Способ получения инокулянта для семян бобовых культур

 

А. И. Позднякова, А, В. Хотянович; В,A, Борисевич, 1

Н.O.Амстердамская, A.Â.Çàéöåâ и В.М,Чиканова

1, Всесоюзный научно-исследовательский институт

1::: сельскохозяйственной микробиологии, Институт я рйой" энергетики АН Белорусской ССР и Белорусский н учно-, исследовательский институт почвоведения и агр змий" (72) Авторъе изабретения (71) Заявители (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ИНОКУЛЯНТА ДЛЯ СЕМЯН

БОБОВЫХ КУЛЬТУР

Изобретение относится к органическим удобрениям с добавкой культур бактерий и может быть использовано в сельском хозяйстве.

Известен способ получения инокулянта для семян бобовых культур, по которому., с целью интенсификации процесса и улучшения качества препарата, слой торфяной крошки псевдоожиживают и одновременно периодически напыляют

1О культуральную жидкость при температуре слоя торфяной крошки 30-35 С до достижения препаратом конечной влажности 35-404 Е13

Недостатком этого способа является то, что смешивание торфа с жидкой культурой и подсушивание препарата при температуре 30-35 С приводит к значительной гибели клубеньковых бактерий. Происходит загрязнение препарата плесневыми грибами, поскольку препарат получают без соблюдения асептических условий при сушке на нестерильном торфе и на торфе тепловой. 2 стерилизации. Получается препарат с низким титром в виду гибели бактерий в процессе нанесения культуры на торф.

Известен также способ получения инокулянта для семян бобовых культур, включающий использование в качестве субстрата-носителя измельченных торфа, почвы и их смесей, внесение в субстрат-носитель источника углеводов, минеральных веществ и активированного угля, нейтрализацию полученной смеси мелом, стерилизацию, инокуляцию семян культурой клубеньковых бактерий, механическое перемешивание упаковку в полиэтиленовые мешки, до" ведение конечного продукта до влажности 40-604 и доращивание клубеньковых бактерий при температуре 2030 С в течение трех-пяти суток. В сос. тав питательных добавок включают соли аммония и фосфорной кислоты в коли" честве 0,.14, мелассу или глюкозу в количестве 8-103 2).

4 объема, а доращивание проводят при температуре 3-143 в течение трехпяти дней.

При необходимости в субстрат-носи-тель добавляют вещество, выбранное из группы, включающей глицерин, декстрин, сорбит, гидрол.

Работая на промышленной установке с мощностью дозы 340 рад/сек с единовременной загрузкой.0,8- 1,0 т субстрата, используя различные торфа и почвы, установили, что оптимальными дозами, обеспечивающими стерильность субстратов, необходимую для приготовления препарата, являются. дозы

2,0-6,0 Ирад в зависимости от исходной контаминации.(обсеменения) субстрата и требуемого срока годности препарата .(табл, 1), 8 табл. 1 приведена эффективная стерилизующая доза в зависимости от исходной контаминации торфа или почвы, споровые микроорганизмы.

Таблица 1

Исходная контаминация, млн/г

Субстрат

Дерновоподзолистая почва

0,05-0,1.1, 25

0,3-0,5

2,5

Чернозем

1,0

0,05

Торф верховой

3,0

1,0

Торф низинный

5-6,0

3,0 новлено, что доза бета-лучей не превышает по биологическому эквиваленту дозу гамма-лучей для получения равного стерилизующего эффекта.

Сравнительные данные по получению торфяного препарата клубеньковых бактерий на торфе, простерилиэованном различными способами, представлены в табл. 2,, Как. видно из табл. 2. радиационный метод стерилизации торфа в отличие от теплового, обеспечивает дос3 922104

Известный способ имеет тот недостатс к, что титр инокулянта получается недостаточно высокий, в составепрепарата имеется много микрофлоры и его трудно хранить свыше .трех месяцев.

Цель изобретения - повышение титра инокулянта, уменьшение содержания в нем посторонней микрофлоры и увеличение срока хранения инокулянта.

