Способ подготовки почвенного образца для электронно- сканирующего микроскопирования

 

1. СПОСОБ ПОДГОТОВКИ ПОЧВЕННОГО ОБРАЗЦА ДЛЯ ЭЛЕКТРОННО-СКАНИРУКЬ ЩЕГО МИКРОСКОПИРОВАНИЯ,.включающий зачистку почвенного образца скальпелем , наклеивание его на столик-держатель электропроводящим клеем и на пыление золота в вакууме о т л и чающийся тем что, с целью iповышения точности измерений,, образец почвы покрывают со. всех сторон клеем на водной основе, после его высыхания верхнюю часть почвенного образца срезают и В1шерживают в парах биофиксатора в течение 2-3 мии с последующим высушиванием при ко натвой температуре., 2. Способ по п.. 1, о т я и ч а ющ и и с я тем, что в качестве клея на водной основе используют поливиI нилацетатный клей, а в качестве фиксатора - осмиевую каслоту. (Л

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУ БЛИН. жи а 01М

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н ABTO| CHOMV СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 3509199/30-15 (22) 03. 11. 82 (4Q 2802„84. Бюл.. 9 8 (72) А.А. Бобров .и Ю.Г.Гельцер (71) ИГУ им М.В.Ломоносова (53) 631.427 ° 23(088.8) ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (56) 1. Парфенова E È, Ярилова E.A.

Руководство к микроморфологическим исследованиям в почвоведении.

N., Наука, 1977, с. 165.

2. Добровольский Г.В., Шоба С.А.

Растровая электронная микроскопия почв. И., изд-во ИГУ, 1978, с. 17. (54) (57) 1. СПОСОБ ПОДГОТОВКИ ПОЧВЕННОГО ОБРАЗЦА ДЛЯ ЭЛЕКТРОННО-СКАНИРУЮЩЕГО ИИКРОСКОПИРОБАНИЯ,.включакщий

„.SU„„76 2 А зачистку почвенного образца скальпелем, наклеивание его на столик-держатель электропроводящим. клеем и на пыление золота в вакууме о т л и -.

-ч а ю шийся тем, что, с целью ,повышения точности измерений обра» эец почвы покрывают со. всех сторон клеем на водной основе, после его высыхания верхнюю часть почвенного образца срезают и выщериивают в па рах биофиксатора в течение 2-3 мии с последующим высушиванием при комнатной температуре

2. Способ по п., 1, о т л и ч а ю шийся тем, что в качестве клея на водной основе используют поливи.нилацетатный клей, а в качестве био g

:фиксатора - осмневую кислоту.

1076832

Способ относится к биологии и почвоведению, в частности к способам . микроскопических исследований биологических объектов.

Известен способ подготовки почвы для микроскопических исследований путем фиксации образца канадским или пихтовым бальзамами и искусственными полимериэующимися смолами с последующим получением тонкого среза почвы — почвенного шлифа 51).

Однако данный способ сложен в исполнении и дорогостоящий, так как используются вещества, отечественные аналоги которых отсутствуют. Кроме того, способ не обеспечивает подго- 15 товку образца к электронно-сканирующей микроскопии с сохранением всех почвенных компонентов (особенно почвенных микроорганизмов и простейших), так как способ предусматривает обра- 2( ботку почвенного образца погружением в кипящие растворы бальзамов и смол.

Это искажает результаты исследований и делает практически невозможным иэу чение п6чвениых простейших и микроор-2 ганиэмов.

Известен также способ подготовки почвы для электронно-сканирующего микроскопирования, включающий зачистку почвенного образца скальпелем, на-ЗО клеивание его на столик-держатель электропроводящим клеем и напыление золота в вакууме (23.

Однако известный способ характеризуется сложностью сохранения нативной структуры почвенного образца иэ-за его непрочности. В большинстве случаев в период подготовки образцы почв разрушаются, а исследование проводят по сколам почвенного образца, т.е. только по поверхностям поч- 40 венных агрегатов. Изучение внутриагрегативной (внутрипедной) почвенной массы практически невозможно.

