Способ идентификации бактерий рода сiтrовастеr
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ
Союз Советских
Социалистических
Республик
< 360263 (61) Дополнительное к авт. свид-ву(22) Заявлено 070280 (21) 2881862/28-13 с присоединением заявки №вЂ” (23) Приоритет —.
Опубликовано 2309.82. Бюллетень ¹ 35
Дата опубликования описания 230982 (51)M Кп з
С 12 О 1/04
Государственный комитет
С С С Р но делам изобретений н открытий (33) УДК 576.8. .093.1(088.8) (71) Заявитель
Ростовский-на-Дону научно-исследовательский инст эпидемиологии, микробиологии и .гигиены (54) СПОСОБ ИДЕНТИФИКАЦИИ БАКТЕРИЯ РОДА CITROBACTER
Изобретение относится к медицине и может быть использовано при диагностике сепсиса.
Известен способ идентификации бактерий рода Citrobacter путем посева исследуемого материала на элективную и дифференцирующую среды с последующим пересевом и инкубированием посевов на накопительной среде, а затем на среде, содержащей в качестве ферментируемого субстрата малоната натрия, и идентифицирующие искони бактерии по изме,нению окраски среды в присутствии индикатора 1).
Однако известный способ длителен, так как предусматривает пересев на накопительные среды и культивирование на среде с малонатом натрия в течение 18-24 ч (до 3 сут).
Целью изобретения является ускорение способа.
Поставленная цель достигается тем, что, согласно способу идентификации бактерий рода Citrobacter, включающему посев исследуемого мате-. риала на элективную и дифференцирующую среды с последующим пересевом и инкубированием чистой культуры на питательной среде, содержащей Фер-. ментируеьый субстрат, и идентификацией бактерий по изменению окраски средй, культуру с элективной и дифференцирующей сред непосредственно пересевают на среду, содержащую, г/л дистилированной воды:
ПЬ-фенилаланин 2,3-2,5 и NaCI
8,0-8,5, и инкубируют при 40-45 С в течение 3,5-4 ч.
Способ осуществляют следующим образом.
Материал от больного или из объектов внешней среды засевают в питательные среды для первичного выделения (среды Эндо, Плоскирева, Левина, висмут-сульфитная среда и среды обогащения), инкубируют 18-24 ч при
37 С в термостате, затем часть колонии, подозрительной на Citrobacf3r, инокулируют одновременно в 2 ряда лунок плексигласовой пластины (или бактериологические пробирки) с
0,2 мл питательной среды, цредваоиь тельно автоклавированной при 112 С в течение 15 мин, состава, г/л
9L-Фенилаланин . 2,3-2,5
Натрий хлористый 8,0-8,5
Дистиллированная вода . Остальное рН среды 7,4-7,6.
960263
Формула изобретения
Составитель Г. Смирнова
Техред N. Гергель Корректор Е.Рошко
Редактор Л.Лукач
Тираж 505 Подписное
ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий
113035, Москва, Ж-35,Раушская наб., д. 4/5
Заказ 7149/31
Филиал ППЧ "Патент", r. Ужгород, ул. Проектная, 4
Для подщелачивания среды исполь-. зуют 0,1 н. NaOH. Инкубацию посевов исследуемых культур проводят в термостате при 40-45 С.
Необходимость инокуляции колонии одновременно в 2 ряда лунок связана с тем, что инкубация представителей трибы Proteeae того же семейства при укаэанном режиме через 10-15 мин вызывает деэаминирование фенилаланина питательной среды. Внесение 10 в среду хлорного железа вызывает химическую реакцию и среда приобретает сине-зеленую окраску. По истечении 10-15 мин инкубаций в первый ряд лУнок вносят по 1 капле . 15 раствора индикатора (103-ый водный раствор хлорного железа).. Результаты учитывают в течение 1-2 с после внесения индикатора. При наличии в лунках представителей трибы Proteeae питательная среда приобретает сине-зеленую или интенсивно зеленую. окраску.
После учета результатов палетку (пробирки) инкубируют еще 3,5-4 ч в тех же условиях. Затем в лунки, в которых были получены отрицательные результаты на присутствие бактерий трибы Рго1 .ееае, вносят по
1 капле индикатора и учитывают результаты. При наличии в лунках (пробирках) культур Citrobacter питательная среда приобретает цвет интенсивно сине-зеленый, изумрудноэеленый или светло-зеленый. Способ, обеспечивает 1003 положительных 35 реакций.
Питательная среда на основе фенилаланина может быть приготовлена в малых объемах (10-100 мл) ex tempore. Для этого соответствующие навес- 40 ки ингредиентов вносят в дистиллированную воду, предварительно подтитрованную 0,1 í. NaOH, и нагревают на пламени горелки до полного растворения..Используется среда после охлаждения.
Использование изобретения позволяет ускорить способ идентификации бактерий рода.Citrobacter (30 ч), дифференцировать эти микроорганизмы от других представителей семейства Entегоbacgeriaceae, Pseudomonaceae и Vibrionaceae беэ дополнительных тестов, а также идентифицировать одновременно и представителей трибы Proteeae.
Способ идентификации бактерий рода Citrobacter путем посева исследуемого материала на элективную и дифФеренцирукщую среды с последукщим пересевом и инкубированием чистой культуры на питательной среде, содержащей ферментируемый субстрат, и идентификацией бактерий rro изменению окраски, среды, о т л и ч а юшийся тем, что, с целью ускорения способа, культуру с элективной и дифференцирующей сред непосредственно пересевают на среду, содержащую, г/л дистилированной воды
DL-Фенилаланин 2,3-2,5 и NaCI 8,08;5, и инкубируют при 40-45 С в течение 3,5-4 ч.
Источники информации, принятые во внимание при экспертизе
1. Методические рекомендации по идентификации бактерий рода цитробактер. М., МЗ.СССР < 1973, с. 4-9.
