Способ получения белковых компонентовкрови

 

Союз Советских

Социалистических

Республик

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ПАТЕНТУ

<1>841572 (61) Дополнительный к патенту (51)М К, 3 (22) Заявлено 210778 (21),2639950/28-13 (23) Приоритет — (32} 25. 07. 77

А 61 К 37/14

Государственный комитет

СССР ио делам изобретений и открытий (33) США (31) --818920

Опубликовано 230681Бюллетень ¹ 23 (53) УДК 615..361..018.51/55 (088.8) Дата опубликования описания 23.0681

Иностранцы

Жак Жан джозеф Деленти Ричард Алэн Шэнф (США) (72) Авторы изобретения

Иностранная фирма

"Монсанто Компани" (США) (71) .Заявитель

54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БЕЛКОВЫХ КОМПОНЕНТОВ

КРОВИ

Изобретение относится к медицине> а именно к гематологии:

Известен способ получения белковых компонентов крови путем адсорбции крови на поперечно сшитых полиэлектролитах — сополимерах, содержащих. этилен и ангидрид малеиновой кислоты, с последующим элюированием целевого продукта с помощью физиологически приемлемой соли Г11.

Однако известный способ.не позволяет получить препарат высокой степени чистоты.

Цель изобретения — повышение степени чистоты препарата.

Поставленная цель достигается тем, что способ получения белковых компо- нентов крови осуществляют путем адсорбции крови на поперечно сшитых полиэлектролитах — сополимерах, содержащих этилен и ангидрид малеиновой кислоты, с последующим элюированием целевого продукта с помощью физиологически приемлемой соли, жидкую плаз- 25 му крови подвергают взаимодействию при рН 7,5-8,5 с полиэлектролитом в количестве 0,025-0,1% с содержанием боковых динизших-алкил-амино-низших-. .-алкильных функциональных групп. 3р

При этом динизший-алкил-амино низшая функциональная группа — диметиламинопропил.

Способ осуществляют следующим образом. . Исходную плазму получают в свежезамороженном виде. До фракционнрования полиэлектролитом-сополимером плазму оттаивают нагревом до 35ОС.

Соответствующий полиэлектролит-сополимер добавляют к плазме в концент- рации примерно 0,025-.0,1%, предпочтительно 0,035-0,05II при рН 7,5-8,5.

Смесь перемешивают около 10 мин, в это время препарат, содержащий фактор IX, селективно адсорбируется полиэлектролитным сополимером. Остающаяся жидкая плазма содержит факторы

II, IX X. Нерастворяющиеся в воде, поперечно сшитые полиэлектролиты-сополимеры содержат этилен и ангидрид малеиновой кислоты с содержанием боковых функциональных динизших-алкил-амино-низших алкильных групп.

Основной сополимер, содержащий этилен и ангидрид малеиновой кислоты (АМК), получают взаимодействием этилена и ангидрида малеиновой кислоты в присутствии перекисного катализато841572 ра в соответствующем растворителе.

Сополимер предпочтительно содержит, в основном, эквимолярные количества этиленового и ангидридного остатков.

Основной сополимер типа АМК можно подвергать взаимодействию с низшим-алкил-амино-бис-низшим алкил-амином, содержащим две первичные аминогруппы с получением поп чно сшитого сополимера типа ANK. оковые функциональ(ные динизший-алкил-амино-низшие алкильные группы можно добавлять в поперечно сшитый сополимер путем взаимодействия динизшего-алкил-аминонизшего алкил-амина с частью всего количества остающихся ангидридных групп полимера типа АМК.

Г!редпочтительно полиэлектролитсополимер также переводят в соль хлористоводородной кислоты.

Предпочтительной функциональной динизший-алкил-амино-низшей алкильной группой является диметиламинопропил, предпочтительным сшивающим.агентом. — метилиминобиспропиламин.

Предпочтительным полиэлектролитом-сополимером является такой, который содержит около 5 метилиминобиспропиламиновых сшивающих групп и около 90 боковых диметиламинопропиламиновых функциональных групп на 100 единиц ангидрйда малеиновой кислоты в полимере типа АМК.

Могут быть использованы и другие сшивающие агенты, например дивинилбензол и этилендиамин, а также функциональные группы, например диметиламиноэтил и диэтиламинобутил.

4 Одной единицей фактора IX считается количество этого фактора в 1 мл смешанной обыкновеннои цельной плазмы. Индекс степени чистоты рассчитывается как соотношение общего количества белка в исходной плазме и общего количества белка в целом препарате, содержащем фактор !Х, умноженное на соотношение единиц фактора IX ,в целевом препарате на основе фактора

IX и единиц фактора IX в исходной плазме.

