Способ количественного определения димилина в растительных объектах

 

Союз Советскми

Соцмапнстмче сими республик

ОП ИСАНИЕ

И ЗОБРЕТЕ Н Иэе

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (t>>888034 (61) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 21. 05.80 (21) 2947658/30-15 с присоединением заявки № (23) П риоритет

Опубликовано 07. 12. 81. Бюллетень ¹ 45

Дата опубликования описания 10 . 12 .81

{5l }N. Кд.

G 01 N 31/08

Гоеударстееииый комитет

СССР до делам изобретений и открытий (53) УДК 632. .951.2:543. .544(088.8) (72) Автори изобретения

Г.Ф. Вылегжанина и Н.И. Красновская

Всесоюзный научно-исследовательский институт биологических методов защиты растений (71) Заявитель (54) СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ

ДИМИЛИНА В РАСТИТЕЛЬНЫХ ОБЪЕКТАХ

Иэооретение относится к области

Физико-химических способов определе- ния органических соединений и может быть использовано для обнаружения остаточных количеств инсектицидов, в частности димилина, в растительных объектах (листьях, клубнях, плодах и т.д.) и контроля за качеством сельскохозяйственной продукции.

Известен способ определения димилина в организме насекомых и воде водоемов (прудовой воде), заключающий" ся в экстракции соединения из насекомых — ацетоном, из воды — этилаце-. татом, концентрировании и очистке экстракта, идентификации соединения методом TCX и количественной оценке методом ГЖХ (1).

Но применение этого способа для анализа растительных проб невозможно ,по следующим причинам: ацетон не является подходящим экстрагентом для растительных проб, содержащих высокий процент воды, из2 за его смешиваемости с водой и затруднительности дальнейшего перерас-, пределения димилина иэ водного ацетона в другие органические растворители. При этом практически весь димилин остается в водном ацетоне в силу высокой полярности димилина; без .тщательной очистки экстрактов этот метод невозможно осуществить, то поскольку ТСХ не обеспечивает разде-: ления сложной многокомпонентной смеси коэкстрактивных веществ и димили на при высоком содержании пигментов, t жиров и восков, имеющихся в растительных объектах.

Целью изобретения RBRRpTGH сокращение сроков анализа и повышение его точности.

Поставленная цель достигается тем, что в качестве органического растворителя при экстракции димилина из растительных объектов используют хло- ристый метилен, а очистку экстракта

888034 г

1О

25 зо

4О

55 осуществляют методом препаративной хроматографии.

Пример. Навеску 10 г измельченных листьев или 50- 100 г клубней картофеля или плодов баклажан помещают в коническую колбу емкостью

500 мл со 100 или 200 мл хлористого метилена и извлекают димилин в течение 16-18 ч (через ночь) методом настаивания. Отфильтровывают, экстракт через воронку Бюхнера и бумажный фильтр в коническую колбу, используя водоструйный насос. Растительный остаток в колбе и на фильтре дважды промывают по 50 мл хлористым метиленом, присоединяя его к основному экстракту. Объединенный фильтр сушат над безводным сернокислым натрием или магнием, вновь фильтруют и . концентрируют до 5-7 мл, используя ротационный пленочный испаритель при температуре 40 С. о

Экстракт наносят полосой на препаративную пластину из кремниевой кислоты (размер 8 16 или 20х20 см, толщина слоя 2 мм, размер частиц

0,10 мм) на высоте 2 см от нижнего края пластины. Рядом наносят стандартный раствор димилина для установления расположения соединения после проявления хроматографической пластины в системе хлороформ. Дают подняться фронту растворителя до верхнего края пластины. Затем ее проветривают в течение 20-30 мин в вытяжной шкафу при комнатной температуре.

Делят полосу пластины со стандартным раствором димилина на 2 см поперечные зоны, начиная от линии старта, до верхнего края пластины. Соскребают слой сорбента из каждой зоны в отдельную чистую колбу емкостью

50 мл со шлифом 29 или 14,5 мм. Вливают в каждую по 10 мл ацетона свежеперегнанного, подсоединяют колбу к обратному холодильнику и нагревают на водяной бане при 55-60 С в течение 5 мин. Фильтруют экстракт, через пористый фильтр в круглодонную колбу, используя водоструйный насос. Дополнительными порциями ацетона (5х2 мл) ополаскивают сорбент и колбу и присоединяют его к основному экстракту.

