Способ получения поверхностного антигена гепатита в

 

OllMCAНИЕ ()) )944580

Союз Советских

Социалистических

Республик

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) Дополнительное к авт. свид-ву— (22) Заявлено 07.02.80 (21) 2898098/28-13 (51) М. Кл.з с присоединением заявки №вЂ”

А 61 К 39/29 (23) Приоритет—

Гооударстеенный комнтет

Опубликовано 23.07.82. Бюллетень № 27

Дата опубликования описания 28.07.82

СССР (53) УДК 576.8, .097.2 (088.8) ле делам нзобретеннй н открытий (72) Авторы изобретения

Б. И. Элькина и Т. В. Никифорова

Кировский научно-исследовательский институт переливания крови (71) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПОВЕРХНОСТНОГО

АНТИГЕНА ГЕПАТИТА В

Изобретение относится к медицине и касается получения поверхностного антигена гепатита В.

Известен способ получения поверхностного антигена гепатита В путем осаждения из сыворотки крови с последующим прогреванием полученного осадка, отделением антигенсодержащей жидкости и очисткой целевого продукта 11).

Однако известный способ не обеспечивает высокого выхода антигена.

Целью изобретения является повышение выхода антигена.

Цель достигается тем, что согласно способу получения поверхностного антигена гепатита В путем осаждения из сыворотки крови с последующим прогреванием полученного осадка, отделением антигенсодержащей жидкости и очисткой целевого продукта, осаждение проводят 4О/о-ным раствором риванола из расчета 35 — 45 мл на 100 мл сыворотки, после прогревания осуществляют протеолиз 0,2-ным раствором трипсина из расчета 15 — 20 мл на 100 мл антигенсодержащей жидкости и очистку проводят

2 диализом против дистиллированной воды при 4 — 5 С.

Пример. Берут 2000 мл НВа — антигенположительной сыворотки (или плазмы), осветляют ее центрифугированием 20 мин при 3000 об/мин, доводят рН сыворотки до

8,5 с помощью 15/О-ro раствора углекислого натрия, после чего 30 мин при постоянном помешивании приливают 800 мл 4О/р-ного водного раствора риванола. Смесь оставляют на 4 — 5 ч при 4 С. Надосадочную жидкость декантируют и отбрасывают, так как весь НВ -антиген переходит в твердую фазу.

К осадку с целью его ресуспендирования . добавляют 400 мл 1,5 /О-го раствора хлористого натрия и оставляют на 10 — 12 ч

1s при 4 С. Полученную творожистую массу центрифугируют при 3000 об/мин 30 мин.

Осадок удаляют. К 570 мл супернатанта добавляют 300 мл дистиллированной воды и проводят температурную обработку при

80 С в течение 1 ч. Продукт термообработки гемогенизируют, добавляя небольшие порции дистиллированной воды, после чего центрифугируют 30 мин при 3000 об/мин.

К 540 мл супернатанта добавляют 81 мл

944580

Соста в ител ь С. Малютин а

Редактор П. Коссей Техред А. Бойкас Корректор Ю. Макаренко

Заказ 5186/4 Тираж 714 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам нзобретений и открытий

113035, Москва, Ж вЂ” 35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП «Патент>, г. Ужгород, ул. Проектная, 4

0,2о/о-го раствора трипсина, доводят рН до

7,8 и при 20 С перемешивают 4 — 5 ч.

Продукты деградации белков удаляют и раствор отдиализовывают против дистиллированной воды 24 ч. Далее НВ-антиген5 ную фракцию концентрируют с помощью сефадекса à — 200, который после этого регенерируют. Весь процесс очистки поверхностного антигена гепатита В контролируют реакциями встречного иммуноэлектрофореза, 10 преципитацией в геле с полипреципитирующей кроличьев сывороткой против человеческих сывороточных белков, спектрометрически. Выход целевого продукта 33 /о, относительный показатель очистки 128,2.

Предлагаемый способ обеспечивает высокий выход целевого продукта при хорошей степени очистки.

Формула изобретения

Способ получения поверхностного антигена гепатита В путем осаждения из сыворотки крови с последующим прогреванием полученного осадка, отделением антигенсодержащей жидкости и очисткой целевого продукта, отличающийся тем, что, с целью повышения выхода антигена, осаждение проводят 4о/о-ным раствором риванола из расчета 35 — 45 мл на 100 мл сыворотки, после прогревания осуществляют протеолиз 0,2о/0-ным раствором трипсина из расчета 15 — 20 мл на 100 мл антигенсодержащей жидкости и очистку проводят диализом против дистиллированной воды при

4 — 5 С.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

l. Авторское свидетельство СССР № 545356, кл. А 61 К 35/16, 1976.