Способ получения вещества,угнетающего лейкозные клетки

 

(i i) 839090

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союз Советских

Социалистических

Республик (61) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 17.04.79 (21) 2757409/28-13 (51) Ч. Кл."

А 61К 35 28 с присоединением заявки № (23) Приоритет (43) Опубликовано 07.07.82. Бюллетень ¹ 25 (45) Дата опубликования описания 07.07.82

Государственный комитет (53) УДК 61545:615..34 (088.8) по делам изобретений и открытий (72) Авторы изобретения (71) Заявитель

А. И. Свириовский, T. В. Шиманская и В. И. Левин

Белорусский научно-исследовательский институт переливания крови (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ВЕЩЕСТВА, УГНЕТА

ЛЕЙКОЗНЫЕ КЛЕТКИ

Изобретение относится к медицине и касается получения новых биологически активных веществ.

Известен способ получения вещества, угнетающего лейкозные клетки, путем обезвоживания, обезжиривания ткани селезенки млекопитающих с последующей экстракцией водой и лиофилизацией (1).

Однако известный способ не позволяет получить целевой продукт, обладающий одновременно стимулирующим действием на нормальные клетки.

Цель изобретения — получение целевого продукта, обладающего одновременно стимулирующим действием на нормальные клетки.

Цель достигается тем, что способ получения вещества, угнетающего лейкозные клетки, осуществляют путем обезвоживания, обезжиривания ткани селезенки млекопитающих с последующей экстракцией водой и лиофилизацией, предварительно перед извлечением селезенки в организм животного вводят лекарственный препарат, преимущественно циклофосфат, разрушающий ткань селезенки.

Способ осуществляют следующим образом.

Телятам однократно вводят препарат, разрушающий ткань селезенки (цпклофосфат, гидрокортизонацетат, дегранол), в дозе на 20% ниже максимально переносимой.

Селезенку извлекают через 7 — 15 дней после обработки животных, когда в организ5 ме полностью пнактивированы введенные препараты и наиболее выражены репаративные процессы. Всю процедуру выделения вещества ведут прп +3 —,-4 . Ткань селезенки после удаления соединительной и

)О жировой ткани механически пзмсльчают путем гомогенпзацин в присутствии ацетона, обезжиривают и обезвоживают путем обработки ацетоном в соотношении 1: 3 в течение 18 — 24 ч и последующих промыва15 ний ацетоном и эфиром. Получеш)ьш сухой порошок экстрагируют 15-кратным объемом воды в течение 12 — 24 ч. Экстракт лиофнлизпруют. Выход вещества по весу составляет 4 — 5% от веса взятого органа, Полу20 ченпос вещество представляет собой аморфный порошок розоватого цвета, хорошо растворимьш в воде, буферных растворах и питательных средах. Вещество нетокси шо.

Вещество обладаcT способностью ингнбиро25 вать синтез ДНК в лейкозных клетках н стимулировать его в нормальных клетках.

Пример. Трем 6 — 7-месячным телятам весом 100 — 120 кг вводят внутримышечно циклофосфан из расчета 30 мг/кг веса. Чер0 рез 10 дней животных забивают и быстра

83!)О!) О

Формула изобрстепи»

Составитсл1 С. Малютина 1 ехред А. Камышникова

Редактор Е, Хейфиц

Корректор Е. Хмелева

Заказ 1019/15 Изд. М 182 Тираж 717 Подписное

НПО «Поиск» Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, 7К-35, Раушская наб., д. 4/5

Типография, ир. Сапунова, 2 пзв 1ска!от eeaieзснку. В и пзкотсмпсрат1 1)пой камере при +3 — +4 селезенки освобождают от жира и соединительной ткани, взвешивают, заливают трехкратным объемом охлажденного до — 8 — 10 ацетона химически чистого и гомогенизируют в гомогснизаторе PT-1 3 мин при 8000 об/мин.

Гомогенат при постоянном помешивании оставляют на 20 ч при +3 — +4 . Затем фильтруют его через воронку Бюхнера под 10 вакуумом, промывают двумя объемами охлажденного ацетона трижды и однократно одним объемом охлажденного эфира для наркоза. Порошок высушивают на воздухе п сеят через капроновое сито. Из 1200 г 1> ткани селезенки получают 260 г порошка, который хранят при +3 — +4 . Затем к 1 г порошка добавляют 15 мл дистиллированной воды, гомогенизируют 5 мин (2 мин, перерыв 1 мин и затем еще 3 мин) в гомо- 20 генизаторе типа Поттера при 5000 об/мип.

Суспензию оставляют при +3 — +4 на

18 ч при постоянном помешивании, центрифугируют 2 ч при 45.000 g на центрифуге

ЦВР-1. Надосадочную жидкость подверга- 5 ют диализу при +3 — +4 против 200 объемов воды в течение 20 ч при помешивании.

Г1пализат цептрифугируют при 30.000 g

45 мин. Надосадочную жидкость фильтруют па холоде через мембранный фильтр с диа- 30 метром пор 0,6 мкм и лиофилизируют. Получа1от 0,23 г вещества из 1 г порошка. Ве1цество получают в виде аморфного порошка розоватого цвета. Вещество растворяют в питательной среде 199 для культивирова- 35 пия клеток. Исследования с помощью радиоизотов показали, что полученное вещество ингибирует синтез ДНК в лейкозных клетках на 80 — 88 /о н стимулирует его о

10 в нормальных клетках па 23 — 67/о.

Сilo< об позволясг получить веп1ес1во, hoторое угнетает пролиферацию лейкозных клеток и не только не угнетает пролиферацию нормальных клеток, но If оказывает стимулирующее действие на пих. Это позволяет использовать его в качестве средства для избирательной ингибиции лейкозных клеток и для стимуляции нормальных клеок. Использование стимулированной и репаративной регенерации в организме млекопитающих селезенки, ранее не применявшейся для получения веществ, противоположно действующих на нормальные и лейкозные клетки, открывает новый источник для получения биологически активных веществ, регулирующих в организме пролиферативные процессы в нормальной и лейKO3IlO1I TKa II II.

Способ получения вещества, угнетающего лейкозные клетки, путем обезвоживания, обезжиривания ткани селезенки млекопитающих с последующей экстракцией водой и лиофилизацией, отличающийся тем, что, с целью получения целевого продукта, обладающего одновременно стимулирующим действием на нормальные клетки, предварительно перед извлечением селезенки в организм животного вводят лекарственный препарат, преимущественно циклофосфат, разруlifaioIIIHA ткань сслсзсIIKII.

1 lсточппки информации, принятые во внимание при экспертизе

1. J. С. Idouck, Н., Jrauguin National Cancer Institute, Monograph, 1973, 38 с. 117—

122.