Поставленная цель достигается тем,1о что согласно способу, стерилизацию осуществляют после упаковки в полиэтиленовые мешки с помощью ионизирующего излучения в дозе 2,6-6,0 Ирад, инокуляциЮ клубеньковых бактерий про-1g родят путем.п1 окалывания. упаковки в асептических условиях полой иглой, отверстие от иглы заклеивают липкой . лентой,. увлажнение проводят в два этапа - сначала до упаковки до влажности 25-403, а потом после упаковки до влажности 40-603, мешки заполняют инокулянтом на 40-803 их общего

Торфяно-навозный компост

Предварительное выдерживание субстрата с влажностью 25-40ь при темпе.ратуре 20-374С в течение трех-пяти суток провоцирует прорастание споро- вых форм грибов и бактерий, в результате чего эффективная стерилиэующая до;за снижается примерно на 30-503, что имеет существенное экономическое значение при производстве клубеньковых бактерий на рассматриваемых субстра- ss тах.

При облучении субстратов на промышленном ускорителе электронов устаЭффективная стерилизующая доза,Мрад

5 922104 б таточно высокие количества клубень- ное количество. посторонних микроорковых бактерий в препарате, даже пос- ганизмов (в. сотни раз меньше, чем ле шести .месяцев хранения, и минималь" при тепловом способен

Т а б л и ц а 2

Способ еееееее

Срок хранения, мес

Тепловой (в автоклаве) 4, Клубеньковые бактерии гороха, шт. 245

14,47

108, 0

6,80

2,90 при 2,0 ати 1 ч при 2,0 ати 2 ч

118,0

6,80

6,00!

0,50

Клубеньковые бактерии сои, щт. 646 е

187 0 при 1,0 ати 1 ч

2,00

2,40

3.!7

0,95

1,77

155,0

3 1О при 1,5 при 2,0 ати 3 ч ати 1 ч 1 раз 3,35

3,10

2 35.

106, О при 2,0 ати 2 ч 1 раз 2,95

97,0

3,40

3,00 при 2,0 ати 2 ч 3 раза 2,47

85,0

3,36

2,66 при 2,0 ати 3 ч 1 раз 3,00 при 2,0 ати 5 ч 1 раз 2,57

110,0

l,56

3,65

125,8

0,74

2,23 радиационный

1 4

Клубеньковые бактерии гороха,шт, 245 гамма-лучи (2;5 Ирад) 2,5 7,00 8,85 5,63

8 85 5 63 047

7,00

Клубеньковые бактерии сои, шт. 646 гамма-лучами (2,0-6,0 Клад) 14,87 12,00

10,00

0,55 бетта-лучами (2.,5-5,0 йрад) 8,87

0,83.

12,13 9,66

Количество клубеньковых бактерий в препарате, млн/г

Количество посторонних микроорганизмов, Ф от клубеньковых бактерий

Полученные инокулянты клубеньковых бактерий по предлагаемому способу состоят из следующих операций: приготовление инокулюма - жидкой культуры клу беньковых бактерий, подготовка субстра- S та-носителя 1размалывания, нейтрализации мелом до рН-6,8-7,2, увлажнения до 25-403, расфасовки в непро|ницаемые для микроорганизмов полиэтиленовые пакеты, стерилизация е упакованного субстрата-носителя гамма- или бетта-излучением в дозе

2,6-6,0 Мрад, инокулирование субстрата жидкой культурой путем инъекции ее непосредственно в упаковку, перемешивание ино1сулиума в мешках в барабанном смесителе в течение 3. I0 мин доведением конечной влажности инокулиума до 40-603 (мешок заполнен на 40-803 от их отжима) и 20 заклейка отверстия от иглы липкой лентой, доращивание в асептических . условиях с инокулянта при температуре 3-14 С в течение трех-пяти суток.

Пример 1. Препарат для сои. 25

Жидкую культуру для инокулирования стерильного субстрата-носителя готовили методом глубинного культивирования клубеньковых бактерий сои в колбах и пятилитровых бутылях на качалке, а . Зе также в 100 л ферментаторах на среде следующего состава, 4.: кукурузный экстракт 0,7"1,0 пекарские дрожжи

0,05-0,1, (ИВ )gSOq -0,1; КН РО 0,025 Ку.НРО ° ЗН20 - 0,025 NgOq 7Н О-и

0,02; глюкоза 0,5- 1,0 меласса - 1,0, СаСо® или СаС11. 6Н О - 0,02-0,01.

