Способ получения биобезопасной культуры мезенхимальных стволовых клеток из ворсин хориона человека

Изобретение относится к области клеточной биологии, конкретно к получению биобезопасной культуры мезенхимальных стволовых клеток из ворсин хориона человека. Способ включает выделение из плаценты человека после операции «кесарево сечение» культуры мезенхимальных стволовых клеток из ворсин хориона, дезагрегацию ткани раствором, содержащим 0,2% коллагеназы 2 типа и 0,18% коллагеназы 4 типа, приготовленным на среде DMEM\F12 в соотношении 1:1 и инкубирование при 37°С в течение 30 мин. Далее собирают отделившиеся клетки, центрифугируют при 800 об/мин в течение 15 мин, получая осадок клеток, который ресуспендируют в ростовой среде DMEM\F12, содержащей 5% фетальной сыворотки теленка, 100 Ед/мл пенициллина, 100 мкг/мл стрептомицина, 2 мМ глютамина, 1 мМ пирувата натрия, ресуспендируют осадок клеток в ростовой среде DMEM\F12 (в соотношении 1:1), переносят в культуральные флаконы и культивируют в атмосфере, содержащей 5% СО2 до формирования 3\4 монослоя, меняя ростовую среду 3 раза в неделю, и при достижении 3\4 монослоя клетки пересевают в соотношении 1:2, причем после 1 пассажа часть клеток используют для выявления наличия в культуре вирусов СПИД, гепатита В и С и микоплазмы методом ПЦР и в случае позитивного анализа на эти инфекции культура бракуется. Изобретение позволяет получать биобезопасную культуру, не зараженную вирусами СПИДа, гепатита В и С и микоплазмы. 1 табл.

 

Изобретение относится к области биотехнологии и клеточной терапии и касается получения из ворсин хориона человека биобезопасной культуры мезенхимальных стволовых клеток однородной клеточной популяции. Изобретение может найти применение в медицине для лечения различных заболеваний.

В настоящее время клеточная терапия находит все более широкое применение в медицине. Путем трансплантации стволовых клеток успешно лечат различные заболевания, такие как остеопороз (Патент РФ №2265442 от 10.12.2005), аллергические заболевания (Патент РФ №2250773 от 27.04.2005), паркинсонизм (Патент РФ №2259836 от 10.09.2005), травму головного мозга (Патент РФ №2216336 от 20.11.2003), онкологические заболевания (Патент РФ №2257219 от 27.07.2005), выращивают органы для трансплантации, изготавливают фармакологические препараты из их дериватов.

Мезенхимальные стволовые клетки (МСК) часто используют в роли трансплантата, т.к. они активизируют собственные резервы организма, способствуют образованию цитокинов и факторов роста.

МСК получают обычно из костного мозга (патент 2303632), хотя их можно выделять из фетальных органов гемопоэза, из скелетных мышц, из подкожной жировой ткани.

Выделение и культивирование МСК относительно несложно, но существует проблема получения однородной клеточной популяции мезенхимальных стволовых клеток в достаточном количестве для трансплантации и консервации впрок. По известным методикам при культивирование МСК из костного мозга обычно получают гетерогенные популяции клеток стромы с незначительным содержанием в них стволовых клеток. При работе с МСК используют традиционные методы работы с клетками (Культура животных клеток. Методы. Под ред. Р. Фрешни. М.: Мир. 1989 г.), в каждом конкретном случае подбирая индивидуальную последовательность действий, условия выделения и наработки клеточной массы.

Однако одним из наиболее перспективных источников получения мезенхимальных стромальных клеток являются ворсины хориона плаценты человека. Ворсины хориона - плодовая часть плаценты и, в силу своего происхождения, содержат значительно больше стволовых клеток, чем материнская часть плаценты. Плацента является одним из наиболее привлекательных источников сингенных и аллогенных стромальных клеток, так как получение клеток из нее является легитимным (Федеральный закон «О биомедицинских клеточных продуктах», 23 июня 2016 года), не связано с серьезными этическими проблемами и позволяет получать значительное количество биологического материала неинвазивным способом.

