Способ количественного определения микробактерий

 

(72) Автор изобретения

Ф.В. Персон

Противотуберкулезный диспансер 11 16 г. Москвы (7I) Заявитель (54) СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ

МИКОБАКТЕРИЙ

1

Изобретение относится к медицине, а именно к диагностике и оценке тяжести микобактериозов.

Известен способ количественного определения микобактерий путем приго5 товления мазков иэ патологического материала, фиксации окрашивания с последующим микроскопическим исследованием препаратов f13..

Однако известный способ трудоемок,о и требует большого времени исследования.

Цель изобретения - ускорение способа.

Указанная цель достигаетсятем, что при осуществлении способа количественного определения микобактерий путем приготовления мазков из патологического материала, фиксации и окрашивания, с последующим микроскопическим исследованием препаратов, готовят парные мазки и при микроскопическом исследовании подсчитывают места максимального скопления микобактерий.

Способ осуществляют следующим об- разом.

Мазки из исследуемого материала приготовляют, как обычно для диагнос-. тического обнаружения микобактерий микроскопией, т.е. препаровальными иглами или другими инструментами выбирают подозрительные участки мате. риала (гнойные комочки и т.п.), переносят на предметное стекло и другим предметным стеклом распределяют равномерным слоем между обоими стеклами.

Полученную пару мазков маркируют и укладывают дпя просушки и фиксации на подогреваемую до 70-90"С поверхность. Практически фиксации достигают за 30-60 мин. Фиксированные препараты закрепляют по 8- 10 пар в специальные струбционообразные держатели. Окраску раствором аурамина-родамина, промывку, обесцвечивание серной кислотой и солянокислым филиал ППП "Патент". г. Ужг

ППЦ,Патент Зак. Я

3 9395 этаыолом и докрашивание метиленовой синей проводят погружным методом, что необходимо для получения сравнимых величин подсчета микобактерий. Микроскопию ведут в люминесцентном освещении при малых 14 средних увеличениях с проверкой олигобациллярного материала под иммерсионным объективом (90х). Одновременно с обнаружением микобактерий опреде- о ляют, просмотрев бегло весь мазок при малом увеличении, место наибольшего скопления (концентрации) иикобактерий, в котором производят подсчет только в одном поле зрвния.

Это число принимают за показатель количества кислотоустойчивых бактерий в исследуемом материале.

П р. и и е р Доставленные. для анализа образцы мокроты 10 больных разбирают в чашках Петри с помощью игл или уголков предметных стекол, гото" вят парные мазки из каждого образца, помещают после маркировки на подогреваемую поверхность на 30-60 мин.

По охлаждении закрепляют в держателе, прослаивая прокладками из нарезанных предметных стекол, погружают на 15 мин в раствор аурамина ХХ

00+родамина С (первого 1,0 г; второго 0,1 г на 1 л воды) при комнатной температуре. После окрашивания мазки опускают для ополаскивания в стакан с водопроводной водой, затем на 5-10 мин погружают в 5/-ный вод3S ный раствор серной кислоты, на 2 мин переносят в Я-ный солянокислый этанол. После ополаскивания погружением в стакан с водой переносят в

0,14-ный водный раствор метиленовой синей на 2 мин, после чего дают стечь краске и ставят для просушки. Иикроскопию, не откладывая, производят в люминесцентном освещении (светофильтры на осветителе СЗС- 14, СЗС"7

45 и ФС- 1, на окуляре ЖС- 18- 1). В зависимости от видимости пользуются увеличениями 100-200 раз (объектив

10-20х окуляр 7-10x). Одновременно с обнаружением светящихся тел, про5О верив морфологию при иммерсии 90х, подсвечивают ориентировочно число микобактерий в поле зрения. Олигобациллярные мазки просматривают при малом увеличении по всей площади для выявления единичных островков в пре55 парате с большими скоплениями микВНИИПИ Заказ 5535 Тираж

43 ф робных клеток. Обязателен просмотр парного мазка, являющегося контролем анализа. Расхождения в парных мазках, как.правило, невелики. Результат подсчета является показателем количества выделяемых больным микобактерий. Принятые градации: МБТ+1, МБТ+2, ИБТ+5,.МБТ+1О, МБТ+20, МБТ+30 и ИБТ+ИН (много),. При исследовании нескоЛьких. мазков принимают во вни-. мание наибольший показатель данного .материала. В примере получены следующие данные: 1) ИБТ: +1+2; 2) ИБТ: ,+20+20; 3) ИБТ: +5+5; 4) МБТ: О О;

5) ИБТ: +11H+MH; 6) +10+10; 7) МБТ:

О О; 8) ИБТ: +30+МН; 9) МБТ: +5+10;

10) МБТ: +1+1.

Пример 2. Готовят парные мазки на предметных стеклах из мозга, печени, почек, асцитической жидкости, селезЕнки золотистого хомячка, зараженного живой вакциной БЦЖ. Обработка препаратов и оценка результатов такая же, как и в примере 1. Результаты: мозг ИБТ: +1+2, легкое

ИБТ: +5+5, печень ИБТ: +20+30, почка

ИБТ: О О, асцитическая жидкость ИБТ:

+1+3, селезенка ИБТ: +20+30.

Таким образом, предлагаемый способ сокращает время исследования до

3 ч, в то время как при применении известного способа необходимо 2336 ч обеспечивать возможность исследования до 100- 150 образцов материала одним сотрудником за рабочий день и повышение чувствительности бактериоскопического подсчета мик обактерий.

Формула изобретения

Способ количественного определения микобактерий путем приготовления мазков из патологического материала, фиксации и окраши ва ния с последующим ми кроскопическим исследованием препаратов, отличающийся „тем, что,. с целью ускорения способа, готовят парные мазки и при микроскопическом исследовании подсчитывают места максимального скопления микобактерий.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Афанасьева 10.П.,Кузнецова В.И.

Динамика бактериовыделения в процессе химиотерапии у больных туберкулезом легких. - "Проблемы туберкулеза", 1977, N 12, с. 32-36.

505 Подписное .....,., ааз;к г