Пример 2. Применяют 0,4 г/мл полиэлектролит-сополимера состава по примеру .1 для примешивания к обыкновенной человеческой плазме в течение

I(IQ 20 мин при рН 7,4 для выделения препарата, содержащего фактор IX, аналогично способу примера 1.

В таблице приведен!,! результаты замеров адсорбции факторов в пересчете

65 на исходную плазму.

После адсорбции фактора IX фактор

VI!I, оставшийся в плазме, может быть далее концентрирован и выделен известными способами. Адсорбированный препарат на основе фактора IX легко выделяется путем элюирования из полиэлектролита-сополимера промывкой водным раствором хлористого натрия молярности приблизительно 1-3. Около

0,035 вес.Ъ полиэлектролитного сополимера, содержащего около 5 метилиминобиспропиламиновых сшивающих групп и около 90 диметиламинопропиламиновых функциональных групп на

100 единиц ангидрида малеиновой кислоты. в сополимере типа AMK применяют для селективной адсорбции препа- рата на основе фактора IX при рН 8.

Адсорбированный препарат на основе белковых компонентов крови элюируют из полиэлектролита-сополимера промывкой 1,7 М NaCI при рН 6.Элюат затем диализируют против 0,1 М NaCI при 4 С и для хранения сушат замораживанием.

Пример 1. Полиэлектролит-сополимер, состоящий из продукта вза имодействия, в основном, эквимолярных частей этилена и ангидрида малеи новой кислоты (AMK), пОперечно сшитого метилиминобиспропиламином (МИБПА), подвергают взаимодействию с диметиламинопропиламйном (ДМАПА) с получением около 5 сшивающих

5 групп — МИБПА и около 90 боковых групп ДМАПА на 100 едиНиц ангидрида малеиновой кислоты в сОполимере типа

AMK с переводом затем в соль .хлористоводородной кислоты.

1 л обыкновенной плазмы человека с помощью одномолярной: гидроокиси натрия доводят до рН 8, добавляя затем 0,35 r полиэлектролита-сополимера, после чего смесь перемешивают

0 мин, фильтруют, и получают фильтl$ рат в виде обедненной фактором IX плазмы. Жмых промывают дистиллированной водой для удаления извлеченного из плазмы белка.

Полиэлектролит-сополимер можно также подвергать взаимодействию с помощью дивинилбензола в качестве средства, образующего поперечные связи, и диметил-аминоэтиламина в качестве поставщика функциональных групп. 5 Можно также испольэовать этилендиамино- и диэтиламинобутиламин в назван ных количествах.

Затем из полиэлектролитногo coIIo

3(3 лимера элюируют препарат на основе фактора IX, содержащего факторы II, IX и Х, промывкой 25 мл 1,7 N .хлористого натрия при рН б,0 (рН доводят до этого значения 0,1 N лимонной кислотой) в течение 20 мин. Сополимерный шлам фильтруют, фильтрат собирают в качестве желаемого состава на основе фактора !Х. В серии семи повторных прогонов фракционирования по 1 л, с применением предлагаеМого способа, получают в среднем 483 + 48 единиц белковых компонентов фактора IX на

1 л при степени чистоты с показателем 178 + 33.

841572

Фактор

Адсорбция, Ъ

Формула изобретения

Vl I

Vl l I

IX

Составитель С.Малютина

Редактор О.Черниченко Техред Н.Бабурка Корректор О. Билак

Заказ 4871/84 Тираж 687 Подписное

ВНИИПИ Государстванного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4

Эти результаты говорят о высокой селективности относительно адсорбции факторов II, IX u X при полном исключении факторов Vll u Vill в пересчете на соответствующие количества этих факторов в исходной плазме.

Пример 3. Согласно описанному в примере 1 способу, сополимер, содержащий этилен и ангидрид малеиновой кислоты (AMK) поперечно сшитый метилиминобиспропиламином (МИБПА) и затем подвергаемый взаимодействию с дибутиламинобутиламином (ДБАБА) вместо диметиламинопропилами на (ДМАПА) дает подобные результаты.

Предлагаемый способ позволяет получить препарат высокой степени чистоты.

1. Способ получения белковых компонентов крови путем адсорбции крови на поперечно сшитых полиэлектролитах-сополимерах, содержащих этилен и ангидрид малеиновой кислоты, с последующим элюированием целевого продукта с помощью физиологически приемлемой соли, о т л и ч а ю щ и и r. я тем, что, с целью повышения чистоты

15 препарата, жидкую плазму крови подвергают взаимодействию при рН 7,5-8,5 с полиэлектролитом в количестве от

0,025-0,1% с содержанием боковых динизших-алкил-амино-низших-алкильЩ ных функциональных групп.

2. Способ по и. 1, о т л и ч а юшийся тем, что динизшая-алкил-амино-низшая функциональная группа диметиламинопропил.

25 Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Патент США Р 3455001, кл. 260-112, 1969.