Культуру выращивали в течение трех суток.

Торф влажностью 20-25ь или почву с щ влажностью 101 размалывали,добавляли 3103 технического мела, 3-253 технического активированного угля, затем смесь торфа с углем и мелом увлажняли до .

35-404, расфасовывали в полиэтиленовые пакеты по 0,35-0,85 кг (из расчета получения 2-5 гектарных порций препарата), при заполнении на

40-804 объема. Пакеты запаивали, упаковывали в течение трех-пяти суток при температуре и стерилизовали гамма-излучением при дозе 2,6 Мрад на промышленной гамма-установке.

Стерильный торф в асептических условиях (в боксе) инокулировали введением жидкой культуры, содержащей источники углевода (глюкоза, сахароза, их смеси, лактоза, сухая молочная сыворотка, сухое молоко или меласса) или защитные вещества (глицерин, дектри, сорбит, гидрол) инъекцией непосредственно в пакет.

Инъекцию осуществляли полей иглой.

Защитные вещества вносили в количестве 1-104 от веса сухого субстрата в зависимости от срока хранения препарата. Жидкую культуру вносили из расчета первоначального содержания клубеньковых бактерий сои в препарате

5,0-0,1 млрд/г s зависимости от срока хранения препарата и влажности в пределах 50-60ь для торфяного и 401 для почвенного препарата. Прокол заклеивали клейкой лентой и содержимое пакетов перемешивали механически в специальных смесителях в течение

3-10 мин. Препарат для сои хранили при температуре 10-14 С.

Использование предлагаемого способа позволяет получить торфяной препарат клубеньковых бактерий с титром 1025 млрд. бактерий в 1 r, Результаты опытов по получению торфяного, почвенного и торфяно-почвенных препаратов клубеньковых бактерий по предлагаемому способу приведены в табл. 3.

922104

Торф-Неманский

Почва-Ленинградская

Торф-Псковский

Почва-Кузнецкая

Торф-Псковский

Почва-Щебекинская

Ю

Срок хранения, мес

Количество клубеньковых бактерий сои, млрд/г

Ч

Торф 12,60,. 10,87 8,27 10,50 5,83 2,74 12,74 11,40 9,80

3,85 8,80 2,26 1,67 3,70 . 2,87 1,65

Почва 13,40 8,42

Торф/ почва

3 1 16 00 11 70 9 00 11 40 5 20 2 64

1:1 13,40 11,64, 9,73 12 25 4,20 2,35 10,20 5,17 3,30 а

1:3 14,83 11,72 7,47 12,40 4,00 2,07 11 10 5,00 2,18

П р и м, е ч а н и е. Количество посторонних микроорганизмов во всех случаях не превышало 0,53 от количества клубеньковых бактерий. для сои. Результаты по наработке опытной партии препарата приведены в табл. 4.

Ilo предлагаемому способу под посевную .1977 г. наработано 11,3 тыс. гектарных порций торфяного препарата

Таблица 4

Титр клубеньковых бактерий сои, млрд/г

Торф

Срок хранения, мес

3 6 9 12

11 65 9,50

6,48

9,84

8,67

1,3

Псковский (порции по

2 га) . 10

Таблица

Количество посторонней микрофлоры

Ф от клубеньковых бактерий

11 922104 12

Влияние различной влажности пре- беньковых бактерий .сои и гороха пока паратов на рост и выживаемость клу- зано в табл, 5, к

Табли ца 5 Количество КБ, млрд/г

Влажность препарата;

Срок хранения, мес.

4 (Грр

Соя ох

Соя Горох

Соя

Горох

2,6 3,8 2,0 1,5 2,4

28,0

3,3

12,5

11 6 9,7

11,2

40,0

1?7

13,4

11,8

14,0

14,2

58-60

15,0

15,0 воляет практически работать без обработки.

Доза стерилизации субстрата, Ирад

Количество микроорганизмов (на 6 месяцев) Количество посторонней микрофлоры,млрд/г

Количество посторонней в млрд/г микрофлоры к коли4 честву клубеньковых бактерий в 3

Горох

Соя

3,0

121 3

1,8

0,5

16.7

29,7

0,8

10,6.

