Образец для электронно-микроскопической ультрамикротомии

 

I. ОБРАЗЕЦ ДЛЯ ЭЛЕКТРОННОЕ ИКРОСКОПИЧЕСКОЙ :.УЛЬТРАМИК-. РОТОМИИпоавг.св.М 86645О, о г ли-, чающийся тем, что с целью повышения его Ш1фо1%1атЕШ1ос1Я) ковус выполнен усеченным, a цштнлр - оптически прозрачным в вианмой части спектра. 2. Образец по п. 1, о т л в ч a ю . щ и и с я тем, что отнош ве .диаметров оснований усечишого конуса составляет 1,25-2.0. 13. Образец по п. t, о т л и чаю щ и и с я тем, что. цилщвр в&гаолвев в виде тонкостш:ной тру&Ш| ввугреегавй диаметр которой не менее диаметра мваьш&го основания конуса. W с

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (3% (11) 3(50 С 0l И 1/28

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

flO ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (61) 866450. (21) 3428977/1821 (22) 27,04,82, (46). 07,08.83, Бюл. % 29 (72) В, Г. С3щоркин (74) Горьковский государственный университет им, Н. И. Лобачевского (53} 543.053(088 8) (56) 4.. Авторское свидетельство СССР

3Ô 866450 кл, С 03. М 3./28, 3.980 (прототиц) ° (54)(57) l. ОБРАЗЕЦ ДЛЯ ЭЛЕКТРОННО-МИКРОСКОПИЧЕСКОЙ УЛЬТРАМИКРОТОМИИпоавт.св.«% 866450, о т л н-,. а lo ш и и с я тем что с целью повм шения его информативности, конус выполнен усеченным, а пилар — оптически прозрачным в вщ нмой части сшжтра.

2, Образец по ц. Х, о т л и ч а юm и и с я тем, что отношение диаметров оснований усеченного конуса составляет

i t,25 2,0, 3. Образец по п. 3., о т л и ч а юm и и с я тем, что. цилиндр выполнен в виде тонкостенной трубки, внутренний диаметр которой не менее диаметра меньшего основения конуса.

Ф 1033

Изобретение относится к технике подготовки материала для исследования в электронном микроскопе, а точнее к образцам,для . прицельной электронно-микроско» пической ультрамикротомии. 5

По основному авт. св, % 866450, известен образец для электронно-микроскопической ультрамикротомии, состоящий из цилиндра, выполненного из твердого ма-. териала с низким коэффициентом линейного g расширения и низкой текучестью, например из керамики, соединенного своей торцовой поверхностью с конусом, выполненным из заполимеризованной заливочной среды,.в терминальной (нижней) части ко- 15 торого расположен .исследуемый объект размером 0,,1-0,2 мм Р1 1.

Однако известный образец предназначен для выполнения рандомизированной электронно-микроскопической ультрамикро- < томии с объекта, например кусочка ткани, когда выбор определенного участка образца не требуется, и для исследователя не имеет значения с какой клетки будет изготовлен ультратонкий срез.

Следовательно, этот образец нельзя испольэовать,для прицельной электронномикроскопической ультрамикротомии, так как цилиндр оптически непрозрачен, и предварительное изучение (выбор) объекта невозможно. Кроме того, в терминаль30 ной части конуса образца нельзя располагать множество объектов, различающихся .между собой по тем или иным морфологическим критериям, которые можно было бы подвергнуть анализу в световом микро-З5 скопе, с целью выбора для ультрамикротомии определенного типа клеток, например, мегакариоцитов костного мозга, так как все типы клеток этого препарата должны быть расположены в одной плоскости (рас-4О пластаны на горизонтальной поверхности) для их просмотра в световом микроскопе.

Uem изобретения — повышение информативности образца..

Указанная цель достигается тем, что 45 в образце, содержащем цилиндр, выполненный иэ твердого материала с низким коэффициентом линейного расширения и низкой текучестью и снабженный конусом, выполненным из заполимеризованной заливочной среды, которая жестко соединена с цилиндром, а также исследуемый объект, расположенный в нижней конической части образца, конус выполнен усеченным, а цишпШр — оптически прозрачным в видимой 55 части сйектра. !

Отношение диаметров оснований усеченного конуса составляет 1,25 2,0.

903 3 цилиндр выполнен в виде тонкостенной трубки, внутренний диаметр которой не менее диаметра меньшего основания конуса.

