Способ получения кардиолипина

 

ОЙ ИСАЛ Е

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союз Советских

Социалистических

Республик

«>709092 (61) Дополнительное к авт. свид-ву— (22) Заявлено30.06.77 (21) 2502376/28-13 с присоединением заявки М— (23) Приоритет— (51)М. Кл.2

A 61 TC 37/2?

Государственный комитет

СССР

00 делан изобретений и открытий (53) УДК 615 45:

:615.34(088,8) Опубликовано 150180 Бюллетень No

Дата опубликования описания 20.01.80 (72) Авторы изобретения

Г.А. Сенников, В.И. Ивец, И.И, Гольбец, Г.Л. Орлова и Ю.М, Краснопольский

Завод бактерийных препаратов Харьковского научно-исследовательского института микробиологии вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова и Московский ордена Трудового Красного Знамени институт тонкой химической технологии им. М.В ° Ломоносова (71) Заявители (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ КАРДИОЛИПИНА

Изобретение относится к фармацевтической промышленности и касается получения активных реагентов, используемых в серодиагностике сифилиса.

Известен способ получения кардиолипина путем экстракции ацетоном измельченной ткани сердца крупного рогатого скота, обработки метанолом, осаждением целевого продукта раствором хлористого бария и выделения в виде натриевой соли (1) .

Однако изв ест ный способ является трудоемким и обеспечивает невысокий выход целевого продукта (0,35 r из

1 кг сердечной мышцы) с высоким содержанием примесей до 20-25%.

Целью изобретения является повышение качества, выхода целевого продукта и упрощение технологии произв одства .

Цель достигается тем, что экстракцию ацетоном проводят в атмосфере инертного газа при температуре от

-2 до -10 С и осаждение бариевой соо ли к ардиоли пина пров одят при температуре от +3 до +5ОС.

Способ осуществляют следующим образом.

Сердечную мышцу измельчают на гомогенизаторе, затем трижды проводят экстракцию ацетоном при температуре от -3 до -10 С. Из обезжиренной и обезвоженной сердечной мышцы трижды экстрагируют фосфолипиды метанолом при коь натной температуре. Общий метанольный экстракт фосфолипидов осаждают водным раствором хлористого бария. Полученный осадок растворяют в эфире и дважды переосаждают раствором хлористого бария в метаноле. Бариевую соль кардиолипина растворяют в смеси эфира и этанола и при помощи раствора хлористого натрия переводят в натриевую соль кардиолипина. К получевному раствору добавляют равный объем метанола, а затем кардиолипин осаждают из раствора в виде бариевой соли путем добавления водного раствора хлористого бария.

Процесс переосаждения кардиолипина и перевода его в натриевую форму повторяют. Полученный раствор натриевой соли кардиолипина в эфире обезвоживают сернокислым натрием. уПаривают в токе неокисляющего газа.

Осадок растворяют в абсолютном этаноле. Процессы осаждения и отделе?09092 формула изобретения

ЦНИИПИ Заказ 8632/5

Тираж 673

Подписное филиал ППП Патент, r. Ужгород, ул. Проектная,4 ния осадков солей кардиолипина проо. водят при температуре +3 до +5 C В целях уменьшения процессов окисления весь технологический цикл получения кардиолипина проводят н атмосфере неокисляющего газа (углекислого газа или азота) .

Пример. 1 кг обезжиренной ткани сердечной мышцы крупного рогатого скота измельчают на гомогенизаторе при 8000 об/мин с ацетоном, охлажденным до температуры -3 -10 С.

К полученному гомогенату добавляют ацетон до общего объема 2, О л (далее все объемы указаны на 1 кг сердечной ткани), и проводят экстракцию н реакторе с мешалкой при 150- (5

200 об/мин и температуре -3 -1.0 С н течение 3 ч в атмосфере неокисляющего газа. Ацетон удаляют фильтрацией. Весь процесс проводят трехкратно. 20

Осадок заливают 2,0 л метанола ы экстрагируют фосфолипиды н течение

3 ч н реакторе с мешалкой при 150200 об/мин в атмосфере неокисляющего газа при комнатной температуре. Метанол отделяют фильтрацией.

Процесс проводят три раза. Все три метанольных экстракта объединяют. Из охлажденных до +3 +5 C экстрактов осаждают кардиолипин, добавляя 60 мл водного раствора 20%-ного хлористого бария (н дальнейшем все процессыосаждения и отделения осадков проводят при 3-5 C) . Формирующийся 12-18 ч осадок отделяют центрифугированием и промывают 0,5 л метанола. Промытый

35 метанолом осадок бариеной соли кардиолипина растворяют н 100 мл эфира °

К полученному эфирному раствору добавляют два объема метанола, содержащего 0,2% хлористого бария, раэ- 40 мешивают в течение 30 мин и центрифугируют. Операцию понторякт. Осадок бариевой соли кардиолипина растворяют в 100 мл эфира и 20 мл этанола и добавляют 12 мл 18%-ного раствора хлористого натрия. Водно-спиртовой слой удаляют. К эфирному раствору добавляют 20 мл этанола и 120 мл

18Ъ-ного раствора хлористого натрия., Размешивают в течение 40 мин, после чего водно-спиртовой слой удаляют, операцию повторяют. Укаэанными опе— рациями переводят бариевую соль кардиолипина в натриевую.

К 100 мл эфирного раствора натриевой соли кардиолипина прибавляют

33 мл метанола (1/3 от объема эфира) . Осадок удаляют центрифугирон анием. К эфирно-метанольному раствору натриеной соли кардиолипина добавляют 67 мл метанола (так, чтобы соотношение эфир метанол было 1:1) и осаждают кардиолипин н виде бариеной соли добавлением 20 мл водного раствора 20% хлористого бария. Осадок формируется за 12-18 ч, после чего его промывают 100 мл метанола, центрифугируют и растворяют в 100 мл эфира. К полученному эфирному раствору бариеной соли кардиолипина добанляют 200 мл (2 объема) метанола, содержащего 0,2Ъ хлористого бария. Раэ— мешинают 30 мин и центрифугируют.

Операцию повторяют. Осадок растворяют и 100 мл эфира, 20 мл этанола и прибавляют 1.20 мл 181-ного хлористого натрия. Размешивают 40 MHH и н односпиртовой слой удаляют . Операцию повторяют. Полученный эфирный раствор натриеного кардиолипина обезноживают при помощи сернокислого натрия (беэ— водного) и упаринают н токе неокисляющего газа при 30 С. Осадок при этом процессе составляет 0,48-0,52 r, Готовый продукт растворяют в 100 мл

I абсолютного этанола, хранят н темном месте при 3-8 С в атмосфере неоо кисляющего газа.

Предлагаемый способ позволяет увеличитьь выход целен or o Продук та

,О, 5 r иэ 1 «r сердечной мышцы),. уменьшить количество примесей до

7-1 0%, упростить технологию произ— нодстна и сократить технологический процесс с 12 суток до 5 суток.

Способ получения кардиолипина путем экстракции ацетоном измельченной ткани сердца крупного рогатого ск от а, обработки метанолом, ос аждением целевого продукта раствором хлористого бария и выделения в виде натриевой соли, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью повышения качества выхода целевого продукта и упрощения технологии производства, экстракцию ацетоном проводят н атмосфере инертного газа при температуре от -3 до -10 С и осаждение бариевой соли кардиолипина проводят при температуре от +3 до +5 С.

Источники информации, принятые но ннимание при экспертизе

1. Регламент получения кардиолипинового антигена для реакции Вассермана Р 36-75, 11.06.75.