11,4

l0 8

2 5

5,0

0,3

0,01

15,8 l3,3

0,1

0,05

7,5

Влияние дозы стерилизации на качество получаемых препаратов представлено в табл. 6 в сравнении с качеством препаратов, получаемых по известному способу (табл. 7).

Как видно из данных табл. 6 и 7, качество препаратов для гороха, клевера, люцерны значительно повывается на. .стерильном торфе, а препараты КБ для люпина и сои могут быть получены исключительно на субстратах, подвергнутых радиационной стерилизации.

Радиционная стерилизация является самым дорогостоящим процессом технологии производства препаратов.

Несмотря на это, выгодно применять ра. диационную стерилизацию с, целью полу49 чения высококачественного препарата.

Радиционный металл стерилизации при надлежащем контроле технологического процесса производства препарата поз-, Исходя из соображений экономии, необходимо применять возможно мини мальную дозу облучения без снижения качества препарата. Экспериментальные данные показывают, что такая доза находится в пределах 2,6-64 Ирад и зависит от исходной обсемененности субстратов и видового состава микрофлоры.

В табл, 6 приведены данные о качестве некоторых препаратов, приготовленных на субстратах, простерилизованных при различных дозах радиации.

В табл. 7 приведен раст и выживаемость клубеньковых бактерий в препаратах, приготовленных на нестерильном и стерильном торфах., Таблица 6

922104

1 л

1 !

X

©

I» о!

1 !

1

1

1 !

I

1

I

1

1

I

-l

1т э

Z т о а о

1Cl

Ю р 1

Ю °

Ф

O Ct о

Ln л

С!

t5 I

1 т

С.! иж

C Ф

IQ I

t5 1

I- I

I

5 3. tCt

l- ОХ

Э %

x alс ми х3ю и

CV

»

Ю

М О м

Ф о о

Ю

Ю фб! о

CO о ЮО .

° ° » ° » ф сО о

° - о

СЧ

Ю м

ЮО Ф

» Ю

Ch СЧ о

Ю

Ю о

Ф о м

Ф 1Ч о о а О

Ф » е о

СО

» л

«ф Ф

61 м

° Ь

СЧ л

° В

ЮО

Ln

OO о

» м

С! Ch

» о л оа

Ф » о о

Ю

Ю о ъО ОЪ

° в » о. о!

Z а э X а

5t Э

Ф М хс о а

>ь ! .Ф с

:ь х

М

Э 1 о .

1- 1 х э о и а о о

1Э

» iX

g,,c;a с ао cLC

Lt g В Э Э

1- О р « рф «Ф

sX, т з л g ф з .54 а ск э х

aLn и . Q a

Q I» CV юф т tX с

4 4 а э з

a In и э

Э l- СЧ р) ъ Ф

iX ф IX .Ф CL сz

4 EA

Q «

I- СЧ

1Щ а

I"

v э х

a a са

X ао э»

1 ь р

I» !

Х а

» т

CL э

I»

Ю х

2l т э

1О

Х

Ф о

1 и э

5 о с х

1

1

)

I

t !

I

I

1

I

1

1

I

1

1

1 и

1 Э

I

»

1 Ig

X

I Э

1 X

I !5

I CL х

1 Y

1 Q ! а

I Р

1 !

1

1

1

I

I

1

1

I

1

I .I I

1 .

1

1

I

1

1 .1

1

1

1

1

1

1 ,1

1.

1

I

I !

»

1

I

1

1

1

1

1

1

1

I л о

° ° Ю Щ а 1Ч

° ь. м а ф

° \ е л Ф CO о О сО л о ° Ь !А a. .I в фО 4Ч Ю р сч ln «Ф О о Ch

ОЪ CO м, о . а

° » » ° Ь

Ю В и а о Я) еэ» М О О сО в о

Ю Ю Ю Ю » CO М л о а О

» » О

Оъ м ° ф

° !! OO .4 л » «ф

1Ч Ln

» ц 1 ° О

922104

1

1

t ! ! ! !

1

z бб

1-! о е

1 а ! 41

1

tQ

6)

t щ

t а

hl ! !

1, бЧ

l

1 ttl

1 гр ! сч

z а ! !

