Питательная среда для выращивания энтомопатогенных бактерий

 

ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ВЫРАЩИВАНИЯ ЭНТОМОПАТОГЕННЫХ БАКТЕРИЙ,включающая кукурузную муку В качестве источника углерода, источники азота и минеральных солей и водопроводную ВОДУ, отличающаяся тем, что, с целью увеличения выхода бактерий , а также удешевления питательной среды, она содержит в качестве источника азота и минеральных солей отжим-т ную жидкость - отход переработки льна При следующем соотношении компонентов , мае.%: Кукурузная мука 0,5-1 Отжимная жидкость отход переработки 3-4(по сульна хому весу) Водопроводная вода Остальное

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (19) (11) 3(51) С 12 N 1/20

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

ГОСУДАРСТ8ЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И OTHPblTMA

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 3462122/28"13 (22) 23.04.82 (46) 30.06 84 Бюл, 9 24 (72) Л.A.Солодянкин (71) Центральный научно-исследова» тельский институт промыаленности лубяных волокон (53) 663.14 (088.8) (56) 1.Авторское свидетельство СССР

)) 609763, кл. С 12 N 1/16, 1977

2.Авторское свидетельство СССР

М 533285, кл. С 12 N 1/00, 1978. (54)(57) ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ВЫРАЩИ

ВАНИЯ ЭНТОИОПАТОГЕННЫХ БАКТЕРИИ,включаюшая кукурузную муку в качестве источника углерода, источники азота и минеральных солей и водопроводную воду, отличающаяся тем, что, с целью уВеличения выхода бактерий, а также удешевления питательной среды, она сОдержит в качестве источника азота и минеральных солей отжим-, ную жидкость — отход переработки льна при следующем соотношении компонентов, мас.Ъ)

Кукурузная мука 0,5-1

Отжимная жидкость отход переработки льна 3-4 (по сухому весу)

Водопроводная вода Остальное

C ф

1100306

Изобретение относится к микробиологической промышленности., в частности к питательным средам для выращивания микроорганизмов -, продуцентов бактериальных препаратов.

Известна питательная среда, представляющая собой мочильную жидкость, полученную при переработке льносоломы Г13 .

Однако эта питательная среда не пригодна,цля выращивания энтомопатогенных бактерий, поскольку в качестве источника углерода она содержит в основном органические ниэкомолекулярные кислоты (до 4000-5000 мг/л).

Наиболее близкой к предлагаемой по технической сущности и достигаемому эффекту является питательная среда для выращивания энтомопатогенных бактерий (23, включающая кукурузную муку в качестве источника углерода, источники азота и минеральных солей и воду. Среда в качестве источника азота и минеральных веществ содержит активный ил (в сухом или жидком виде) при следующем соотношении компонентов:

Кукурузная мука, r 10-15

Сухой активный ил,г 10-30

Вода водопроводная, мл До 1000 или кукурузная мука, г 10-15 жидкий активный ил,мл 250-750

Вода водопроводная,мл До 1000

Сухой (жидкий) активный ил, получемый на заводах кормовых дрожжей, по своим питательным свойствам обладает ценными качествами: содержит

50% сырого протеина, витамины и минеральные элементы.

Питательные среды, содержащие активный ил заводов кормовых дрожжей, приготавливают следующим образом.

Отвешивают и высыпают в реактор нужное количество сухого ила или кукурузной муки (либо других продуктов или субпродуктов, содержащих полисахариды), в ту же емкость заливают по расчету водопроводную воду с температурой 30-40 С, перемешивают, устанавливают рН 7,8-8,0 при помощи

ЗОЪ-ного раствора едкой щелочи. Кипятят 15 мин, перемешивают, при этом проверяют значение рН, которое должно составлять 7,5-8,0. Полученную среду стерилизуют при 120 С или пропускают через установку непрерывной стерилизации.

После стерилизации рН среды должно быть в пределах 6,8-7,2 ° Полученную среду для ферментации с целью производства биомассы засевают жидкой посевной культурой (инокулятом) в количестве 3-4% по отношению к ферментационной среде.

Сущность изобретения заключается

30 в следующем, Отжимная жидкость содержит (сухое вещество) при следующем соотношении компонентов, вес.В:

Сырой протеин 20-40

35 Минеральный остаток (иэ них Р О 30- 40%)

Пектиновые вещества

Лигнин

Целлюлоза

40 Полисахариды

820,0

2"3

10-12

14-25

3-4

Отжим из вымоченного льна получают в производственных условиях от 1-й пары вальцов отжимно-промыв45 ной машины, создающей давление на вымоченную льносолому (тресту) в пределах 40-80 кг/см йо"ширине слоя.

Получаемый под высоким давлением вальцов экстракт льна содержит белковые и пектиновые вещества стебля льна, которые не переходят свободно в мочильную жидкость при биологичес- кой мочке. При прохождении через вальцы отжимно-промывной машины ткани и клетки набухшей льносоломы раэ55 рываются и их содержимое переходит в отжимную жидкость, которая может служить для микроорганизмов в соста", ве питательной среды источником азота и углерода.

Количество отжимной жидкости в питательной среде регламентируется интересами производства .препаратов на этой питательной среде, Эту величину удобно выражать через количест65 во сухого вещества (в жидкой или выоднако известная питательная среда содержит парафины 1,9-2,9%, токсические и дурнопахнущие продукты, образующиеся при кислотном гидролизе древесины, а азот доминирует в основ5 ном в виде микробной биомассы и является трудноусвояемым продуктом, что не позволяет получить высокий выход бактерий. Кроме того, среда достаточно дорогая.

10 Целью изобретения является увеличение выхода бактерий, а также удешевление питательной среды.

