Способ выделения уробилина
Союз Советскик
Социалистических
Республик
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
Н АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 230679 (21) 2814009/28-13 (51) N с присоединением заявки ¹ (23) Приоритет
G 01 N 33/72
Государственный комитет
СССР но делам изобретений н открытий
Опубликовано 300431.fБюллетень № 16 (53} УДК 612.015.4 (088.8) ч
Дата опубликования описания 3004.81 (54) СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ УРОБИЛИНА
Изобретение относится к области медицины и может быть использовано в лабораторной диагностике.
Известен способ вьщеления уробилина путем экстракции хлороформом с последующим выпариванием последнего расворением в спирте образовавшегося осадка, обработкой полученного раствора соляной кислотой в присутствии хлорного железа при повышенной температуре (1).
Однако известным способом трудно выделить D-уробилин, Цель изобретения — выделение D уробилина.
Эта цель достигается тем, что вьщеляют уробилин путем экстракции хлороформом с последующим выпариванием последнего растворением в спир- 20 те образовавшегося осадка, обработкой полученного раствора соляной кислотой в присутствии хлорного железа при повышенной температуре, перед экстракцией в пробу добавляют хлорис- 25 тый барий, из образовавшейся смеси путем центрифугирования удаляют осадок и экстракцию ведут при рН 4,5.
Способ осуществляют следующим образом. ю
Берут 10 мл мочи, подкисляют ее несколькими каплями ледяной уксусной кислоты до рН 4,5 для улучшения экстракции уробилина, Добавляют
2,5 мл хлористого бария, чем осаждают билирубин, большое количество которого мешает ходу мезобиливиолиновой реакции. Выпавший осадок центрифугируют 15 мин при скорости
3000 об/мин. Надосадочную жидкость зкстрагируют в течение 5 мин, Хлороформенный экстракт концентрируют и выпаривают при 75 С на водяной бане.
Для проведения мезобиливиолиновой реакции осадок растворяют в 5мл этилового спирта, добавляют 0,5мл 100мг % раствора хлорного железа и 6 М соляной кислоты. Пробирку помещают в водяную баню с температурой 72 С на
15 мин для полного окисления уробилиновых тел хлорным железом.
Пример . Больная Б» 57 лет.
Первоначальный диагноз: вирусный,гепатит. Болезнь протекает остро, наблюдается желтуха, боли в жийоте, тошнота, рвота, зуд кожи, повышенная температура. С диагнозом вирусный гепатит больная госпитализирована в клинику, где поставлен диагноз-рак головки поджелудочной железы, 826245
Формула изобретения
Составитель С.Малютина
Редактор E.Äè÷èíñêàÿ Техред Н.Ковалева
Корректор М.Коста:
Заказ 2368j33 Тираж 907
ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий
113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5
Подписное
Филиал ППП Патент, г. Ужгород, ул, Проектная, 4
У больной берут 10 мл мочи на обследование для выявления в ней
D-уробилина.. Предварительно осаждают билирубин, добавляя хлористый барий, с последующим центрифугирова-. нием при 3000 об/мин в течение 15 мин
Присутствующи@ в моче билирубин может вступить в ход Меэобиливиолиновой реакции и тем самым, мешать выявлению П-уробилина. Мочу, свободную от билирубина, подкисляют строго до
gH 4,5 . Именно при этом значении
:рН достигают полную экстракцию Dуробилина. Экстракцию проводят хлороформом в 2 этапа по 10 мл, Весь хлороформ концентрируют в одну пробирку, которую помещают в водяную баню при 75 С до полного выпаривания. Для проведения мезобиливиолиновой реакции осадок растворяют в
5 мл. этилового спирта. Берут строго 0,5 мл 100 мг Ъ раствора хлорного железа в б M соляной кислоты и,цобавляют к уробилину, растворенному в 5 мл этилового спирта. Для дальнейшего развития реакции пробирку помещают в водяную баню с температурой
72 С на 15 мин. В пробирке наблюда ется бледно-зеленая окраска. Результат
/ реакции оценивают на спектрофотометре СФ-16. На волне 495 нм регистрируют содержание 6-уробилина 0,125, на волне 540 нм — содержание i-уробилина 0,070,на волне б40 нм — содержание,Р-уробилина 0,087 оптических единиц.,В процентном соотношении это выражается слецующим образом: 6- уробилин 44%, i-уробилин
25%, D-уробилин 31%. Выделены все три фракции уробилинов, где содержание D-уробилина в 15Ъ и более указывает на наличие подпеченочной желтухи опухолевого генеза.
Больному на основании клинических данных, данных лабораторного обследования,поставлен диагноз — рак roловки поджелудочной железы, с таким диагнозом больная направлена в хирургическую клинику. б
Предлагаемым способом исследования биологических жидкостей на уробилин проведено 1594 исследования во всех 1594 случаях выделен D-уробилин различной концентрации. Моча больных вирусным гепатитом (1272 исследования) содержала 15% D-уроби-. лина и меньше и определялась 2-3 дня, затем D-уробилин исчезал совсем. В моче больных подпеченочной желтухой опухолевого генвза содержание Dуробилина равнялось 15% и более и с течением времени возрастало (322
15 исследования).
Предлагаемый способ позволяет выделять 0-уробилин и может быть широко использован в лабораторной диагностике подпеченочной желтухи
2О опухолевого гечеза.
Способ выделения уробилина путем экстракции хлороформом с последующим выпариванием последнего растворением в спирте образовавшегося осадка, обработкой полученного раствора соляной кислотой в присутствии хлорного..железа при повышенной температуре, отличающийся тем,. что, с целью выделения D-уробилина, перед экстракциай в пробу добавляют хлористый барий, из образовавшейся смеси путем центрифугирования удаляют осадок и экстракцию ведут при рН 4,5.
Источники информации, принятые во внимание при экспертизе
40 l. Baumgartel T., Physiologic
und 8i1irubinsstoffurchsele aIs
grundIagen der Ikterusfors chubg, Stuttgart, 1950.
