Способ количественного определения налидиксовой кислоты

 

СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ НАЛИДИКСОВОЙ КИСЛОТЫ, включающий приготовление анализируемой пробы, взаимодействие ее с химическим реагентом и измерение спектра, отличающийся тем, что, с целью снижения предела обнаружения налидиксовой кислоты, анализируемую пробу подвергают взаимодействию со стандартным раствором хлорида тербия при рН среды 6,5-7,0(С последующим измерением интенсивности полос спект-. ра сенсибилизированной люминесценции тербия, по которой определяют .концентрацию нгшидиксовой кислоты. л со оо 00 li

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

3(5D G 01 И 21/64, ГОСУДАРСТ8ЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕН

Н ABTOPCH0MV СВИДЕТЕЛЬСТВУ

1 (2i) 3423332/18-25 (22) 16.04,82 (46 ) 30.08. 83. Бюл. 9 32 (72 ) С. В. Бельтюкова, Т.Л. Грицай, Н.С. Полуэктов и Т.Б. Кравченко (71) Физико-химический институт

AH Украинской ССР(53) 535.37(088.8) (56) 2. Мощковский М.Д. Лекарствен- ные средства. ч. II, М., "Медицина"

1977, с. 241-242.

2. Huudt Н.К.Ь., Barlov Е.C. Thin

Layer Chromatographic Method. for the

Quantitative Analysis of Nalidixic

Acid in Human Plasm.. . — "Chromatogr,Biomed. App1™, 1981, ч, 223, М 1, р. 165-172.

З..Cuisinaud I., Ferry N., Seccia М., Bernard М., Sassard I. Determination of Nalidixic Acid апй its

Tvo Major Metabolites in Human Plazma and Urine by Reversed-phase-highperformance Liquid Chromatography, "Chromatogr", 1970, ч,181, Р 3-4 р. 394-406, 4. Зубенко В.Г., Щерба И.А. УФспектрофотом трический метод анализа налидиксовой кислоты. — "Фармацевтический журнал", 1975, 9 3, с. 28.

5. Гафари A.Â., Туркевич М.М. и Рудый Р.В. Определение налидиксовой кислоты в жидкостях и тканях организма и лекарственных формах.

"Фармацевтический журнал", 1977, Р 2, .с, 92-93 (прототип1.

„„SU„„1038841 A (54)(57) СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ НАЛИДИКСОВОЙ КИСЛОТЫ, включающий приготовление анализируемой пробы, взаимодействие ее с химическим реагентом и измерение спектра, отличающийся тем, что, с целью снижения предела обнаружения налидиксовой кислоты, анализируемую пробу подвергают взаимодействию со стандартным раствором хлорида тербия при рН среды 6,5-7,0 с последующим измерением интенсивности полос спект-. ра сенсибилиэированной люминесценции тербия, по которой определяют .концентрацию налидиксовой кислоты.

10 38841

Изобретение относится к аналитической химии- а именно к способам количественного люминесцентного определения налидиксовой кислоты—

1-этил-7-метил-4-он-1, 8-нафтириди н-3- карбоновой кислоты.

В СССР препарат импортируется иэ

Венгрии и Югославии под названиями

"Невиграмон" и "Неграм" соответственно, и широко используется как антибактерь альное средство,. в частности, при инфекциях мочевых путей (циститы, пиэлиты), а также для профилактики инфекций при операцих на почках (1).

Известно несколько способов количественного определения налидиксовой кислоты в лекарственных формах и биологических жидкостях: хроматография в тонком слое на пластинах с силикагелем и люминесцентная индикация (2 ), жидкостная хроматография под высоким давлением на колонках с обращенными фазами (3).

Известен также стектрофотометри" ческий способ определения налидиксовой кислоты в чистых препаратах (4).

Недостатки указанных способов сложное аппаратурное оформление, длительность выполнения и невысокая

-чувствительность определения.

Наиболее близким к предлагаемому является способ количественного определения налидиксовой кислоты в жидкостях, тканях организма и лекарственных формах, включающий приготовление анализируемой пробы, взаимодействие ее с химическим реагентом и измерение спектра (5 ).

Так, в частности, в ряде биологических объектов проводят осаждение белков вольфраматом натрия в присутствии Н $0, экстракцию налидиксовой кислоты метанолом и спектрофотометрическое определение ее по собственной полосе поглощения с Л с,„д= 255 либо 327 нм.