Упаривают ацетон на водяной бане до

0,5 мл и наносят остаток на ТСХ силуфол Уф 254 (ЧССР). Рядом с анализируемым раствором наносят свидеталь

5-10 мкг стандарта димилина.,Проявляют TCX в системе хлороформ-ацетон (4:1), проветривают на воздухе и просматривают под Уф-лампой. Отмечают R димилина, Определив таким образом зону расположения димилина на препаративной пластине, соскребают на этом же уровне слой сорбента с растительной про-, бой, захватывая полосу на 0,5 см шире для обеспечения количественного извлечения димилина из анализируемой пробы. Зкстрагируют димилин из сорбента, как описано выше. Ацетоновый экстракт упаривают до 0,5 мл и используют для TCX идентификации, перенося количественно на ТСХ силуол

Уф 254 в виде полосы шириной 2 см.

Рядом с анализируемой пробой наносят стандартный раствор димилина 510 мкг. После проявления ТСХ в системе хлороформ-ацетон (4:1) проветривают пластину на воздухе, просматривают в УФ-свете и отмечают зону расположения соединения. Выскребают слой сорбента с димилином в колбу емкостью

10-15 мл. Экстрагируют димилин

5 мл ацетона при 3-5 минутном нагревании на водяной бане в колбе, снабженной обратным холодильником. Фильтруют экстракт через пористый фильтр, используя водоструйный насос. Ополаскивают трижды колбу и фильтр с сорбентом 1 мл ацетона, присоединяя его к основному экстракту. Отгоняют ацетон на водяной бане, отдувая пары ацетона током воздуха. Очищенный остаток в колбе используют для количественного определения димилина.

Количественное определение димилина проводят по способу, заключающемуся в том, что к очищенному анализируемому остатку добавляют 0,5 мл свежеперегнанного диметилсульфоксида, 0,3 мл иодистого метила и 20 мг гидрида натрия. Колбу с содержимым сильно встряхивают и оставляют на 1520 мин. Затем вливают 3 мл гексана, после чего осторожно по каплям добавляют 10 мл воды. Закрывают колбу пробкой и встряхивают 20-30 с. Оставляют для разделения слоев. Отделяют гексановый слой метилированного ди- милина. Водную фракцию встряхивают вновь с 1 мл гексана. Присоединяют этот гексановый экстракт к первому.

Сушат экстракт безводным сернокислым натрием. Фильтруют гексановый экстракт в сухую чистую пробирку с делениями и упаривают гексан до нужного

888034

Са где h

h

5 объема (1-2-3 мл). Доводят объем до метки гексаном и используют для ГИХ определения.

Условия ГЖХ определения метилированного димилина: хроматограф

"Цвет-106" с пламенно-ионизационным детектором, стеклянная колонка 2 м к

g 3,5 мм, заполненная хроматоном

М-АУ-НИОКР (0,16-0,20 мм) с 5 SE 30 температура испарителя 230, колонки

220, азот 40 мл/мин, водород

30 мл/мин, воздух 400 мл/мин, шкала электрометра 2 10 ", а время удерживания метилированного димилина

9,5 мин.

Для количественного определения хроматографировали анализируемые и стандартные растворы с известной концентрацией вещества (10-100 мкг/мл), в колонку хроматографа вводили по

2 мкл из серии стандартных растворов для получения высоты пика, близкой к анализируемым растворам.Для по.лучения средней высоты пика проводили 2-3 параллельных определения.

Содержание димилина в пробе (в мг/кг) вычисляли по формуле:

h4Ó, ø высота пика стандартного раствора, мм; высота пика анализируемого раствора, мм; объем стандартного раствора, вводимого в колонку газового хроматографа,-мкл; объем анализируемого раствора, вводимого в колонку газового хроматографа, мкл; концентрация стандартного раствора, мкл/мл; объем экстракта анализируемой пробы, мл; масса пробы, кг. б

В таблице 1 приведены данные, характеризующие предел обнаружения и точность количественного определения димилина.

