Патенты автора Колотьева Наталия Александровна (RU)
Изобретение относится к медицинской биотехнологии. Изобретение представляет собой способ выявления влияния низкомолекулярных биологически активных соединений на взаимодействие антиген-антитело, заключающийся в количественной характеристике изменений в площади флуоресцирующих комплексов с использованием метода конфокальной микроскопии, отличающийся тем, что 10 мкл низкомолекулярного биологически активного соединения вносят в полистироловую пробирку с 50 мкл венозной крови, предварительно разведенной раствором FAX flow до содержания эритроцитов 1×106/л, далее добавляют 10 мкл специфических к выбранному антигену антител, конъюгированных флуорохромным красителем, производят инкубацию в течение 20 минут в темном месте, перемешивают полученную смесь на вортексе, добавляют 2 мл раствора FAX flow и вновь перемешивают на вортексе, что составляет опытную пробу, контрольной пробой служит аналогичный раствор, не содержащий низкомолекулярного биологически активного соединения; затем выполняют конфокальную микроскопию опытного и контрольного образцов в режиме флуоресценции; выделяют кадр с флуоресцирующими комплексами; рассчитывают интенсивность пикселей кадра с флуоресцирующими комплексами по зеленому цвету, находят отношение интенсивности пикселей кадра с флуоресцирующими комплексами опытной и контрольной проб в процентах, значение интенсивности кадра с флуоресцирующими комплексами контрольной пробы принимают за 100%, при изменении отношения >35% по сравнению с контрольной пробой говорят о том, что исследуемое низкомолекулярное биологически активное соединение усиливает взаимодействие антиген-антитело, при изменении отношения <-35% по сравнению с контрольной пробой говорят о том, что исследуемое низкомолекулярное биологически активное соединение замедляет взаимодействие антиген-антитело, при изменении одного из отношений от -35% до 35% включительно говорят об отсутствии влияния выбранного низкомолекулярного биологически активного соединения на взаимодействие антиген-антитело. Изобретение позволяет количественно оценивать влияние низкомолекулярных биологически активных соединений на взаимодействие антиген-антитело. 4 ил.
СПОСОБ ВЫЯВЛЕНИЯ ВЛИЯНИЯ НИЗКОМОЛЕКУЛЯРНЫХ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ НА КОНФОРМАЦИЮ БЕЛКА // 2698628
Изобретение относится к биохимии. Предложен способ выявления влияния низкомолекулярных биологически активных лигандов на конформацию белка, при котором биологически активный лиганд низкомолекулярной массы в концентрациях 16 мкМ, 8 мкМ, 4 мкМ, 2 мкМ, 1 мкМ, 0,5 мкМ вносят в микрокапилляры «nanoDSF grade», содержащие белок в конечной концентрации 1 мкМ, получая опытные пробы, контрольной пробой служит раствор, содержащий белок в такой же конечной концентрации без добавления низкомолекулярного соединения; 10 мкл каждой из полученных опытных проб инкубируют в течение 5 минут в темном месте при температуре 25°С; проводят измерение эндогенной флуоресценции по остаткам тирозина и триптофана на приборе Prometheus NT.48 при интенсивности лазера 30%, длинах волн 330 и 350 нм, диапазоне нагрева от 20°С до 95°С, с шагом 1°С/мин; строят график зависимости флуоресценции от температуры нагревания, строят графики первых производных для полученных кривых; рассчитывают значение температуры пика и значение первой производной в точке пика для контрольной и опытных проб, рассчитывают отношения значений первой производной в точке пика опытной и контрольной проб в процентах, значение первой производной в точке пика контрольной пробы принимают за 100%, при изменении отношения >15% по сравнению с контрольной пробой говорят об изменении конформации белковой молекулы в сторону разворачивания, при изменении отношения <-15% по сравнению с контрольной пробой говорят об изменении конформации белковой молекулы в сторону сворачивания, при изменении отношения от -15% до 15% включительно говорят об отсутствии влияния выбранного низкомолекулярного лиганда на конформацию белковой молекулы. Изобретение обеспечивает объективную оценку конформационного состояния белковой молекулы. 1 ил., 3 табл., 3 пр.
Изобретение относится к медицине, а именно к клинической биохимии, и может быть использовано для выявления влияния низкомолекулярных биологически активных веществ на аффинитет белок-лигандной связи. Для этого осуществляют количественное определение титра антигенов гепатита вирусной этиологии в сыворотке пациентов методом иммуноферментного анализа. При этом биологически активное соединение низкомолекулярной массы вносят в лунку планшета с иммобилизованными антителами к антигену вируса гепатита перед этапом внесения сыворотки для определения воздействия на антитела или антигены. После чего инкубируют в течение 5 минут в темном месте и проводят иммуноферментный анализ. Строят калибровочный график зависимости оптической плотности от концентрации антигена вирусного гепатита. По полученному калибровочному графику рассчитывают титр антигенов в контрольных и опытных образцах. При изменении концентрации антигена на ≥±10% по сравнению с контрольным образцом делают вывод о наличии влияния исследуемого низкомолекулярного биологически активного вещества на аффинитет белок-лигандной связи. А при изменении концентрации антигена на <±10% - об отсутствии влияния выбранного низкомолекулярного биологически активного вещества на аффинитет белок-лигандной связи. Изобретение позволяет выявлять влияние низкомолекулярных биологически активных веществ на взаимодействие белков с лигандами путем определения титра антигенов гепатита вирусной этиологии в сыворотке пациентов. 1 ил., 2 табл., 2 пр.
СПОСОБ ОЦЕНКИ ДЕЙСТВИЯ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ НА АНТИГЕН-АНТИТЕЛЬНОЕ ВЗАИМОДЕЙСТВИЕ // 2484480
Изобретение относится к области медицины, в частности к биохимии, фармакологии, биологии, и может быть использовано для тестирования биологически активных веществ с учетом групповой принадлежности крови