Известен способ лечения заболеваний роговицы у собак, заключающийся в ретробульбарном введении лекарственного вещества в непосредственной близости от патологического очага, отличающийся тем, что в качестве лекарственного средства используют мезенхимальные стволовые клетки пуповины или плаценты, взятые после нормальных родов, при этом осуществляют ретробульбарное введение клеток путем инъекции 1-2 мл физиологического раствора, содержащего 0,075-0,20×10 6 клеток/кг веса одномоментно 1-2 раза в год. Мезенхимальные стромальные клетки пуповины или плаценты были получены в соответствии со стандартной методикой следующим образом. Образцы пуповины или плаценты человека собирали после нормальных родов на 39-40 неделе гестации. Вены пуповины и плаценты канюлировали и промывали сначала раствором Хенкса, а затем 0,1% раствором коллагеназы I типа, приготовленным на среде DMEM без сыворотки, и инкубировали при 37°С 30 мин. Затем сосуды вновь промывали раствором Хенкса, ткань подвергали непродолжительному мягкому механическому воздействию и собирали отделившиеся клетки. Полученные клетки осаждали центрифугированием. Осадок ресуспендировали в среде DMEM, содержащей 10% сыворотки, 100 Ед/мл пенициллина, 100 ед/мкг стрептомицина, 2 мМ глютамина, 1 мМ пирувата натрия, 10 нг/мл базального фактора роста фибробластов (b-FGF), переносили в культуральные чашки и культивировали до формирования монослоя, меняя среду 2 раза в неделю. При достижении монослоя клетки пересевали в соотношении 1:2 (патент 2481112 RU).

Известен СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ ПРОИСХОДЯЩИХ ИЗ ПУПОВИННОЙ КРОВИ ПЛЮРИПОТЕНТНЫХ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК, ЭКСПРЕССИРУЮЩИХ ZNF281 (патент 2511417 RU).

Недостатком способа является то, что в крови подавляющая часть стволовых клеток преиндуцирована в кроветворном направлении и не может быть использована для лечения заболеваний, не связанных с патологией крови.

Известен СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ КЛЕТОЧНОЙ КУЛЬТУРЫ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ СОСУДИСТЫХ И ДЕМИЕЛИНИЗИРУЮЩИХ ЗАБОЛЕВАНИЙ НЕРВНОЙ СИСТЕМЫ И КЛЕТОЧНАЯ КУЛЬТУРА, ПОЛУЧЕННАЯ ЭТИМ СПОСОБОМ (патент RU 2347579), включающий в себя выделение из пуповины новорожденного после нормальных родов культуры стволовых клеток, отличающийся тем, что осуществляют выделение культуры аллогенных мезенхимальных стволовых клеток для парентерального введения их пациенту с неврологической патологией, при выделении аллогенных мезенхимальных стволовых клеток пуповину освобождают от остатков крови и промывают в растворе Версена с добавлением антибиотиков: 100 Ед./мл пенициллина, 100 ед/мкг стрептомицина, 100 ед./мл амфотерицина, в течение 1 ч при комнатной температуре на шейкере, вены канюлируют с обеих сторон и промывают сначала раствором Хенкса, а затем 0,1%-ным раствором коллагеназы 1 типа, приготовленным на среде DMEM, и инкубируют при 37°С в течение 30 мин, затем осуществляют механическое воздействие на ткань пуповины, собирают отделившиеся клетки, промывая их раствором Хенкса, полученную после механического воздействия и промывания суспензию клеток центрифугируют при 1000 об/мин в течение 5 мин, получая осадок клеток, который ресуспензируют в ростовой среде DMEM, содержащей 10% фетальной сыворотки крупного рогатого скота Ед./мл пенициллина, 100 ед./мкг стрептомицина, 2 мМ глютамина, 1 мМ пирувата натрия, ресуспендированный осадок клеток в ростовой среде DMEM переносят в культуральные чашки и культивируют до формирования монослоя, меняя ростовую среду DMEM 2 раза в неделю, и при достижении монослоя клетки пересевают в соотношении 1:2, а перед проведением клеточной терапии монослой переводят в суспензию путем обработки смесью раствора Версена и 0,25%-ного раствора трипсина в соотношении 1:1 в течение 20 мин при 37°С, которую затем трижды промывают физиологическим раствором с pH 7,2, затем суспензию осаждают центрифугированием в течение 5 мин при 1000 об/мин, осадок клеток ресуспендируют в стерильном физиологическом растворе, получая аллогенные мезенхимальные стволовые клетки пуповины человека в количестве от 1-5 млн клеток в 5 мл физиологического раствора. Способ по п. 1, отличающийся тем, что выделение аллогенных мезенхимальных клеток производят из пуповины новорожденного после нормальных родов на 38-40 недели гестации. Клеточная культура для лечения заболеваний нервной системы, включающая полученную из пуповины новорожденного культуру стволовых клеток для парентерального введения их пациенту, отличающаяся тем, что она получена с возможностью выделения культуры аллогенных мезенхимальных стволовых клеток по п. 1, причем количество аллогенных мезенхимальных стволовых клеток в клеточной культуре - в диапазоне от 1 до 5 млн клеток в 5 мл физиологического раствора. Способ выбран нами в качестве прототипа. Недостатком прототипа является низкий выход МСК и низкая жизнеспособность клеток, вызванная применением в качестве дезаггреганта смеси смесью раствора Версена и 0,25%-ного раствора трипсина в соотношении 1:1 в течение 20 мин при 37°С. Кроме того, такая культура может нести опасность для реципиента и медицинского персонала, проводящего манипуляции с такими препаратами из-за их изначальной возможной зараженности вирусами СПИДА, гепатитов В и С и микоплазмой.

