Патенты автора Кулагина Лариса Николаевна (RU)
Изобретение относится к области биотехнологии. Изобретение представляет собой способ получения и культивирования фибробластоподобных клеток из пульпы молочных зубов, включающий забор, подготовку, ферментативную обработку материала, выделение суспензии клеток при центрифугировании, где при появлении признаков выпадения молочного зуба у ребенка его родителям выдают стерильный пенициллиновый флакон с раствором Хенкса с антибиотиками, в который помещают выпавший зуб; после доставки флакона в лабораторию, зуб извлекают стерильным инструментом в чашку Петри и трижды отмывают стерильным раствором Хенкса с антибиотиками; переносят зуб в новую пробирку со стерильным раствором Хенкса с антибиотиками и помещают ее в медицинский холодильник на 24 часа; в оставшийся в транспортировочном флаконе раствор добавляют три капли сыворотки плодов коровы и помещают его в термостат, инкубируя при 37° в течение 24 часов, после чего проводят контроль стерильности забора; при отсутствии признаков контаминации материала в инсулиновый шприц набирают 0,2 мл 0,1% коллагеназы из панкреаса краба ООО «БиолоТ»; иглу шприца вводят в канал молочного зуба и аспирируют содержимое канала в шприц; переносят содержимое в центрифужную пробирку и инкубируют ее в течение двух минут при комнатной температуре; инактивируют действие фермента, добавляя в пробирку 2 мл стерильного 0,02% раствора Версена и 1 мл 10% полной ростовой среды α-МЕМ с глютамином; центрифугируют пробирку в холодовой центрифуге при температуре 4°С, скорости вращения 1200 об/мин в течение 5 минут; надосадочную жидкость утилизируют; осадок клеток ресуспендируют в полной питательной среде α-МЕМ с глютамином, включающей 10% FBS, 8 мкг/мл гентамицина; подсчитывают количество выделенных жизнеспособных клеток в камере Горяева, используя 0,4% раствор трипанового синего; высевают клетки в дозе 1×105 жизнеспособных кл./см2 в культуральный флакон с полной питательной средой α-МЕМ с глютамином, включающей 10% FBS, 8 мкг/мл гентамицина; культивирование проводят в CO2-инкубаторе при температуре 37°С, 5% CO2 и постоянной влажности; через день добавляют во флакон 0,2 мл новую аналогичную питательную среду; первую смену среды проводят на 7 сутки; кондиционированную культуральную среду из флакона с клетками отбирают пипеткой, центрифугируют ее в холодовой центрифуге при температуре 4°С, скорости вращения 1500 об/мин в течение 10 минут, после чего возвращают в культуральный флакон и добавляют свежую среду в соотношении 1:1; по достижении 80% конфлюентного монослоя проводят пересев клеток из расчета 1:2; 1 ПФ. Изобретение позволяет получить и культивировать фибробластоподобные клетки из пульпы молочных зубов. 1 табл., 1 ил.
Изобретение относится к медицине и может быть использовано для получения и культивирования фибробластоподобных клеток из пуповины новорожденного. Для этого проводят забор пуповины у здоровых женщин после рождения ребенка путем кесарева сечения. Пуповину трижды отмывают стерильным раствором Хенкса с антибиотиком от сгустков крови и слизи. Удаляют кровеносные сосуды. Оставшуюся ткань измельчают, переносят материал в центрифужные пробирки и заливают 0,2% раствором коллагеназы. Пробирки помещают в термошейкер при температуре +37°С, скорости вращения 100 об/мин на 16 часов. Фильтруют содержимое в новые пробирки. Вносят в них стерильный 0,02% раствор Версена в соотношении 1:1 и центрифугируют пробирки в холодовой центрифуге в течение 20 минут. Осадок клеток ресуспендируют в полной питательной среде и подсчитывают количество выделенных жизнеспособных клеток. Высевают клетки в культуральный флакон. Культивирование проводят в СО2-инкубаторе и смену среды проводят каждые 5 суток культивирования. По достижении 80% конфлюентности клеточного монослоя проводят пересев клеток из расчета 1:2. Изобретение позволяет получать фибробластоподобные клетки без риска контаминации условно-патогенной флорой. 1 табл.
Изобретение относится к медицине, лабораторным исследованиям и может быть использовано для обработки предметных стекол с зеркальным покрытием для культивирования и изучения культур клеток in vitro с помощью микроскопа МИМ-340. Способ обработки предметных стекол с зеркальным покрытием включает дезинфекцию путем погружения стекол в вертикальном положении в емкость с 70% этиловым спиртом на 30 минут; предстерилизационную очистку путем погружения стекол в вертикальном положении в емкость с дистиллированной водой объемом до 200 мл, в которой предварительно растворяют 5 г моющего средства; при исходной температуре раствора 30°С стекла выдерживают в нем в течение 30 минут, после чего каждое стекло моют в этом растворе с помощью стерильных ватных тампонов; ополаскивают стекла под проточной водой в течение трех минут, затем ополаскивают стекла дистиллированной водой в течение пяти минут; сушат стекла в вертикальном положении в ламинарном шкафу при комнатной температуре до полного исчезновения влаги; стерилизацию ультрафиолетовым облучением стекол в ламинарном шкафу в течение 30 минут; каждое стекло заворачивают в стерильный материал и помещают в стерильную чашку Петри, которую герметично закрывают.