5 Возможности метода проверены при исследовании в лабораторно-полевых опытах продолжительности сохранения и биологической эффективности димилина на картофеле и баклажанах в борьбе с колорадским жуком. В лабораторно-полевом опыте с участков картофельного поля площадью 2 га и баклажанного поля в 0,2 га, обработанных

0,08-0,244 по действующему веществу (253 смачивающийся порошок), через определенные интервалы времени отбирали пробы листьев картофеля и баклажан и съемный урожай картофеля и баклажан. Определяли в них содержание димилина предлагаемым способом.

B таблицах 2 и 3 представлены результаты определения.

Преимущества предлагаемого способа заключаются в том, что значительно сокращается рабочее время, затрачиваемое на анализ, для экстракции и очистки используются эффективные дешевые, легкодоступные реагенты, а их сочетание позволяет отделить мешающие определению вещества, четко выделить на ТСХ димилин и использовать его для дальнейшего количественного определения.

Другие дополнительные преимущества предлагаемого способа заключаются в том, что он позволяет. распространить применение его к широкому кругу растительных объектов и с высоким со" держанием коэкстрактивных веществ, что в конечном итоге будет способствовать организации охраны окружающей среды от неблагоприятного воздействия этого пестицида.

888034

Таблица 1

Результаты количественного определения димилина в различных растительных объектах

Димилина

Проба задано найдено мкг мкг

Стандартный раствор димилина

8,21

27,11

5,23

3,61

7,30

0,34

0,02

0,05

100

18,60 5,10 11,11

7,63 5,32 22,89

4,20 2,41 10,32

20

10 r листьев баклажан Контроль Не обнаружено

1,50 0,60 1,66

2,42 1,08 2,80

75,0

80,0

20 15,0

10 8,0

10 г клубней картофеля

Контроль Не обнаружено

20 15,0

1,50 0,60 1,66

2,42 1,08 2,80

75,0

80,0

1О 8,0

20 г плодов баклажанов Контроль Не обнаружено

3,82 2,92 8,08

6,90 3,44 10,95

20 15,0

10 7,0

75,0.

70,0

100 91,79

80 69,89

50 42,62

20 14,08

10 9,Л5

10 г картоФельных листьев Контроль Не обнаружено

89,60

40,94

12,90

13

4

13

91,79

87,36

83 24

70,20

90,50

99,60

81,88

64,10

29 61

38,80

10,41

17,89

36,46

16,54

11,45

888034

Таблица

Результаты определения димилина на листьях картофеля после обработки их димилином

Норма расхода димилина

Обнаружено димилина в мг/кг листьев в 1 день на 6 день на 10 день на 16 день на 24 день

Не обнаружено

Контроль

Не обнаружено

Не обнаружено

Не обнаружено

Не обнару- жено

0,02

640 r/ra

320 гlга

1,50

5,52

0,01

0,20

0,86

0,80

0,06

0,01

0,20

Il р и м е ч а н и е: в. клубнях съемного урожая картофеля остатков димилина не обнаружено

Таблица 3

Результаты определения димилина на листьях Оаклажан после их обработки димилином

Обнаружено димилинв в мгlкг листьев

Норма расхода димилина

I в 1 день на 2 день на 26 день на 33 день

Не обнаружено

Не обнаружено

Не обнаружено

Не обнаружено

Контроль

0,42

0,34

3,81

0,01

0,01

0,65

0,01

24,65

0,01

0,22

П р и м е ч а н и е: спустя 44 дня после обработки в съемных плодах баклажан остатков димилина не обнаружено. формула изобретения

Способ количественного определения димилина в растительных объектах, .ss включающий era экстракцию органичес" ким растворителем, концентрирование экстракта, очистку экстракта, иден240 г/га

320 г/га

640 г/га

320 гlга + 500 r/ãà хлорофоса

3,57

16,91

23,45

16,36 тификацию димилина синтезом тонкослойной хроматографии и количественное определение его методом газожидкостной хроматографии, о т л и ч а юшийся тем, что, с целью сокращения сроков анализа и повышения его точности, в качестве органического

088034

I

Составитель П. Рубинова

Редактор Н. Аристова Техред М.Рейвес Корректор М. Пожо

Тираж 910 Подписное

ВЯИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5,Заказ 10718/12

Филиал ППП "Патент", r. Ужгород, ул. Проектная, 4 растворителя при экстракции димилина из растительных объектов используют хлористый метилен, а очистку экстракта осуществляют методом препаратив.ной хроматографии.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. J. Assoc. 0ffic. Anal. Chem., s 1978, 61, М 3, 629.