Недостатки указанного способаневысокая чувствительность определения, необходимость работы в ультрафиолетовой области спектра, где возможно наложение спектров многих органических веществ.

Цель изобретения — снижение предела обнаружения налидиксовой кислоты.

Поставленная цель достигается тем, что согласно способу количественного определения налидиксовой кислоты, включающему приготовление анализируемой пробы, взаимодействие ее с химическим реагентом и измерение интенсивности спектра, анализируемую пробу подвергают взаимодействию со стандартным раствором хлорида тербия при рН среды 6,5 - 7,0 с последующим измерением интенсивности полос спектра сенсибилиэированной люминесценции тербия, по которой определяют концентрацию налидиксовой кислоты.

Сенсибилизация люминесценции тербия в его соединении с налидиксо5 вой кислотой, обусловленная поглощением света органической частью молекулы и передачей э нер гии воз бужденного состояния ионам тербия, приводит к понижению предела обнаружения

10 налидиксовой кислоты на порядок величины по сравнению с прототипом при одновременном сохранении экспрессности и простоты определения °

Способ осуществляют следующим

)5 образом

К анализируемому раствору добавляют стандартный раствор хлорида тербия, создают в растворе нейтральную среду (рН 6,5-7,0) с помощью уротропина, регистрируют интенсивность люминесценции при "ease = 546 нм.

Содержание налидиксовой кислоты в пробе определяют по калибровочному графику либо по Методу добавок.

При определении налидиксовой кислоты в биологических жидкостях и тка- . нях организма выделение налидиксовой кислоты осуществляется методом, опи« санным в (5 ).

Пример. Количественное опреЗО деление налидиксовой кислоты в лекарственных формах ("Невиграмон").

Точную навеску препарата "Невиграмон" растворяют в мерной колбе в 0,1 н.НаОН, нагревая на водяной

35 бане.

Для получения стандартного раствора хлорида тербия (1 мг/мл) точную навеску оксида тербия растворяют в соляной кислоте, выпаривают до

4р получения остатка влажных солей и

:разбавляют дистиллированной водой.

В пробирку помещают 0,1 мл исследуемого раствора с содержанием налидиксовой кислоты 0,1-0,01 мкг/мп, приливают 0,2 мл стандартного раствора. хлорида тербия, содержащего

1 мг/мл ТЬОХЗ, 0,6 мл 40%-ного раствора уротропина, и доводят объем до 10 мл водой.

Спектры люминесценции регистрируют с помощью спектрографа ИСП-51 или другого спектрофлуориметра при

Л = 546 нм. Люминесценцию возбуждают излучением ртутной лампы

СВД-120A со светофильтром УФС-2.

Растворы комплексов устойчивы во времени и способны сохранять люминесцентные свойства в течение нескольких часов. Содержание налидиксовой кислоты определяют по калибро60 вочному графику. Определение возможно проводить и по методу добавок.

По величине пиков люминесценции растворов пробы и пробы .с добавками рассчитывают содержание налидиксовой кислоты в пробе.

1038841

При малых содержаниях налидикбовой кислоты необходимо регистрировать, интенсивность люминесценции холостого опыта и вычитать ее из интенсивности люминесценции пробы.

Предел обнаружения налидиксовой 5 кислоты равен 0,01 мкг/мл, Точность и достоверность способа были проверены в лабораторных услоОпределение напидиксовой кислоты в препарате

"Невиграмон"(n=5 t =2,8) 1

Введено, Найдено, Я t мкг мкг и

0,0012 0,04+0,0015

0,002 0 10+0 0025

0,012 0,50+0,015

0,01б 0,90 0,020

3,7

2,5

3,0

2,2

Составитель Н.Воров

Редактор А. Мотыль Техред B.äàëåêoðåé Корректор И. Ватрушкина

Зяказ 6221/50 Тираж 873 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент"у г. ужгород, ул. Проектная, 4

0,04

0,10 0 i50

0,90

0,.041

О,ФО

0,49

0,88 виях путем статической обработки ре зультатов анализа. препарата "Невиграмон" (cM. таблицу).

Предлагаеияй способ позвсщяет по сравнению с llgpToTHIIoM понизить предел обнаружения налидиксоэой кислоты на порядок величины, составляя 0,01 мкг/мл.