3 4)

l ®

1 Щ

l 1 о б-! ttt

1 ttt

1 со

Ю л

»! М(! ! й

1I

1:. 1»

v з ф с

z а

1» о

Э з

CL

С! .Ig

1 1Э

1 зф ф

1 X Д

I I ОИ о м

4) L hC !

l 1

I I

1 I

1

1 I

I б

1 1 ! I

I 1

1 1» 1

1 1

) I1i

1 !.! ! ф I

I 1 Y 1 О о z

1 Y 1 X

И ! IR

1 I»

1 О

hC

1

I !

1 а бЧ

° »

1:

l c

I

ЯЧ !! л л

) .1, 1

1 а

1; о !

I

I

I

1

I

I

I

1

1 !

1

I бЧ сч

I

I

) в

1 е

1

1

1;

1 !

I и !

1

1

1

1 бЧ

I !

I !

1

1

I

I.

1 .

1 о

1

1

I

I >з . с о

z c аг в э ! 1- о

t Il

3 1

1 ф

CL о

I 1l

С, l

l -Щ

l уб ! с

X .1 ©, l ф

l о

l ф б!б

Ю о с

l ф

1

4

t ф

1

l X

1 III

l

1 ф

t

17

Полученные данные указывают на неприемлемость дозы 1,0 Мрад.

Внесение источников углевода и защитных веществ в субстраты-носители. S

В таких естественных субстратах, как торф или почва имеется незначительное количество усвояемого углево да, который обеспечивает потребность клубеньковых бактерий в энергии при кратковременном хранении препаратовмаксимум до трех месяцев. В практике однако необходимо хранить препараты не менее 6-9 мес. В связи с этим разрабатывались приемы внесения уг.I б

04

9221

Количество клубеньковых бактерий, млрд/ч

Добавлено 34 источника энергии (от веса сухого торфа) Срок хранения, мес г

12

Горох Соя Горох Соя

Горох в Соя

Горох Соя

0,5

2,8 1,0 1,4

7,6 8,8 5,о

5,6 9,5 4,7

Без добавки

Глюкоза

Сахароза

Лактоза

13,0

6,2

12,8

5,9

6,0 8,8 6,5

7,3

l1,9

6,9

5,6 7 8 4,5

8,9

Сухое молоко

Сухая молочная сыворотка

11,8 18,0 9,1

12,87 8,7

10,7

7, 8

9,0 10,2

10,9 14 3 9,0

10,8 66,1 7,7.4,6, 6,0

13,8 8,4

12,3 8,0

16,2 11,0

12,0

11,0

15,7 10,5

Полученные данные указывают на то, что прибавление различных источников энергии оказывает существенное

Глицерин

Сорбит

Гидрол

Декстрин

Меласса

6,6 5,8 3,0

12,4 16,3 8,7 .11,0 . 14,7 9,4

10,0 15,4 8,2

9,7 12,6 7,7 леводов и защитных веществ в пакеты со стерильными субстратами. Экспери-. ментально подбирали подходящие источники и определяли.их оптимальные концентрации.

В табл. 8 представлены результаты влияния различных доступных и сравнительно недорогих источников энергии на развитие культуры КБ в торфе. Аналогичные результаты получены для почвы и смеси торфа с почвой в этих случаях абсолютные величины титров несколько ниже, в связи с высоким содержанием в почве инертной массы — минеральные части почвы.

Таблица 8

14 0 7,3 11 р 5,8 7,0

10,0 5,8 9 р 5,2 . 6,8

8,8 4,8 5,7 3 5 3,8

112 78 93 41 .54 влияние на содержание КБ в препарате при длительном хранении. В целом, из экспериментальных данных следует, что

4 20

Для лучшего перемешивания субстрата-носителя с жидкой культурой пакет. заполняется на 40-803 объема. Температура хранения препаратов оказывает существенное влияние на сохранение КБ в них. При высокой температуре происходит более интенсивное отмирание бактерий. В работе этому вопросу было уделено серьезное внимание и подробно изучено влияние температуры на клубеньковые бактерии. Оказалось что у люпина и сои, относящиеся к группе так называемых "медленнорастущих", лучше сохраняются при хранении препарата после инокулирования при температурах 10-15 С у "быстрорастущих" клубеньковых бактерий (горок, клевер, люцерна и др.)лучше сохраняются при температурах 3-5 С,. В табл. 9 ,приведена выживаемость КБ при различных: температурах хранения.

