NaCI u ;3 мл этилового спирта, энергично 824052 Формула изобретения Составитель 10. Алмазов Техред Н.Майорош Корректор М. Коста Редактор В. Иванова Тираж 907 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5 Заказ 2099/64 Филиал ППП "Патент", r. Ужгород, ул. Проехтная,4 смешивают встрахиванием 20 раз.Взятые количества исходных реагентов соответствуют соотношению 1:5 и 7:30. Смесь помещают на 30 мин в холодильник, потом центрифугируют 30 мин при 1500 об/мин. Надосадочную жид кость сливают в другую центрифужную пробирку и повторно извлекают из нее гликоген. Для этого к надосадку прибавляют 0,5 мл насыщенного раствора NaCI, 1 мл этилового спирта, и встряхивают 20 раз. Потом ставят на 10 мин в холодильник, центрифугируют 30 мин, надосадочную жидкостЬ выбрасывают, а осадки дважды промывают 2-мя мл этилового спирта. В полученных осадках гликогена проводят количественный анализ. Для этого каждый осадок растворяют в горячей воде 0,5 мл, добавляют по 1 мл концентрированной H Антрона, который готовят следующим образом: смешивают 34 мл воды и 66 мл концентрированной H В качестве компенсационной жидкости берут контроль, который готовят так же, как опытные пробы, только вместо раствора гликогена берут 0,5 мл воды. Таким образом, в исследуемой крови определен гликоген в количестве 777 мг/л. Из них 666 мг/л в осадке обработанной крови и 111 мг/л в насадочной жидкости. Предлагамый способ повышает точность количественного определения гликогена в крови в 5-7 раз, что подтверждено на 560 пробах крови клинически здоровых людей (365) и больных различными психозами (195), при этом в 12-14 раз сокращается время на одно исследование. Способ количественного определеt5 ния гликогена в крови путем ее кипячения в присутствии КОН с последующим охлаждением смеси, обработкой ее этиловым спиртом, после чего промывают полученный осадок гликогена этиловым спиртом, растворяют его в 20 горячей воде, обрабатывают Н 50 и фотоколориметрируют, о т л и ч а юшийся тем, что, с целью повышения точности способа, этиловый спирт добавляют к охлажденной смеси в при4 д5 сутствии NaCI, при этом кровь, щелочь, этиловый спирт и хлористый натрий берут в соотношении 1."5, 7:30 40:5,7, а полученную после центрифугирования надосадочную жидкость обрабатывают раствором NaCI и этиловым спиртом, извлекают из нее гликоген, обрабатывают его концентрированной H Источники информации, принятые во внимание при экспертизе 1. Справочник. Биохимические методы исследования в клинике. Под ред. Покровского. 1969, с. 230-231.
