Способ получения средства, обладающего иммуностимулирующим действием

 

(19)RU(11)1077089(13)C(51)  МПК ⁵    _A61K35/28Статус: по данным на 27.12.2012 - прекратил действиеПошлина: учтена за 20 год с 07.04.2001 по 06.04.2002

(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СРЕДСТВА, ОБЛАДАЮЩЕГО ИММУНОСТИМУЛИРУЮЩИМ ДЕЙСТВИЕМ

Изобретение относится к медицине и может быть использовано при производстве лекарственных препаратов, стимулирующих иммунную систему. Известен способ получения иммуностимулятора из красного костного мозга, включающий культивирование клеток костного мозга в питательной среде, последующее отделение клеток центрифугированием, гель-хроматографию супернатанта на сефадексе G 50 с целью отделения балластных примесей и концентрирования активной фракции. Недостатком известного способа является то, что полученное вещество оказывало влияние только на стимулирование В-системы иммунитета. Целью изобретения является получение средства, активирующего В- и Т-лимфоциты. Поставленная цель достигается тем, что в способе получения средства, обладающего иммуностимулирующим действием, включающем экстракцию активного вещества из красного костного мозга, отделение балластных примесей и выделение целевого продукта лиофильным высушиванием, в качестве сырья используют замороженные дробленные кости, содержащие красный костный мозг, экстракцию проводят 3%-ным водным раствором уксусной кислоты с добавлением хлористого цинка при соотношении хлористого цинка и уксусной кислоты 1: 1000, недостаточную жидкость обрабатывают охлажденным до (-3)-(-5)^оС ацетоном, из полученного осадка выделяют активное вещество растворением в воде при рН 6-7. П р и м е р. Берут грудную кость убойных животных, укладывают ее на противни и замораживают при -40^оС, дробят на дробилке перед экстракцией. Дробленую кость загружают в реактор с охлаждением в раствор 3%-ной уксусной кислоты (1 ч. сырья и 5-6 ч. раствора кислоты) и туда же добавляют хлористый цинк из расчета 1 г ZnCl₂ на 1 л уксусной кислоты. Экстракцию проводят 48 ч с перемешиванием по 1 ч 3 раза в день. После окончания экстракции субстрат центрифугируют в течение 20 мин со скоростью 3000 об/мин. Надосадочную жидкость декантируют и к ней добавляют ацетон, охлаждаемый до -4^оС в соотношении 1:5 (1 ч. элюата и 5 ч. ацетона), перемешивают. Формирование осадка происходит в течение 24 ч при (-3)-(-10)^оС. Осадок высушивают, затем измельчают и растворяют в дистиллированной воде при 20^оС из расчета 20 г порошка в 1 л воды (2%-ный раствор) при рН = 6,0. Водную экстракцию проводят 3 ч при непрерывном перемешивании и при комнатной температуре. Удаляют балластные вещества путем фильтрации. В отфильтрованный прозрачный слегка желтоватый раствор препарата добавляют уксусной кислоты до рН 4,0-5,0. Раствор стерильно фильтруют через пластины EKS, разливают во флаконы и лиофилизируют. Получают в каждом флаконе 10 мг лиофилизированного порошка белого цвета. Изучение физико-химических свойств полученного вещества, выделенного из красного костного мозга, с помощью методов гель-фильтраций, ионообменной хроматографии, электрофореза в тонком слое целлюлозы и аминокислотного анализа показало, что они являются полипептидами с мол.м. 2000-10000 дальтон. Изучение биологической активности полипептидов, выделенных из костного мозга, проведено на 40 морских свинках весом 300-400 г. Животным I группы, опытной, вводили ежедневно внутримышечно по 1 мг препарата в течение 10 сут. Животным II группы, контрольной, по аналогичной схеме вводили физиологический раствор. У животных до и после курса введения полипептида, полученного из красного костного мозга, определяли количество кариоцитов, активных Т-лимфоцитов, В-лимфоцитов, О-лимфоцитов в тимусе, селезенке и лимфоузлах. Результаты исследований представлены в таблице. Из таблицы следует, что введение полипептидов костного мозга животным увеличивает достоверно все показатели иммунитета в тимусе, увеличивает количество кариоцитов, активных Т-лимфоцитов и О-лимфоцитов в селезенке, Т-лифоцитов в лимфоузлах. Согласно этим данным можно сделать вывод о тотальной стимуляции иммуноноэза в тимусе, частично в селезенке и лимфоузлах. Технико-экономическое преимущество предложенного способа по сравнению с базовым объектом, известным способом получения гуморального фактора (САП) костного мозга усматривается в том, что вещество, полученное известным способом, содержало достаточное количество балластных веществ, в результате чего САП (стимулятор антителопродуцентов) оказывал влияние на функционирование только В-системы иммунитета. По результатам исследований вещества полученного предложенным способом видно, что оно является стимулятором Т-системы, В-системы иммунитета. Это в свою очередь позволяет пpедполагать эффективность применения биологически активного вещества, полученного из красного костного мозга при состояниях, сопровождающихся тотальным угнетением иммунной системы. Технология подготовки и переработки сырья предложенного способа способствует максимальному извлечению низкомолекулярных полипептидов и позволит получить более высокий выход конечного продукта по сравнению с базовым объектом, где сырьем служил костный мозг интактных доноров.

Формула изобретения

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СРЕДСТВА, ОБЛАДАЮЩЕГО ИММУНОСТИМУЛИРУЮЩИМ ДЕЙСТВИЕМ, включающий экстракцию активного вещества из красного костного мозга, отделение балластных примесей и выделение целевого продукта лиофильным высушиванием, отличающийся тем, что, с целью получения средства, активирующего В- и Т-лимфоциты, в качестве сырья используют замороженные дробленные кости, содержащие красный костный мозг, экстракцию проводят 3%-ным водным раствором уксусной кислоты с добавлением хлористого цинка при соотношении хлористого цинка и уксусной кислоты 1 : 1000, надосадочную жидкость обрабатывают охлажденным до (-3) - (-5)^oС ацетоном, из полученного осадка выделяют активное вещество растворением в воде при рН 6 - 7.

РИСУНКИ

Рисунок 1

PC4A - Регистрация договора об уступке патента Российской Федерации на изобретение

Номер и год публикации бюллетеня: 27-1999

(73) Патентообладатель:
ООО "Клиника Института биорегуляции и геронтологии"

Договор № 8609 зарегистрирован 28.04.1999

Извещение опубликовано: 27.09.1999        

---