Поставленная цель достигается тем, что питательная среда для выраi5 щивания энтомопатогенных бактерий, включающая кукурузную муку в качестве источника углерода, источники азота и минеральные соли и воду, содержит в качестве источника азота и минеральных солей отжимную жидкостьотход переработки льна при следующем соотношении компонентов, мас.Ъг

Кукурузная мука 0,5"1,0

Отжимная жидкостьотход переработки льна 3-4(по сухому весу)

Водопроводная вода Остальное

1100306

Прототип

Показатели

Осадок отжимной жидкости сухой 3 мас.Ъ

Кукурузйая мука 0,5 мас.%

Состав

Ил БВК сухой 3 мас.Ъ

Кукурузная мука l мас.Ъ

Вода водопроводная.

До 100%

Вода водопроводная до 1000 мл

Количество живых микробных тел, млрд/мл

3,01+0,18/3,26+0,16

2,67+0,06/3,43+0,06

6,70/6,80

6,55/6,95 рН среды рН культуральной жидкости

7,75/8,05

7,40/7,80

Таблица 2

Ж гибели гусениц

Прототип

Дозировка спор на одну особьВид микроорганизма

Предлагаемая среда на 5-й

1 день на 5-й день в конце опыта

20 дней в конце опыта

20 дней

Bac thuringiensis

2 млн, 46,7.

200 тыс..75, 5

82,2

9.7, 8

Var galleriae

71,1 100,0

77,8

Вас.thuringiensis

2 млн. 42,2

62,2

57,8

88g7

Vai dendrolimus

200 тыс. 31,1

51,1

53 3

88,9

Пример. Отвешивают и высыпа- жимную жидкость в количестве 3% и ют в варочный аппарат высушенную от- 65 кукурузную муку,в ту же емкость засушенной отжимной жидкости). При содержании в питательной среде 1-2% отжимной жидкости (по сухому веществу) в культуральной жидкости нарастание титра микробных тел не превышает 1,5-2,5 млрд/wr, что недостаточ- 5 но. При увеличении концентрации отжимной жидкости до 6-7% (по сухому

Hp и м е ч а н и е. Показатели 30 накопления микроорганизмов при выращивании на предлагаемой среде и на среде, принятой за прототип: в числителе для Bacil 1 us .thuringiensis var

galleriae Jsak; в знаменателе " для 35

Вас111из thuringiensic var dendro-.

limus.

Кроме того, как показали исследования, данная питательная среда с веществу) и выше затягивается про- цесс вегетативного деления клеток, замедленно идет процесс спорообразования, время формирования свободных спор удлиняется до 4-5 сут и выл.

Сравнение предлагаемой питательной среды с известной (прототип) представлено в табл. 1.

Т а о л и ц а 1

1 выращенными на ней микроорганизмами характеризуется высокой инсектицидностью, также лучше поедается насе комыми и гусеницами, что приводит к более высокой их гибели (например, гусеницами овощной моли (galleria

mellanella Е) .

В табл. 2 приведены данные, показывающие влияние питательной среды на инсектицидность бактерий °

1100306

Таблица 3

Титр живых спор, млрд мл

Вар. дендролимус рН

Состав среды, Мас.В среды культуральной жидкости

Вар. галлерия

Отжимнан жидкость 2,0 2,24+0,09 2,36+0,11

6 60

7,40

0,5

6 70

7,10

Кукурузная мука

Вода водопроводная Оста

3,01+0,18

6 80

7,80

7,40

6,70

Вода водопроводная .Ост.

Отжимная жидкость 4,0

Кукурузная мука 1,0

Вода водопроводная Ост.

3,55+0,26

3,27+0,21

6,70

8 20

6,80

7,70

° °

Ил БВК сухой Котовского завода 3,0 3,04+0,17 2,88+0,14

6,75

8,15

6,60

7 95.Ил БВК Котовского завода сухой

2,0 2,55+0,07 2,68+0,12

6,85

8,20

Кукурузная мука

1,0

6,60

7,95

Вода водопроводная Ост.

ВНИИПИ Ваказ 4543/23 . Тираж 522 Подписное

Филиал ППП "Патент" г Ужгород ул Проектная 4 ливают по расчету водопроводную воду с температурой 30-40 С, перемешивают, устанавливают рН 7,8-8,2 при помо ци

30%-ного раствора едкого натра. Кипятят 15-20 мин, перемешивают, проверяют рН, значение которого должно

5 составить около 7,4-7,8. Полученную среду .стерилизуют при 121-128 с или пропускают через установку непрерывной стерилизации. После стерилизации рН среды должен быть в пределах 10

6,6-7,2. Полученную среду для ферменОтжимная жидкость 3,0 3,26+0,16

Кукурузная мука 0,5

Кукурузная мука 1,0

Вода водопроводная Ост.

Титр живых спор культивирования в лабораторном стеклянном ферментере определяется методом высева на сухой питательный агар (СПА) .

Цена сухой отжимной жидкости (от

1-й пары вальцов) с учетом расходов на концентрирование (сепарацию) и сушку составляет ориентировочно не более 25-30 коп/кг, в то время как тации с целью производства биомассы засевают жидкой посевной культурой (инокулятом) s количестве 4-5% по отношению к ферментационной среде.

Используют культуру Bacillus thuringiensis var galleriae u var ciendrollmus

Результаты определения эффективности срец отжимной жидкости в сравнении со средой активного или производства белкововитаминного концентрата (БВК) приведены в табл. 3. применяемый активный ил (в прототипе) стоит 50 коп/кг.

Таким образом, предлагаемая пита55 тельная среда по, сравнению с известной позволяет увеличить выход бактерий с 2,55 до 3,55 млрд/мл. Кроме того, предлагаемая среда дешевле известной в 1,5-2,0 раза.