Способ приготовления диагностикума направленного действия

 

Союз Советскни

Соцнапистнческнк

Республик

Оп ИКАНИЕ

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (»)889004 (61) Дополнительное к авт. свнд-ву— (22) Заявлено 28. 03. 80 (21) 2914165/28-13 с присоединением заявки М(23) Приоритет (53)М. Кл.

А 61 К 39144

3Ьеударствоивй комитат

СССР по делан иаабретеиий и Ртг)рытии

Опубликовано 15. 12. 81, Бюллетень Рй 46

Дата опубликования описания 18. 12.81 (53) УДК 616-097(088.8) 1

1 а % 1

В.А. Шамардин и Б.В. КаральНик;, -д -."=-X00qpg g.,-:., )

""1"1БЛМ ТЕКр, Казахский научно-исследовательский институ микробиологии и инфекционных болезней (72) Авторы изобретения (71) Заявитель ии, (54) СПОСОБ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ДИАГНОСТИКУМА

НАПРАВЛЕННОГО ДЕЙСТВИЯ

Изобретение относится к медицине, в частности к приготовлению диагнос" тических препаратов,>и может быть использовано в микробиологии и иммунологии.

Известен способ приготовления диагностикума направленного действия путем обработки нативных эритроцитов танином с последующим отмыванием эритроцитов и сенсибилизацией их

ggG-сенситином El), 10

Однако известный способ не обеспечивает высоко специфической индикации реагентов на Fc-фрагмент.

Целью изобретения является повы15 шение чувс.гвительности диагностикума.

Эта цель достигается тем, что способ приготовления диагностикума направленного действия осуществляют путем обработки нативных эритроцитов танином с последующим отмыванием эритроцитов и сенсибилизацией их 3gG-сенситином, причем эритроцить) предварительно прогревают при 962

98 С обрабатывают 0,05-0,001. -ным раствором нагретого до 96-98 С танина, а сенсибилизацию эритроцитов осуществляют при 45-56 С в течение о

120-180 мин..

Пример. 1 мл 103-ной взвеси формалинизированных эритроцитов барана и 2 мл 0,005 -ного раствора танина порознь прогревают в течение

20 мин в кипящей водяной бане, после чего эритроциты отмывают 2 раза

0,854-ным раствором NaC8 (по 4 мл) и ресуспендируют до 2 мл в таком же растворе, рН 7,2. К 2 мл 5),"-ных прогретых эритроцитов добавляют 2 мл

0,0054-ного прогретого раствора танина и выдерживают 10 мин при 45, после чего эритроциты дважды отмывают 0,853-ным раствором йаСГ и ресуспендируют до 2 мл в таком же растворе, рН 6,4. К 2 мл 54-ных отрабо.танных эритроцитов добавляют 2 мл

2 5 мг е 3 gG и выдерживают 120 мин при 50 С, после чего эритроциты ото

3 889004 мывают 0,854-ным раствором NaC!?, со", держащим 0,064 желатины (рП 7,2) и ресуспендируют до 2 мл. Полученные

» 5i-ные эритроцитарные dqG-диагностикумы вносят по 0,05 мл в 0,5 мл последовательных разведений взвеси стафилококка Кован. Чувствительность индикации стафилококка составляет

5 млн. клеток/мл.

Результаты сравнительной оценки индикации реагентов на Ге-фрагмент

3gG с диагностикумами, приготовленными по предлагаемому и известному способам (с помощью риванола и танина) представлены в табл. 1-3.

Использование предложенного способа позволяет повысить чувствительность РПГ для выявления реагентов на

Fe-фрагмент 3 оС и сократить в 2 раза

1О расход 3 9 6.

Таблица 1

Средние арифметические минимальных выявляемых доз (млн.клеток/мл) стафилококка Кован при дозе 3 оС, мкг/мл

Сенсибилизация

1000 500 250 125

По предлагаемому способу

8,0 0,3

5,0+0,2

5,0+0,2

5, Г-.0,2

5, О+0,2

С помощью риванола

14,0 0,4 28,0+0,7

8,0+0,3

8,0 0,3

9,0+0,3

С помощью танина (по Бойдену) 12,0+0,4 16,0+0,5 24,0+0,6 40,0+0,9

12,0+0,4

Таблица2

Средние арифметические минимальных выявляемых доз антигена 090 1 (мкг/мл) при дозе иммунного 3 gG, мкг/мл

2000

500

1000

250 125

По предлагаемому способу

0,5

0,5

0,5

0,5

0,5

С помощью риванола

0,5

0 г

0,5

0,5

0,5

0,0120,005 0,01+ 0,005 О, 01+0, 005 О, 08+0, 01 0,25

По Бойдену

Т а б л и ц а 3

Средняя геометрическая титра анти-3qG сыворотки (a тыс) при дозе нормального 3qG, мкг/мл

1 1 (1

100 50 25 12,5 6,25

317,0 0,018

С помощью риванола

86,0+0, 015 94,0+0, 015 120,0 О, 017 114, О+О, 016 98, 0+0, 016

97 0+0,015 109,0+0,016 131, 0 0,017 124,0а0, 017 112, О+О, 015

По Бойдену

По предлагаемому способу 2 14,0-0,017 430,0 0,018 520,0 0,019 520,0 0,019

8890 с

Формула изобретения

Составитель Г. Крюкова

Редактор Л. Плисак Техред С.Мигунова Корректор А. Ференц

Тираж 690 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, П-35, Раушская наб., д. 4/5

Заказ 10801/9

Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4

Способ приготовления диагностикума направленного действия путем обработки нативных эритроцитов танином с последующим отмыванием эритроцитов и сенсибилизацией их 3 g G- ñåíñèòèíîì отличающийся тем, что, с целью повышения чувствительности диагностикума для индикации реагентов на Fe-фрагмент 3g G, эритроциты

04 1 предварительно прогревают при 9698 С, обрабатывают 0,05-0,0013-ным о раствором нагретого до 96-98 С танио на, а сенсибилизацию эритроцитов осуществляют при 45-56ОC в течение 120180 мин.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Авторское свидетельство СССР 634749, кл. A 61 K 39/00, 1979,