В результате такого выполнения элементов образца образуется плоская поверхность в терминальной части конуса, на которой могут быть распластаны биообъекты, например гетерогенные клетки пунктата костного мозга или сложные по составу гистоструктуры, что создает благоприятные условия для их просмотра и выбора с помощью светового микроскопа на этапе подготовки образца к прицельной ультрамикротомии. Соотношение диаметров большего основания (базапьной части) и меньшего основания (терминальной части) усеченного конуса целесообразно выбирать в пределах 1,25 2,0. Это соотношение является наиболее оптимальным и имеет значение для процедуры изготовления образцов (извлечения готовых образцов из ячеек матрицы). Увеличение диаметра терминальной части усеченного

1 конуса (приближение усеченного конуса по форме к цишпщру) приведет к затруднению этой процедуры и по данной причине является нецелесообразным. Уменьшение диаметра терминальной части конуса также неоправдано, так как это приведет к снижению полезной площади терминальной поверхности и, следовательно, на ней может быть размещено значительно меньшее количество гетерогенных объектов, что соответственно ухудшает условия выбора искомых структур вследствие их малочисленности на условной единице площади терминальной поверхности конуса. Этот фактор приобретает особое значение при выборе для прицельной ультрамикротомии крайне малочисленных интересующих исследователя объектов, располагающихся среди множества прочих. цилиндр может быть выполнен в виде полого цилиндра с тонкими стенками (оптически прозрачного в продольном направлении в видимой части спектра, что необходимо для прохождения света от конденсатора светового микроскопа и освещения снизу терминальной поверхности усеченного конуса с находящимися на ней биообъектами), например из керамики, причем внутренний диаметр полого цилиндра должен быть не менее диаметра терминальной части усеченного конуса, так как в случае уменьшения диаметра просвета цилиндра освещенность поверхности усеченного конуса, на которой находятся объекты, будет неполной (затененной по креям), что снижает возможность полноценного просмотра объектов на

Составитель В. Гаврюшин

Редактор Н, Сташишина Техред И,Метелева Корректор О. Билак

Заказ 56l2/45 Тираж 873 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж 35, Раушская наб., д, 4/5

Филиал ППП "Патент, r. Ужгороц, ул. Проектная, 4

3 О33 всей поверхности усеченного конуса, а .увеличение диаметра неоправдано, так как избыток света по периферии площади конуса с объектамп не будет использован.

На чертеже показан образец для при5 цельной электронно-микроскопической игр амикротомии.

Образец состоит из заполимериэованно го заливочного материала l в вщ е усеченного конуса, прочно соединенного своей10 более широкой частьюсторцом полого mrМ лиидра 2, выполненного иэ твердого материала, например из керамики (керамической трубки), а на термической части усеченного конуса расположены исследуемые t5 объекты 3, предназначенные для выбора под контролем светового микроскопа.

С образцом работают следующим образом.

Образец помещают на предметный сто-.20 лик светового микроскопа так, чтобы исследуемые объекты 3 находились сверху, а снизу от конденсатора микроскопа направляют свет, который, прохоця через полый цилиндр 2 образца, освещает объек-25 ты, распластанные на терминальной час\ ти конуса 1. Под визуальным контролем с помощью метчика отмечают содержащии искомые объекты участок на поверхности образца, на котором будет заточена "пирамида и произведена прицельная ультрамик

Ф

30 ротомия. После приготовления пирамидки" (операция по срезанию вокруг выбранного участка образца, например определенной выбранной клетки, заполимеризованной заливочной среды со всеми прочими объ- З5 ектами, которым не было отдано предпоч- тение в процессе отбора участка с теми или иными структурами на поверхности усеченного конуса) образец плотно эажи40

903 4 мают в патроне объектадержателя ультра« микротома, причем зажатию подвергают только цилиндр 2, обладакюций низким коэффициентом линейного расширения и низкой текучестью. Так как силы деформации не действуют на эаливочный материал, находящийся на торце образца, в последнем устраняется эффект текучести, в силу чего получают ультратонкие срезы стабильной толщины в соответствии с заданными параметрами. О стабильности толщины приготовленных срезов свидетельствует однозначная интерференционная картина отраженного света в серии ультратонких срезов.

Таким образом, конструктивные особенности образца обеспечивают возможность размещения множества гетерогенных объектов на терминальной части усеченного конуса, освещения распластанных объектов снизу от конденсатора светового микроскопа через светооптически прозрачный (полый) цилиндр и, следовательно, выбор интересующих исследователя структур из множества гетерогенных объектов для последующей прицельной ультрамикротомии. При этом образец обледает всеми достоинствами, свойственными двухфрагментным образцам, главным из которых является отсутствие твердотельной текучести образца при зажатии его в патроне объектодержателя ультрамикротома и, следовательно, высокое качество изготавливаемых срезов.

Кроме того, при изготовлении предлагаемых образцов достигают значительной экономии дорогостоящего заливочного материала поскольку основная часть об3 разца выполнена не из заливочной среды, а из пустотелого керамического цюппщра.