Способ контроля качества тиогликолевой среды

 

1, j

И.А..Гавристова, З.И. Андреева и ff.Ã. Бендас, у,.. . " (72) Авторы изобретеиия

Государственный научно-исследовательский институтстандартизации и контроля медицинских биологических препаратов им. Л.А. Тарасевича (7! ) Заявитель (54) СПОСОБ КОНТРОЛЯ КАЧЕСТВА ТИОГЛИКОЛЕВОЙ

СРЕДЫ

1

Изобретение относится к области медицины, а именно к микробиологии.

Известен способ контроля качества тиогликолевой среды с использованием штамма Clostridium sporogeпез (Известен также способ контроля качества тиогликолевой среды путем выращивания культуры тест-штамма

Сlostr!d um почуi 198 с последующим хранением на питательной среде, получением рабочей культуры путем двукратного пассирования на среде

Тароцци и посевом ее в контролируемую среду (2);

Однако известный способ является недостаточно чувствительным.

Целью изобретения является повышение чувствительности способа.

Эта цель достигается тем, что сагласно способу контроля качества тиогликолевой среды путем выращивания культуры тест-штамма Clostridium navyi 198 с последующим хранением на

2 питательной среде, получением рабо= чей культуры путем двукратного пассирования на среде Тароцци и посевом ее в контролируемую среду, отличительной особенностью является то, что культуру Clostridium novyi 198 выращивают и хранят на питательной среде, содержащей,. г/л -воды:

Панкреатический гидролизат ка- . зеина неглубокой степени расщепления 15,0-20,0

Глюкоза 1,8-2,2

Хлористый натрий 5,0-6,0

Агар 0.9-1,1

Казеин хлоркальциевый

zo (r/íà 10 мл среды рН 7,8 0, 1 0,3-0,5 и перед посевом суспензию рабочей культуры с концентрацией 7,0+0,3 10 клеток/мп разводят изотоничным

5, 0 -6, 0

0,9-1,1

Зо

0,3 мл

3 99

:раствором хлористого натрия, содержащим редуцирующее вещество, при этом в качестве редуцирующего вещества используют тиогликолевую кислоту из расчета 0,3 мл кислоты.на 1 л раствора.

Пример. Исходную культуру

С1. почу1 198 получают в споровой форме на питательной среде следующего состава, г/л воды:

Панкреатический гидролизат каэеина неглубокой степени расщепления 1,0-20,0

Глюкоза 1,8- 2,2

Хлористый натрий

Агар

Каэеин хлоркальц иевый (г/на

10 мл среды) рН 7,8 0,1 0,3-0,5

Перед посевом на данную питательную среду двухсуточную культуру отделяют от среды выращивания (модифицированная среда Тароцци) центрифугированием при 3000 об/мин в течение 20 мин, подводят под оптический стандарт мутности, соответствующий

10 единицам с применением разводящей жидкости следующего состава, г/л:

Хлористый натрий 8,5

Тиоглико» левая кислота

Дистиллированная вода рН

710, 2 До 1 л

Затем. культуру высевают по 1 мл на ряд пробирок с 10 мл питательной. среды для получения спор. Посевы инкубируют в течение 48 ч при 37 C и путем микроскопировайия определяют наличие спор. Пробирки с исходной споровой культурой С1. почу1 198 закрывают резиновыми колпачками и хранят при температуре +4 С - +8 С, либо полученную культуру высушивают методом лиофильной сушки в геле гидрата окиси алюминия и хранят при той же температуре.

Для получения рабочей культуры споровую форму тест-,штамма по 1 мл пересевают на 2-3 пробирки с l0 мл среды Тароцци, инкубируют в течение

0808 4

20-48 ч при 37 С, после чего осуществляют второй пересев тест-штамма на 2-3 пробирки -с той же средой и проводят инкубйрбвание в течение

17-19 ч при 37 С.

Полученную культуру центрифугируют при 3000 об/мин в течение 20 мин, образовавшуюся биомассу подводят под оптический стандарт мутности, соответствующий 10 единицам, с использованием разводящей жидкости.

Иэ полученной суспенэии 1 мл культуры переносят в пробирку, содержащую 9 мл стерильной разводящей жидкости (разведение 10" ) и подобным образом последовательно получают десятикратные разведения культуры до седьмой пробирки - 10 .

Для посева на испытуемую среду используют четыре последних разведения: 10, 10, l0, 10 . Из каждого указанного разведения по

0,5 мл взвеси вносят в пробирки с

10 мл тиогликолевой среды, инкубируют посевы в течение 48 ч при 37 С, после чего производят учет результатов, Среда считается при.годной при росте тест-штамма не ниже, чем из разведения 10 6, что соответствует определенному количеству (30-40) засеянных микробных клеток.

Исследовано качество 7 серий тиогликолевой среды промышленного изготовления по известному и предложенному способам. Контрольной средой служила тиогликолевая среда серии

У 40. Разница в полученных результатах при оценке разных серий тиогликолевой среды по известному способу незначительна и составила

1 1д(l0 8 -10 ). Такая разница (1 1д) наблюдалась в данных и для контрольной серии У 40. По предложенному способу разница в результатах контроля испытуемых серий составила

3 lд (10 - 10 ) при стандартных результатах (10 ) одной и той же серии

И 40, выбранной в качестве контрольной.

Иэ 7 отконтролированных серий по предложенному способу было выявлено

2 серии среды низкого качества, которые не соответствуют предъявляемым требованиям, т.е. не обеспечивает рост минимальных количеств клеток тест-штамма, что соответствует посевной дозе шестого разведения (10 ), содержащей 30-40 микробных

15,0-20,0

1,8-2,2

5 9 клеток, тогда как по известному способу все серии среды оказались пригодными для проверки стерильности медицинских препаратов.

Использование изобретения позволит улучшить контроль стерильности медицинских препаратов на всех этапах их изготовления.

Формула изобретения

Способ контроля качества тиогликолевой среды путем выращивания культуры тест-штамма Сlostridium novyi 198 с паследующим хранением на питательной среде, получением рабочей культуры путем двукратного пассирования на среде Тароцци и посевом ее в контролируемую среду, о т л ич а ю шийся тем, что, с целью повышения чувствительности способа, культуру Clostridium novyi . 198 выращивают и хранят на питательной среде, содержащей, г/л воды:

Панкреатический гидролизат казеина неглубокой степени расщепления

Глюкоза

90808 4

Хлористый натрий 5,0-6,0

Агар 0,9-1,1

Казеин хлоркальциевый (г/на

10 мл среды) рН 7,8 0,1 - 0,3-.0,5 и перед посевом суспензию рабочей культуры с концентрацией 7,0 0,3 "

10,. 10 клеток/мл разводят изотоничным раствором хлористого натрия, содержащим редуцирующее вещество, 2. Способ по и. 1, о т л и ч а юшийся тем, что в качестве ре15 дуцирующего вещества используют тиогликолевую кислоту из расчета 0,3 мл кислоты на 1 л раствора.

Источйики информации, ze принятые во внимание при экспертизе

1. Фармакопея ЧССР, 1970 Изд. 3-е, 163

2. Инструкция по контролю стериль2s ности вакцин, анатоксинов, бактериофагов, сывороточных препаратов и аллергенов. Приложение к приказу 192 Из. СССР, 1979, 7-9 (прототип).

Составитель Е. Ярных

Редактор Г. Волкова Техред A.Áàáèíåö Корректор А. Язятко

Заказ 56/36 Тираж 521 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035 Москва Ж-35 Раушская наб. д. 4/5

В

Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, Ч