Известен способ получения мезенхимальных стволовые клеток человека из хориальной стромы плаценты (Патент RU 225225), избранный нами в качестве прототипа. Ткани человека измельчают и обрабатывают раствором коллагеназы в среде Игла в модификации Дюльбекко, при этом децидуальную или амниотическую оболочку плаценты обрабатывают коллагеназой типа I, а хориальную строму плаценты - коллагеназой типа IV. Затем полученную суспензию очищают от эритроцитов с помощью лизирующего раствора с последующей последовательной фильтрацией через фильтры с размером пор 100 и 10 мкм. Изобретение позволяет повысить однородность клеточной суспензии, выход целевого продукта и жизнеспособность клеток. Недостатком метода является недостаточный пролиферативный потенциал и малое количество стволовых клеток. Кроме того, такая культура может нести опасность для реципиента и медицинского персонала, проводящего манипуляции с такими препаратами из-за их возможной зараженности вирусами СПИДА, гепатитов В и С и микоплазмой.

Нами предложен способ получения биобезопасной культуры мезенхимальных стволовых клеток из ворсин хориона человека, включающий в себя выделение из плаценты человека после операции «Кесарево сечения» культуры мезенхимальных стволовых клеток из ворсин хориона, причем при выделении мезенхимальных стволовых клеток отделяют ворсины хориона от плаценты, освобождают от остатков крови и промывают в растворе Версена с добавлением антибиотиков 200 Ед/мл пенициллина, 200 мкг/мл стрептомицина, 0,25 мкг/мл амфотерицина в течение 1 ч при комнатной температуре на шейкере, вены канюлируют с обеих сторон и промывают раствором Хенкса, затем осуществляют механическое и ферментативное воздействие на ткани пуповины и собирают отделившиеся клетки, отличающийся тем, что дезаггрегацию ткани проводят раствором, содержащим 0,2% коллагеназы 2 типа и 0,18% коллагеназы 4 типа, приготовленным на среде DMEM\F12 в соотношении 1:1 и инкубируют при 37°С в течение 30 мин, собирают отделившиеся клетки, центрифугируют при 800 об/мин в течение 15 мин, получая осадок клеток, который ресуспендируют в ростовой среде DMEM\F12, содержащей 5% фетальной сыворотки теленка 100 Ед/мл пенициллина, 100 мкг/мл стрептомицина, 2 мМ глютамина, 1 мМ пирувата натрия, ресуспендируют осадок клеток в ростовой среде DMEM\F12 в соотношении 1:1, переносят в культуральные флаконы и культивируют в атмосфере, содержащей 5% CO2 до формирования 3\4 монослоя, проводя замену ростовой среды 3 раза в неделю на 50%, и при достижении 3\4 монослоя клетки пересевают в соотношении 1:2, причем после 1 пассажа часть клеток используют для выявления наличия в культуре вирусов СПИД, гепатита В и С и микоплазмы методом ПЦР и в случае позитивного анализа на эти инфекции культура бракуется.

