Патенты автора Полтавцев Андрей Михайлович (RU)
Изобретение относится к медицине, а именно к биотехнологии, и может быть использовано для получения биобезопасной культуры мезенхимальных стволовых клеток из Вартонова студня пуповины человека. Способ включает выделение из ткани пуповины после операции «кесарево сечение» первичной культуры мезенхимальных стволовых клеток из Вартонова студня. Причем при выделении мезенхимальных стволовых клеток пуповину освобождают от остатков крови и промывают в растворе Версена с добавлением антибиотиков 100 Ед./мл пенициллина, 100 мкг/мл стрептомицина, 0,25 мкг/мл амфотерицина в течение 1 ч при комнатной температуре на шейкере, вены канюлируют с обеих сторон и промывают физиологическим раствором (0,9%). Дезагрегацию ткани проводят раствором, содержащим 0,1% коллагеназы 2 типа и 0,15% коллагеназы 4 типа, приготовленным на среде DMEM/F12 в соотношении 1:1, инкубируют при 37°С в течение 30 мин, собирают отделившиеся клетки. Далее центрифугируют при 800 об/мин в течение 15 мин, получая осадок клеток, который ресуспендируют в ростовой среде DMEM/F12, содержащей 10% фетальной сыворотки крупного рогатого скота, 100 Ед./мл пенициллина, 100 мкг/мл стрептомицина, 2 мМ глютамина, 1 мМ пирувата натрия. Ресуспендируют осадок клеток в ростовой среде DMEM/F12 в соотношении 1:1, переносят в культуральные флаконы и культивируют в атмосфере, содержащей 5% СO2 до формирования 3/4 монослоя, меняя ростовую среду 3 раза в неделю. При достижении 3/4 монослоя клетки пересевают, получая культуру МСК, причем после 1 пассажа часть клеток используют для выявления наличия в культуре вирусов СПИД, гепатита В и С и микоплазмы методом ПЦР и в случае позитивного анализа на эти инфекции культура бракуется. Использование данного способа позволяет повысить выход и жизнеспособность мезенхимальных стволовых клеток, полученных из Вартонова студня пуповины человека. 1 табл.
Изобретение относится к медицине, а именно к биотехнологии, и может быть использовано для оценки остеогенного потенциала мезенхимальных стромальных клеток. Способ включает оценку экспрессию генов BGLAP Osteocalcin, BMPR1A, ВМР1, IGF1, COL1A1,COL3A1, ALPL, RUNX2, SMAD2, SMAD4, VDR, FGF-2, IGFR1, SPP1 Osteopontin, TGFBR1 методом реал-тайм ПЦР. По изменению экспрессии судят об изменении остеогенного потенциала мезенхимальных стромальных клеток, причем в качестве критерия повышения остеогенного принимают повышение экспрессии генов BGLAP Osteocalcin, ВМР1, IGF-1, COL1A1,COL3A1, ALPL, RUNX2, SMAD2, SMAD4, VDR и понижение экспрессии генов низкой дифференцировки BMPR1A, FGF-2, IGFR1, SPP1 Osteopontin, TGFBR1 на 20-й день культивирования. Использование данного способа позволяет сравнивать между собой различные культуры, а также разные пассажи одной и той же культуры, что позволит выбирать оптимальные клеточные культуры для использования в медицине. 1 табл.
Способ получения биобезопасной культуры мезенхимальных стволовых клеток из ворсин хориона человека // 2645255
Изобретение относится к области клеточной биологии, конкретно к получению биобезопасной культуры мезенхимальных стволовых клеток из ворсин хориона человека. Способ включает выделение из плаценты человека после операции «кесарево сечение» культуры мезенхимальных стволовых клеток из ворсин хориона, дезагрегацию ткани раствором, содержащим 0,2% коллагеназы 2 типа и 0,18% коллагеназы 4 типа, приготовленным на среде DMEM\F12 в соотношении 1:1 и инкубирование при 37°С в течение 30 мин. Далее собирают отделившиеся клетки, центрифугируют при 800 об/мин в течение 15 мин, получая осадок клеток, который ресуспендируют в ростовой среде DMEM\F12, содержащей 5% фетальной сыворотки теленка, 100 Ед/мл пенициллина, 100 мкг/мл стрептомицина, 2 мМ глютамина, 1 мМ пирувата натрия, ресуспендируют осадок клеток в ростовой среде DMEM\F12 (в соотношении 1:1), переносят в культуральные флаконы и культивируют в атмосфере, содержащей 5% СО2 до формирования 3\4 монослоя, меняя ростовую среду 3 раза в неделю, и при достижении 3\4 монослоя клетки пересевают в соотношении 1:2, причем после 1 пассажа часть клеток используют для выявления наличия в культуре вирусов СПИД, гепатита В и С и микоплазмы методом ПЦР и в случае позитивного анализа на эти инфекции культура бракуется. Изобретение позволяет получать биобезопасную культуру, не зараженную вирусами СПИДа, гепатита В и С и микоплазмы. 1 табл.