Т а б л и ц а

Иедленнорастущие,млрд/г

Быстрорастущие, млрд/г

Температура

Срок хранения, мес

0,7

10,8

1,0

1 3

9,0

3-5

2,0

14,6

4,0

6,0

10- 15

18-22

1 0

15,2

0,7

5,6

10,5

2,1

1,0

0 7

0,5 i 0 -. количество КБ после инокулирования (исходное) ТорФ (рН=6,0) с влажностью 283 размалывали, нейтрализовали мелом(53) до рп6,9; увлажняли до 37,83, расфа.. совывали в полиэтиленовые пакеты по

0,8 кг при коэффициенте заполнения

0,6. Пакеты запаивали, упаковывали в картонные коробки, выдерживали в те.чение трех суток при температуре 37+1 С и стерилизовали при дозе

6,0 Мрад.

19 92210 все испытанные источники оказывают практически одинаковое влияние на титры клубеньковых бактерий. Выбор того или другого источника энергии при производстве будет определяться доступностью его и экономическими со. ображениями. Практика получения экспериментальных партий препарата указывает на предпочтительность ис" пользования мелассы, декстрина и 10 глицерина.

Для рационального распределения ,:клеток клубеньковых бактерий в массе субстрата-носителя после инъекции в пакет жидкой культуры, отверстие И от прокалывания пакета заклеивали липкой лентой (лейкопластырем, полихлорвиниловой пленкой и др,) и содержимое пакета перемешивали во вращающихся барабанах - 60 об/мин в дв течение 3-10 мин..П р и.м е р 2. Препарат для люпи на (Эторфяной), .

Стерильный торф в асептических условиях в боксе инокулировали жидкой культурой Rhizobium upini шт.. 367 с титром 9,0 млрд/мл, в которую добавляли 53 глицерина, Жидкую культуру в количестве 200 мл вводили инъекцией в пакет со стерильным торфом. Отверс" тие от укола заклеивали полихлорви- ниловой пленкой, содержимое пакетов перемешивали механически во вращающемся барабане (40 об/мин) в течение

l0 мин. Первоначальное содержание К6 лапина во влажном препарате состав21 92210 ляло 1,77 млрд/г, глицерина 2,03 от веса сухого торфа. Влажность препарата - 50>. Препарат хранили при темпе4 22 ратуре 10-15 С (табл. 10), В табл. f0 приведен торфяной препарат для люпина.

Таблица 10

Количество посторонней микрофлоры в 4 от количества КБ люпина

Срок хранения, мес °

-3 . 6 .. 12

О

1,77

10,7

О,1

9,4

7,5

15,3 рой Rhizobi um 1ир1п г шт. 646 с титром

10,0 млрд/мл, в которую добавляли ,, 13ь лактозы. Иидкую культуру в количестве 60 мл вводили инъекцией в па- кет со стерильной почвой. Отверсуйе от укола заклеивали лейкопластырем, содержимое пакетов перемешивали механически во вращающемся барабане (40 об/мин) в течение 3 мин. Первоначальное содержание КБ сои во .влажном препарате было 1,5 млрд/г, лактозы 3,13 от веса сухой почвы. Влажность препарата - 39,83. Препарат хранили при температуре 10-15 С (табл.11)

В табл. ll приведен почвенный препарат для сои.

П р и и е р 3. Препарат для сои (почвенный).

Почву (рН=5,0) с влажностью 14,53 размалывали, нейтрализовали мелом (64) до рН 6,8, добавляли 254 активи..рованного угля, увлажняли до 26,34, расфасовывали в полиэтиленовые пакеты по 0,34 кг при заполнении 404 объема. Пакеты запаивали, упаковывали в картонные коробки, выдерживали в течение четырех суток при темпера-туре 29+1 С и стерилизовали при

4,0 Ирад.

Стерильную почву в асептических условиях инокулировали жидкой культуТаблица 11

Количество КБ сои, млрд/г

Срок хранения; мес

1 3 6 12 24

О.

1,5 8,9 7,2 5,8

1,5 6,4

3,5

1,2

Пример 4. Препарат для сои (почвенно-торфяной).