Предложенный способ позволяет получать биобезопасную культуру, не зараженную опасными вирусами. Пересев клеток при достижении ими 3\4 монослоя позволяет поддерживать их в стадии логарифмического роста, что препятствует дифференцировке и повышает пролиферативный потенциал. Применение в качестве дезагрегирующего агента смеси содержащей 0,2% коллагеназы 2 типа и 0,18% коллагеназы 4 типа приготовленным на среде DMEM\F12 в соотношении 1:1 повышает выход и жизнеспособность клеток (табл. 1), они соответствуют фенотипу МСК. Экспрессия поверхностных маркеров полученных клеток соответствует иммунофенотипу МСК: клетки положительны по CD13, CD73, CD44, CD90, CD105, CD29, CD54 и отрицательны по CD34, CD80, CD83, CD86, CD HLA-DR.

Способ получения биобезопасной культуры мезенхимальных стволовых клеток из ворсин хориона человека, включающий в себя выделение из плаценты человека после операции «кесарево сечение» культуры мезенхимальных стромальных клеток из ворсин хориона, причем при выделении мезенхимальных стромальных клеток отделяют ворсины хориона от плаценты, освобождают от остатков крови и промывают в растворе Версена с добавлением антибиотиков: 200 Ед/мл пенициллина, 200 мкг/мл стрептомицина, 0,25 мкг/мл амфотерицина, в течение 1 ч при комнатной температуре на шейкере, затем осуществляют механическое и ферментативное воздействие на ткань, центрифугируют, метод отличается тем, что дезагрегацию ткани проводят раствором, содержащим 0,2% коллагеназы 2 типа и 0,18% коллагеназы 4 типа, приготовленным на среде DMEM\F12 в соотношении 1:1 и инкубируют при 37°С в течение 30 мин, собирают клетки, центрифугируют при 800 об/мин в течение 15 мин, получая осадок клеток, который ресуспендируют в ростовой среде DMEM\F12, содержащей 5% фетальной сыворотки теленка, 100 Ед./мл пенициллина, 100 мкг/мл стрептомицина, 2 мМ глютамина, 1 мМ пирувата натрия, пассируют, в соотношении 1:1, культивируют в атмосфере, содержащей 5% СО2 до формирования 3\4 монослоя, меняя ростовую среду 3 раза в неделю, и при достижении 3\4 монослоя, клетки пересевают в соотношении 1:2, причем после 1 пассажа часть клеток используют для выявления наличия в культуре вирусов СПИД, гепатита В и С и микоплазмы методом ПЦР и в случае позитивного анализа на эти инфекции культура бракуется.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к иммуноцитокинам, и может быть использовано в медицине для лечения рака. Получают иммуноцитокин, содержащий: конъюгат интерлейкина 15 и домена sushi IL-15Rα, ковалентно связанный с антителом или его фрагмент, направленным против антигена, имеющего отношение к неоваскуляризации опухоли или к внеклеточному матриксу опухоли, или опухолевого антигена.

Группа изобретений относится к среде для культивирования клеток млекопитающих, способу ее получения и способу продуцирования рекомбинантного полипептида с использованием указанной среды.

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к химерному антигенному рецептору (CAR), обладающему специфичностью к CD22, что может быть использовано в медицине.

Группа изобретений относится к области биохимии. Предложены автомат и автоматизированный способ культивирования клеток, стерильный одноразовый комплект для культивирования клеток в автомате, опорное средство для взбалтывания для автомата и применение вышеуказанных автомата, комплекта и средства для культивирования стволовых клеток типа CD34+ или мононуклеарных клеток крови, таких как лимфоциты.

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к модифицированным in vitro дендритным клеткам, и может быть использовано в медицине. Полученные определенным способом дендритные клетки используют в составе фармацевтической композиции или набора для регулируемой экспрессии полипептида, обладающего функцией интерлейкина-12 (IL-12) в присуствии активирующего лиганда.

Настоящая группа изобретений относится к биотехнологии и иммунологии. Предложены способы получения целевого антитела с модулированным галактозилированием (варианты), способы модулирования галактозилирования целевого антитела (варианты) путем оптимизации культуральной среды.