Кроме того, известным способом нельзя изучить почвы, легкие по меха-45 ническому составу (супесчаные, песчаные), а также исследовать внутрен" ний состав многочисленных легко разрушающихся почвенных структур биогенного происхождения (капролиты дождевых червей, экспременты почвенных беспозвоночных) .

Цель изобретения — повышение точ- . ности измерений.

Поставленная цель достигается reM, что образец почвы покрывают со всех сторон клеем на водной основе, после его высыхания верхнюю часть почвенного образца срезают и выдерживают в парах биофиксатора в течение 2-3 мин с последующим высушиванием при комнатной температуре.

В качестве клея на водной основе используют поливиналацетатиый клей, а в качестве биофиксатора - осмиевую кислоту 65

Пример 1. Прн помощи пинцета переносим монолит почвы в крышку алюминиевого бюкса с поливинилацетатным клеем (слой клея 2-3 мм) и выдерживаем 2 мин. Этого времени достаточно для того, чтобы клей пропитал основание понолита почвы. Эатем помещаем почвенный монолит на предварительно обезжиренный столик-держатель и покрываем монолит с боковых сторон поливинилацетатным клеем с помощью кисточки. После эатвердевания клея скальпелем срезаем верхнюю часть монолита на необходимой для исследования глубине. Затем помещаем столик-держатель с монолитом в бюкс с осмиевой кислотой на 2 мин для . фиксации простейших и микроорганизмов. Высушиваем образец при комнатной температуре.

П р и и е р 2. Берем комочек почвы объемом не более 1 см . При помощи пинцета погружаем его на 1/3 в поливинилацетатный клей и .выдерживаем

3 мин. После затвердевания клея скальпелем делаем срез в проклеенной нижней части почвенного образца так, чтобы получилась ровная поверхность.

На предварительно обезжиренный сто» лик-держатель наносим каплю поливинилацетатного клея и помещаем почвенный образец нижней частью на столик-держатель. Кисточкой покрываем со всех сторон комочек почвы клеем.

После эатвердевания клея скальпелем срезаем верхнюю часть образца и фиксируем приклееный образец в парах осмиевой кислоты 3 мин. Высушиваем при комнатной температуре.

Слабокорродированный фитолит в ненарушенном образце почвы (дерново-подзолистая почва, гумусо-аккумулятивный горизонт Aq)

Пример 3. Капролит при помощи скальпеля переносим в крышку алюминиевого бюкса с поливинилацетатным клеем (слой клея 1-2 мм) на 1 мин.

Затем помещаем на предварительно обезжиренный столик-держатель и кисточкой покрываем его со всех сторон поливинилацетатным клеем. После эатвердевания клея делаем срез верхней части капролита и приклеенный капролит фиксируем 3 мин в парах осмиевой кислоты

Обрастание свежеобразовавшегося капролита (2-й день) актиномицетами.

Пример 4. При помощи шприца пропитываем поливинилацетатным клеем слой почвы толщиной 3 мм и площадью 1 см . После эатвердевания клея кисточкой покрываем переднюю стенку почвы над площадной размером

1 см2. При помощи скальпеля осторожно открывает поочередено боковые стенки монолита и покрываем их поливинилацетатным клеем. Вынимаем моно1076832

Составитель A.Шпажников

Редактор Н.Стащишина Техред И. Надь Корректор Г. Решетиик

Заказ 739/42 Тираж 823 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР о делам изобретений и открытий

113035, Москва, X-35, Раушская наб., д. 4/5

° ае филиал ППП Патент, г.ужгород, ул;Проектная, 4 лит из почвы и скальпелем удаляеи прилипшие песчаные частицы, зачищаем нижнюю часть монолита.

На предварительно обезжиренный столик-держатель наносим каплю поливинилацетатного клея. После затвердевания клея скальпелем осторожно срезаем верхнюю иасть монолита и фиксируем почвенный образец в парах осмиевой кислоты 2 мин. Высушивание проводим как и в предыдущих примерах при комнатной температуре.

Обрастание минеральной частицы актиномицетами.