Почву (рН=6,5) с влажностью. 153 и торф (рН=, 4,7). размалывали, нейтраКоличество люпина, млрд/г

Количество посторонней микрофлоры, в 4 от количества КБ сои

2104 24 гидрола. Жидкую культуру в количестве 70 мл вводили инъекцией в пакет со стерильным субстратом, отверстие от укола заклеивали лейкопластырем, g,ñ0äåðæèìîå пакетов перемешивали механически во вращающемся барабане (40 об/мин) в течение -4 мин. Первоначальное содержание клубеньковых бактерий сои во влажном препарате быto ло 1,6 млрд/г, гидрола 1,04 от веса

1 сухого субстрата. Влажность препарата 52,54, Препарат хранили при темпе ратуре 10- 15ОС (табл. 12), В табл, 12 приведен почвенно-торфяной препарат

tS для сои.

Таблица 12

Количество клубеньковых бактерий сои, млрд/г

Срок хранения, мес

5,4 2,5

1,8

",7

Пример 5. Препарат для клевера (Эторфяной).

Торф (рН=3,8) с влажностью 303 . размалывали, нейтрализовали мелом (103) до рН=7,1, увлажняли до 40,34 расфасовывали в полиэтиленовые паке.ты по 0,8 кг (из расчета получения . 5 гектарных порций препарата при коэффициенте заполнения 0,6). Пакеты запаивали, упаковывали в картонные коробки, выдерживали в течение четырех суток при температуре 32+1 С и стерилизовали при дозе 2,5 Ирад.

Стерильный торф в асептических условиях инокулировали жидкой культу- © рой ЙЬ!иоЬ1um;tri 1î i 1 шт. 348 с

23 92 лизовали мелом (53) до рН 7,0 и до- бавляли 153 активированного угля, Смесь почвы с торфом (1:i), мелом и углем увлажняли до 344 расфасовывали в полиэтиленовые пакеты по

0,33 кг при заполнении 403. Пакеты запаивали, упаковывали в картонные коробки, выдерживали при температуре

27 1 C в течение пяти суток и стерилизовали при 2,5 Ирад.

: Стерильный субстрат в асептических условиях инокулировали культурой

Rhizoblum japon1cum шт. 646 с титром

8,5 млрд/мл, в которую добавляли 33

1,6 l3,3 - 10,5 7,0

Количество посторонней микрофлоры, в 4 от количества клубеньковых бактерий титром 7,6 млрд/мл в которую добавляли 153 декстрина. Жидкую культуру в количестве 200 мл вводили инъекцией в пакет со стерильным торфом.

Отверстие от укола заклеивали лейкопластырем, содержимое пакетов перемешивали механически во вращающемся барабане (40 об/мин). в течение 10 мин

Первоначальное содержание КБ клевера во влажном препарате составляло

1,3 млрд/г, декстрина 6,2О от веса сухого торфа. Влажность препарата5i,83. Препарат хранили при температуре Ъ-5©C (табл. 13). В табл. 13 приведен торфяной препарат для клеВера.

922104

25

Таблиц а 13

Срок хранения, мес

12

10,8 6,4

11,3

1,3

12,9

1,2

Таблица 14

Срок хранения, мес.6 32 24.

I 1

12

5,0 2,1

1,7 3,5

0 5

Количество КБ клевера, млрд/г

0 1 3

Р р и м е р 6. Препарат для гороха(почвенный).

Почву (рН=5,8) с влажностью 17,И размалывали, нейтрализовали мелом (74). до рН=7,2 добавляли 253 активированного угля, увлажняли до 27;7 ь расфасовывали в полиэтиленовые пакеты по 0,34 кг, при заполнении 40 ь.

Пакеты запаивали, упаковывали в картонные коробки, выдерживали в те чение трех суток при температуре 371

t1 С и стерилизовали при дозе 4,0 Мрад

Стерильную почву в асептических условиях инокулировали жидкой культурой Rhizobi um gegunasorum штД50

-Количество КБ гороха, млрд/г

063. 100 83

Пример 7 . Препарат для лю; церны (почвенно-торфяной). И

Почву (рН-7,0) с влажностью 11,8i и торф (рН-6,6) с влажностью 263 размалывали, доводилй мелом(34) до

Количество посторонней микрофлоры, в Ф от количества КБ клевера с титром 5,0 млрд/мл, в которую добавляли 30 ь мелассы. Жидкую культуру в количестве 60 мл вводили инъекцией в пакет со стерильной почвой, отверстие от укола заклеивали полихлорвиниловой пленкой, содержимое пакетов перемешивали механически во вращающемся барабане .(40 об/мин) в течение

3 мин. Первоначальное содержание клубеньковых бактерий гороха во влажном препарате было 0,63 млрд/г, мелассы 7,5Ô бт веса сухой почвы.