Настоящее изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к способу улучшения сократительной способности сердца, повышения капиллярной плотности или снижения миокардиальной гипертрофии у пациента с поврежденным миокардом, что может быть использовано в медицине.

Изобретения касаются безбелковой среды и способа ее использования. Охарактеризована безбелковая среда для культивирования клеток СНО.
Изобретение относится к области медицинской биотехнологии, а именно к применению клеточной линии меланомы кожи человека 369 ADmel, хранящейся в Специализированной коллекции культур клеток позвоночных Российской коллекции клеточных культур под регистрационным номером РККК (П) 727Д.
Изобретение относится к области биохимии. Изобретение представляет собой культуральную среду для мезенхимальных клеток человека, включающую базальную среду для мезенхимальной стволовой клетки, лизат наружного слоя лейкоцитов/тромбоцитов человека (лейкоцитарную пленку) в количестве от 5 до 20% (об./об.); инсулин в количестве от 2 от 20 мг/л; селенит натрия в количестве от 0,005 до 1,730 мг/л; этаноламин в количестве от 1 до 8 мг/л и основной фактор роста фибробластов (bFGF) в количестве от 5 до 25 нг/мл, причем упомянутая среда дополнена эмбриональной бычьей сывороткой (FBS) в количестве от 10% до 20% (об./об.) или добавкой клеточной культуры, полученной из плазмы человека (CCS) в количестве от 10 до 40% (об./об.).

Изобретение относится к области биохимии. Предложен биореактор для выращивания тканеинженерных конструкций. Биореактор содержит станину, два электродвигателя и камеру с прозрачными стенками и герметичными крышками. Камера включает трубки для притока и оттока жидкостей, узел для фиксации образцов, сменную герметичную внутреннюю камеру и поршень. В поршне выполнен паз под внутреннюю камеру и отверстия для фиксации сменных переходников поршня. Первая герметичная крышка камеры является съемной, имеет сквозное центральное отверстие для крепления фиксирующей детали и сквозные отверстия для прохождения трубок. Вторая герметичная крышка камеры закреплена неподвижно и с наружной стороны имеет паз для передачи вращения с вала электродвигателя. В зоне центрального отверстия с внутренней стороны съемной крышки выполнен паз для фиксации внутренней камеры, закреплена гофра, а к гофре прикреплен сменный узел для фиксации образцов. На станине установлен узел для преобразования вращения вала электродвигателя в возвратно-поступательное движение узла для фиксации образцов, причем камера прикреплена к установленному на станине сменному внутреннему кольцу подшипника. Изобретение обеспечивает фиксацию образцов различного типа, длины и диаметра, а также оптимальное соответствие объема камеры биореактора размерам зафиксированного образца. 6 з.п. ф-лы, 24 ил.

Изобретение относится к области биохимии, генной инженерии и биотехнологии, в частности к конъюгату рекомбинантной бутирилхолинэстеразы человека и окисленной каламиновой кислоты со средней молекулярной массой 27 кДа. Указанный конъюгат предназначен для лечения, предотвращения, подавления или снижения токсических эффектов фосфорорганических соединений. Настоящее изобретение также относится к способу получения указанного конъюгата. Представленный способ включает культивирование клеток СНО, трансформированных вектором экспрессии, содержащим ген бутирилхолинэстеразы человека, очистку и химическое сиалирование полученной рекомбинантной бутирилхолинэстеразы. Изобретение относится также к фармацевтической композиции, содержащей указанный конъюгат, и к способу лечения, предотвращения, подавления или снижения токсических эффектов фосфорорганических соединений у животного. Настоящий способ предусматривает введение животному указанных конъюгата или композиции. Настоящее изобретение позволяет получать конъюгат и фармацевтическую композицию для лечения, предотвращения, подавления или снижения токсических эффектов фосфорорганических соединений. 4 н. и 10 з.п. ф-лы, 13 ил., 4 табл., 1 пр.

Изобретение относится к биотехнологии. Описана биоинженерная конструкция для восстановления больных или поврежденных тканей. Указанная конструкция содержит мезенхимальные стволовые клетки и слой внеклеточного матрикса, продуцируемый указанными клетками, при этом указанные мезенхимальные клетки не являются производными эмбриона человека и выращены в условиях среды с заданным химическим составом, свободной от i) сыворотки животных и экстрактов тканей животных и ii) свободной от привнесенных вирусов животных или межвидовых вирусов, для получения указанного слоя внеклеточного матрикса, который синтезируют и собирают указанные мезенхимальные стволовые клетки. Указанная культуральная среда содержит (i) основную питательную среду, (ii) трансформирующий фактор роста альфа (ТФР-α), (iii) инсулин, (iv) L-глютамин или производное L-глютамина, и (v) аскорбат или производное аскорбата. Изобретение может быть использовано в терапии, направленной на восстановление больных или поврежденных тканей. 15 з.п. ф-лы, 17 ил., 13 пр.

Изобретение относится к области клеточной биологии, конкретно к получению индуцированной нервной стволовой клетки из дифференцированной клетки. Способ включает доставку в клетку, не являющуюся нервной, набора для индукции перепрограммирования, состоящего из белка SOX2 или молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующей белок SOX2, и белка HMGA2 или молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующей белок HMGA2, либо увеличение экспрессии указанных белков в клетке с последующим культивированием. Изобретение позволяет производить скрининг стимулятора или ингибитора регенерации, индивидуально подобранного для пациента терапевтического средства, а также способ лечения и профилактики заболеваний, обусловленных повреждением нервных стволовых клеток. 7 н. и 12 з.п. ф-лы, 31 ил., 21 пр.

Изобретение относится к биотехнологии. Конкретно, изобретение относится к предупреждению феномена усиления токсичности глазных инстилляций при совместном применении комбинации лекарственных препаратов. Используют культуры клеток конъюнктивы, при этом осуществляют подбор оптимальных концентраций глазных препаратов путем оценки метаболитической активности культуры клеток конъюнктивы качественно через морфологическую оценку с помощью визуального контроля и количествено с помощью МТТ-теста. Оценка осуществляется при воздействии указанных глазных препаратов или их комбинаций в различных концентрациях. Оценивают продукцию цитокинов в сравнении с контролем по уровню транскрипции после 48 ч инкубирования с указанными глазными препаратами или их комбинацией в подобранной концентрации. В качестве контроля используют не обработанную культуру клеток конъюнктивы. Усиление продукции цитокинов указывает на отсутствие усиления токсичности глазных инстилляций при совместном применении лекарственных препаратов, что позволяет применять проверенную комбинацию лекарственных препаратов для лечения воспалительных заболеваний конъюнктивы и роговицы. Изобретение может быть использовано для предупреждения феномена усиления токсичности глазных инстилляций при совместном применении комбинации лекарственных препаратов. 4 з.п. ф-лы, 3 ил., 3 табл., 1 пр.

Изобретение относится к области биохимии. Предложен способ совместного культивирования зрелых адипоцитов с клетками крыс. Способ включает выделение зрелых адипоцитов из жировой ткани крыс, получение в монокультуре монослоя прикрепленных к вкладышу адипоцитов, формирование слоя клеток крыс на дне сосуда, заполнение питательной средой всего объема данного сосуда и размещение вкладыша с монослоем адипоцитов поверх его. Изобретение обеспечивает однотипную локализацию адипоцитов в объеме культурального сосуда, а также возможность микроскопического наблюдения за состоянием всех клеточных популяций. 6 ил., 3 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии. Изобретение представляет собой способ хранения почек поросят при субнормальных температурах (0÷4°C) от 2 до 7 суток для получения монослоя первично трипсинизированных культур. Изобретение позволяет увеличить длительность хранения изолированной почки. 2 з.п. ф-лы, 5 пр., 3 табл., 5 ил.

Группа изобретений относится к биотехнологии. Предложен мультиэлементный референтный материал и способ его получения. Способ получения мультиэлементного референтного материала предусматривает формирование групп животных по числу токсических материалов, которые входят в состав получаемого референтного препарата, введение в организм животного токсичного материала - металла в виде его водорастворимой соли и отбор жидкой биологической среды животного после анализа на содержание в ней токсиканта. При этом в организм животного вводят токсичный металл, выбранный из ряда, включающего ртуть, кадмий, свинец, а в качестве жидкой биологической среды отбирают кровь или мочу по меньшей мере от двух групп животных. Смешивают мочу или кровь, отобранную от каждой группы животных, с известными концентрациями токсического материала, с получением композитной жидкой биологической среды, содержащей по меньшей мере два токсичных металла с последующим замораживанием и ее лиофилизацией. Заявленные изобретения позволяют сократить продолжительность способа получения мультиэлементных референтных материалов с требуемым содержанием токсического материала. 2 н.п. ф-лы, 2 пр.