Влажность препарата - 39ь. Хранили препарат при температуре 3-5 C (табл. 14), В табл. 14 приведен почвенный препарат для гороха.

Количество посторонней микрофлоры в, от количества клубеньковых бактерий гороха рН-7,2, добавляли 153 активированного угля, смесь почвы с торфом (1:1), мелом и углем увлажняли до 353 расфасовывали в полиэтиленовые пакеты по 0,8 кг.при заполнении 601 Пакеты

Таблица 15

Количество посторонней микрофлоры, Ф от количества клубеньковых бактерий

Срок хранения, мес

12 24

12

13,0 11,0 8,0 4,8

5,3.2,0

3,0

2,7

Формула изобретения

33

1. Способ получения инокулянта для семян бобовых культур, включающий использование в качестве субстратаносителя измельченных торфа, почвы и их смесей, внесение в субстрат- щ носитель источника углеводов, минеt ральных. веществ и активированного уг." ля, нейтрализацию полученной смеси мелом, стерилизацию,. расфасовку в непроницаемую для микроорганизмов упаковку, инокуляцию культурой клубень" ковых бактерий с доведением влажности в конечного продукта до 40-603, механи- ц ческое перемешивание и доращивание клубеньковых бактерий при температу- щ и ре 20-30 С в течение трех-пяти дней, отличающийся тем, что, с . целью повышения титра инокулянта, уменьшения содержания в нем посторон ней микрофлоры и увеличения срока

ВНИИПИ Заказ 2495/32 Т краж 699 Подписное филиал ППП "П*тент", г.ужгород, ул.Проектная, 4

27 9221 запаивали, упаковывали s картонные коробки, выдерживали при температуре

20 1 С в течение пяти суток и стерилизовали при дозе 2,5 Мрад.

Стерильный субстрат в асептических условиях инокулировали жидкой культурой Rhizobium4mekiioti шт.. 425 с титром 11,0 млрд/мл:, в которую добавляли 253 сухой молочной сыворотки, Io

Жидкую культуру в количестве 200 мл вводили инъекцией в пакет со стерильКоличество клубеньковых бактерий люцерны, млрд/г

Таким образом предлагаемый способ получения инокулянта лучше известного ®в способа.

04 28 ным субстратом, отверстие от укола заклеивали липкой лентой, содержимое пакетов перемешивали механически во вращающемся барабане (40 об/мин) в течение 8 мин. Первоначальное содержание.К6 люцерны во влажном прейарате было 2,0 млрд/г, молочной сыворотки I0i от веса сухого субстрата. Влажность препарата — 48 . Препарат хранили при температуре 3--5 С (табл. 15). В табл. 15 приведен почвенно-торфяной препарат для люцерны. хранения инокулянта, стерилизацию осуществляют после расфасовки с помощью ионизирующего бета- или гамма-излучения в дозе 2,6-6,0 йрад, увлажнение проводят в два этапа - сначала до расфасовки до влажности 25-403, а затем после расфасовки — до влажности

40-603, инокуляцию проводят в асептических условиях путем прокалывания упаковки полой иглой с заклеиванием места прокола липкой лентой, упаковки заполняют на 40-804 их объема и далее упаковки помещают в барабанные смесители на 3-10 мин и культуру доращивают до получения готового препарата.

2, Способ по п.1, о т л и ч а ю " шийся тем, что в субстрат-носиель добавляют защитные вещества, ыбранные из группы, включающей глиерин, декстрин, сорбит, гидрол.

Источники информации, ринятые во внимание при экспертизе

1. Авторское свидетельство СССР

477150, кл. С 05 F 11/08, 1973, 2. Авторское свидетельство СССР

592807, кл. С 05 F 11/08, 1976 (прототип).