Изобретение относится к области медицины. Изобретение представляет собой способ иммобилизации клеточной подложки на основе биомембран в условиях жидкой культуральной системы путем фиксации подложки-носителя клеток на основе биологической мембраны, где подложку-носитель клеток на основе биологической мембраны механически фиксируют в расправленном состоянии на предварительно залитом в чашку Петри стерильном агар-агаре при помощи стерильных игл от инсулиновых шприцев под острым углом вкола от 10 до 60 градусов, вершина которого направлена к подложке-носителю клеток. Изобретение позволяет обеспечить надежную фиксацию подложки-носителя клеток на основе биологической мембраны. 4 ил.

Изобретение относится к области биомедицины и касается способа получения ростовой добавки к среде для культивирования клеток человека из тромбоцитарной массы доноров. Представленный способ включает нормирование образца тромбоцитарной массы до заданной концентрации тромбоцитов 1,75×109 кл/мл посредством центрифугирования тромбоцитарной массы при 3130 g в течение 40 минут при 20°С и ресуспендирования осадка в супернатанте заданного объема до указанной концентрации тромбоцитов. Трехкратный температурный лизис нормированного образца путем замораживания на сутки до -80°С и размораживания при +37°С. Осаждение клеточного дебриса посредством центрифугирования при 3130 g в течение 40 минут при 20°С, сбор супернатанта с получением индивидуального образца лизата тромбоцитов с последующим его микроскопическим контролем при увеличении ×200 на наличие в поле зрения не более 3-х фрагментов тромбоцитов. При этом стандартизацию проводят путем пулирования равных по объему индивидуальных образцов лизата, полученных из тромбоцитарной массы не менее 12 доноров обеих тендерных групп, и полученный лизат тромбоцитов центрифугируют при 3130 g в течение 40 минут при 20°С, с последующей ультрафильтацией на фильтрах 0,45 мкм или 0,22 мкм, полученную ростовую добавку делят на аликвоты требуемого объема и замораживают до -80°С. Изобретение позволяет получить стандартизованные образцы нексеногенной ростовой добавки для культивирования клеток человека разных типов с функциональной активностью образцов, определяемой по скорости прироста тест-культур, различающейся не более чем на 10,0%. 3 ил., 8 табл., 2 пр.

Изобретение относится к области клеточной биологии, конкретно к получению биобезопасной культуры мезенхимальных стволовых клеток из ворсин хориона человека. Способ включает выделение из плаценты человека после операции «кесарево сечение» культуры мезенхимальных стволовых клеток из ворсин хориона, дезагрегацию ткани раствором, содержащим 0,2 коллагеназы 2 типа и 0,18 коллагеназы 4 типа, приготовленным на среде DMEM\F12 в соотношении 1:1 и инкубирование при 37°С в течение 30 мин. Далее собирают отделившиеся клетки, центрифугируют при 800 обмин в течение 15 мин, получая осадок клеток, который ресуспендируют в ростовой среде DMEM\F12, содержащей 5 фетальной сыворотки теленка, 100 Едмл пенициллина, 100 мкгмл стрептомицина, 2 мМ глютамина, 1 мМ пирувата натрия, ресуспендируют осадок клеток в ростовой среде DMEM\F12, переносят в культуральные флаконы и культивируют в атмосфере, содержащей 5 СО2 до формирования 3\4 монослоя, меняя ростовую среду 3 раза в неделю, и при достижении 3\4 монослоя клетки пересевают в соотношении 1:2, причем после 1 пассажа часть клеток используют для выявления наличия в культуре вирусов СПИД, гепатита В и С и микоплазмы методом ПЦР и в случае позитивного анализа на эти инфекции культура бракуется. Изобретение позволяет получать биобезопасную культуру, не зараженную вирусами СПИДа, гепатита В и С и микоплазмы. 1 табл.

Наверх